CN108535401A - 蔓荆叶的鉴定方法 - Google Patents
蔓荆叶的鉴定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108535401A CN108535401A CN201810364549.7A CN201810364549A CN108535401A CN 108535401 A CN108535401 A CN 108535401A CN 201810364549 A CN201810364549 A CN 201810364549A CN 108535401 A CN108535401 A CN 108535401A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- test sample
- wild pepper
- solution
- pepper leaf
- reference substance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/90—Plate chromatography, e.g. thin layer or paper chromatography
- G01N30/94—Development
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
本发明公开了一种蔓荆叶的鉴定方法，所述蔓荆叶的鉴定方法包括：吸取所述供试品溶液和所述对照品溶液各2‑12μL，分别点于同一薄层色谱板上，以环己烷‑乙酸乙酯‑甲酸体积比3:5:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至所述色谱板斑点显色清晰，置光下检视，所述供试品溶液的色谱与所述对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点时，判定所述供试品含有蔓荆叶。由于，供试品与蔓荆叶标准对照品的处理方法完全相同，且在同一薄层色谱板中展开显色，所以根据比对结果可以明确得出该供试品是否为蔓荆叶，可见本发明中蔓荆叶的鉴定方法具有操作简单、准确率高、无需鉴定人员品闻，保障鉴定人员的健康等优点。
Description
技术领域
本发明涉及中药技术领域，尤其涉及蔓荆叶的鉴定方法。
背景技术
蔓荆叶是马鞭草科牡蔓属植物蔓荆的枝叶，蔓荆叶别名白背叶，白背木耳，白布荆，海风柳，番仔埔姜，白背布惊，白叶，水稔仔等。主要产于福建，广东，广西，云南，台湾等。生于海边，沙滩，河边，平原及村寨附近。在夏季和秋季采收蔓荆的枝叶，洗净，切断，晒干备用。蔓荆叶具有活血化瘀，祛风止痛。主治跌打损伤，风湿疼痛的功效。煎汤内服，捣敷外用均可。
蔓荆，茎呈圆柱形，幼茎略呈方形，灰白色，质脆，断面黄白色，髓部微木化，幼茎髓部较大，白色。叶为三出复叶，常皱褶破碎。叶柄长5～30mm。完整小叶片卵形、倒卵形或卵状长圆形，长25～70mm，宽10～20mm，先端钝或短尖，基部楔形至近圆形，全缘，上表面褐色或黑褐色，无毛或被微柔毛，下表面密被灰白色绒毛，叶脉突起，侧脉约8对，羽状排列。小叶无柄或有时中间小叶基部下延成短柄。揉之有香气，味微苦。
根据上述蔓荆叶的特性，现有技术中对蔓荆叶的鉴定方法为具有经验的中药师通过人工观察品闻鉴定。由于，蔓荆叶的毒副作用暂不明确，对于血虚、胃虚以及肝脾状况不佳的人员，食用蔓荆叶容易造成健康受损。因此，现有的蔓荆叶的鉴定方法对品鉴人员的健康带来威胁。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种蔓荆叶的鉴定方法，该鉴定方法通过薄层色谱法的显色比对，能够对蔓荆叶进行客观鉴定，提高蔓荆叶鉴定结果的准确性。
为实现本发明的目的，本发明提供的蔓荆叶的鉴定方法包括如下步骤：
供试品溶液的制备：取供试品粉末1-4g，加石油醚15-60mL，回流提取20-60min，取出所述供试品粉末，在所述供试品粉末中加乙醇15-60mL，超声处理15-60min，过滤得到供试品滤液，将所述供试品滤液干燥得供试品溶质，所述供试品溶质除杂后溶解于0.5-2mL乙醇溶液中，得到供试品溶液；
对照品溶液的制备：取蔓荆叶对照药材粉末1-4g，加石油醚15-60mL，回流提取20-60min，取出所述蔓荆叶对照药材粉末，在所述蔓荆叶对照药材粉末中加乙醇15-60mL，超声处理15-60min，过滤得到对照品滤液，将所述对照品滤液干燥得对照品溶质，所述供试品溶质除杂后溶解于0.5-2mL乙醇溶液中，得到对照品溶液；
薄层色谱鉴定：吸取所述供试品溶液和所述对照品溶液各2-12μL，分别点于同一薄层色谱板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸体积比3:5:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至所述色谱板斑点显色清晰，置光下检视，所述供试品溶液的色谱与所述对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点时，判定所述供试品含有蔓荆叶。
优选地，所述蔓荆叶的鉴定方法包括以下步骤：
