CN114994197A - 一种采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了一种采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法，属于中药成分检测技术领域。一种采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备，(2)对照品溶液的制备，(3)相对校正因子的计算，(4)目标化合物的含量计算，(5)分析经步骤(3)和(4)计算得到的目标化合物的含量和相对校正因子。该方法简单、准确，操作方便，实用性高，结果准确，采用该方法能实现蔓荆子配方颗粒中原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷和蔓荆子黄素成分含量的同步测定，从而有效评价和控制蔓荆子配方颗粒的质量，为保证临床用药安全和有效提供科学依据。

Description

一种采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法
技术领域
本申请涉及一种采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法，属于中药成分检测技术领域。
背景技术
蔓荆子为马鞭草科牡荆属多年生落叶小灌木单叶蔓荆Vitex trifoliaL.var.simplicifolia Cham或蔓荆Vitex trifoliaL.的干燥成熟果实，主产于山东、广西、广东、福建、江西、浙江等地，属常用中药，有几千年的应用历史，具有疏散风热、清理头目、止痛的功效。
由于中药成分的复杂性，单一性成分难以真正体现和评价中药的品质及其相关制剂的质量，由此，有人提出了多指标综合质量控制的模式，即同时用多个特征性成分对药材进行质量评价；以传统测定方法同时测定中药材中几种成分，不但面临对照品难得，检验周期长，还耗能、耗时；一测多评法(QAMS)是借助相对校正因子，只需测定1个成分(内参物)即可实现对多个成分的含量测定，能有效解决以上难题，在中药成分分析中逐渐得以广泛应用；当前国内外尚无一测多评法测定蔓荆子配方颗粒中原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷和蔓荆子黄素的含量的报道。
发明内容
为了解决上述问题，提供了一种采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法，该方法简单、准确，操作方便，实用性高，结果准确，采用该方法能实现蔓荆子配方颗粒中原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷和蔓荆子黄素成分含量的同步测定，从而有效评价和控制蔓荆子配方颗粒的质量，为保证临床用药安全和有效提供科学依据。
本发明采用如下技术方案：
一种采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取蔓荆子配方颗粒，研细，加入甲醇，加热回流提取，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(2)对照品溶液的制备：称取原儿茶酸对照品、对羟基苯甲酸对照品、异荭草苷对照品、穗花牡荆苷对照品、蔓荆子黄素对照品，加适量甲醇溶解，得混合对照品溶液；
(3)相对校正因子的计算：取步骤(2)的混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪，得到混合对照品溶液中原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷和蔓荆子黄素的峰面积，以蔓荆子黄素为内参物，计算原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷和穗花牡荆苷的相对校正因子；
(4)目标化合物的含量计算：精密吸取步骤(1)制备的供试品溶液，注入高效液相色谱仪，得到供试品溶液中各待测成分的峰面积，利用与蔓荆子黄素的相对校正因子计算蔓荆子配方颗粒中原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷和蔓荆子黄素的含量；
(5)分析经步骤(3)和(4)计算得到的目标化合物的含量和相对校正因子。
优选地，所述步骤(3)和(4)中，高效液相色谱条件为：
色谱柱：Waters Atlantis T3色谱柱；柱温：25℃-35℃；检测波长：250-280nm；流动相：以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B组成的梯度洗脱液进行梯度洗脱；流速：0.1-2ml/min；理论塔板数按蔓荆子黄素峰计算应不低于2000。
优选地，所述梯度洗脱程序为：
Figure BDA0003640674630000021
Figure BDA0003640674630000031
优选地，所述步骤(3)中相对校正因子计算方法为：以蔓荆子黄素为内参物，按下式计算原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷和穗花牡荆苷的相对校正因子；
Figure BDA0003640674630000032
其中，As为内参物峰面积，Ws为内参物浓度(或质量)，Ak为待测组分的峰面积，Wk为待测组分k的浓度(或质量)。
优选地，原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷和蔓荆子黄素的相对保留时间及相对校正因子如下：
Figure BDA0003640674630000033
优选地，所述步骤(2)中对照品溶液的制备为：分别精密称定原儿茶酸对照品、对羟基苯甲酸对照品、异荭草苷对照品、穗花牡荆苷对照品、蔓荆子黄素对照品适量，分别加甲醇制成浓度为1.0241mg/ml、1.00386mg/ml、0.9024mg/ml、0.99372mg/ml、1.0034mg/ml的对照品储备液；
