CN110907585B - 一种用于鉴别南非醉茄根提取物掺假的薄层检测方法 - Google Patents
一种用于鉴别南非醉茄根提取物掺假的薄层检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种用于鉴别南非醉茄根提取物掺假的薄层检测方法,填补现有技术中无法鉴别出南非醉茄根提取物是否掺有醉茄茎叶或是纯粹的茎叶提取物的空白。该方法包括以下步骤:1)制备对照品溶液和样品溶液;2)薄层点样;3)制备展开剂;4)展开;5)显色与检视。采用此种薄层检测方法简单、经济、快速、高效、且专属性强,对南非醉茄根和南非醉茄茎叶的对比明显,结果直观,易于辨认和区分,为确保南非醉茄根提取物的质量提供了可靠的鉴别方法。
Description
技术领域
本发明属于植物鉴别领域,具体涉及一种用于鉴别南非醉茄根提取物掺假的薄层检测方法。
背景技术
南非醉茄,也称为印度人参(Ashwagandha),是印度阿育吠陀传统草药,为小型灌木,主要药用部位为根部。科学研究表明,南非醉茄提取物与中国的人参一样具有强壮、兴奋与提高人体免疫力等多种功效。南非醉茄提取物与其他具有壮阳作用的一些植物(如玛卡、特纳草、瓜拉那果、卡瓦根以及中国的淫羊藿等)配伍后可加工成治疗男性勃起障碍症药物。据了解,目前美国市场上至少有数十种“天然伟哥”产品,其中绝大多数含有印度出口的南非醉茄提取物。近据美国研究人员发现,南非醉茄还有出色的镇静作用,而美国成年人中有不少人因精神压力过大夜间难以入睡,现美国厂商生产的天然安眠产品(助眠产品)均以南非醉茄提取物为主要成分,并加入缬草根、雏菊和其他一些具有镇静作用的药用植物。因此,南非醉茄根提取物在美国市场上非常畅销。
然而,伴随着南非醉茄根提取物在市场上的走俏,很多商家为了追逐利益,就开始用醉茄地上部分的茎叶来代替根做成提取物在市场上销售,有的是在根提取物中掺有部分茎叶提取物,有的甚至干脆就是纯的茎叶提取物。这严重影响了醉茄根提取物的质量。同时,由于对醉茄地上部分药理作用研究不是很清楚,掺有醉茄地上部分或是纯碎的醉茄地上部分提取物也大大增加了对人体的潜在危害的作用。因此,如何鉴别醉茄根提取物中是否掺有醉茄茎叶,或者其根本就是茎叶提取物,对于保证醉茄根的质量和人们的健康非常重要。
对于掺有南非醉茄地上部分的醉茄根提取物来说,其外观和气味根本无法进行鉴别。《美国药典》40版中,醉茄根提取物的鉴定方法,经实验室验证,是无法鉴别出其是否掺有醉茄茎叶或是纯粹的茎叶提取物,参见图3。
鉴于此,寻求一种鉴别南非醉茄根提取物是否掺假的方法时非常有必要的。
发明内容
本发明提供一种用于鉴别南非醉茄根提取物掺假的薄层检测方法,用于填补现有技术中无法鉴别出南非醉茄根提取物是否掺有醉茄茎叶或是纯粹的茎叶提取物的空白。
为实现上述目的,本发明的构思是:
针对南非醉茄根与南非醉茄茎叶中所含物质的差异,借助两者在薄层上各自特有的薄层斑点,用以对市面上的南非醉茄根提取物是否掺假进行鉴别。鉴别原理:在硅胶G薄层板上,待鉴别南非醉茄根提取物的斑点,如果和南非醉茄根原料的斑点一致,则判断此提取物是不含有南非醉茄茎叶的,为真的南非醉茄根提取物。如果待鉴别南非醉茄根提取物中含有南非醉茄茎叶的特征斑点,则判断此提取物掺有醉茄地上部分。
本发明所提供的技术解决方案是:
一种用于鉴别南非醉茄根提取物掺假的薄层检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)制备对照品溶液和样品溶液
1.1)取南非醉茄根原料及南非醉茄茎叶原料,粉粹后过筛,分别置于可密封的试验容器中,各自加入所述南非醉茄根原料及所述南非醉茄茎叶原料质量5~10倍量、质量浓度为70%~100%的乙醇,并进行超声提取60~120分钟,取出试验容器后放至室温,然后采用微孔滤膜过滤,收集滤液作为对照品溶液;
1.2)取待鉴别的南非醉茄根提取物,置于可密封的试验容器中,加入所述南非醉茄根提取物质量5~10倍量、质量浓度为70%~100%的乙醇,并进行超声处理30~60分钟,取出试验容器后放至室温,然后采用微孔滤膜过滤,收集滤液作为样品溶液;
2)薄层点样
将步骤1)中制备好的对照品溶液样品溶液和样品溶液依次分别点于同一硅胶G薄层板上同一高度的不同位置上形成点样原点;
3)制备展开剂
3.1)取乙酸乙酯、甲酸、乙酸和水,以10∶1.1∶1.1∶2.6的体积比混合,得到展开剂,此处乙酸乙酯、甲酸、乙酸和水均为纯品;
3.2)将展开剂置于展开缸中,密封展开缸,预饱和15~20分钟;
4)展开
将步骤3)预饱和后的展开缸打开,迅速将步骤2)点样后的硅胶G薄层板放入展开缸中,放入的硅胶G薄层板应斜靠在展开缸中,且展开缸中的展开剂不能没过点样原点;当展开剂的前沿上行至硅胶G薄层板上边缘,距离点样原点6cm~15cm时,将硅胶G薄层板取出;
5)显色与检视
5.1)吹干步骤4)展开好的硅胶G薄层板上的试剂后,喷以天然显色剂,在105℃下加热2~4分钟,放至室温后在紫外365nm光照下检视;
5.2)再向硅胶G薄层板喷以质量浓度为5%~10%的硫酸乙醇溶液,并在105℃下加热3~5分钟,放至室温后在紫外365nm光照下检视。
进一步地,步骤1.1)具体为,取南非醉茄根原料及南非醉茄茎叶原料,粉碎后过80目,置于带塞的三角瓶中;各自加入所述南非醉茄根原料及所述南非醉茄茎叶原料质量6~8倍量、质量浓度为80%的乙醇,并进行超声提取60分钟,取出三角瓶后放至室温,然后采用微孔滤膜过滤,收集滤液作为对照品溶液;采用此条件处理的原料样品,在后续展开中能够形成特征分明的展开图。
进一步地,步骤1.2)具体为,取待鉴别的南非醉茄根提取物,置于带塞的三角瓶中加入所述南非醉茄根提取物质量6~8倍量、质量浓度为80%的乙醇,并进行超声处理60分钟,取出三角瓶后放至室温,然后采用微孔滤膜过滤,收集滤液作为样品溶液;采用此条件处理的原料样品,在后续展开中能够形成特征分明的展开图。
进一步地,步骤2)中,所述样品溶液和对照品溶液的点样位置距离硅胶G薄层板下边缘的距离为1.0~1.5cm,能够在完成展开步骤时,有效地利用薄层板。
进一步地,步骤3.2)中,为了使展开剂在展开缸中更好的达到平衡,从而减少硅胶G薄层板的边缘效应,所述展开缸采用双槽展开缸,双槽展开缸的大小为10×10cm、20×10cm或10×20cm,且双槽中的展开剂剂量保持一致,并预饱和15分钟。
进一步地,步骤4)中,当展开剂的前沿上行至硅胶G薄层板上边缘,距离点样原点8cm~10cm时,将硅胶G薄层板取出。
进一步地,步骤5.1)中,所述天然显色剂为10g/L的二苯硼酸-2-氨基乙酯甲醇溶液或者50g/L的聚乙二醇4000甲醇溶液。
进一步地,步骤5.2)中,为了使显色效果更好,所述硫酸乙醇溶液的质量浓度为10%。