供试品溶液的制备：取供试品粉末1.5-3g，加石油醚20-45mL，回流提取20-45min，取出所述供试品粉末，在得到的所述供试品粉末中加乙醇20-45mL，超声处理15-60min，过滤得到供试品滤液，将所述供试品滤液干燥得供试品溶质，所述供试品溶质除杂后溶解于1-1.5mL乙醇溶液中，得到供试品溶液；
对照品溶液的制备：取蔓荆叶对照药材粉末1.5-3g，加石油醚20-45mL，回流提取20-45min，取出所述蔓荆叶对照药材粉末，在所述蔓荆叶对照药材粉末中加乙醇20-45mL，超声处理15-60min，过过滤得到对照品滤液，将所述对照品滤液干燥得对照品溶质，所述供试品溶质除杂后溶解于1-1.5mL乙醇溶液中，得到对照品溶液；
薄层色谱鉴定：吸取所述供试品溶液和所述对照品溶液各5-10μL，分别点于同一薄层色谱板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸体积比3:5:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，置光下检视，所述供试品溶液的色谱与所述对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点时，判定所述供试品含有蔓荆叶。
优选地，所述蔓荆叶的鉴定方法包括以下步骤：
供试品溶液的制备：取供试品粉末2g，加石油醚30mL，回流提取30min，取出所述供试品粉末，在得到的所述供试品粉末中加乙醇30mL，超声处理20min，过滤得到供试品滤液，将所述供试品滤液干燥得供试品溶质，所述供试品溶质除杂后溶解于1mL乙醇溶液中，得到供试品溶液；
对照品溶液的制备：取蔓荆叶对照药材粉末2g，加石油醚30mL，回流提取30min，取出所述蔓荆叶对照药材粉末，在所述蔓荆叶对照药材粉末中加乙醇30mL，超声处理20min，过滤得到对照品滤液，将所述对照品滤液干燥得对照品溶质，所述供试品溶质除杂后溶解于1mL乙醇溶液中，得到对照品溶液；
薄层色谱鉴定：吸取所述供试品溶液和所述对照品溶液各6μL，分别点于同一薄层色谱板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸体积比3:5:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，置光下检视，所述供试品溶液的色谱与所述对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点时，判定所述供试品含有蔓荆叶。
优选地，所述供试品溶质除杂的步骤包括：
将所述供试品溶质溶解于水中得供试品水溶液，将所述供试品水溶液过滤得滤液，将滤液蒸干得到除杂后的所述供试品溶质。
优选地，所述薄层色谱板为硅胶G薄层色谱板。
优选地，所述供试品溶液以及所述对照品溶液制备完成后1-4天内进行薄层色谱鉴定，鉴定结果有效。
优选地，所述供试品粉末以及所述蔓荆叶对照药材粉末的制备方法为，将所述供试品粉末以及所述蔓荆叶对照药材粉末分别研磨，研磨粉末过75目筛
优选地，所述供试品溶液的制备的步骤之前，还包括：
将所述供试品粉末制片，得供试品切片；
通过显微镜观察所述供试品切片，得到所述供试品的显微特征；
当所述供试品的显微特征为蔓荆叶显微特征时，执行供试品溶液的制备的步骤。
优选地，所述预设蔓荆叶显微特征包括：
所述蔓荆叶具有非腺毛、导管、木栓细胞、纤维束以及腺鳞，其中，所述蔓荆叶具有非腺毛形状弯曲，单个或多个成簇；所述导管为缘纹孔导管、梯纹导管以及螺纹导管；所述木栓细胞呈方形或多角形，且所述木栓细胞为黄棕色；所述纤维束末端尖或分叉，且具有纹孔；所述腺鳞的头部为四细胞，柄为单细胞。
优选地，所述将所述供试品粉末制片，得供试品切片的步骤包括：
取所述供试品粉末置载玻片上，滴加水合氯醛溶液；
将所述载玻片置于火焰上加热透化，得到所述供试品切片。
本发明实施例提出的一种蔓荆叶的鉴定方法，该蔓荆叶的鉴定方法包括，制备供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液由蔓荆叶标准品制得。将蔓荆叶供试品溶液和对照品溶液分别取样于同一薄层色谱板上，并将薄层色谱板放置在存有展开剂的容器中展开，取出薄层色谱板晾干，喷上显示剂，加热至斑点显色清晰，在光下检视，比较供试品溶液的色谱和对照品溶液的色谱中相对应的位置上的荧光斑点是否显示相同颜色，当显示颜色相同时，可得出该供试品中含有蔓荆叶的鉴定结果。通过薄层色谱法，将供试品中的分离开的显色成分与标准的蔓荆叶比对。由于，供试品与蔓荆叶标准对照品的处理方法完全相同，且在同一薄层色谱板中展开显色，所以根据比对结果可以明确得出该供试品是否为蔓荆叶，可见本发明中蔓荆叶的鉴定方法具有操作简单、准确率高、无需人员品闻，保障鉴定人员的健康等优点。
附图说明
图1是本发明蔓荆叶的鉴定方法第一实施例的色谱图；
图2是本发明蔓荆叶的鉴定方法第六实施例的色谱图；
图3是本发明蔓荆叶的鉴定方法第七实施例的第一色谱图；
图4是本发明蔓荆叶的鉴定方法第七实施例的第二色谱图；
图5是本发明蔓荆叶的鉴定方法第七实施例的第三色谱图；
图6是本发明蔓荆叶的鉴定方法第七实施例的第四色谱图；
图7(a)是本发明蔓荆叶的鉴定方法中蔓荆叶的第一微观结构图；
图7(b)是本发明蔓荆叶的鉴定方法中蔓荆叶的第二微观结构图；
