CN111903521B - 一种广藿香生根培养专用培养基及其配制方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种广藿香生根培养专用培养基及其配制方法和应用，该广藿香生根专用培养基包括以下成分：花宝1号、花宝2号、硫酸亚铁、乙二胺四乙酸二钠、钼酸钠、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钴、硼酸、α‑萘乙酸、活性炭、纳米银溶液、青霉素、链霉素和卡拉胶，培养基的配制过程无需进行高温消毒即可直接使用；利用该广藿香生根培养专用培养基进行广藿香组培苗生根炼苗培养，通过组培过程中保鲜膜封口和控制环境因素，直接在塑料大棚自然环境进行生根炼苗，可大幅度减少生根炼苗时的污染率，并减少炼苗时间，结合本发明中的广藿香生根培养专用培养基，能有效地缩短广藿香组织培养工厂化育苗过程中的生长周期，繁殖快、移栽存活率高、污染率低、综合成本低。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种广藿香生根培养专用培养基及其配制方法和应用。
背景技术
广藿香[Pogostemon cablin( Blanco) Benth ]为唇形科刺蕊草属，多年生草本或半灌木，其干燥地上部分为中药广藿香。广藿香作为广东省主要的道地药材之一，《中国药典》中记载其具有芳香化浊，和中止呕，发表解暑的功效。广藿香原产于菲律宾、马来西亚等国，最早自宋代引入我国，按主产地分为石牌藿香、高要藿香、湛江藿香及海南藿香。由于气候等生态条件不同，广藿香引进我国栽培后罕见开花结籽，故长期采用扦插繁殖，导致植株生长缓慢，病虫害发生率高、抗逆性弱，单位产量低。这几年，广东地区广藿香在栽培过程中发生青枯病较为严重，对广藿香药材的种植生产造成较大的制约。
在广藿香传统扦插繁殖基础上，人们采用植物组织培养技术，使广藿香在种苗繁殖方面取得良好的进展。张家明等研究广藿香体细胞培养再生植株的过程，肖省娥等找出了合适的愈伤组织诱导和分化的培养基，杜勒等培育牌香试管苗，并扩大繁殖用于生产，黄蜂等研究了广藿香组培快繁技术，潘超美等研究了广藿香工厂化生产程序，但对于因扦插繁殖带有病菌而无法提供大批优质种苗，随着基地生产产业化的大量需要，急需寻找新的方法繁殖优质广藿香种苗。
但研究显示，一般的广藿香品种在自然条件下经过多年的种植栽培后，会导致优良品种的种质资源退化快，优良品种得不到良好应用，品质也得不到保证。因此，采用组织培养、工厂化育苗的方式是现代广藿香种植栽培的重要手段。对组织培养的培养基深入研究使得广藿香种植发展规模化成为可能。但是，这些培养基中普遍为MS培养基并附加一定量的植物激素不同种类，但是由于国家对易燃易爆炸化学药品使用的严格控制，MS培养基成分中的硝酸盐类被列为控制的范围，使得现在植物组织培养行业的运作将寸步难行，而且MS培养基种含有的有机物和蔗糖成分，容易引起培养基的污染并增加培养基的成本，因此，找到其它化学代替药品，而避开这些硝酸盐类的使用，是解决现植物组织培养行业面临这一重大问题的关键技术和有效方法，同时，现组织培养培养基使用时都必须经过高温灭菌，而组培苗的生根、炼苗过程的处理对广藿香种苗的成活率，生长情况都有显著影响，但也未见报道。因此，有必要找出MS培养基成分中的硝酸盐类的其他化学代替品，同时去除培养基中的有机物和蔗糖成分，提供一种生长周期短、繁殖快速、移栽存活率高、污染率低、综合成本低的免除高温消毒、无蔗糖成分的广藿香组织培养的简易抗菌培养基及生根炼苗时污染控制操作技术。
发明内容
针对上述存在的问题，本发明旨在提供一种广藿香生根培养专用培养基及其配制方法，避开了MS培养基成分中的硝酸盐类物质，去除了培养基中的有机物和蔗糖成分，且在配制过程中不需要经过高温灭菌，操作简单；本发明还提供基于该广藿香生根培养专用培养基的广藿香组培苗生根炼苗培养方法，广藿香生长周期短、繁殖快速、移栽存活率高、污染率低、综合成本低。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：
