CN114989992A - 一种丛枝菌根真菌离体双重培养物促进植物生长的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种丛枝菌根真菌离体双重培养物促进植物生长的方法，该方法为：制备扩繁培养基，扩繁培养基上放置毛状根培养1个月后，然后在超净工作台中用手术刀切取含丛枝菌根真菌的扩繁培养基，涂抹在所述毛状根上，在温度为25℃的黑暗条件下条件下，培养两个月，得到子代共生丛枝菌根真菌的培养物，制备成丛枝菌根真菌离体双重培养物，当其为包含孢子和根段的固体复合物时，直接填入种植穴后，种植植物幼苗；当其为包含孢子、根段的悬浊液时，对植物幼苗进行浸种、蘸根或者沟施后，种植植物幼苗。本发明避免了只获取单纯丛枝菌根真菌孢子的流失率，最大限度上避免浪费。

Description

一种丛枝菌根真菌离体双重培养物促进植物生长的方法
技术领域
本发明属于丛枝菌根真菌技术领域，具体涉及一种丛枝菌根真菌离体双重培养物促进植物生长的方法。
背景技术
丛枝菌根真菌是土壤中重要的微生物，能够与地球上80％的陆地植物共生，包括玉米、小麦、水稻等重要的农作物。在农业生产实践中发挥着重要的作用，但是丛枝菌根真菌是一种专性共生真菌，只能与植物共生才能繁殖，目前没有完全成熟高效的纯培养方法。其扩繁方法主要有盆栽培养法、培养基培养法、静止营养液培养法、流动营养液培养法、喷雾液培法、玻璃珠分室培养法、大田培养法以及丛枝菌根真菌与植物离体根器官的离体双重培养法。
主流生产方法中，离体双重培养是最为高效获得纯净孢子生产的方法。一个培养皿中可获得2万至3万颗孢子，远远胜过盆栽培养等方法，还没有杂菌污染，生长周期短，占据的空间小，目前应用的方式主要是将培养物溶解打碎处理，只获取孢子进行保存。有以下缺点：
1.溶解，打碎提取纯孢子的过程中浪费，流失了大量孢子。
2.纯孢子提取出后，不易保存，容易污染。
3.造成大量的资源浪费，培养物中包含大量的根系，次生代谢物质和剩余的营养元素。
4.操作步骤复杂，不容易操作。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种丛枝菌根真菌离体双重培养物促进植物生长的方法，该方法避免了获取单纯丛枝菌根真菌孢子过程中的流失率，最大限度上避免浪费。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种丛枝菌根真菌离体双重培养物促进植物生长的方法，该方法为：
S1、母代扩繁培养基的制备：所述母代扩繁培养基由以下原料制成：MgSO4·7H2O0.73g、KNO30.076g、KCl 0.065g、Ca(NO3)2·4H2O 0.35g、MES缓冲剂2.13g、蔗糖10g、MSR微量元素溶液1mL、MSR铁盐溶液10mL，加水定容至1L，将pH值调至5.8后，加入植物凝胶Phytagel，121℃高温灭菌后，加入维生素溶液1mL；所述植物凝胶Phytagel的终浓度为3.5g/L；
S2、母代共生丛枝菌根真菌的培养物的制备：
在S1中得到的母代扩繁培养基上放置毛状根培养1个月后，放入丛枝菌根真菌，在温度为25℃的黑暗条件下条件下培养至产孢，得到母代共生丛枝菌根真菌的培养物；
S3、扩繁培养基的制备：所述扩繁培养基由以下原料制成：MgSO4·7H2O 0.73g、KNO30.076g、KCl 0.065g、Ca(NO3)2·4H2O 0.35g、MES缓冲剂2.13g、蔗糖10g、MSR微量元素溶液1mL、MSR铁盐溶液10mL，加水定容至1L，将pH值调至5.8后，加入植物凝胶Phytagel，121℃高温灭菌后，加入维生素溶液1mL、滤液5mL；所述植物凝胶Phytagel的终浓度为3.5g/L；
所述维生素溶液由以下原料加蒸馏水定容至250mL而成:硫胺素0.25g、吡哆醇0.225g、烟酸0.25g、泛酸钙0.225g、钴胺素0.1g、生物素0.000225g；