进一步地,所述步骤5)中,采用吹风机将硅胶G薄层板上的试剂吹干。
进一步地,所述步骤5)中,采用电加热板对硅胶G薄层板进行加热,且喷天然显色剂时的加热时间较喷硫酸乙醇溶液时的加热时间短1分钟。
本发明中样品溶液、对照品溶液、展开剂的配制顺序可根据实际检测情况进行调整。
本发明的优点是:
1.本发明旨在用一种快速简单的方法来鉴别南非醉茄根提取物是否掺有南非醉茄茎叶或纯粹就是南非醉茄茎叶的提取物;有效利用薄层鉴别方法,可以很清楚的从薄层图谱中分辨出南非醉茄茎叶的成分,其方法简单、经济(成本低)、快速、高效、且专属性强。对南非醉茄根和南非醉茄茎叶的对比明显,结果直观,易于辨认和区分,为确保南非醉茄根提取物的质量提供了可靠的鉴别方法。
2.本发明选用南非醉茄根和南非醉茄茎叶特有的代表成分对来两者进行鉴别,斑点清晰,结果判断直观准确。
3.本发明选用适量的乙醇直接对原料样品进行超声处理,过滤,滤液作为检测溶液,样品前处理非常简单。
4.本发明采用乙酸乙酯、甲酸、乙酸和水以10∶1.1∶1.1∶2.6的体积比进行混合,得到展开剂,斑点分离效果好,各样品特征斑点突出,且没有斑点拖尾和斑点扩散现象,结果对比明显,容易判断。
5.本发明选择在薄层板展开距离为8~10cm时取出薄层板,此时斑点分离度效果好,斑点没有重合现象。
6.本发明先采用天然显色剂显色,在天然显色剂的基础上再用质量浓度为5%~10%的硫酸乙醇进行显色,叠加使用显色剂,多方面多角度对比,使各样品特征斑点突出,信息全面,使醉茄根和醉茄茎叶区别明显,易于识别南非醉茄根提取物是否掺有南非醉茄茎叶部分。
附图说明
图1为实施例一中仅使用天然显色剂显色,并在紫外365nm光照下进行检视的视图;
图2为实施例一中使用天然显色剂和硫酸乙醇显色,并在紫外365nm光照下进行检视的视图;
图3为采用《美国药典》40版中记载的薄层鉴别方法进行检视的视图;其中,(a)为在紫外365nm光照下进行检视的视图;(b)为在白光下进行检视的视图;
图4为实施例二中仅使用天然显色剂显色,并在紫外365nm光照下进行检视的视图;
图5为实施例二中使用天然显色剂和硫酸乙醇显色,并在紫外365nm光照下进行检视的视图;
图6为实施例三中仅使用天然显色剂显色,并在紫外365nm光照下进行检视的视图;
图7为实施例三中使用天然显色剂和硫酸乙醇显色,并在紫外365nm光照下进行检视的视图;
图8为实施例四中仅使用天然显色剂显色,并在紫外365nm光照下进行检视的视图;
图9为实施例四中使用天然显色剂和硫酸乙醇显色,并在紫外365nm光照下进行检视的视图。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明的内容作进一步的详细描述:
实施例一
一种用于鉴别南非醉茄根提取物掺假的薄层检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)制备对照品溶液和样品溶液
1.1)取南非醉茄根原料及南非醉茄茎叶原料,粉碎后过80目,置于带塞的三角瓶中;各自加入南非醉茄根原料及南非醉茄茎叶原料质量6倍量、质量浓度为70%的乙醇,并进行超声提取120分钟,取出三角瓶后放至室温,然后采用微孔滤膜过滤,收集滤液作为对照品溶液;为了提升该试验的正确性,针对南非醉茄根原料以及南非醉茄茎叶原料均制备两组对照品溶液,南非醉茄根对照品溶液的编号为2号和3号;南非醉茄茎叶原料对照品溶液的编号为4号和5号;