精密吸取原儿茶酸对照品储备液、对羟基苯甲酸对照品储备液、异荭草苷对照品储备液、穗花牡荆苷对照品储备液、蔓荆子黄素对照品储备液适量至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成浓度分别为51.7171μg/ml、319.7294μg/ml、32.0352μg/ml、287.6819μg/ml、21.9936μg/ml的混合对照品溶液①；
精密吸取混合对照品溶液①5ml置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，计为混合对照品溶液②；
精密吸取混合对照品溶液②5ml置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，计为混合对照品溶液③；
精密吸取混合对照品溶液③5ml置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，计为混合对照品溶液④；
精密吸取混合对照品溶液④5ml置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，计为混合对照品溶液⑤。
优选地，所述步骤(1)中供试品溶液的制备为：取蔓荆子配方颗粒0.1-0.5g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30-60分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
优选地，所述加热回流时间为30分钟，功率为250W，频率为40kHz。
优选地，所述步骤(5)具体包括：结合供试品溶液的高效液相色谱图和原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷的相对校正因子，通过相关系数法和t检验法分别比较一测多评法的计算值和外标法的实测值。
本申请的有益效果包括但不限于：
1.本申请的采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法，以蔓荆子黄素作为内参物，计算原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷的相对校正因子，并用相对校正因子计算原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷和蔓荆子黄素的含量，该方法以多种成分为质量控制指标，结果更加可靠。
2.本申请的采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法，还可以用于测定蔓荆子标准汤剂冻干粉的含量，实现对多个成分的同步测定，含量测定结果与外标法无显著性差异，重复性好、准确可靠，提高了检测效率，降低了检测成本，同时更简便、全面地对蔓荆子配方颗粒进行质量控制。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本申请的进一步理解，构成本申请的一部分，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。在附图中：
图1为本申请实施例涉及的专属性色谱图。
图2为本申请实施例涉及的回流与超声提取对比图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，在此指出以下实施例不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域普通技术人员根据本发明的内容作出一些简单的替换或调整，均在本发明的保护范围之内。
实施例1
1、仪器与试药
1.1仪器：Agilent高效液相色谱仪；BSA224S-CW电子天平(赛多利斯科技仪器(北京)有限公司)；XS105电子天平(METTLER TOLEDO)；KDM型可调控温电热套(山东鄄城华鲁电热仪器有限公司)。
1.2色谱柱：
Waters Atlantis T3 SN：01893110314077(4.6*250mm，5μm)
Waters Atlantis T3 SN：01893110314080(4.6*250mm，5μm)
Waters Atlantis T3 SN：01893110314030(4.6*250mm，5μm)
1.3试药：
蔓荆子黄素对照品(中国食品药品检定研究院，纯度98.3％)
原儿茶酸对照品(上海诗丹德标准技术服务有限公司，纯度98.0％)
对羟基苯甲酸对照品(上海诗丹德标准技术服务有限公司，纯度99.0％)
异荭草苷对照品(中国食品药品检定研究院，纯度94.0％)
穗花牡荆苷对照品(上海源叶生物科技有限公司，纯度98.0％)
蔓荆子标准汤剂冻干粉批号：21070701，160402，20201101，20090011，20210607，21012824，20201113，21010011，20071005，190501，20090021，1806039131，20071211，201001，19022713。
蔓荆子配方颗粒(批号：2010001、2010002、2010003，山东宏济堂制药集团股份有限公司)
1.4试剂：乙腈、磷酸为色谱纯，甲醇为分析纯，水为屈臣氏纯化水；
1.5色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：Waters Atlantis T3色谱柱；柱温：30℃；检测波长：258nm；流动相：以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B组成的梯度洗脱液进行梯度洗脱，洗脱程序见表1；流速：1ml/min；理论塔板数按蔓荆子黄素峰计算应不低于2000；
表1
Figure BDA0003640674630000061
2、实验方法与结果