一种广藿香生根培养专用培养基，其特征在于，由以下成分组成：花宝1号、花宝2号、硫酸亚铁、乙二胺四乙酸二钠、钼酸钠、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钴、硼酸、α-萘乙酸、活性炭、纳米银溶液、青霉素、链霉素和卡拉胶；
所述花宝1号的用量为450~550mg/L，所述花宝2号的用量为450~550mg/L，所述硫酸亚铁的用量为27.5~28.0mg/L，所述乙二胺四乙酸二钠的用量为37.0~37.5mg/L，所述钼酸钠的用量为0.2~0.3mg/L，所述硫酸锰的用量为22.0~22.5mg/L，所述硫酸锌的用量为8.5~8.8mg/L，所述硫酸铜的用量为0.02~0.03mg/L，所述氯化钴的用量为0.02~0.03mg/L，所述硼酸的用量为6.0~6.5mg/L，所述α-萘乙酸的用量为0.18~0.22mg/L，所述活性炭的用量为950~1050mg/L，所述纳米银溶液的用量为360~440mg /L，所述青霉素的用量为15000~17000单位/L，所述链霉素的用量为9500~10500单位/L，所述卡拉胶的用量为6~8g/L；
所述广藿香生根培养专用培养基在广藿香组培苗生根炼苗培养中的应用步骤包括：
步骤1：在超净工作台上将广藿香生根材料接入广藿香专用培养基中，广藿香生根材料为单芽接入，长2～3.0cm，生长正常，每瓶接种6个芽；
步骤2：广藿香生根材料接入当天，使用食品级保鲜膜覆盖在接种材料的组培培养瓶口，盖上瓶盖，隔天放入炼苗塑料大棚内架子上进行炼苗及生根培养；
步骤3：塑料大棚炼苗生根培养。
进一步的，所述花宝1号的用量为500mg/L，所述花宝2号的用量为500mg/L，所述硫酸亚铁的用量为27.8mg/L，所述乙二胺四乙酸二钠的用量为37.3mg/L，所述钼酸钠的用量为0.25mg/L，所述硫酸锰的用量为22.3mg/L，所述硫酸锌的用量为8.6mg/L，所述硫酸铜的用量为0.025mg/L，所述氯化钴的用量为0.025mg/L，所述硼酸的用量为6.2mg/L，所述α-萘乙酸的用量为0.2mg/L，所述活性炭的用量为1000mg/L，所述纳米银溶液的用量为400mg/L，所述青霉素的用量为16000单位/L，所述链霉素的用量为10000单位/L，所述卡拉胶的用量为7g/L。
进一步的，所述花宝1号、花宝2号和活性炭为化学纯；
所述硫酸亚铁、乙二胺四乙酸二钠、钼酸钠、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钴、硼酸和α-萘乙酸为分析纯；
所述青霉素和链霉素为医用级；
所述卡拉胶为食品级。
进一步的，一种广藿香生根培养专用培养基的配制方法，其特征在于，包括以下步骤，
步骤1：按要求准备好花宝1号、花宝2号、硫酸亚铁、乙二胺四乙酸二钠、钼酸钠、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钴、硼酸、α-萘乙酸、活性炭、卡拉胶各类化学物品及相应的操作工具，按顺序放在培养基配制台上；
步骤2：按要求准备好纳米银溶液、青霉素和链霉素粉剂，并用纯净水将其配制成混合溶液A 和混合溶液B；
所述混合溶液A中各组分的浓度分别为：纳米银溶液400mg/L、青霉素16000单位/L、链霉素10000单位/L；
所述混合溶液B 的容积为200mL，各组分的浓度分别为：纳米银溶液400mg/L、青霉素16000单位/L、链霉素10000单位/L；
步骤3：将培养瓶和瓶盖先用自来水冲洗干净，然后装入步骤2中配制的混合溶液A进行浸泡10min，晾干待用；
步骤4：称取7g的卡拉胶，放入洁净的不锈钢锅里；
步骤5：分别称取27.8mg硫酸亚铁和37.3mg乙二胺四乙酸二钠，并用100ml的纯净水溶解后倒入不锈钢锅里；