所述滤液的制备方法为：取S2中得到的母代共生丛枝菌根真菌的培养物，用浓度为2.941g/L的柠檬酸钠溶液溶解，用0.22μm的滤膜滤除根系和孢子，得到滤液；所述母代共生丛枝菌根真菌的培养物和柠檬酸钠溶液的用量比为1g:5mL；
S4、丛枝菌根真菌的扩繁：
在S3中得到的扩繁培养基上放置毛状根培养1个月后，然后在超净工作台中用手术刀切取含丛枝菌根真菌的扩繁培养基，涂抹在所述毛状根上，在温度为25℃的黑暗条件下条件下，培养两个月，得到子代共生丛枝菌根真菌的培养物；
所述子代共生丛枝菌根真菌的培养物循环至S3中用所述滤液的制备；
S5、丛枝菌根真菌离体双重培养物的制备：
将S4中得到的子代共生丛枝菌根真菌孢子的培养物在温度为25℃的条件下风干，用搅拌机打碎后，得到包含孢子和根段的固体复合物，即丛枝菌根真菌离体双重培养物；
或者将S4中得到的子代共生丛枝菌根真菌孢子的培养物，加入浓度为2.941g/L的柠檬酸钠溶液，在搅拌机内打碎后，加入纯净水稀释，混合均匀，得到包含孢子、根段的悬浊液，即丛枝菌根真菌离体双重培养物；所述悬浊液中子代共生丛枝菌根真菌孢子的培养物、柠檬酸钠溶液和纯净水的用量比为1g：5mL：50mL；
S6、当S5中所述丛枝菌根真菌离体双重培养物为包含孢子和根段的固体复合物时，将所述丛枝菌根真菌离体双重培养物直接填入种植穴后，种植植物幼苗；
当S5中所述丛枝菌根真菌离体双重培养物为包含孢子、根段的悬浊液时，将所述丛枝菌根真菌离体双重培养物对植物幼苗进行浸种、蘸根或者沟施后，种植植物幼苗；
S1和S3中所述MSR微量元素溶液由以下原料中加蒸馏水定容至500mL，然后在温度为121℃的条件下灭菌20min，避光保存：KH2PO42.05g、MnSO4·4H2O 1.225g、ZnSO4·7H2O0.145g、H3BO30.93g、CuSO4·5H2O 0.12g、Na2MoO4·2H2O 0.0072g、(NH4)6Mo7O24·4H2O0.0175g；
所述MSR铁盐溶液由0.4g的NaFeEDTA加蒸馏水定容至500mL，然后在温度为121℃的条件下灭菌20min，避光保存。
优选地，S2和S4中所述毛状根是用发根农杆菌诱导出的植物根系；所述毛状根的植物来源包括胡萝卜或者苜蓿。
优选地，S6中所述植物幼苗为百脉根。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
本发明在扩繁培养基中加入滤液，可以让孢子更快共生产孢，丛枝菌根真菌离体双重培养物与直接施加丛枝菌根真菌孢子相比，本发明充分利用根系和孢子的次生代谢物和残存的矿质营养，避免了只获取单纯丛枝菌根真菌孢子的流失率，最大限度上避免浪费，本发明能更快地促进孢子分枝伸长，更快与植物共生，有利于植物的生长和繁殖，促进植物生长。
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明。
附图说明
图1是本发明的实施例1的对照组正常培养的孢子萌发的菌丝显微镜图。
图2是本发明的实施例1的实验组的孢子萌发的菌丝显微镜图。
图3是本发明的实施例1的百脉根开花数图。
具体实施方式
实施例1
本实施例的丛枝菌根真菌离体双重培养物促进植物生长的方法，该方法为：
S1、母代扩繁培养基的制备：所述母代扩繁培养基由以下原料制成：MgSO4·7H2O0.73g、KNO30.076g、KCl 0.065g、Ca(NO3)2·4H2O 0.35g、MES缓冲剂2.13g、蔗糖10g、MSR微量元素溶液1mL、MSR铁盐溶液10mL，加水定容至1L，将pH值调至5.8后，加入植物凝胶Phytagel，121℃高温灭菌后，加入维生素溶液1mL；所述植物凝胶Phytagel的终浓度为3.5g/L；
S2、母代共生丛枝菌根真菌的培养物的制备：
在S1中得到的母代扩繁培养基上放置毛状根培养1个月后，放入丛枝菌根真菌，在温度为25℃的黑暗条件下条件下培养至产孢，得到母代共生丛枝菌根真菌的培养物；