2.1采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：经过考察后(见下述6、供试品溶液的制备)确定供试品溶液制备方式为：取蔓荆子配方颗粒0.3g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟(功率为250W，频率为40kHz)，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(2)对照品溶液的制备：分别精密称定原儿茶酸对照品、对羟基苯甲酸对照品、异荭草苷对照品、穗花牡荆苷对照品、蔓荆子黄素对照品适量，分别加甲醇制成浓度为1.0241mg/ml、1.00386mg/ml、0.9024mg/ml、0.99372mg/ml、1.0034mg/ml的对照品储备液；
精密吸取原儿茶酸对照品储备液、对羟基苯甲酸对照品储备液、异荭草苷对照品储备液、穗花牡荆苷对照品储备液、蔓荆子黄素对照品储备液适量至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成浓度分别为51.7171μg/ml、319.7294μg/ml、32.0352μg/ml、287.6819μg/ml、21.9936μg/ml的混合对照品溶液①；
精密吸取混合对照品溶液①5ml置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，计为混合对照品溶液②；
精密吸取混合对照品溶液②5ml置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，计为混合对照品溶液③；
精密吸取混合对照品溶液③5ml置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，计为混合对照品溶液④；
精密吸取混合对照品溶液④5ml置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，计为混合对照品溶液⑤；
(3)相对校正因子的计算：取步骤(2)的混合对照品溶液①～⑤，注入高效液相色谱仪，测定，以蔓荆子黄素为内参物，按下式计算原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷的相对校正因子，结果见表1，
Figure BDA0003640674630000071
其中，As为内参物峰面积，Ws为内参物浓度(或质量)，Ak为待测组分的峰面积，Wk为待测组分k的浓度(或质量)；
表1
Figure BDA0003640674630000072
(4)目标化合物的含量计算：精密吸取步骤(1)制备的供试品溶液，注入高效液相色谱仪，得到供试品溶液中各待测成分的峰面积，利用与蔓荆子黄素的相对校正因子计算蔓荆子配方颗粒中原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷和蔓荆子黄素的含量。
2.2本发明一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法的方法学考察如下：
2.2.1线性关系考察
精密吸取混合对照品溶液①～⑤各10μL，注入超高效液相色谱仪，测定各待测组分色谱峰峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归，结果见表2。
表2 5种成分线性关系及线性范围
Figure BDA0003640674630000081
2.2.2专属性考察
取蔓荆子配方颗粒所使用的辅料(糊精)适量，按照步骤(1)中供试品溶液的制备方法制备成阴性对照溶液；取蔓荆子配方颗粒供试品溶液、原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷、蔓荆子黄素混合对照品溶液、阴性对照溶液、空白溶剂注入高效液相色谱仪，获得其色谱图，结果见图1，糊精阴性样与空白溶剂在原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷、蔓荆子黄素保留时间处无色谱峰，方法专属性良好。
2.2.3重复性试验
称取0.3g蔓荆子配方颗粒，研细，精密称定，取6份，注入高效液相色谱仪测定，结果见表3。原儿茶酸含量的RSD为0.98％，对羟基苯甲酸含量的RSD为0.30％，异荭草苷含量的RSD为0.99％，穗花牡荆苷含量的RSD为0.91％，蔓荆子黄素含量的RSD为0.97％，重复性较好，符合分析要求。
表3重复性试验
Figure BDA0003640674630000091
2.2.4中间精密度
不同分析人员在不同时间利用另一台高效液相色谱仪，进行重复性试验，结果见表4，不同仪器测定蔓荆子配方颗粒中原儿茶酸含量的RSD为0.93％，对羟基苯甲酸含量的RSD为0.48％，异荭草苷含量的RSD为1.85％，穗花牡荆苷含量的RSD为0.92％，蔓荆子黄素含量的RSD为1.21％，符合分析要求。
表4中间精密度结果
Figure BDA0003640674630000092
2.2.5回收率试验
取蔓荆子配方颗粒粉末约0.15g，精密称定，分别加入原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷、蔓荆子黄素对照品溶液适量，注入高效液相色谱仪，测定5种成分的含量，并计算回收率，结果见表5-9，原儿茶酸回收率在97.75％～102.09％之间，对羟基苯甲酸回收率在94.45％～96.63％之间，异荭草苷回收率在99.13％～104.58％之间，穗花牡荆苷回收率在97.22％～100.85％之间，蔓荆子黄素回收率在94.45％～98.27％之间，符合分析要求。
Figure BDA0003640674630000101
表5原儿茶酸回收率试验
Figure BDA0003640674630000102
表6对羟基苯甲酸回收率试验
Figure BDA0003640674630000103
表7异荭草苷回收率试验
Figure BDA0003640674630000104
表8穗花牡荆苷回收率试验
Figure BDA0003640674630000111