步骤6：分别称取500mg花宝1号，500mg花宝2号，0.25mg钼酸钠，22.3mg硫酸锰，8.6mg硫酸锌，0.025mg硫酸铜，0.025mg氯化钴，6.2mg硼酸，0.2mgα-萘乙酸，逐一用50ml的纯净水溶解后倒入容量瓶，并加入纯净水定容至700ml；
步骤7：将步骤6中定容好的溶液倒入不锈钢锅中，加热到90～95℃，不断搅拌直至卡拉胶完全溶解；
步骤8：用NaOH或HCl调整步骤7中混合溶液的pH 值至5.8；
步骤9：待调整好pH 值的培养基温度降到60～70℃时，加入1g活性炭，以及步骤2中配制好的混合溶液B，充分搅拌均匀，即得广藿香专用培养基；
步骤10：用烧杯将配制好的广藿香专用培养基分装到步骤3中清洁好的培养瓶中，盖上瓶盖，集中放入接种室待用。
进一步的，一种广藿香生根培养专用培养基在广藿香组培苗生根炼苗培养中的应用，其特征在于，包括以下步骤，
步骤1：在超净工作台上将广藿香生根材料接入广藿香专用培养基中，广藿香生根材料为单芽接入，长2～3.0cm，生长正常，每瓶接种6个芽；
步骤2：广藿香生根材料接入当天，使用食品级保鲜膜覆盖在接种材料的组培培养瓶口，盖上瓶盖，隔天放入炼苗塑料大棚内架子上进行炼苗及生根培养；
步骤3：塑料大棚炼苗生根培养。
进一步的，步骤2中使用的保鲜膜为使用纳米银溶液、青霉素和链霉素混合液浸泡2小时后的保鲜膜，且使保鲜膜超出组培培养瓶瓶盖边缘1.5～2.0cm。
进一步的，步骤3中塑料大棚炼苗生根培养的条件为：温度15～35℃、光照强度8000～15000 Lux、光照时间7～11h、湿度35～85%；待生根炼苗培养15～25d，苗生根整齐、高4～5cm时即可移植。
本发明的有益效果是：与现有技术相比，本发明的改进之处在于，
1、本发明把现普遍使用的MS培养基中的大量元素、有机物和蔗糖去除，改为花宝1号和花宝2号，使培养基简单化，大大降低了培养基的成本并简化了培养基的配制过程，减除了因有机物和蔗糖容易引起污染的风险；
2、本发明中的广藿香生根培养专用培养基成本低，加入纳米银溶液、青霉素、链霉素等杀菌剂和抗生素，有效的控制培养基的污染率，使培养基免除高温消毒就能直接使用，能够有效控制污染；
3、本发明中针对广藿香生根培养专用培养基提出了一种广藿香组培苗生根炼苗培养的方法，通过组培过程中保鲜膜封口和控制环境因素，直接在塑料大棚自然环境进行生根炼苗，可大幅度减少生根炼苗时的污染率，并减少炼苗时间，结合本发明中的广藿香生根培养专用培养基，能有效地缩短广藿香组织培养工厂化育苗过程中的生长周期，繁殖快、移栽存活率高、污染率低、综合成本低。
附图说明
图1为本发明实施例一中刚接入广藿香生根材料时的照片。
图2为本发明实施例一中接入广藿香生根材料后保鲜膜封口后的组培瓶照片。
图3为本发明实施例一中炼苗生根培养20天的广藿香组培苗生根照片。
图4为本发明实施例一中移栽成活后的广藿香组培苗照片。
图5为本发明对比例一中刚接入广藿香生根材料时的照片。
图6为本发明对比例一中炼苗生根培养20天的广藿香组培苗生根照片。
图7为本发明对比例一中移栽成活后的广藿香组培苗照片。
图8为本发明对比例二中刚接入广藿香生根材料时的照片。
图9为本发明对比例二中炼苗生根培养4天的广藿香组培苗生根照片。
具体实施方式
为了使本领域的普通技术人员能更好的理解本发明的技术方案，下面结合附图和实施例对本发明的技术方案做进一步的描述。
实施例一：
一种广藿香生根培养专用培养基，由以下成分组成：花宝1号、花宝2号、硫酸亚铁、乙二胺四乙酸二钠、钼酸钠、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钴、硼酸、α-萘乙酸、活性炭、纳米银溶液、青霉素、链霉素和卡拉胶；