1.2)购买不同渠道的待鉴别南非醉茄根提取物,分别置于带塞的三角瓶中,各自加入南非醉茄根提取物质量6倍量、质量浓度为70%的乙醇,并进行超声处理30分钟,取出三角瓶后放至室温,然后采用微孔滤膜过滤,收集滤液作为样品溶液;制得5组不同样品的样品溶液,编号依次为1号、6号、7号、8号、9号和10号;
2)薄层点样
将步骤1)中制备好的对照品溶液样品溶液和样品溶液按编号顺序依次点于同一硅胶G薄层板上同一高度的不同位置上形成10个点样原点,且点样原点距离硅胶G薄层板下边缘的距离为1.0~1.5cm;
3)制备展开剂
3.1)取乙酸乙酯、甲酸、乙酸和水,以10∶1.1∶1.1∶2.6的体积比混合,制备20ml的展开剂,此处乙酸乙酯、甲酸、乙酸和水均为纯品;
3.2)将展开剂置于10×10cm规格的双槽展开缸中,并使双槽中的展开剂剂量保持一致;然后密封展开缸,预饱和15分钟;双槽展开缸的规格也可为20×10cm或10×20cm;
4)展开
将步骤3)预饱和后的展开缸打开,迅速将步骤2)点样后的硅胶G薄层板放入展开缸中,放入的硅胶G薄层板应斜靠在展开缸中,且展开缸中的展开剂不能没过点样原点;当展开剂的前沿上行至硅胶G薄层板上边缘,距离点样原点8cm时,将硅胶G薄层板取出;
5)显色与检视
5.1)用吹风机吹干步骤4)展开好的硅胶G薄层板上的试剂后,喷以天然显色剂,置于电加热板上,在105℃下加热3分钟,放至室温后在紫外365nm光照下检视,得到图1中的视图;该天然显色剂可选用10g/L的二苯硼酸-2-氨基乙酯甲醇溶液或者50g/L的聚乙二醇4000甲醇溶液。
5.2)再向硅胶G薄层板喷以质量浓度为10%的硫酸乙醇溶液,同样,置于电加热板上,并在105℃下加热4分钟,放至室温后分别在紫外365nm光照下检视,得到图2中的视图。
6)对比鉴别
a)如图1所示,在硅胶G薄层板上,喷以天然显色剂后,在紫外365nm光照下,Rf=0.09和Rf=0.35附近,南非醉茄茎叶有明显的橘黄颜色斑点(4号、5号),而南非醉茄根(2号、3号)没有,且南非醉茄根的斑点明显少于南非醉茄茎叶的斑点。因此,可以初步判断:1号、6号、7号样品为南非醉茄根的提取物;8号、9号、10号为南非醉茄根掺有南非醉茄茎叶的提取物。
b)如图2所示,在硅胶G薄层板上,再喷以质量浓度为10%的硫酸乙醇后,在紫外365nm光照下,Rf=0.09~0.13和Rf=0.35~0.45之间,南非醉茄茎叶有明显的嫩绿色斑点或淡蓝色斑点(4号、5号),而南非醉茄根没有(2号、3号);与此同时,在Rf=0.02附近,南非醉茄根有明显的棕黑颜色斑点(2号、3号),而南非醉茄茎叶没有(4号、5号)。因此,可以确认:1号、6号、7号样品为南非醉茄根的提取物;8号、9号、10号为南非醉茄根掺有南非醉茄茎叶的提取物,其中8号的掺杂量较少,因此在Rf=0.09~0.13处的斑点不明显。
为了进一步验证本发明鉴别方法的可靠性,我司对《美国药典》40版中记载醉茄根鉴定方法进行实验验证,从而证明此方法不能检测醉茄提取物中是否掺有醉茄茎叶。如图3所示:S1为醉茄素A标准品,S2为醉茄素IV标准品,1~3号为醉茄根原料,4号为醉茄茎叶原料,5~7号为醉茄根提取物,8~10为掺有茎叶的醉茄提取物。
实施例二
与实施例的区别在于:
1.1)中,各自加入南非醉茄根原料及南非醉茄茎叶原料质量8倍量、质量浓度为80%的乙醇,并进行超声提取60分钟;
1.2)中,各自加入南非醉茄根提取物质量8倍量、质量浓度为80%的乙醇,并进行超声处理60分钟;
4)中,当展开剂的前沿上行至硅胶G薄层板上边缘,距离点样原点10cm时,将硅胶G薄层板取出;
实施例三
与实施例一的区别在于:
1.1)中,各自加入南非醉茄根原料及南非醉茄茎叶原料质量5倍量、质量浓度为100%的乙醇,并进行超声提取80分钟;
1.2)中,各自加入南非醉茄根提取物质量5倍量、质量浓度为100%的乙醇,并进行超声处理45分钟;
3.2)中,展开剂预饱和时间为20分钟;
4)中,当展开剂的前沿上行至硅胶G薄层板上边缘,距离点样原点15cm时,将硅胶G薄层板取出;
5.1)中,在105℃下加热2分钟,放至室温后在紫外365nm光照下检视;
5.2)中,再向硅胶G薄层板喷以质量浓度为8%的硫酸乙醇溶液,同样,置于电加热板上,并在105℃下加热3分钟,放至室温后分别在紫外365nm光照下;
实施例四
与实施例一的区别在于:
1.1)中,各自加入南非醉茄根原料及南非醉茄茎叶原料质量10倍量的乙醇,并进行超声提取100分钟;
1.2)中,各自加入南非醉茄根提取物质量10倍量的乙醇;
3.2)中,展开剂预饱和时间为18分钟;
4)中,当展开剂的前沿上行至硅胶G薄层板上边缘,距离点样原点6cm时,将硅胶G薄层板取出;
5.1)中,在105℃下加热4分钟,放至室温后在紫外365nm光照下检视;
5.2)中,再向硅胶G薄层板喷以质量浓度为5%的硫酸乙醇溶液,同样,置于电加热板上,并在105℃下加热5分钟,放至室温后分别在紫外365nm光照下检视;
同样,采用实施例二-实施例四的检测条件并进行检视,可得到与实施例一相类似的检测视图,具体参见图4~图9,均能显示出南非醉茄根、南非醉茄茎叶、以及待鉴别南非醉茄根提取物的特征斑点,协助人员鉴别该待鉴别南非醉茄根提取物是否掺假,对比明显,结果直观,在此不再赘述。
以上所述,仅为本发明的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明公开的技术范围内,可轻易想到各种等效的修改或替换,这些修改或替换都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种用于鉴别南非醉茄根提取物掺假的薄层检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)制备对照品溶液和样品溶液
1.1)取南非醉茄根原料及南非醉茄茎叶原料,粉粹后过筛,分别置于可密封的试验容器中,各自加入所述南非醉茄根原料及所述南非醉茄茎叶原料质量5~10倍量、质量浓度为70%~100%的乙醇,并进行超声提取60~120分钟,取出试验容器后放至室温,然后采用微孔滤膜过滤,收集滤液作为对照品溶液;
1.2)取待鉴别的南非醉茄根提取物,置于可密封的试验容器中,加入所述南非醉茄根提取物质量5~10倍量、质量浓度为70%~100%的乙醇,并进行超声处理30~60分钟,取出试验容器后放至室温,然后采用微孔滤膜过滤,收集滤液作为样品溶液;
2)薄层点样
将步骤1)中制备好的对照品溶液和样品溶液依次分别点于同一硅胶G薄层板上同一高度的不同位置上形成点样原点;
3)制备展开剂
