CN108184671B - 一种番茄快速繁殖并提高炼苗成活率的方法 - Google Patents

一种番茄快速繁殖并提高炼苗成活率的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种番茄快速繁殖并提高炼苗成活率的方法，本方法利用以海藻糖替代常规培养基中的蔗糖及其它组份的改变而配制出的特定的培养基配方对番茄进行组织培养，通过番茄愈伤组织诱导培养、愈伤组织分化培养、丛生芽生根培养、组培苗炼苗移栽和移栽后管理，得到番茄幼苗。本方法操作简单，成本低，番茄组培苗成活率达90％以上，株高和株茎也明显提高，组培苗移栽后成活率高，抗逆性强，并且此方法易于推广，可以直接应用于生产，有较好的经济效益和社会效益。

Description

一种番茄快速繁殖并提高炼苗成活率的方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种番茄快速繁殖并提高炼苗成活率的方法。
背景技术
番茄是茄科番茄属的一年生或多年生的植物，它是世界上最重要的蔬菜作物之一，同时它又是一种重要的模式作物，因此，它无论在生产上还是科学研究上都具有相当重要的价值。
番茄组织培养技术对于抢救性保存重要番茄种质，快速扩繁珍贵番茄品种，建立番茄种质资源基因库，保存、挖掘、利用优良番茄种质资源，具有很大的应用潜力。番茄组织培养技术的建立，也为番茄基因工程的发展奠定了一定的基础。因此，建立一个高效番茄离体培养体系，提高番茄组培苗成活率，具有重要的经济和社会效益。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供一种番茄快速繁殖并提高炼苗成活率的方法，将特定的培养基应用于组培中，操作简单，成本低，易于推广，组培苗移栽后成活率高，抗逆性强，可以直接应用于生产。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
一种番茄快速繁殖并提高炼苗成活率的方法，包括以下步骤：
a.番茄愈伤组织诱导培养：取番茄嫩叶作为外植体，滴加3～4滴Tween-80，然后置于流水中冲洗4～5小时；再用75％酒精消毒15秒，用无菌水冲洗3～4次；再用浓度为0.1％的升汞(氯化汞)消毒8～10分钟，用无菌水冲洗3～4次；处理完后将叶片剪切成0.4～0.6cm×0.4～0.6cm大小，接种于愈伤组织诱导培养基中。其中愈伤组织诱导培养基成分：0.5～1.5mg·L-1Kt(激动素)、0.2～0.8mg·L-1IAA(吲哚乙酸)、1～3g·L-1花宝1号、1～3g·L-1花宝4号、微量元素、铁盐、有机成分、20～30g·L-1海藻糖、7g·L-1琼脂粉，调节pH为5.6～6.0。培养条件：温度24～26℃，相对湿度80％，光照强度1000～2000勒克斯，光照时间14～16小时/天。
b.番茄愈伤组织分化培养：将步骤a中生成的番茄愈伤组织移至分化培养基中培养，分化形成丛生芽，其中分化培养基成分：1～2mg·L-1 6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)、0.2～0.6mg·L-1IAA(吲哚乙酸)、1～3g·L-1花宝1号、1～3g·L-1花宝4号、微量元素、铁盐、有机成分、20～30g·L-1海藻糖、7g·L-1琼脂粉，调节pH为5.6～6.0。培养条件：温度24～26℃，相对湿度80％，光照强度1000～2000勒克斯，光照时间14～16小时/天。
c.丛生芽生根培养：将步骤b中生成的丛生芽进行分割，接种到生根培养基中，其中生根培养基成分：0.3～0.6mg·L-1NAA(萘乙酸)、1～3g·L-1花宝1号、1～3g·L-1花宝4号、微量元素、铁盐、有机成分、20～30g·L-1海藻糖、7g·L-1琼脂粉，调节pH为5.6～6.0。培养条件：温度24～26℃，相对湿度80％，光照强度1000～2000勒克斯，光照时间14～16小时/天。