图7(c)是本发明蔓荆叶的鉴定方法中蔓荆叶的第三微观结构图；
图7(d)是本发明蔓荆叶的鉴定方法中蔓荆叶的第四微观结构图；
图7(e)是本发明蔓荆叶的鉴定方法中蔓荆叶的第五微观结构图；
图7(f)是本发明蔓荆叶的鉴定方法中蔓荆叶的第六微观结构图。
本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明试验方法及参数：
1、试验材料
表1蔓荆叶样品表
2、试验材料质量检测：
2.1水分
照水分测定法(中国药典2010年版一部附录IX H第一法)测定。实测样品5批，结果为8.83％～10.64％，平均值9.55％(见表2)。根据《中国药典》2010年版一部附录ⅡB要求，规定本品水分不得过13.0％，如正文。
表2试验材料水分测定结果
2.2总灰分
照灰分测定法(中国药典2010年版一部附录IX K)测定。实测样品5批，结果为3.88％～4.83％，平均值4.32％(见表3)。根据最大值上浮20％，规定本品总灰分不得超过6.0％，如正文。
表3试验材料总灰分测定结果
2.3酸不溶性灰分
照灰分测定法(中国药典2010年版一部附录IX K)测定。实测样品5批，结果为0.39％～1.07％，平均值0.74％(见表4)。根据最大值上浮20％，规定本品酸不溶性灰分不得过1.0％，如正文。
表4试验材料酸不溶灰分测定结果
2.4二氧化硫残留量
照二氧化硫残留量测定法(中国药典2010年版一部附录ⅨU)测定。实测样品5批。结果为2.50mg/kg～9.99mg/kg，平均值6.69mg/kg(见表5)，根据《中国药典》2010年版一部附录Ⅸ要求，规定本品二氧化硫残留量不得过150mg/kg，如正文。
表5试验材料二氧化硫残留量测定结果
2.5浸出物
根据生产需要，照水溶性浸出物测定法项下的热浸法(中国药典2005年版一部附录X A)测定，用水作溶剂。实测样品5批，结果为14.51％～17.61％(见表6)。平均值为16.73％。根据最小值下浮20％，规定本品水溶性浸出物不得少于11.0％，如正文。
表6试验材料浸出物含量测定结果
由表2-6可知，上述五种试验材料的水分、总灰分、酸不溶性灰分、二氧化硫残留量、以及浸出物含量均符合《中国药典》2010年版对蔓荆叶的质量要求，本发明中的试验材料可靠，试验结果有效。
3、试验仪器与试剂
薄层色谱成像仪(武汉药科新科技开发有限公司YOKO-2S)，普通硅胶G预制板(德国Macherey-Nagal公司，批号：006052，规格：10×10cm)，普通硅胶GF254预制板(德国默克有限公司，批号：1.05554.0001，规格：10×10cm)，普通CMC-Na硅胶G板(浙江台州路桥四甲生化厂，批号：080603，规格：10×10cm)；三氯化铝，丙酮，甲酸，石油醚，乙醇，乙酸乙酯，甲醇，环己烷，香草醛均为分析纯。
对照药材：蔓荊叶对照药材，经华南植物研究所鉴定。
供试品：供试品如上表1所示的序号1-5的蔓荆叶。
供试品粉末：将供试品研磨粉碎后过75目筛得供试品粉末。
蔓荆叶对照药材粉末：将蔓荆叶对照药材研磨粉碎后过75目筛得蔓荆叶对照药材粉末。
实施例一
供试品溶液的制备：取供试品粉末2g，加石油醚30ml，加热回流提取30分钟，弃去石油醚液，药渣挥干，加乙醇30ml，超声处理20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加热水10mL，置60℃水浴搅拌溶解，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL溶解，作为供试品溶液。其中，石油醚的沸程为60-90℃。
对照品溶液的制备：另取蔓荊叶对照药材粉末2g，加石油醚30ml，加热回流提取30分钟，弃去石油醚液，药渣挥干，加乙醇30ml，超声处理20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加热水10mL，置60℃水浴搅拌溶解，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL溶解，作为对照品溶液。其中，石油醚的沸程为60-90℃。
薄层色谱板：普通硅胶G预制板，其中，薄层色谱板还可以是普通硅胶GF254预制板或者是普通CMC-Na硅胶G板。
点样：供试品溶液与对照品溶液分别点样6μL。
展开剂：环己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比3:5:1)。
显色剂：5％香草醛硫酸溶液，105℃烘至斑点清晰。
展开方式：上行展开，展距8cm。
检视：置日光下检视，日光可以为天然日光，也可为日光灯等发光设备制得的日光。
色谱识别：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
试验色谱图如图1所示，图中1-5分别对应表示表1中序号1-5的蔓荆叶，6为蔓荆叶对照药材。由图1可知，试验采用的五种不同批号的蔓荆叶的色谱与山羊角对照药材的色谱的相应位置上显示相同颜色的斑点，且RF值较佳。因此，采用本实施例中的薄层色谱法鉴定蔓荆叶的方法客观可行。
实施例二