S3、扩繁培养基的制备：所述扩繁培养基由以下原料制成：MgSO4·7H2O0.73g、KNO30.076g、KCl 0.065g、Ca(NO3)2·4H2O 0.35g、MES缓冲剂2.13g、蔗糖10g、MSR微量元素溶液1mL、MSR铁盐溶液10mL，加水定容至1L，将pH值调至5.8后，加入植物凝胶Phytagel，121℃高温灭菌后，加入维生素溶液1mL、滤液5mL；所述植物凝胶Phytagel的终浓度为3.5g/L；
所述维生素溶液由以下原料加蒸馏水定容至250mL而成:硫胺素0.25g、吡哆醇0.225g、烟酸0.25g、泛酸钙0.225g、钴胺素0.1g、生物素0.000225g；
所述滤液的制备方法为：取S2中得到的母代共生丛枝菌根真菌的培养物，用浓度为2.941g/L的柠檬酸钠溶液溶解，用0.22μm的滤膜滤除根系和孢子，得到滤液；所述母代共生丛枝菌根真菌的培养物和柠檬酸钠溶液的用量比为1g:5mL；
S4、丛枝菌根真菌的扩繁：
在S3中得到的扩繁培养基上放置毛状根培养1个月后，然后在超净工作台中用手术刀切取含丛枝菌根真菌的扩繁培养基，涂抹在所述毛状根上，在温度为25℃的黑暗条件下条件下，培养两个月，得到子代共生丛枝菌根真菌的培养物；
所述子代共生丛枝菌根真菌的培养物循环至S3中用所述滤液的制备；
S5、丛枝菌根真菌离体双重培养物的制备：
将S4中得到的子代共生丛枝菌根真菌孢子的培养物在温度为25℃的条件下风干，用搅拌机打碎后，得到包含孢子和根段的固体复合物，即丛枝菌根真菌离体双重培养物；
或者将S4中得到的子代共生丛枝菌根真菌孢子的培养物，加入浓度为2.941g/L的柠檬酸钠溶液，在搅拌机内打碎后，加入纯净水稀释，混合均匀，得到包含孢子、根段的悬浊液，即丛枝菌根真菌离体双重培养物；所述悬浊液中子代共生丛枝菌根真菌孢子的培养物、柠檬酸钠溶液和纯净水的用量比为1g：5mL：50mL；
S6、当S5中所述丛枝菌根真菌离体双重培养物为包含孢子和根段的固体复合物时，将所述丛枝菌根真菌离体双重培养物直接填入种植穴后，种植植物幼苗百脉根；
当S5中所述丛枝菌根真菌离体双重培养物为包含孢子、根段的悬浊液时，将所述丛枝菌根真菌离体双重培养物对植物幼苗进行浸种、蘸根或者沟施后，种植植物幼苗百脉根；
S1和S3中所述MSR微量元素溶液由以下原料中加蒸馏水定容至500mL，然后在温度为121℃的条件下灭菌20min，避光保存：KH2PO42.05g、MnSO4·4H2O 1.225g、ZnSO4·7H2O0.145g、H3BO30.93g、CuSO4·5H2O 0.12g、Na2MoO4·2H2O 0.0072g、(NH4)6Mo7O24·4H2O0.0175g；
所述MSR铁盐溶液由0.4g的NaFeEDTA加蒸馏水定容至500mL，然后在温度为121℃的条件下灭菌20min，避光保存；
S2和S4中所述毛状根是用发根农杆菌A4诱导出的植物根系；本实施例中所述毛状根的植物来源为胡萝卜；
毛状根的植物来源也可以为苜蓿等。
(一)本实施例还进行了培养物对丛枝菌根真菌孢子的促进作用的试验：
试验分为两组：
实验组为本实施例中的S3中的扩繁培养基；
对照组为S1中的母代扩繁培养基(即不添加滤液)；
各挑取形态完好的单个丛枝菌根真菌孢子，进行表面消毒后，用无菌水冲洗干净后，分别放入实验组的扩繁培养基和对照组的不添加滤液的培养基上，在25℃的培养箱环境下进行暗培养，15天后在体式显微镜下观察孢子的生长情况。
对照组正常培养的孢子萌发的菌丝只有一条(图1)，实验组的孢子萌发分枝3到4条(图2)，实验组中孢子延伸出的菌丝长度，相较于对照组提高了111.83％；可见显著促进孢子分枝和延长，有助于孢子萌发后迅速和植物形成共生。
(二)丛枝菌根真菌离体双重培养物对植物的促生作用：
验证步骤S6中丛枝菌根真菌离体双重培养物(包含孢子和根段的固体复合物和包含孢子、根段的悬浊液)的两种处理方法的有效性。
1、用丛枝菌根真菌离体双重培养物(包含孢子和根段的固体复合物)：