d.组培苗炼苗移栽：当步骤c中组培苗生根后，将培养瓶移到温室中进行强光闭瓶练苗5～7天，遮阴度宜为50％～70％；然后将组培苗从琼脂培养基中取出，使用浓度为0.1％多菌灵溶液清洗1次，再用清水清洗，尽量避免损坏根系，冲洗干净后移入基质中，基质成分为珍珠岩、蛭石、腐殖土(体积比1:1:0.5)。这些基质在使用前应喷施杀菌剂。
e.移栽后管理：组培苗移栽后7天内遮阴度宜为50％～90％，喷雾洒水保持湿度为80～90％，最佳为85％左右，之后逐渐降低湿度和增强光照直至产生新叶，培养温度控制在25～30℃，新叶长出后使用浓度为0.5％花宝4号做叶面肥喷施。
其中，步骤a、步骤b和步骤c中的海藻糖，对组培苗体内多种生物活性物质起到非特异性保护作用，抵御培养过程中不利因素(包括不利渗透压、弱光、高湿等)对组培苗的伤害，显著提高组培苗抗逆性。
步骤a、步骤b和步骤c中花宝1号、花宝4号(北京康贝斯科技有限公司)，具有提供植物生长所需营养，强壮植物根、茎、叶，提高组培苗弱光适应性，促使芽分化与根群生长的作用。
优选的，所述的步骤a、步骤b和步骤c中愈伤组织诱导培养基成分：1.0mg·L-1Kt、0.5mg·L-1IAA、1.5g·L-1花宝1号、1.5g·L-1花宝4号、微量元素、铁盐、有机成分、30g·L-1海藻糖、7.0g·L-1琼脂粉，pH值为5.8；
分化培养基成分：1.5mg·L-1 6-BA、0.5mg·L-1IAA、1.5g·L-1花宝1号、1.5g·L-1花宝4号、微量元素、铁盐、有机成分、30g·L-1海藻糖和7.0g·L-1琼脂粉，pH值为5.8；
生根培养基成分：0.3mg·L-1NAA、1.5g·L-1花宝1号、1.5g·L-1花宝4号、微量元素、铁盐、有机成分、30g·L-1海藻糖、7.0g·L-1琼脂粉，pH值为5.8。
优选的，所述的步骤a、步骤b和步骤c中微量元素、铁盐和有机成分为MS培养基的微量元素、铁盐和有机成分，其中微量元素为0.83mg·L-1碘化钾、6.2mg·L-1硼酸、22.3mg·L-1硫酸锰、8.6mg·L-1硫酸锌、0.25mg·L-1钼酸钠、0.025mg·L-1硫酸铜和0.025mg·L-1氯化钴；铁盐为37.3mg·L-1乙二胺四乙酸二钠和27.8mg·L-1硫酸亚铁；有机成分为100mg·L-1肌醇、2mg·L-1甘氨酸、0.1mg·L-1盐酸硫胺素、0.5mg·L-1盐酸吡哆醇和0.5mg·L-1烟酸。
优选的，所述的步骤a、步骤b和步骤c中pH值用1％的NaOH或HCl来调节。
优选的，所述的步骤a、步骤b和步骤c中培养基的灭菌的条件是121℃，20分钟。
优选的，上述的步骤a中用75％酒精消毒及其之后的操作均在无菌条件下进行。
优选的，上述的步骤b、步骤c中的操作均在无菌条件下进行。
由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
1、提高组培苗抗逆性：本发明培养基中用海藻糖取代了传统培养基中的蔗糖，在为植物提供碳源和能源，调节渗透压的基础上，可以在组培苗体内细胞表面形成独特的保护膜，对其体内多种生物活性物质起到非特异性保护作用，一定程度上抵御培养过程中不利因素(包括不利渗透压、弱光、高湿等)对组培苗的伤害，显著提高组培苗抗逆性。而蔗糖、葡萄糖等其它糖类，均不具备这一功能。
2、促进组培苗分化生长：本发明培养基中用花宝1号和花宝4号，取代了常规MS培养基中单纯的大量元素，有效的促进芽的分化，加快了组培苗根、茎、叶的强健生长。