供试品溶液的制备：取供试品粉末1g，加石油醚30ml，加热回流提取30分钟，弃去石油醚液，药渣挥干，加乙醇30ml，超声处理20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加热水10mL，置60℃水浴搅拌溶解，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL溶解，作为供试品溶液。其中，石油醚的沸程为60-90℃。
对照品溶液的制备：另取蔓荊叶对照药材粉末1g，加石油醚30ml，加热回流提取30分钟，弃去石油醚液，药渣挥干，加乙醇30ml，超声处理20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加热水10mL，置60℃水浴搅拌溶解，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL溶解，作为对照品溶液。其中，石油醚的沸程为60-90℃。
薄层色谱板：普通硅胶G预制板，其中，薄层色谱板还可以是普通硅胶GF254预制板或者是普通CMC-Na硅胶G板。
点样：供试品溶液与对照品溶液分别点样6μL。
展开剂：环己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比3:5:1)。
显色剂：5％香草醛硫酸溶液，105℃烘至斑点清晰。
展开方式：上行展开，展距8cm。
检视：置日光下检视，日光可以为天然日光，也可为日光灯等发光设备制得的日光。
色谱识别：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例三
供试品溶液的制备：取供试品粉末1.5g，加石油醚40ml，加热回流提取30分钟，弃去石油醚液，药渣挥干，加乙醇40ml，超声处理20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加热水10mL，置60℃水浴搅拌溶解，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL溶解，作为供试品溶液。其中，石油醚的沸程为60-90℃。
对照品溶液的制备：另取蔓荊叶对照药材粉末1.5g，加石油醚40ml，加热回流提取30分钟，弃去石油醚液，药渣挥干，加乙醇40ml，超声处理20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加热水10mL，置60℃水浴搅拌溶解，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL溶解，作为对照品溶液。其中，石油醚的沸程为60-90℃。
薄层色谱板：普通硅胶G预制板，其中，薄层色谱板还可以是普通硅胶GF254预制板或者是普通CMC-Na硅胶G板。
点样：供试品溶液与对照品溶液分别点样6μL。
展开剂：环己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比3:5:1)。
显色剂：5％香草醛硫酸溶液，105℃烘至斑点清晰。
展开方式：上行展开，展距8cm。
检视：置日光下检视，日光可以为天然日光，也可为日光灯等发光设备制得的日光。
色谱识别：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例四
供试品溶液的制备：取供试品粉末3g，加石油醚50ml，加热回流提取30分钟，弃去石油醚液，药渣挥干，加乙醇30ml，超声处理20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加热水10mL，置60℃水浴搅拌溶解，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL溶解，作为供试品溶液。其中，石油醚的沸程为60-90℃。
对照品溶液的制备：另取蔓荊叶对照药材粉末3g，加石油醚50ml，加热回流提取30分钟，弃去石油醚液，药渣挥干，加乙醇30ml，超声处理20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加热水10mL，置60℃水浴搅拌溶解，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL溶解，作为对照品溶液。其中，石油醚的沸程为60-90℃。
薄层色谱板：普通硅胶G预制板，其中，薄层色谱板还可以是普通硅胶GF254预制板或者是普通CMC-Na硅胶G板。
点样：供试品溶液与对照品溶液分别点样6μL。
展开剂：环己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比3:5:1)。
显色剂：5％香草醛硫酸溶液，105℃烘至斑点清晰。
展开方式：上行展开，展距8cm。
检视：置日光下检视，日光可以为天然日光，也可为日光灯等发光设备制得的日光。
色谱识别：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例五
供试品溶液的制备：取供试品粉末4g，加石油醚60ml，加热回流提取40分钟，弃去石油醚液，药渣挥干，加乙醇50ml，超声处理20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加热水10mL，置60℃水浴搅拌溶解，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇2mL溶解，作为供试品溶液。其中，石油醚的沸程为60-90℃。