选用百脉根MG20(Lotusjaponicus)作为宿主植物，百脉根是优质牧草，豆科模式植物，在畜牧领域有着重要的实用价值。将百脉根种子在研钵内用砂纸磨破种皮，用酒精和次氯酸钠溶液进行消毒，用无菌水冲洗干净后，在1％的水琼脂培养基上进行萌发。种植基质选用配比为4：1的蛭石和珍珠岩。保证基质的吸水性和孔隙度。种植基质中不含营养元素，不会影响丛枝菌根真菌和百脉根共生。种植基质配置好后，经121℃，40min灭菌，冷却后使用。待种子萌发后，选取长势相似的百脉根移栽入种植基质内。
实验组在种植穴内埋入丛枝菌根真菌离体双重培养物(包含孢子和根段的固体复合物)，然后种入百脉根幼苗。
对照组Ri在种植穴内加入和丛枝菌根真菌离体双重培养物(包含孢子和根段的固体复合物)等量的的丛枝菌根真菌异形根孢囊霉(Rhizophagus irregularis，Ri)的孢子。
对照组CK则不做任何处理。每组做三个重复。
各组每星期需浇营养液，满足植物的生长需求。
营养液配方为：2mmol/L K2SO4，1.5mmol/L Mg2SO4·7H2O，3mmol/LCaCl2·2H2O，0.1mmol/L FeEDTA，4mmol/L(NH4)2SO4，8mmol/L NaNO3，1.33mmol/L Na2HPO4，2.86mg/L的H3BO3以及微量元素1.81mg/LMnCl2·4H2O，0.5mg/L ZnSO4·7H2O，0.08mg/L CuSO4·5H2O，0.025mg/LNaMoO4·7H2O。
将百脉根植株放入光照培养箱中，培养条件为白天25℃，晚上22℃，光照时间为16小时,70％湿度，定期改变植株的位置，消除影响。
接种丛枝菌根真菌离体双重培养物(包含孢子和根段的固体复合物)后一个月，加入丛枝菌根真菌离体双重培养物(包含孢子和根段的固体复合物)的叶片数比Ri提高了20％，株高提高了56.17％；加入丛枝菌根真菌离体双重培养物(包含孢子和根段的固体复合物)的叶片数比CK提高了23.52％，株高提高了76.63％。
接种丛枝菌根真菌离体双重培养物(包含孢子和根段的固体复合物)后二个月，加入丛枝菌根真菌离体双重培养物(包含孢子和根段的固体复合物)的叶片数比Ri提高了155.56％，比CK提高了293.02％；加入丛枝菌根真菌离体双重培养物(包含孢子和根段的固体复合物)的株高比CK提高了30.92％；加入丛枝菌根真菌离体双重培养物(包含孢子和根段的固体复合物)的植株平均分枝数为6，较对照组CK提高了328.57％，较Ri处理组提高了300％。明显可见提高了植物的株高、叶片数和分枝数，促进植物更快与丛枝菌根真菌共生，促进了植物的生长。
2、用丛枝菌根真菌离体双重培养物(包含孢子、根段的悬浊液)：
方法同1。
将两种浓度的包含孢子、根段的悬浊液、滤液和Ri孢子与百脉根组合接种。并设置以下六个处理组，每个处理组三组重复。
对照组CK；
只添加丛枝菌根真菌Ri的孢子的对照组Ri；
只添加不同浓度的不含丛枝菌根真菌繁殖体的滤液lv1/2和lv；
不含丛枝菌根真菌繁殖体的滤液：即为本实施例中S3步骤中的滤液(即用滤膜过滤含孢子、根段的悬浊液)；
包含孢子、根段的悬浊液分为两个浓度组Ri+lv1/2和Ri+lv；
Ri与Ri+lv1/2，Ri+lv三个处理组中孢子量都是定量接种，数目大致相同。
接种悬浊液两个月后取样观察，Ri和Ri+lv1/2，Ri+lv三组的株高比CK分别提高了58.27％，43.75％和30.99％。lv1/2和lv两个处理组的株高比CK提高了37.74％和18.16％。
与对照组CK相比，Ri和Ri+lv1/2，Ri+lv的地上部生物量均有极显著差异，分别提高了133.51％，175.62％和196.32％。Ri+lv1/2，Ri+lv两组的地上部生物量比Ri提高了18.04％和26.94％。对比地下部分生物量，Ri和Ri+lv1/2，Ri+lv分别比CK提高了67.06％，68.89％和74.196％，均有明显差异。从植株的总生物量来看，Ri，Ri+lv1/2与Ri+lv三组和CK均有极显著差异，其中Ri+lv的总生物量较Ri提高了22.80％，有显著差异。lv1/2和lv两组的生物量和CK相比有提升趋势，但无明显差异。