3、显著提高组培苗炼苗成活率：组培苗虽然具有一定的光合能力，但长期处于高湿、弱光、低CO2、恒温的异养条件下生长，其组织分化不完善，叶表保护组织不发达，气孔多而且不易关闭、叶绿素少，根毛少，光合自养能力弱，适应性差。本发明培养的组培苗体内含有较高水平的海藻糖，抗逆性高，在炼苗过程中，能够有效保护组培苗细胞活性，促进组培苗组织发育，显著提高对外界环境变化的适应性，提高成活率。
4、本发明培养基制作方便，成本低，极大地节省了生产成本。
总之，本发明方法操作简单，成本低，番茄组培苗成活率达90％以上，株高和株茎也明显提高，组培苗移栽后成活率高，抗逆性强，并且此方法易于推广，可以直接应用于生产，有较好的经济效益和社会效益。
具体实施方式
实施例1：
取健壮番茄植株嫩叶作为外植体，设4种不同培养基处理，各3次重复，具体技术方案如下：
处理1：按本发明的方法进行番茄组织培养。
a.番茄愈伤组织诱导培养：取番茄嫩叶作为外植体，滴加加入3～4滴Tween-80，然后置于流水中冲洗4.5小时；75％酒精消毒15秒，无菌水冲洗3～4次；0.1％升汞(氯化汞)消毒10分钟，无菌水冲洗3次；将叶片剪切成0.4～0.6cm×0.4～0.6cm左右，接种于愈伤组织诱导培养基中。其中愈伤组织诱导培养基成分为：0.5mg·L-1Kt(激动素)、0.25mg·L-1IAA(吲哚乙酸)、1g·L-1花宝1号、2g·L-1花宝4号、微量元素、铁盐、有机成分、30g·L-1海藻糖、7g·L-1琼脂粉，调节pH为5.8。培养条件：温度25℃，相对湿度80％，光照强度1500勒克斯，光照时间16小时/天。
b.番茄愈伤组织分化培养：将步骤a中生成的番茄愈伤组织移至分化培养基中培养，分化形成丛生芽，其中分化培养基成分为：1mg·L-1 6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)、0.5mg·L-1IAA(吲哚乙酸)、1g·L-1花宝1号、2g·L-1花宝4号、微量元素、铁盐、有机成分、30g·L-1海藻糖、7g·L-1琼脂粉，调节pH为5.8。培养条件：温度25℃，相对湿度80％，光照强度1500勒克斯，光照时间16小时/天。
c.丛生芽生根培养：将步骤b中生成的丛生芽进行分割，接种到生根培养基中，其中生根培养基成分为：0.3mg·L-1NAA(萘乙酸)、1g·L-1花宝1号、2g·L-1花宝4号、微量元素、铁盐、有机成分、30g·L-1海藻糖、7g·L-1琼脂粉，调节pH为5.8。培养条件：温度25℃，相对湿度80％，光照强度1500勒克斯，光照时间16小时/天。
d.组培苗炼苗移栽：当步骤c中组培苗生根后，将培养瓶移到温室中进行强光闭瓶练苗6天，遮阴度宜为50％～70％。然后将组培苗从琼脂培养基中取出，冲洗干净，冲洗时尽量避免损坏根系。先使用浓度为0.1％多菌灵溶液进行清洗1次，然后再用清水清洗干净后移入基质中，基质成分为珍珠岩、蛭石、腐殖土(体积比1:1:0.5)。这些基质在使用前应采用喷施杀菌剂处理，杀菌剂为常用组培基质杀菌剂。
e.移栽后管理：组培苗移栽后7天内遮阴度宜为50％～90％，喷雾洒水保持湿度为85％左右，之后逐渐降低湿度和增强光照直至产生新叶，培养温度控制在25～30℃，新叶长出后使用浓度为0.5％花宝4号做叶面肥喷施。
处理2：将上述处理1提到的愈伤组织诱导培养基、分化培养基和生根培养基中海藻糖更换为蔗糖30g·L-1，其它培养基成分及培养环境与处理1完全相同。
处理3：将上述处理1提到的愈伤组织诱导培养基、分化培养基和生根培养基中用MS培养基大量元素(1650mg·L-1硝酸氨，1900mg·L-1硝酸钾，440mg·L-1氯化钙，370mg·L-1硫酸镁，170mg·L-1磷酸二氢钾)代替花宝1号和花宝4号成分，其它培养基成分及培养环境与处理1完全相同。