对照品溶液的制备：另取蔓荊叶对照药材粉末4g，加石油醚60ml，加热回流提取40分钟，弃去石油醚液，药渣挥干，加乙醇50ml，超声处理20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加热水10mL，置60℃水浴搅拌溶解，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇2mL溶解，作为对照品溶液。其中，石油醚的沸程为60-90℃。
薄层色谱板：普通硅胶G预制板，其中，薄层色谱板还可以是普通硅胶GF254预制板或者是普通CMC-Na硅胶G板。
点样：供试品溶液与对照品溶液分别点样6μL。
展开剂：环己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比3:5:1)。
显色剂：5％香草醛硫酸溶液，105℃烘至斑点清晰。
展开方式：上行展开，展距8cm。
检视：置日光下检视，日光可以为天然日光，也可为日光灯等发光设备制得的日光。
色谱识别：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例六
实施例六
供试品溶液的制备：取供试品粉末2g，加石油醚30ml，加热回流提取30分钟，弃去石油醚液，药渣挥干，加乙醇30ml，超声处理20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加热水10mL，置60℃水浴搅拌溶解，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL溶解，作为供试品溶液。其中，石油醚的沸程为60-90℃。
对照品溶液的制备：另取蔓荊叶对照药材粉末2g，加石油醚30ml，加热回流提取30分钟，弃去石油醚液，药渣挥干，加乙醇30ml，超声处理20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加热水10mL，置60℃水浴搅拌溶解，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL溶解，作为对照品溶液。其中，石油醚的沸程为60-90℃。
薄层色谱板：普通硅胶G预制板，其中，薄层色谱板还可以是普通硅胶GF254预制板或者是普通CMC-Na硅胶G板。
点样：供试品溶液分别点样2、4、6、8、10、12μL，对照品溶液点样6μL。
展开剂：环己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比3:5:1)。
显色剂：5％香草醛硫酸溶液，105℃烘至斑点清晰。
展开方式：上行展开，展距8cm。
检视：置日光下检视，日光可以为天然日光，也可为日光灯等发光设备制得的日光。
图2所示为本实施例的色谱图，1-5分别对应点样量为2、4、6、8、10、12μL的供试品，6点样6μL的蔓荆叶对照药材。由图2可知，当供试品溶液点样量小于6μL时，色谱图中的荧光斑点显示不清晰，供试品溶液点样量大于或等于6μL时，色谱图中的荧光斑点显示较为清晰。导致上述现象的原因通常是由于用于薄层色谱分离的物质含量较低。然而，薄层色谱分析时，点样量过高导致溶液中物质难以分离，荧光斑点过大，相互影响色谱显示。综上可得，在本发明的蔓荆叶的鉴定方法中最佳点样量6μL。
实施例七
取供试品与对照品溶液各6μl分别于提取后的第1天、第2天、第3天、第4天点样。
供试品溶液的制备：取供试品粉末2g，加石油醚30ml，加热回流提取30分钟，弃去石油醚液，药渣挥干，加乙醇30ml，超声处理20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加热水10mL，置60℃水浴搅拌溶解，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL溶解，作为供试品溶液。其中，石油醚的沸程为60-90℃。
对照品溶液的制备：另取蔓荊叶对照药材粉末2g，加石油醚30ml，加热回流提取30分钟，弃去石油醚液，药渣挥干，加乙醇30ml，超声处理20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加热水10mL，置60℃水浴搅拌溶解，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL溶解，作为对照品溶液。其中，石油醚的沸程为60-90℃。
薄层色谱板：普通硅胶G预制板，其中，薄层色谱板还可以是普通硅胶GF254预制板或者是普通CMC-Na硅胶G板。
点样：供试品溶液与对照品溶液分别点样10μL，其中，供试品溶液制备后第1天、第2天、第3天、第4天进行点样操作。
展开剂：环己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比3:5:1)。
显色剂：5％香草醛硫酸溶液，105℃烘至斑点清晰。
展开方式：上行展开，展距8cm。
检视：置日光下检视，日光可以为天然日光，也可为日光灯等发光设备制得的日光。