所述花宝1号的用量为500mg/L，所述花宝2号的用量为500mg/L，所述硫酸亚铁的用量为27.8mg/L，所述乙二胺四乙酸二钠的用量为37.3mg/L，所述钼酸钠的用量为0.25mg/L，所述硫酸锰的用量为22.3mg/L，所述硫酸锌的用量为8.6mg/L，所述硫酸铜的用量为0.025mg/L，所述氯化钴的用量为0.025mg/L，所述硼酸的用量为6.2mg/L，所述α-萘乙酸的用量为0.2mg/L，所述活性炭的用量为1000mg/L，所述纳米银溶液的用量为400mg/L，所述青霉素的用量为16000单位/L，所述链霉素的用量为10000单位/L，所述卡拉胶的用量为7g/L，如下表1所示。
表1 广藿香生根培养专用培养基配方（单位：mg/L)
进一步的，本实施例还提供一种广藿香生根培养专用培养基的配制方法，包括以下步骤，
步骤1：按要求准备好花宝1号、花宝2号、硫酸亚铁、乙二胺四乙酸二钠、钼酸钠、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钴、硼酸、α-萘乙酸、活性炭、卡拉胶各类化学物品及相应的操作工具，按顺序放在培养基配制台上；
所述花宝1号、花宝2号和活性炭为化学纯（花宝1号、花宝2号由美国HYPOHEX出品，北京中科起源科技有限公司经销）；
所述硫酸亚铁、乙二胺四乙酸二钠、钼酸钠、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钴、硼酸和α-萘乙酸为分析纯；
所述卡拉胶为食品级。
步骤2：按要求准备好纳米银溶液、青霉素和链霉素粉剂，并用纯净水将其配制成混合溶液A 和混合溶液B；
所述青霉素和链霉素为医用级，青霉素粉剂为16000单位/g，链霉素粉剂为10000单位/g；
所述纳米银溶液购自广州市科瑨材料科技有限公司，溶液中银离子成分含量为20g/L。
所述混合溶液A中各组分的浓度分别为：纳米银溶液0.4g/L、青霉素16000单位/L、链霉素10000单位/L；
所述混合溶液B 的容积为200mL，各组分的浓度分别为：纳米银溶液0.4g/L、青霉素16000单位/L、链霉素10000单位/L；
步骤3：将培养瓶和瓶盖先用自来水冲洗干净，然后装入步骤2中配制的混合溶液A进行浸泡10min，晾干待用；
步骤4：称取7g的卡拉胶，放入洁净的不锈钢锅里；
步骤5：分别称取27.8mg硫酸亚铁和37.3mg乙二胺四乙酸二钠，并用100ml的纯净水溶解后倒入不锈钢锅里；
步骤6：分别称取500mg花宝1号，500mg花宝2号，0.25mg钼酸钠，22.3mg硫酸锰，8.6mg硫酸锌，0.025mg硫酸铜，0.025mg氯化钴，6.2mg硼酸，0.2mgα-萘乙酸，逐一用50ml的纯净水溶解后倒入容量瓶，并加入纯净水定容至700ml；
步骤7：将步骤6中定容好的溶液倒入不锈钢锅中，加热到90～95℃，不断搅拌直至卡拉胶完全溶解；
步骤8：用NaOH或HCl调整步骤7中混合溶液的pH 值至5.8；
步骤9：待调整好pH 值的培养基温度降到60～70℃时，加入1g活性炭，以及步骤2中配制好的混合溶液B，充分搅拌均匀，即得广藿香生根培养专用培养基；
步骤10：用烧杯将配制好的广藿香生根培养专用培养基分装到步骤3中清洁好的培养瓶中，盖上瓶盖，集中放入接种室待用。
进一步的，本实施例还提供一种广藿香生根培养专用培养基在广藿香组培苗生根炼苗培养中的应用方法，包括以下步骤，
步骤1：在超净工作台上将广藿香生根材料接入广藿香生根培养专用培养基中，广藿香生根材料为单芽接入，长2～3.0cm，生长正常，每瓶接种6个芽；接入过程保证无菌操作，刚接入广藿香生根材料时的具体情况如附图1所示。
步骤2：广藿香生根材料接入当天，使用食品级保鲜膜覆盖在接种材料的组培培养瓶口，盖上瓶盖，隔天放入炼苗塑料大棚内架子上进行炼苗及生根培养；如附图2所示。
具体的，该操作中保鲜膜先使用纳米银溶液、青霉素和链霉素混合液浸泡2小时后再进行使用，且使保鲜膜超出组培培养瓶瓶盖边缘1.5～2.0cm，保证瓶口被完全密封。
步骤3：塑料大棚炼苗生根培养。
具体的，塑料大棚炼苗生根培养的条件为：温度15～35℃、光照强度8000～15000Lux、光照时间7～11h、湿度35～85%；炼苗生根培养20天以后的广藿香组培苗图附图3所示。