处理4：将上述处理1提到的愈伤组织诱导培养基、分化培养基和生根培养基中海藻糖更换为蔗糖30g·L-1，用MS培养基大量元素(1650mg·L-1硝酸氨，1900mg·L-1硝酸钾，440mg·L-1氯化钙，370mg·L-1硫酸镁，170mg·L-1磷酸二氢钾)代替花宝1号和花宝4号成分，其它培养基成分及培养环境与处理1完全相同。
表1不同培养基对组培苗的影响
Figure BDA0001589128240000061
表1中各个处理的培养：培养15天时，调查愈伤组织诱导率，愈伤组织诱导率＝(诱导愈伤组织外植体个数/接种外植体数)×100％；培养40天时，调查不定芽分化率，愈伤组织不定芽分化率＝(具有不定芽分化的愈伤组织块数/继代愈伤组织块数)×100％；将分化出芽的材料转移到生根培养基上诱导生根，培养20天时，测量组培苗株高株茎，目测观察根的生长情况，生根率＝(具有根系的组培苗/诱导生根组培苗总数)×100％；平均根数＝诱导生根组培苗出根总数/诱导生根组培苗个数；移栽后30天统计炼苗成活率，炼苗成活率＝(炼苗后成活的组培苗数目/炼苗组培苗总数)×100％。
试验结果表明：本发明能够提高番茄组培苗的抗逆性，显著促进组培苗分化生长，显著提高番茄组培苗愈伤组织诱导率、不定芽分化率、平均株高和平均株茎；而且组培苗炼苗成活率也显著提高。
实施例2：
取健壮番茄植株嫩叶作为外植体，设4种不同培养基处理，各3次重复，具体技术方案如下：
处理1：按本发明的方法进行番茄组织培养。
a.番茄诱导愈伤组织培养步骤：取番茄嫩叶作为外植体，滴加4滴吐温80，然后置于流水中冲洗4.5小时；再采用75％酒精消毒15秒，无菌水冲洗4次；用浓度为0.1％的升汞(氯化汞)消毒9分钟，用无菌水冲洗4次；将叶片组织剪成大小面积为0.4～0.6cm×0.4～0.6cm左右，接种于愈伤组织诱导培养基中培养形成愈伤组织，其中培养基成分：0.5mg·L- 1Kt(激动素)、0.25mg·L-1IAA(吲哚乙酸)、20g·L-1海藻糖、1.5g·L-1花宝1号、1.5g·L-1花宝4号、7g·L-1琼脂粉和MS培养基中的微量元素、铁盐、有机成分、pH5.6～6.0；培养条件：温度25℃，相对湿度80％，光照强度1500勒克斯，每日光照15小时。
b.番茄愈伤组织分化丛生芽步骤：将步骤a生成的番茄愈伤组织移至分化培养基中培养，分化形成丛生芽，其中培养基成分为1mg·L-16-BA(6-苄氨基腺嘌呤)、0.5mg·L- 1IAA(吲哚乙酸)、20g·L-1海藻糖、1.5g·L-1花宝1号、1.5g·L-1花宝4号、7g·L-1琼脂粉和MS培养基中的微量元素、铁盐、有机成分，pH5.8；培养条件：温度25℃，相对湿度80％，光照强度1500勒克斯，每日光照15小时。
c.培养丛生芽生根步骤：将步骤b生成的丛生芽进行分割，接种到生根培养基中，其中培养基成分0.3mg·L-1NAA(萘乙酸)、20g·L-1海藻糖、1.5g·L-1花宝1号、1.5g·L-1花宝4号、7g·L-1琼脂粉和MS培养基中的微量元素、铁盐、有机成分、pH5.8；培养条件：温度25℃，相对湿度80％，光照强度1500勒克斯，每日光照15小时。
d.组培苗炼苗移栽步骤：当生根后或根系得到基本发育后，将培养瓶移到温室中进行强光闭瓶练苗7天，遮阴度宜为50％～70％。试管苗从琼脂培养基中移出时要用长镊子小心取出，彻底清洗干净，并且避免损坏根系。之后使用0.1％多菌灵溶液中清洗，然后用清水清洗后移入苗床，其中苗床成分为珍珠岩、蛭石、腐殖土比例为1:1:0.5。这些基质在使用前应喷施稀的杀菌剂。
e.移栽后的管理：移出的试管苗一般在炼苗前期遮阴要达到50％～90％，并采用喷雾洒水保持一定的湿度(85％左右)，之后逐渐降低湿度和增强光照直至产生新叶，温度在25～30℃，新叶长出后使用浓度为0.5％花宝4号做叶面肥喷施。
处理2：将上述处理1提到的愈伤组织诱导培养基、分化培养基和生根培养基中海藻糖更换为20g·L-1蔗糖，其它培养基成分及培养环境与处理1完全相同。