图3、图4、图5和图6分别为供试品溶液制备后第1天、第2天、第3天和第4天的色谱图。图3、图4、图5和图6中1-5分别对应表示表1中序号1-5的蔓荆叶，6为蔓荆叶对照药材。由图3、图4、图5和图6可得，在供试品溶液制备后4天内进行色谱鉴定均可显示清晰荧光斑点，因此，供试品溶液在制备后4天内物化特性稳定，即供试品溶液以及所述对照品溶液制备完成后1-4天内进行薄层色谱鉴定，鉴定结果有效。
实施例八
图7为蔓荆叶的微观结构图，由图7可知，蔓荆叶的微观结构特征为：蔓荆叶具有非腺毛、导管、木栓细胞、纤维束以及腺鳞。其中，非腺毛形为弯曲状，存在形态为单个或多个成簇；蔓荆叶中有缘纹孔导管、梯纹导管以及螺纹导管三种类型的导管；蔓荆叶中的木栓细胞呈方形或多角形，颜色呈黄棕色；在蔓荆叶的纤维束末端多尖或分叉，且具有纹孔；腺鳞的头部为四细胞，柄为单细胞。其中，在显微观察前将蔓荆叶粉末制作水合氯醛透化片。
在本实施例中，蔓荆叶的色谱鉴定之前，采用显微镜对供试品进行微观鉴定。当通过显微镜观察供试品微观结构，该供试品具有蔓荆叶的微观结构特征时，初步判定该供试品可能为蔓荆叶，可将该供试品进一步采用色谱鉴定，判断该供试品是否蔓荆叶；若该供试品并不具有蔓荆叶的微观结构特征，则直接判定该供试品不是蔓荆叶。结合微观鉴定，可初步验证供试品，简化蔓荆叶的鉴定方法，减少对供试品进行色谱鉴定的试验操作，提高蔓荆叶的鉴定效率。
Claims (10)
1.一种蔓荆叶的鉴定方法，其特征在于，所述蔓荆叶的鉴定方法包括以下步骤：
供试品溶液的制备：取供试品粉末1-4g，加石油醚15-60mL，回流提取20-60min，取出所述供试品粉末，在所述供试品粉末中加乙醇15-60mL，超声处理15-60min，过滤得到供试品滤液，将所述供试品滤液干燥得供试品溶质，所述供试品溶质除杂后溶解于0.5-2mL乙醇溶液中，得到供试品溶液；
对照品溶液的制备：取蔓荆叶对照药材粉末1-4g，加石油醚15-60mL，回流提取20-60min，取出所述蔓荆叶对照药材粉末，在所述蔓荆叶对照药材粉末中加乙醇15-60mL，超声处理15-60min，过滤得到对照品滤液，将所述对照品滤液干燥得对照品溶质，所述供试品溶质除杂后溶解于0.5-2mL乙醇溶液中，得到对照品溶液；
薄层色谱鉴定：吸取所述供试品溶液和所述对照品溶液各2-12μL，分别点于同一薄层色谱板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸体积比3:5:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至所述色谱板斑点显色清晰，置光下检视，所述供试品溶液的色谱与所述对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点时，判定所述供试品含有蔓荆叶。
2.如权利要求1所述的蔓荆叶的鉴定方法，其特征在于，所述蔓荆叶的鉴定方法包括以下步骤：
供试品溶液的制备：取供试品粉末1.5-3g，加石油醚20-45mL，回流提取20-45min，取出所述供试品粉末，在得到的所述供试品粉末中加乙醇20-45mL，超声处理15-60min，过滤得到供试品滤液，将所述供试品滤液干燥得供试品溶质，所述供试品溶质除杂后溶解于1-1.5mL乙醇溶液中，得到供试品溶液；
对照品溶液的制备：取蔓荆叶对照药材粉末1.5-3g，加石油醚20-45mL，回流提取20-45min，取出所述蔓荆叶对照药材粉末，在所述蔓荆叶对照药材粉末中加乙醇20-45mL，超声处理15-60min，过过滤得到对照品滤液，将所述对照品滤液干燥得对照品溶质，所述供试品溶质除杂后溶解于1-1.5mL乙醇溶液中，得到对照品溶液；
薄层色谱鉴定：吸取所述供试品溶液和所述对照品溶液各5-10μL，分别点于同一薄层色谱板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸体积比3:5:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，置光下检视，所述供试品溶液的色谱与所述对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点时，判定所述供试品含有蔓荆叶。
3.如权利要求2所述的蔓荆叶的鉴定方法，其特征在于，所述蔓荆叶的鉴定方法包括以下步骤：
供试品溶液的制备：取供试品粉末2g，加石油醚30mL，回流提取30min，取出所述供试品粉末，在得到的所述供试品粉末中加乙醇30mL，超声处理20min，过滤得到供试品滤液，将所述供试品滤液干燥得供试品溶质，所述供试品溶质除杂后溶解于1mL乙醇溶液中，得到供试品溶液；
对照品溶液的制备：取蔓荆叶对照药材粉末2g，加石油醚30mL，回流提取30min，取出所述蔓荆叶对照药材粉末，在所述蔓荆叶对照药材粉末中加乙醇30mL，超声处理20min，过滤得到对照品滤液，将所述对照品滤液干燥得对照品溶质，所述供试品溶质除杂后溶解于1mL乙醇溶液中，得到对照品溶液；
薄层色谱鉴定：吸取所述供试品溶液和所述对照品溶液各6μL，分别点于同一薄层色谱板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸体积比3:5:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，置光下检视，所述供试品溶液的色谱与所述对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点时，判定所述供试品含有蔓荆叶。