生长两个月后，对照组CK不分枝，只生长主茎。lv1/2和lv平均分1-2枝干，Ri平均分2-3枝。Ri+lv1/2，Ri+lv两个处理组平均分4-5枝干，且分枝的长度较其他处理组都更长。
还可以观察到，所有添加过不含丛枝菌根真菌繁殖体的滤液或包含孢子、根段的悬浊液的植物(lv1/2、lv、Ri+lv1/2和Ri+lv)，开花时间都提前了，Ri+lv比Ri的开花时间提前了7天，lv的开花时间比CK提前了3天，提前了植物的繁殖生长期，有利于植物的生长和繁殖。(图3)
对Ri、Ri+lv1/2和Ri+lv三组的植物根系进行台盼蓝染色处理，三组的菌根侵染率大致相同。Ri+lv和Ri+lv1/2的菌根侵染强度分别为55.94％和51.67％，均高于Ri处理组的36.82％。可见施用丛枝菌根真菌离体双重培养物能提高植物和丛枝菌根真菌的共生效率，从而促进植物的生长发育。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制。凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。

Claims (3)

1.一种丛枝菌根真菌离体双重培养物促进植物生长的方法，其特征在于，该方法为：
S1、母代扩繁培养基的制备：所述母代扩繁培养基由以下原料制成：MgSO4·7H2O0.73g、KNO3 0.076g、KCl 0.065g、Ca(NO3)2·4H2O 0.35g、MES缓冲剂2.13g、蔗糖10g、MSR微量元素溶液1mL、MSR铁盐溶液10mL，加水定容至1L，将pH值调至5.8后，加入植物凝胶Phytagel，121℃高温灭菌后，加入维生素溶液1mL；所述植物凝胶Phytagel的终浓度为3.5g/L；
S2、母代共生丛枝菌根真菌的培养物的制备：
在S1中得到的母代扩繁培养基上放置毛状根培养1个月后，放入丛枝菌根真菌，在温度为25℃的黑暗条件下条件下培养至产孢，得到母代共生丛枝菌根真菌的培养物；
S3、扩繁培养基的制备：所述扩繁培养基由以下原料制成：MgSO4·7H2O 0.73g、KNO30.076g、KCl 0.065g、Ca(NO3)2·4H2O 0.35g、MES缓冲剂2.13g、蔗糖10g、MSR微量元素溶液1mL、MSR铁盐溶液10mL，加水定容至1L，将pH值调至5.8后，加入植物凝胶Phytagel，121℃高温灭菌后，加入维生素溶液1mL、滤液5mL；所述植物凝胶Phytagel的终浓度为3.5g/L；
所述维生素溶液由以下原料加蒸馏水定容至250mL而成:硫胺素0.25g、吡哆醇0.225g、烟酸0.25g、泛酸钙0.225g、钴胺素0.1g、生物素0.000225g；
所述滤液的制备方法为：取S2中得到的母代共生丛枝菌根真菌的培养物，用浓度为2.941g/L的柠檬酸钠溶液溶解，用0.22μm的滤膜滤除根系和孢子，得到滤液；所述母代共生丛枝菌根真菌的培养物和柠檬酸钠溶液的用量比为1g:5mL；
S4、丛枝菌根真菌的扩繁：
在S3中得到的扩繁培养基上放置毛状根培养1个月后，然后在超净工作台中用手术刀切取含丛枝菌根真菌的扩繁培养基，涂抹在所述毛状根上，在温度为25℃的黑暗条件下条件下，培养两个月，得到子代共生丛枝菌根真菌的培养物；
所述子代共生丛枝菌根真菌的培养物循环至S3中用所述滤液的制备；
S5、丛枝菌根真菌离体双重培养物的制备：
将S4中得到的子代共生丛枝菌根真菌孢子的培养物在温度为25℃的条件下风干，用搅拌机打碎后，得到包含孢子和根段的固体复合物，即丛枝菌根真菌离体双重培养物；
或者将S4中得到的子代共生丛枝菌根真菌孢子的培养物，加入浓度为2.941g/L的柠檬酸钠溶液，在搅拌机内打碎后，加入纯净水稀释，混合均匀，得到包含孢子、根段的悬浊液，即丛枝菌根真菌离体双重培养物；所述悬浊液中子代共生丛枝菌根真菌孢子的培养物、柠檬酸钠溶液和纯净水的用量比为1g：5mL：50mL；