处理3：将上述处理1提到的愈伤组织诱导培养基、分化培养基和生根培养基中用MS培养基大量元素(1650mg·L-1硝酸氨，1900mg·L-1硝酸钾，440mg·L-1氯化钙，370mg·L-1硫酸镁，170mg·L-1磷酸二氢钾)代替花宝1号和花宝4号成分，其它培养基成分及培养环境与处理1完全相同。
处理4：将上述处理1提到的愈伤组织诱导培养基、分化培养基和生根培养基中海藻糖更换为20g·L-1蔗糖，用MS培养基大量元素(1650mg·L-1硝酸氨，1900mg·L-1硝酸钾，440mg·L-1氯化钙，370mg·L-1硫酸镁，170mg·L-1磷酸二氢钾)代替花宝1号和花宝4号成分，其它培养基成分及培养环境与处理1完全相同。
表2不同培养基对组培苗的影响
Figure BDA0001589128240000081
表2中各个处理中的愈伤组织诱导率、不定芽分化率、株高、株茎、生根率、平均根数和炼苗成活率计算方式参照实施例1。
试验结果表明：本发明能够提高番茄组培苗的抗逆性，显著促进组培苗分化生长，显著提高番茄组培苗愈伤组织诱导率、不定芽分化率、平均株高和平均株茎；而且组培苗炼苗成活率也显著提高。
实施例3：
取健壮番茄植株嫩叶作为外植体，设4种不同培养基处理，各3次重复，具体技术方案如下：
处理1：按本发明的方法进行番茄组织培养。
a.番茄诱导愈伤组织培养步骤：取番茄嫩叶作为外植体，滴加3滴吐温80，然后置于流水中冲洗4.5小时；再采用75％酒精消毒15秒，无菌水冲洗3次；用浓度为0.1％的升汞(氯化汞)消毒8分钟，用无菌水冲洗3次；将叶片组织剪成大小面积为0.4～0.6cm×0.4～0.6cm左右，接种于愈伤组织诱导培养基中培养形成愈伤组织，其中培养基成分：1mg·L-1Kt(激动素)、0.5mg·L-1IAA(吲哚乙酸)、20g·L-1海藻糖、1g·L-1花宝1号、2g·L-1花宝4号、7g·L-1琼脂粉和MS培养基中的微量元素、铁盐、有机成分、pH5.8；培养条件：温度25℃，相对湿度80％，光照强度1500勒克斯，每日光照15小时。
b.番茄愈伤组织分化丛生芽步骤：将步骤a生成的番茄愈伤组织移至分化培养基中培养，分化形成丛生芽，其中培养基成分为1.5mg·L-16-BA(6-苄氨基腺嘌呤)、0.5mg·L-1IAA(吲哚乙酸)、20g·L-1海藻糖、1.5g·L-1花宝1号、1.5g·L-1花宝4号、7g·L-1琼脂粉和MS培养基中的微量元素、铁盐、铁盐、有机成分，pH5.8；培养条件：温度25℃，相对湿度80％，光照强度1500勒克斯，每日光照15小时。
c.培养丛生芽生根步骤：将步骤b生成的丛生芽进行分割，接种到生根培养基中，其中培养基成分0.3mg·L-1NAA(萘乙酸)、20g·L-1海藻糖、1.5g·L-1花宝1号、1.5g·L-1花宝4号、7g·L-1琼脂粉和MS培养基中的微量元素、铁盐、有机成分、pH5.8；培养条件：温度25℃，相对湿度80％，光照强度1500勒克斯，每日光照15小时。
d.组培苗炼苗移栽步骤：当生根后或根系得到基本发育后，将培养瓶移到温室中进行强光闭瓶练苗5天，遮阴度宜为50％～70％。试管苗从琼脂培养基中移出时要用长镊子小心取出，彻底清洗干净，并且避免损坏根系。之后使用浓度为0.1％多菌灵溶液中清洗，然后用清水清洗后移入苗床，其中苗床成分为珍珠岩、蛭石、腐殖土比例为1:1:0.5。这些基质在使用前应喷施稀的杀菌剂。
e.移栽后的管理：移出的试管苗一般在炼苗前期遮阴要达到50％～90％，并采用喷雾洒水保持一定的湿度(85％左右)，之后逐渐降低湿度和增强光照直至产生新叶，温度在25～30℃，新叶长出后使用浓度为0.5％花宝4号做叶面肥喷施。
处理2：将上述处理1提到的愈伤组织诱导培养基、分化培养基和生根培养基中海藻糖更换为20g·L-1蔗糖，其它培养基成分及培养环境与处理1完全相同。