待生根炼苗培养15～25d，苗生根整齐、高4～5cm时即可移植，移栽成活后的广藿香组培苗照片如附图4所示，从附图4中可以看出，移栽的六株广藿香组培苗全部成活。
实施例二：
一种广藿香生根培养专用培养基，由以下成分组成：花宝1号、花宝2号、硫酸亚铁、乙二胺四乙酸二钠、钼酸钠、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钴、硼酸、α-萘乙酸、活性炭、纳米银溶液、青霉素、链霉素和卡拉胶；
所述花宝1号的用量为450mg/L，所述花宝2号的用量为450mg/L，所述硫酸亚铁的用量为27.5mg/L，所述乙二胺四乙酸二钠的用量为37.0mg/L，所述钼酸钠的用量为0.2mg/L，所述硫酸锰的用量为22.0mg/L，所述硫酸锌的用量为8.5mg/L，所述硫酸铜的用量为0.02mg/L，所述氯化钴的用量为0.02mg/L，所述硼酸的用量为6.0mg/L，所述α-萘乙酸的用量为0.18mg/L，所述活性炭的用量为950mg/L，所述纳米银溶液的用量为360mg/L，所述青霉素的用量为15000单位/L，所述链霉素的用量为9500单位/L，所述卡拉胶的用量为6g/L。如表2所示。
表2 广藿香生根培养专用培养基配方（单位：mg/L)
本实施例中广藿香生根培养专用培养基的配制方法和对广藿香组培苗进行培养的培养方法与实施例一相同。
实施例三：
一种广藿香生根培养专用培养基，由以下成分组成：花宝1号、花宝2号、硫酸亚铁、乙二胺四乙酸二钠、钼酸钠、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钴、硼酸、α-萘乙酸、活性炭、纳米银溶液、青霉素、链霉素和卡拉胶；
所述花宝1号的用量为550mg/L，所述花宝2号的用量为550mg/L，所述硫酸亚铁的用量为28.0mg/L，所述乙二胺四乙酸二钠的用量为37.5mg/L，所述钼酸钠的用量为0.3mg/L，所述硫酸锰的用量为22.5mg/L，所述硫酸锌的用量为8.8mg/L，所述硫酸铜的用量为0.03mg/L，所述氯化钴的用量为0.03mg/L，所述硼酸的用量为6.5mg/L，所述α-萘乙酸的用量为0.22mg/L，所述活性炭的用量为1050mg/L，所述纳米银溶液的用量为4.4g，所述青霉素的用量为17000单位/L，所述链霉素的用量为10500单位/L，所述卡拉胶的用量为8g/L。如表3所示。
表3 广藿香生根培养专用培养基配方（单位：mg/L)
本实施例中广藿香生根培养专用培养基的配制方法和对广藿香组培苗进行培养的培养方法与实施例一相同。
对比例一（去除污染控制技术、MS培养基、高温消毒）：
一种广藿香对比例培养基，有以下成分组成：硝酸氨、硝酸钾、磷酸二氢钾、氯化钙、硫酸镁、硫酸亚铁、乙二胺四乙酸二钠、钼酸钠、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钴、硼酸、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆辛、烟酸、肌醇、α-萘乙酸、蔗糖和卡拉胶；
所述硝酸氨的用量为1650mg/L、硝酸钾的用量为1900mg/L、磷酸二氢钾的用量为370mg/L、氯化钙的用量为440mg/L、硫酸镁的用量为170mg/L、硫酸亚铁的用量为27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠的用量为37.3mg/L、钼酸钠的用量为0.25mg/L、硫酸锰的用量为22.3mg/L、硫酸锌的用量为8.6mg/L、硫酸铜的用量为0.025mg/L、氯化钴的用量为0.025mg/L、硼酸的用量为6.2mg/L、甘氨酸的用量为2mg/L、盐酸硫胺素的用量为0.1mg/L、盐酸吡哆辛的用量为0.5mg/L、烟酸的用量为0.5mg/L、肌醇的用量为100mg/L、α-萘乙酸的用量为0.2mg/L、蔗糖的用量为30g/L和卡拉胶的用量为7g/L。如表4所示。