3.1)取乙酸乙酯、甲酸、乙酸和水,以10∶1.1∶1.1∶2.6的体积比混合,得到展开剂;
3.2)将展开剂置于展开缸中,密封展开缸,预饱和15~20分钟;
4)展开
将步骤3)预饱和后的展开缸打开,迅速将步骤2)点样后的硅胶G薄层板放入展开缸中,且展开缸中的展开剂不能没过点样原点;当展开剂的前沿上行至硅胶G薄层板上边缘,距离点样原点6cm~15cm时,将硅胶G薄层板取出;
5)显色与检视
5.1)吹干步骤4)展开好的硅胶G薄层板上的试剂后,喷以天然显色剂,在105℃下加热2~4分钟,放至室温后在紫外365nm光照下检视;
所述天然显色剂为10g/L的二苯硼酸-2-氨基乙酯甲醇溶液或者50g/L的聚乙二醇4000甲醇溶液;
5.2)再向硅胶G薄层板喷以质量浓度为5%~10%的硫酸乙醇溶液,并在105℃下加热3~5分钟,放至室温后在紫外365nm光照下检视;
鉴别南非醉茄根提取物掺假的薄层检测方法的原理为:在硅胶G薄层板上,待鉴别南非醉茄根提取物的斑点,如果和南非醉茄根原料的斑点一致,则判断此提取物是不含有南非醉茄茎叶的,为真的南非醉茄根提取物;如果待鉴别南非醉茄根提取物中含有南非醉茄茎叶的特征斑点,则判断此提取物掺有醉茄地上部分。
2.根据权利要求1所述的用于鉴别南非醉茄根提取物掺假的薄层检测方法,其特征在于:
步骤1.1)具体为,取南非醉茄根原料及南非醉茄茎叶原料,粉碎后过80目,置于带塞的三角瓶中;各自加入所述南非醉茄根原料及所述南非醉茄茎叶原料质量6~8倍量、质量浓度为80%的乙醇,并进行超声提取60分钟,取出三角瓶后放至室温,然后采用微孔滤膜过滤,收集滤液作为对照品溶液。
3.根据权利要求2所述的用于鉴别南非醉茄根提取物掺假的薄层检测方法,其特征在于:
步骤1.2)具体为,取待鉴别的南非醉茄根提取物,置于带塞的三角瓶中加入所述南非醉茄根提取物质量6~8倍量、质量浓度为80%的乙醇,并进行超声处理60分钟,取出三角瓶后放至室温,然后采用微孔滤膜过滤,收集滤液作为样品溶液。
4.根据权利要求3所述的用于鉴别南非醉茄根提取物掺假的薄层检测方法,其特征在于:
步骤2)中,所述样品溶液和对照品溶液的点样位置距离硅胶G薄层板下边缘的距离为1.0~1.5cm。
5.根据权利要求4所述的用于鉴别南非醉茄根提取物掺假的薄层检测方法,其特征在于:
步骤3.2)中,所述展开缸采用双槽展开缸,双槽展开缸的大小为10×10cm、20×10cm或10×20cm,且双槽中的展开剂剂量保持一致,并预饱和15分钟。
6.根据权利要求5所述的用于鉴别南非醉茄根提取物掺假的薄层检测方法,其特征在于:
步骤4)中,当展开剂的前沿上行至硅胶G薄层板上边缘,距离点样原点8cm~10cm时,将硅胶G薄层板取出。
7.根据权利要求6所述的用于鉴别南非醉茄根提取物掺假的薄层检测方法,其特征在于:
步骤5.2)中,所述硫酸乙醇溶液的质量浓度为10%。
8.根据权利要求7所述的用于鉴别南非醉茄根提取物掺假的薄层检测方法,其特征在于:
所述步骤5)中,采用吹风机将硅胶G薄层板上的试剂吹干。
9.根据权利要求8所述的用于鉴别南非醉茄根提取物掺假的薄层检测方法,其特征在于:
所述步骤5)中,采用电加热板对硅胶G薄层板进行加热,且喷天然显色剂时的加热时间较喷硫酸乙醇溶液时的加热时间短1分钟。
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