处理3：将上述处理1提到的愈伤组织诱导培养基、分化培养基和生根培养基中用MS培养基大量元素(1650mg·L-1硝酸氨，1900mg·L-1硝酸钾，440mg·L-1氯化钙，370mg·L-1硫酸镁，170mg·L-1磷酸二氢钾)代替花宝1号和花宝4号成分，其它培养基成分及培养环境与处理1完全相同。
处理4：将上述处理1提到的愈伤组织诱导培养基、分化培养基和生根培养基中海藻糖更换为20g·L-1蔗糖，用MS培养基大量元素(1650mg·L-1硝酸氨，1900mg·L-1硝酸钾，440mg·L-1氯化钙，370mg·L-1硫酸镁，170mg·L-1磷酸二氢钾)代替花宝1号和花宝4号成分，其它培养基成分及培养环境与处理1完全相同。
表3不同培养基对组培苗的影响
Figure BDA0001589128240000101
表3中各个处理中的愈伤组织诱导率、不定芽分化率、株高、株茎、生根率、平均根数和炼苗成活率计算方式参照实施例1。
试验结果表明：本发明能够提高番茄组培苗的抗逆性，显著促进组培苗分化生长，显著提高番茄组培苗愈伤组织诱导率、不定芽分化率、平均株高和平均株茎；而且组培苗炼苗成活率也显著提高。
实施例4：
2015年10月在山东临沂某山区，发现一株具有突出性状的番茄珍贵种质资源，为保存此种质资源，防止移栽过程中或者恶劣环境造成断种，采取本发明的方法进行组织培养扩繁。具体步骤如下：
a.番茄诱导愈伤组织培养步骤：取番茄嫩叶作为外植体，滴加4滴吐温80，置于流水中冲洗4.5小时；再采用75％酒精消毒15秒，无菌水冲洗4次；用浓度为0.1％的升汞(氯化汞)消毒10分钟，用无菌水冲洗3次；将叶片组织剪成大小面积为0.4～0.6cm×0.4～0.6cm左右，接种于愈伤组织诱导培养基中培养形成愈伤组织，其中培养基成分：1mg·L-1Kt(激动素)、0.5mg·L-1IAA(吲哚乙酸)、30g·L-1海藻糖、1.5g·L-1花宝1号、1.5g·L-1花宝4号、7g·L-1琼脂粉和MS培养基中的微量元素、铁盐、有机成分、pH5.8；培养条件：温度25℃，相对湿度80％，光照强度1500勒克斯，每日光照15小时。
b.番茄愈伤组织分化丛生芽步骤：将步骤a生成的番茄愈伤组织移至分化培养基中培养，分化形成丛生芽，其中培养基成分为1.5mg·L-16-BA(6-苄氨基腺嘌呤)、0.5mg·L-1IAA(吲哚乙酸)、30g·L-1海藻糖、1.5g·L-1花宝1号、1.5g·L-1花宝4号、7g·L-1琼脂粉和MS培养基中的微量元素、铁盐、有机成分，pH5.8；培养条件：温度25℃，相对湿度80％，光照强度1500勒克斯，每日光照15小时。
c.培养丛生芽生根步骤：将步骤b生成的丛生芽进行分割，接种到生根培养基中，其中培养基成分0.3mg·L-1NAA(萘乙酸)、30g·L-1海藻糖、1.5g·L-1花宝1号、1.5g·L-1花宝4号、7g·L-1琼脂粉和MS培养基中的微量元素、铁盐、有机成分、pH5.8；培养条件：温度25℃，相对湿度80％，光照强度1500勒克斯，每日光照15小时。
d.组培苗炼苗移栽步骤：当生根后或根系得到基本发育后，将培养瓶移到温室中进行强光闭瓶练苗6天左右，遮阴度宜为50％～70％。试管苗从琼脂培养基中移出时要用长镊子小心取出，彻底清洗干净，并且避免损坏根系。之后使用0.1％多菌灵溶液中清洗，然后用清水清洗后移入苗床，其中苗床成分为珍珠岩、蛭石、腐殖土比例为1:1:0.5。这些基质在使用前应喷施稀的杀菌剂。
e.移栽后的管理：移出的试管苗一般在炼苗前期遮阴要达到50％～90％，并采用喷雾洒水保持一定的湿度(85％左右)，之后逐渐降低湿度和增强光照直至产生新叶，温度在25～30℃，新叶长出后使用浓度为0.5％花宝4号做叶面肥喷施。
表4实施结果统计：