4.权利要求1所述的蔓荆叶的鉴定方法，其特征在于，所述供试品溶质除杂的步骤包括：
将所述供试品溶质溶解于水中得供试品水溶液，将所述供试品水溶液过滤得滤液，将滤液蒸干得到除杂后的所述供试品溶质。
5.权利要求1所述的蔓荆叶的鉴定方法，其特征在于，所述薄层色谱板为硅胶G薄层色谱板。
6.如权利要求1所述的蔓荆叶的鉴定方法，其特征在于，所述供试品溶液以及所述对照品溶液制备完成后1-4天内进行薄层色谱鉴定，鉴定结果有效。
7.如权利要求1所述的蔓荆叶的鉴定方法，其特征在于，所述供试品粉末以及所述蔓荆叶对照药材粉末的制备方法为，将所述供试品粉末以及所述蔓荆叶对照药材粉末分别研磨，研磨粉末过75目筛。
8.如权利要求1-7任一所述的蔓荆叶的鉴定方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备的步骤之前，还包括：
将所述供试品粉末制片，得供试品切片；
通过显微镜观察所述供试品切片，得到所述供试品的显微特征；
当所述供试品的显微特征为蔓荆叶显微特征时，执行供试品溶液的制备的步骤。
9.如权利要求8所述的蔓荆叶的鉴定方法，其特征在于，所述预设蔓荆叶显微特征包括：
所述蔓荆叶具有非腺毛、导管、木栓细胞、纤维束以及腺鳞，其中，所述蔓荆叶具有非腺毛形状弯曲，单个或多个成簇；所述导管为缘纹孔导管、梯纹导管以及螺纹导管；所述木栓细胞呈方形或多角形，且所述木栓细胞为黄棕色；所述纤维束末端尖或分叉，且具有纹孔；所述腺鳞的头部为四细胞，柄为单细胞。
10.如权利要求8所述的蔓荆叶的鉴定方法，其特征在于，所述将所述供试品粉末制片，得供试品切片的步骤包括：
取所述供试品粉末置载玻片上，滴加水合氯醛溶液；
将所述载玻片置于火焰上加热透化，得到所述供试品切片。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810364549.7A CN108535401A (zh) | 2018-04-20 | 2018-04-20 | 蔓荆叶的鉴定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810364549.7A CN108535401A (zh) | 2018-04-20 | 2018-04-20 | 蔓荆叶的鉴定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108535401A true CN108535401A (zh) | 2018-09-14 |
Family
ID=63479290
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810364549.7A Pending CN108535401A (zh) | 2018-04-20 | 2018-04-20 | 蔓荆叶的鉴定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108535401A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114994197A (zh) * | 2022-05-12 | 2022-09-02 | 山东宏济堂制药集团股份有限公司 | 一种采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000035425A (ja) * | 1998-07-16 | 2000-02-02 | Pola Chem Ind Inc | 津液作用を有する素材の鑑別法 |
| CN1552363A (zh) * | 2003-05-29 | 2004-12-08 | 毛友昌 | 辛芳鼻炎丸及制备方法 |
| CN103055048A (zh) * | 2012-12-22 | 2013-04-24 | 湖南师范大学 | 一种从蔓荆子中提取总黄酮的方法 |
| CN104418829A (zh) * | 2013-09-07 | 2015-03-18 | 山东大学（威海） | 一种具有抗肿瘤作用的化合物单叶蔓荆素b的结构与制备方法及其用途 |
-
2018
- 2018-04-20 CN CN201810364549.7A patent/CN108535401A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000035425A (ja) * | 1998-07-16 | 2000-02-02 | Pola Chem Ind Inc | 津液作用を有する素材の鑑別法 |
| CN1552363A (zh) * | 2003-05-29 | 2004-12-08 | 毛友昌 | 辛芳鼻炎丸及制备方法 |
| CN103055048A (zh) * | 2012-12-22 | 2013-04-24 | 湖南师范大学 | 一种从蔓荆子中提取总黄酮的方法 |
