CN115011505A - 一株枯草芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于微生物农药技术领域，提供了一株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）KC1723，保藏编号为CGMCC No.24397。该菌株对番茄叶霉病菌，番茄灰霉病菌，大蒜白斑病菌，白菜黑斑病菌，花生炭疽病菌和芹菜叶斑病菌有较好的防治效果。本发明的枯草芽胞杆菌KC1723分离自田间土壤内，未经任何基因修饰，因此将其释放到自然界中不会存在任何生态的、环境的隐患，是绝对安全的生物防治介体。该对作物安全，同时对多种植物病害具有防治作用，显示出该菌有较大的潜力开发成商品化生物农药的潜力，具有极为显著的经济和社会效益。

Description

一株枯草芽孢杆菌及其应用
技术领域
本发明属于微生物农药技术领域，具体涉及一株枯草芽孢杆菌及其在防治蔬菜病害中的应用。
背景技术
目前我国主要通过使用化学药剂开展植物病害防控，农药使用持续期长，用量大。而化学农药的大量应用不仅容易造成高抗性病原菌的产生，而且对土壤等生态环境也会造成污染。近年来，基于农业健康可持续发展的需求，通过生防微生物抑菌或通过诱导系统抗性防治植物病害的环境安全型生物菌剂得到越来越多的重视。芽孢杆菌属细菌在自然界广泛存在，其生长迅速，产生的芽孢抗逆能力强，能够在多种环境下应用。
枯我国草芽孢杆菌（Bacillus spp.）微生物是目前研究及应用较多的一类生防细菌。目前研究显示，不同的枯草芽孢杆菌亚种作用多样，例如，中国农业科学院植物保护研究所蒋细良等将获得处理印染废水的枯草芽孢杆，湖北省农业科学院植保土肥研究所乔艳等筛选获得番茄抗病害枯草芽孢杆菌，中谷生物科技(大连)有限公司张秉胜等人从土壤中分离得到动物饲料用添加剂枯草芽孢杆菌。正是由于其功能的多样性和种质资源的复杂性，不同的枯草芽孢杆菌被多家单位广泛应用于多种生物过程，而不同的菌株均具备一定的特殊性。
发明内容
针对现有果蔬病害防控中化学药剂用量大的问题，本发明提供一种抗病害特异性好的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）KC1723，对番茄叶霉病、灰霉病，大蒜白斑病，白菜黑斑病、花生炭疽病和芹菜叶斑病均有显著的防效。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。
一株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）KC1723，保藏编号为CGMCC No. 24397。
一种包含上述枯草芽孢杆菌KC1723的农药或肥料。
优选地，所述农药或肥料的施用对象选自番茄，大蒜，白菜，花生或芹菜。
所述农药的防治对象为番茄叶霉病菌，番茄灰霉病菌，大蒜白斑病菌，白菜黑斑病菌，花生炭疽病菌和芹菜叶斑病菌。
本发明具有以下优点：
本发明的枯草芽胞杆菌KC1723分离自田间土壤内，未经任何基因修饰，因此将其释放到自然界中不会造成任何生态的、环境的隐患，是绝对安全的生物防治介体。本发明的枯草芽胞杆菌KC1723对作物安全，同时对多种植物病害具有防治作用，显示出该菌有较大的潜力开发成商品化生物农药的潜力，具有极为显著的经济和社会效益。
生物保藏信息
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）KC1723，于2022年02月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏地址为中国北京，北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No. 24397。
附图说明
图1是是KC1723菌株在LB培养基上的形态（28℃，5天）。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明做进一步说明，但本发明不受下述实施例的限制。
实施例1 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）KC1723菌株的分离和鉴定
1. KC1723菌株的分离
选择番茄叶霉病较为严重的大棚，在相对未发生病害的植株周围取土：去除地表浮土，取根际3-10厘米左右的土样10克。将采集的土壤装入灭菌的三角瓶中，加入100 mL灭菌水，充分摇匀后静置10分钟，吸取上部液体做浓度梯度稀释，吸取100 μL不同稀释后的稀释液均匀涂布于PDA固体培养基上，于32℃培养2-3天，待长出菌落后，镜检，挑取具有枯草芽孢杆菌形态的菌落进行扩大培养，并以番茄叶霉病菌（Passalora fulva）为对象用平板对峙法进行初步筛选：将番茄叶霉病菌接种于固体PDA培养基的一侧四分之一处，另一侧用无菌牙签接种待筛菌株，每个菌株3次重复，以只接种病原菌为对照，于28 ℃恒温培养箱培养至对照菌落刚好长满整个平板时，测量抑菌圈直径，计算抑菌率。抑菌率计算公式如下：
抑菌率(%)= (对照菌落半径-试验菌落半径)/ 对照菌落半径×100%。
根据抑菌效果筛选获得最高效的防治菌种，编号为KC1723，将其用甘油保存于-80℃冰箱。
2. KC1723菌株的鉴定
将筛选得到的菌株KC1723接种于LB培养基（蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、氯化钠10g/L、琼脂粉15g/L，pH7.0），28℃培养5天，形态如图1所示，显微观察显示，该菌的菌体为杆状，可产芽孢，革兰氏染色为阳性。
将菌种接种于LB液体培养基，32℃、160rpm的条件下培养16h，离心收集菌体，提取基因组DNA，采用通用引物27F（5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'）和F1541（5'-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3'）扩增16S rRNA，将PCR产物回收后进行测序。测序结果在NCBI进行BLAST比对。经MEGA和ClustalW系统进化分析，并结合菌体形态观察，确定该菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），于2022年02月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏编号为CGMCC No. 24397。
实施例2 枯草芽孢杆菌KC1723对多种植物病害的抑制
挑取保存的枯草芽胞杆菌KC1723菌株，接种于LB固体培养基上，于32℃培养72h。将培养好的菌种接入LB液体培养基中，于32℃、160rpm的条件下培养16h，得到枯草芽孢杆菌KC1723发酵液。
以番茄叶霉病菌（Passalora fulva）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、大蒜白斑病菌（Stemphylium solani）、白菜黑斑病菌（Alternaria brassicae）、花生炭疽病菌（Colletotrichum truncatum）、芹菜叶斑病菌（Alternaria tenuissima）、番茄枯萎病菌（Fusarium oxysporum）、小麦赤霉病菌（Fusarium oxysporum）和水稻稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）为防治对象，采用平板菌落对峙培养的方法检测枯草芽孢杆菌KC17230对上述植物病害的抑制效果：将10 μL枯草芽孢杆菌KC1723发酵液接种于固体PDA培养基的一侧四分之一处，另一侧接种待试病原菌，每处理重复3次，25℃，培养7天后，测量对照的菌落直径（mm）和对峙培养菌落直径（mm）并计算抑制率。抑制率（%）=（对照菌落直径-对峙培养菌落直径）/对照菌落直径×100%。
表1 枯草芽孢杆菌KC1723对多种植物病原菌的抑制率（means±S.D）
供试病原菌 抑制率（%）
番茄叶霉病菌 86.6±2.3 a
番茄灰霉病菌 79.3±3.1 ab
大蒜白斑病菌 75.2±2.7 b
白菜黑斑病菌 73.9±1.8 b
花生炭疽病菌 81.3±2.3 ab
芹菜叶斑病菌 72.1±3.0 b
番茄枯萎病菌 29.1±3.3 d
小麦赤霉病菌 31.7±1.2 d
水稻稻瘟病菌 37.2±1.8 c
表中同列数据后不同小写字母表示在P < 0.05水平差异显著。
由表1可以看出，枯草芽孢杆菌KC1723番茄叶霉病菌，番茄灰霉病菌，大蒜白斑病菌，白菜黑斑病菌，花生炭疽病菌和芹菜叶斑病菌的抑制率均高于70%，对以上病害均具有较强的抑制能力。但是对番茄枯萎病菌、小麦赤霉病菌和水稻稻瘟病菌的抑制率均低于40%，效果较差。