Figure BDA0001589128240000121
表4中的愈伤组织诱导率、不定芽分化率、株高、株茎、生根率、平均根数和炼苗成活率计算方式参照实施例1。
应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (8)

1.一种番茄快速繁殖并提高炼苗成活率的方法，其特征在于，包括以下步骤：
a.愈伤组织诱导培养
取番茄嫩叶作为外植体，做消毒处理；然后将叶片剪切成0.4～0.6cm×0.4～0.6cm大小，接种于愈伤组织诱导培养基中培养；
其中愈伤组织诱导培养基成分：0.5～1.5mg·L-1Kt、0.2～0.8mg·L-1IAA、1～3g·L-1花宝1号、1～3g·L-1花宝4号、微量元素、铁盐、有机成分、20～30g·L-1海藻糖、7.0g·L-1琼脂粉，pH值为5.6～6.0；
b.愈伤组织分化培养
将步骤a中生成的番茄愈伤组织移至分化培养基中培养，分化形成丛生芽；
其中分化培养基成分：1.0～2.0mg·L-1 6-BA、0.2～0.6mg·L-1IAA、1～3g·L-1花宝1号、1～3g·L-1花宝4号、微量元素、铁盐、有机成分、20～30g·L-1海藻糖和7.0g·L-1琼脂粉，pH值为5.6～6.0；
c.丛生芽生根培养
将步骤b中生成的丛生芽进行分割，接种到生根培养基中培养；
其中生根培养基成分：0.3～0.6mg·L-1NAA、1～3g·L-1花宝1号、1～3g·L-1花宝4号、微量元素、铁盐、有机成分、20～30g·L-1海藻糖、7.0g·L-1琼脂粉，pH值为5.6～6.0；
d.组培苗炼苗移栽
当步骤c中组培苗生根后，将培养瓶移到温室中进行强光闭瓶炼 苗5～7天，遮阴度宜为50％～70％；然后将组培苗移入基质中培养；
e.移栽后管理
组培苗移栽后7天内遮阴度宜为50％～90％，保持湿度为80～90％，温度在25～30℃，逐渐降低湿度和增强光照直至产生新叶。
2.如权利要求1所述的番茄快速繁殖并提高炼苗成活率的方法，其特征在于，所述步骤a中愈伤组织诱导培养基成分：1.0mg·L-1Kt、0.5mg·L-1IAA、1.5g·L-1花宝1号、1.5g·L-1花宝4号、微量元素、铁盐、有机成分、30g·L-1海藻糖、 7.0g·L-1琼脂粉，pH值为5.8。
3.如权利要求1所述的番茄快速繁殖并提高炼苗成活率的方法，其特征在于，所述步骤b中分化培养基成分：1.5mg·L-1 6-BA、0.5mg·L-1IAA、1.5g·L-1花宝1号、1.5g·L-1花宝4号、微量元素、铁盐、有机成分、30g·L-1海藻糖和7.0g·L-1琼脂粉，pH值为5.8。
4.如权利要求1所述的番茄快速繁殖并提高炼苗成活率的方法，其特征在于，所述步骤c中生根培养基成分：0.3mg·L-1NAA、1.5g·L-1花宝1号、1.5g·L-1花宝4号、微量元素、铁盐、有机成分、30g·L-1海藻糖、7.0g·L-1琼脂粉，pH值为5.8。
5.如权利要求1所述的番茄快速繁殖并提高炼苗成活率的方法，其特征在于，所述步骤d中基质成分为珍珠岩、蛭石和腐殖土。
6.如权利要求1所述的番茄快速繁殖并提高炼苗成活率的方法，其特征在于，所述步骤e中新叶长出后使用0.5％花宝4号做叶面肥喷施。
7.如权利要求1所述的番茄快速繁殖并提高炼苗成活率的方法，其特征在于，所述步骤a、步骤b和步骤c中培养条件均为：温度24～26℃，相对湿度80％，光照强度1000～2000勒克斯，光照时间14～16小时/天。
8.如权利要求1所述的番茄快速繁殖并提高炼苗成活率的方法，其特征在于，所述步骤a中用75％酒精消毒及其之后的操作均在无菌条件下进行；所述步骤b和步骤c中的操作均在无菌条件下进行。
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