| CN104418829A (zh) * | 2013-09-07 | 2015-03-18 | 山东大学（威海） | 一种具有抗肿瘤作用的化合物单叶蔓荆素b的结构与制备方法及其用途 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| CHI 100发布: "《广东省中药材标准》第三册征求意见稿", 《HTTPS://WWW.OURYAO.COM/FORUM.PHP?MOD=VIEWTHREAD&TID=435828&HIGHLIGHT=%D2%E2%BC%FB%B5%C4%CD%A8%D6%AA》 * |
| 肖丽香: "傣药哈管底(蔓荆根)与叶的薄层鉴别与临床应用", 《中国名族医药杂志》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114994197A (zh) * | 2022-05-12 | 2022-09-02 | 山东宏济堂制药集团股份有限公司 | 一种采用一测多评法测定蔓荆子配方颗粒成分含量的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kumar et al. | Pharmacognostic evaluation of Cayratia trifolia (Linn.) leaf | |
| CN102507550B (zh) | 一种基于天然色素的食品气味可视化传感器的制作方法 | |
| CN105062125A (zh) | 桑葚红色素提取及纯化的方法 | |
| CN102028859B (zh) | 一种治疗哮喘的中药制剂的检测方法 | |
| CN103558214A (zh) | 缺苞箭竹中多酚类物质含量的测定方法 | |
| Raman et al. | Microscopic characterization and HPTLC of the leaves, stems and roots of Fadogia agrestis-an African folk medicinal plant | |
| Ghorpade et al. | Pharmacognostic and phytochemical evaluation of Celosia argentea | |
| CN108535401A (zh) | 蔓荆叶的鉴定方法 | |
| CN101078713B (zh) | 一种加入内标物的绞股蓝药材指纹图谱检测方法 | |
| CN110907585B (zh) | 一种用于鉴别南非醉茄根提取物掺假的薄层检测方法 | |
| CN107831261A (zh) | 泽泻丹皮白芍制剂的质量检测方法 | |
| Kumar et al. | Pharmacognostical and phytochemical standardization of Houttuynia cordata Thunb | |
| CN205449804U (zh) | 中药材检测识别装置 | |
| CN111308032A (zh) | 一种小罗伞药材的质量控制方法 | |
| CN105891172A (zh) | 一种用于不同种属及易混淆中药材或中药饮片的检测识别方法 | |
| Kaskoos et al. | Evaluation of pharmacognostic features of aerial parts of Andrographis paniculata Wall. | |
| CN110596297B (zh) | 一种王瓜子药材的质量标准检测方法 | |
| CN103543235B (zh) | 一种快速鉴别延胡索生熟饮片的方法 | |
| Nazish et al. | Preliminary pharmacognostical standardisation of Ruta graveolens L. aerial parts | |
| CN102048990A (zh) | 中药制剂清宫寿桃丸的质量控制方法 | |
| Ramalingam et al. | Pharmacognostical, phytochemical and anthelmintic evaluation of Leucas indica (L) | |
| Kodirov et al. | Biological study of gynostemma pentaphyllum (thunb.) Makino | |
| Ahmad et al. | Pharmacognostical studies and establishment of quality parameters of Cucmis melo L. CV. Namdhari | |
| Liang et al. | Authentication and differentiation of two easily confusable Chinese material medica: Herba Solani Lyrati and Herba Aristolochiae Mollissimae | |
| CN109324111A (zh) | 一种鉴定佩兰真伪的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180914 |