表9蔓荆子黄素回收率试验
Figure BDA0003640674630000112
2.2.6稳定性考察
采用2.2.3重复性试验供试品溶液，分别在第0h、2h、4h、8h、12h、24h各进样一次，测定样品中待测组分含量，计算RSD，结果见表10，在24小时之内，原儿茶酸含量的RSD为0.43％，对羟基苯甲酸含量的RSD为0.54％，异荭草苷含量的RSD为0.79％，穗花牡荆苷含量的RSD为0.66％，蔓荆子黄素含量的RSD为0.55％，溶液稳定性良好，符合分析要求。
表10样品稳定性试验
Figure BDA0003640674630000113
Figure BDA0003640674630000121
3、相对校正因子重现性考察
3.1不同仪器和不同色谱柱考察
分别采用不同的仪器和不同色谱柱对相对校正因子进行测定，结果见表11，测得的相对校正因子RSD值在0.98％～1.23％之间，表明各待测组分相对校正因子在不同仪器和不同色谱柱之间重现性良好。
表11不同仪器和不同色谱柱对待测成分相对校正因子的影响
Figure BDA0003640674630000122
3.2不同流速考察
分别采用不同流速对相对校正因子进行测定，结果见表12，测得的相对校正因子RSD值在0.00％～1.16％之间，表明各待测组分相对校正因子在不同流速之间重现性良好。
表12不同流速对待测成分相对校正因子的影响
Figure BDA0003640674630000123
Figure BDA0003640674630000131
3.3不同柱温考察
分别采用不同柱温对相对校正因子进行测定，结果见表13，测得的相对校正因子RSD值在0.00％～1.58％之间，表明各待测组分相对校正因子在不同柱温之间重现性良好。
表13不同柱温对待测成分相对校正因子的影响
Figure BDA0003640674630000132
4、待测组分色谱峰定位
分别计算各待测组分与内参物蔓荆子黄素的相对保留值(r)与保留时间差(ΔtR)，并考察其在不同仪器和不同色谱柱之间的重现性，结果见表14-15，相对保留值与保留时间差波动均较小，最终选择不同仪器和不同色谱柱中各待测成分的相对保留值的平均值作为峰定位依据。
表14不同仪器和不同色谱柱中各待测成分的相对保留时间
Figure BDA0003640674630000133
表15不同仪器和不同色谱柱中各待测成分的保留时间差
Figure BDA0003640674630000141
5、一测多评法与外标法(ESM)测定结果的比较
分别取15批蔓荆子标准汤剂冻干粉及3批蔓荆子配方颗粒，按步骤(1)制备供试品溶液，精密吸取对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，测定。分别采用一测多评法和外标法计算原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷、蔓荆子黄素的含量，结果见表16。外标法与一测多评法计算的含量经t检验比较，P远大于0.05，表明两种方法测得的含量无明显差异，且两组含量之间相对误差<3％，表明所建立的一测多评方法准确性良好，可用于蔓荆子配方颗粒及标准汤剂的含量测定。
表16一测多评法与外标法测定5种成分含量
Figure BDA0003640674630000142
Figure BDA0003640674630000151
6、供试品溶液的制备
6.1提取方式考察
取蔓荆子配方颗粒(2010001)适量，分别加热回流和超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟制备供试品溶液，注入液相色谱仪进行测定，计算原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷、蔓荆子黄素的含量，结果见表17、图2，回流提取各待测成分含量较高，故选择提取方式为回流提取。
表17提取方式考察结果
Figure BDA0003640674630000152
6.2提取溶剂考察
分别采用水、60％甲醇、甲醇回流制备供试品溶液，测定供试品峰面积，计算原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷、蔓荆子黄素的含量，结果见表18，不同提取溶剂对各成分影响较大，综合分析各待测成分含量，采用甲醇提取时各待测成分提取相对更完全，故选择提取溶剂为甲醇。
表18不同提取溶剂的比较
Figure BDA0003640674630000161
6.3提取时间的考察
分别设置回流时间为30分钟、45分钟、60分钟，制备供试品溶液，测定供试品峰面积，计算原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷、蔓荆子黄素的含量，结果见表19，不同回流时间对各待测成分含量影响不大，故选择回流时间为30分钟。
表19提取时间考察结果
Figure BDA0003640674630000162
6.4称样量的考察
分别取约0.1g、0.3g、0.5g蔓荆子配方颗粒，精密称定，制备供试品溶液，注入高效液相色谱仪测定，计算原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷、蔓荆子黄素的含量，结果见表20，不同称样量对各待测成分含量影响不大，最终选择称样量为0.3g。
表20称样量考察结果
Figure BDA0003640674630000163
以上所述，仅为本申请的实施例而已，本申请的保护范围并不受这些具体实施例的限制，而是由本申请的权利要求书来确定。对于本领域技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的技术思想和原理之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取蔓荆子配方颗粒，研细，加入甲醇，加热回流提取，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(2)对照品溶液的制备：称取原儿茶酸对照品、对羟基苯甲酸对照品、异荭草苷对照品、穗花牡荆苷对照品、蔓荆子黄素对照品，加适量甲醇溶解，得混合对照品溶液；