Claims (4)

1.一株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）KC1723，保藏编号为CGMCC No. 24397。
2.一种包含如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌KC1723的农药或肥料。
3.根据权利要求2所述的农药或肥料，其特征在于，其施用对象选自番茄，大蒜，白菜，花生或芹菜。
4.根据权利要求2所述的农药或肥料，其特征在于，其防治对象为番茄叶霉病菌，番茄灰霉病菌，大蒜白斑病菌，白菜黑斑病菌，花生炭疽病菌和芹菜叶斑病菌。
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Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005079580A1 (ja) * 2004-02-23 2005-09-01 Nippon Soda Co., Ltd. 植物病害防除剤組成物及び微生物
US20110262416A1 (en) * 2004-03-24 2011-10-27 Korea Research Institute Of Chemical Technology Bacillus subtilis strain having antagonistic activity for controlling plant diseases
CN102433282A (zh) * 2011-12-16 2012-05-02 华南农业大学 枯草芽孢杆菌nb12及其培养方法和应用
CN107164285A (zh) * 2017-07-11 2017-09-15 河南科技大学 一株枯草芽孢杆菌bbd012及防治番茄病害中的应用
CN108048357A (zh) * 2017-12-26 2018-05-18 武汉科诺生物科技股份有限公司 一种枯草芽孢杆菌及其培养方法
CN110079483A (zh) * 2019-05-28 2019-08-02 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 一种枯草芽孢杆菌及其应用
CN110195033A (zh) * 2019-06-05 2019-09-03 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 一株枯草芽孢杆菌及在番茄匍柄霉叶斑病防治中的应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005079580A1 (ja) * 2004-02-23 2005-09-01 Nippon Soda Co., Ltd. 植物病害防除剤組成物及び微生物
US20110262416A1 (en) * 2004-03-24 2011-10-27 Korea Research Institute Of Chemical Technology Bacillus subtilis strain having antagonistic activity for controlling plant diseases
CN102433282A (zh) * 2011-12-16 2012-05-02 华南农业大学 枯草芽孢杆菌nb12及其培养方法和应用
CN107164285A (zh) * 2017-07-11 2017-09-15 河南科技大学 一株枯草芽孢杆菌bbd012及防治番茄病害中的应用
CN108048357A (zh) * 2017-12-26 2018-05-18 武汉科诺生物科技股份有限公司 一种枯草芽孢杆菌及其培养方法
CN110079483A (zh) * 2019-05-28 2019-08-02 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 一种枯草芽孢杆菌及其应用
CN110195033A (zh) * 2019-06-05 2019-09-03 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 一株枯草芽孢杆菌及在番茄匍柄霉叶斑病防治中的应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ALI ABDELMOTELEB, ROSALBA TRONCOSO-ROJAS, TANIA GONZALEZ-SOTO, DANIEL GONZÁLEZ-MENDOZA: "Antifungical Activity of Autochthonous Bacillus subtilis Isolated from Prosopis juliflora against Phytopathogenic Fungi" *
SEVDALINA TODOROVA, LUBKA KOZHUHAROVA: "Characteristics and antimicrobial activity of Bacillus subtilis strains isolated from soil" *
丁婷;: "枯草芽孢杆菌BS-1菌株抑菌活性研究" *
李新宇;李磊;陈利达;石延霞;柴阿丽;谢学文;李宝聚;: "番茄匍柄霉叶斑病拮抗细菌的筛选与鉴定" *

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