S6、当S5中所述丛枝菌根真菌离体双重培养物为包含孢子和根段的固体复合物时，将所述丛枝菌根真菌离体双重培养物直接填入种植穴后，种植植物幼苗；
当S5中所述丛枝菌根真菌离体双重培养物为包含孢子、根段的悬浊液时，将所述丛枝菌根真菌离体双重培养物对植物幼苗进行浸种、蘸根或者沟施后，种植植物幼苗；
S1和S3中所述MSR微量元素溶液由以下原料中加蒸馏水定容至500mL，然后在温度为121℃的条件下灭菌20min，避光保存：KH2PO4 2.05g、MnSO4·4H2O 1.225g、ZnSO4·7H2O0.145g、H3BO3 0.93g、CuSO4·5H2O 0.12g、Na2MoO4·2H2O 0.0072g、(NH4)6Mo7O24·4H2O0.0175g；
所述MSR铁盐溶液由0.4g的NaFeEDTA加蒸馏水定容至500mL，然后在温度为121℃的条件下灭菌20min，避光保存。
2.根据权利要求1所述的一种丛枝菌根真菌离体双重培养物促进植物生长的方法，其特征在于，S2和S4中所述毛状根是用发根农杆菌诱导出的植物根系；所述毛状根的植物来源包括胡萝卜或者苜蓿。
3.根据权利要求1所述的一种丛枝菌根真菌离体双重培养物促进植物生长的方法，其特征在于，S6中所述植物幼苗为百脉根。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08191685A (ja) * 1995-01-12 1996-07-30 Idemitsu Kosan Co Ltd Ｖａ菌根菌の人工培養法
CN1548524A (zh) * 2003-05-16 2004-11-24 北京市农林科学院植物营养与资源研究 一种高效抗旱、耐高磷营养丛枝菌根真菌及其生产方法
CN103828618A (zh) * 2014-03-26 2014-06-04 兰州大学 一种利用丛枝菌根真菌提高小麦生长和抗旱能力的方法
CN108419605A (zh) * 2018-02-13 2018-08-21 河南科技大学 一种丛枝菌根真菌菌剂及其制备方法与应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08191685A (ja) * 1995-01-12 1996-07-30 Idemitsu Kosan Co Ltd Ｖａ菌根菌の人工培養法
CN1548524A (zh) * 2003-05-16 2004-11-24 北京市农林科学院植物营养与资源研究 一种高效抗旱、耐高磷营养丛枝菌根真菌及其生产方法
CN103828618A (zh) * 2014-03-26 2014-06-04 兰州大学 一种利用丛枝菌根真菌提高小麦生长和抗旱能力的方法
CN108419605A (zh) * 2018-02-13 2018-08-21 河南科技大学 一种丛枝菌根真菌菌剂及其制备方法与应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MILAN GRYNDLER等: "Appropriate nonmycorrhizal controls in arbuscular mycorrhiza research: a microbiome perspective", 《MYCORRHIZA》, vol. 28, pages 435, XP036602275, DOI: 10.1007/s00572-018-0844-x *
温莉莉等: "丛枝菌根 (AM)真菌扩繁方法的研究进展", 《东北林业大学学报》, vol. 37, no. 6, pages 93 *
董昌金等: "影响丛枝菌根真菌孢子萌发的几种因素研究", 《植物营养与肥料学报》, vol. 9, no. 4, pages 490 - 491 *

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