(3)相对校正因子的计算：取步骤(2)的混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪，得到混合对照品溶液中原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷和蔓荆子黄素的峰面积，以蔓荆子黄素为内参物，计算原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷和穗花牡荆苷的相对校正因子；
(4)目标化合物的含量计算：精密吸取步骤(1)制备的供试品溶液，注入高效液相色谱仪，得到供试品溶液中各待测成分的峰面积，利用与蔓荆子黄素的相对校正因子计算蔓荆子配方颗粒中原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷和蔓荆子黄素的含量；
(5)分析经步骤(3)和(4)计算得到的目标化合物的含量和相对校正因子。
2.根据权利要求1所述的采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法，其特征在于，所述步骤(3)和(4)中，高效液相色谱条件为：
色谱柱：Waters Atlantis T3色谱柱；柱温：25℃-35℃；检测波长：250-280nm；流动相：以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B组成的梯度洗脱液进行梯度洗脱；流速：0.1-2ml/min；理论塔板数按蔓荆子黄素峰计算应不低于2000。
3.根据权利要求2所述的采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：
Figure FDA0003640674620000021
4.根据权利要求1所述的采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法，其特征在于，所述步骤(3)中相对校正因子计算方法为：以蔓荆子黄素为内参物，按下式计算原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷和穗花牡荆苷的相对校正因子；
Figure FDA0003640674620000022
其中，As为内参物峰面积，Ws为内参物浓度(或质量)，Ak为待测组分的峰面积，Wk为待测组分k的浓度(或质量)。
5.根据权利要求4所述的采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法，其特征在于，原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷和蔓荆子黄素的相对保留时间及相对校正因子如下：
Figure FDA0003640674620000023
6.根据权利要求1所述的采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法，其特征在于，所述步骤(2)中对照品溶液的制备为：分别精密称定原儿茶酸对照品、对羟基苯甲酸对照品、异荭草苷对照品、穗花牡荆苷对照品、蔓荆子黄素对照品适量，分别加甲醇制成浓度为1.0241mg/ml、1.00386mg/ml、0.9024mg/ml、0.99372mg/ml、1.0034mg/ml的对照品储备液；
精密吸取原儿茶酸对照品储备液、对羟基苯甲酸对照品储备液、异荭草苷对照品储备液、穗花牡荆苷对照品储备液、蔓荆子黄素对照品储备液适量至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成浓度分别为51.7171μg/ml、319.7294μg/ml、32.0352μg/ml、287.6819μg/ml、21.9936μg/ml的混合对照品溶液①；
精密吸取混合对照品溶液①5ml置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，计为混合对照品溶液②；
精密吸取混合对照品溶液②5ml置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，计为混合对照品溶液③；
精密吸取混合对照品溶液③5ml置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，计为混合对照品溶液④；
精密吸取混合对照品溶液④5ml置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，计为混合对照品溶液⑤。
7.根据权利要求1所述的采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法，其特征在于，所述步骤(1)中供试品溶液的制备为：取蔓荆子配方颗粒0.1-0.5g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30-60分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
8.根据权利要求7所述的采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法，其特征在于，所述加热回流时间为30分钟，功率为250W，频率为40kHz。
9.根据权利要求1所述的采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法，其特征在于，所述步骤(5)具体包括：结合供试品溶液的高效液相色谱图和原儿茶酸、对羟基苯甲酸、异荭草苷、穗花牡荆苷的相对校正因子，通过相关系数法和t检验法分别比较一测多评法的计算值和外标法的实测值。
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