表4 广藿香培养基对比例配方（单位：mg/L)
该对比例中广藿香对比例培养基的制备方法包括以下步骤：
步骤1：按照配比称取原料，除蔗糖和/或卡拉胶外，其余成分配制成混合溶液A；
步骤2：加热混合溶液A，加入蔗糖和/或卡拉胶，搅拌至卡拉胶和蔗糖完全溶解，得混合溶液B；
步骤3：调整混合溶液B的pH值至5.8；
步骤4：灭菌，灭菌后放至室温待用。
具体来说，按照以下步骤配制而成：
1、准备好各类成分母液及相应的操作工具，按一定顺序放在培养基配制台上；
2、用电子称称取蔗糖30g和适量的卡拉胶，放入洁净的不锈钢锅里；
3、按配制表列出各类成分母液用量，分别用量筒和吸量管逐一量取和吸量后，放入容量瓶并加入纯净水定容；
4、将定容好的母液倒入不锈钢锅并放在电磁炉上加热，不断搅拌直到卡拉胶和蔗糖完全溶解；
5、充分混合溶解好以后，用1N NaOH或1N HCl调整pH值到所需值（优选pH5.8）；
6、按容器大小和培养要求，用烧杯将培养基分装到培养瓶。分装时注意不要把培养基粘附到瓶口和内壁上；
7、把分装好培养基的瓶盖上盖，装入消毒箱，放进高压灭菌锅进行消毒灭菌；
8、高压灭菌后取出，放至室温即可使用。
进一步的，本对比例还提供一种广藿香对比例培养基在广藿香组培苗生根炼苗培养中的应用方法，包括以下步骤，
步骤5：在超净工作台上将广藿香生根材料接入广藿香生根培养专用培养基中，广藿香生根材料为单芽接入，长2～3.0cm，生长正常，每瓶接种6个芽，盖上瓶盖，隔天放入炼苗塑料大棚内架子上进行炼苗及生根培养；接入过程保证无菌操作，如附图5所示。
步骤6：塑料大棚炼苗生根培养。
具体的，塑料大棚炼苗生根培养的条件为：温度15～35℃、光照强度8000～15000Lux、光照时间7～11h、湿度35～85%；炼苗生根培养20天以后的广藿香组培苗图附图6所示。
待生根炼苗培养15～25d，苗生根整齐、高4～5cm时即可移植，移栽成活后的广藿香组培苗照片如附图7所示。从图7中可以看出，移栽六株广藿香组培苗后只有4株成活，其与2株广藿香组培苗死亡。
对比例二（去除污染控制技术、MS培养基、无高温消毒）：
一种广藿香对比例培养基，由以下成分组成：硝酸氨、硝酸钾、磷酸二氢钾、氯化钙、硫酸镁、硫酸亚铁、乙二胺四乙酸二钠、钼酸钠、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钴、硼酸、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆辛、烟酸、肌醇、α-萘乙酸、蔗糖、和卡拉胶；
所述硝酸氨的用量为1650mg/L、硝酸钾的用量为1900mg/L、磷酸二氢钾的用量为370mg/L、氯化钙的用量为440mg/L、硫酸镁的用量为170mg/L、硫酸亚铁的用量为27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠的用量为37.3mg/L、钼酸钠的用量为0.25mg/L、硫酸锰的用量为22.3mg/L、硫酸锌的用量为8.6mg/L、硫酸铜的用量为0.025mg/L、氯化钴的用量为0.025mg/L、硼酸的用量为6.2mg/L、甘氨酸的用量为2mg/L、盐酸硫胺素的用量为0.1mg/L、盐酸吡哆辛的用量为0.5mg/L、烟酸的用量为0.5mg/L、肌醇的用量为100mg/L、α-萘乙酸的用量为0.2mg/L、蔗糖的用量为30g/L和卡拉胶的用量为7g/L。如表5所示。
表5 广藿香培养基对比例配方（单位：mg/L)
本对比例中广藿香对比例培养基的制备方法包括以下步骤：
步骤1：按照配比称取原料，除蔗糖和/或卡拉胶外，其余成分配制成混合溶液A；
步骤2：加热混合溶液A，加入蔗糖和/或卡拉胶，搅拌至卡拉胶和蔗糖完全溶解，得混合溶液B；
步骤3：调整混合溶液B的pH值至5.8；
步骤4：放入接种室待用。
具体来说，按照以下步骤配制而成：
1、准备好各类成分母液及相应的操作工具，按一定顺序放在培养基配制台上。
2、用电子称称取蔗糖30g和适量的卡拉胶，放入洁净的不锈钢锅里。
3、按配制表列出各类成分母液用量，分别用量筒和吸量管逐一量取和吸量后，放入容量瓶并加入纯净水定容。
4、将定容好的母液倒入不锈钢锅并放在电磁炉上加热，不断搅拌直到卡拉胶和蔗糖完全溶解。
5、充分混合溶解好以后，用1N NaOH或1N HCl调整pH值到所需值（优选pH5.8）。
6、按容器大小和培养要求，用烧杯将培养基分装到培养瓶。分装时注意不要把培养基粘附到瓶口和内壁上。
7、把分装好培养基的瓶盖上盖，放入接种室待用。
进一步的，本对比例还提供一种广藿香培养基在广藿香组培苗生根炼苗培养中的应用方法，包括以下步骤，
步骤5：在超净工作台上将广藿香生根材料接入广藿香生根培养专用培养基中，广藿香生根材料为单芽接入，长2～3.0cm，生长正常，每瓶接种6个芽，盖上瓶盖，隔天放入炼苗塑料大棚内架子上进行炼苗及生根培养；接入过程保证无菌操作，如附图8所示。
步骤6：塑料大棚炼苗生根培养。
具体的，塑料大棚炼苗生根培养的条件为：温度15～35℃、光照强度8000～15000Lux、光照时间7～11h、湿度35～85%；炼苗生根培养第4天以后的广藿香组培苗图附图9所示，从图9中可以看出，炼苗生根培养第4天的时候，广藿香组培苗被污染死亡，无苗可以移栽。
对实施例一、实施例二、实施例三以及对比例一和对比例二中广藿香组培苗培养过程中的生长数据进行整理和对比，结果如表6所示。
表6 广藿香组培苗培生长数据统计表
从表6中可以看出，本申请中的广藿香生根培养专用培养基相比于传统的广藿香培养基，在广藿香组培苗生根炼苗培养中，广藿香组培苗的污染率明显降低，移栽后的成活率显著提高，而且移栽后的广藿香组培苗生长情况也更好。在花宝1号的用量为500mg/L，花宝2号的用量为500mg/L，硫酸亚铁的用量为27.8mg/L，乙二胺四乙酸二钠的用量为37.3mg/L，钼酸钠的用量为0.25mg/L，硫酸锰的用量为22.3mg/L，硫酸锌的用量为8.6mg/L，硫酸铜的用量为0.025mg/L，氯化钴的用量为0.025mg/L，硼酸的用量为6.2mg/L，α-萘乙酸的用量为0.2mg/L，活性炭的用量为1000mg/L，纳米银溶液的用量为20mL/L，青霉素的用量为16000单位/L，链霉素的用量为10000单位/L，卡拉胶的用量为7g/L时制备出来的培养基在广藿香组培苗生根炼苗培养中效果是最好的，广藿香组培苗污染率最低，移栽后成活率最高，试管苗的生长情况也是最优的。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (7)
1.一种广藿香生根培养专用培养基，其特征在于，由以下成分组成：花宝1号、花宝2号、硫酸亚铁、乙二胺四乙酸二钠、钼酸钠、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钴、硼酸、α-萘乙酸、活性炭、纳米银溶液、青霉素、链霉素和卡拉胶；
所述花宝1号的用量为450~550mg/L，所述花宝2号的用量为450~550mg/L，所述硫酸亚铁的用量为27.5~28.0mg/L，所述乙二胺四乙酸二钠的用量为37.0~37.5mg/L，所述钼酸钠的用量为0.2~0.3mg/L，所述硫酸锰的用量为22.0~22.5mg/L，所述硫酸锌的用量为8.5~8.8mg/L，所述硫酸铜的用量为0.02~0.03mg/L，所述氯化钴的用量为0.02~0.03mg/L，所述硼酸的用量为6.0~6.5mg/L，所述α-萘乙酸的用量为0.18~0.22mg/L，所述活性炭的用量为950~1050mg/L，所述纳米银溶液的用量为360~440mg /L，所述青霉素的用量为15000~17000单位/L，所述链霉素的用量为9500~10500单位/L，所述卡拉胶的用量为6~8g/L；
所述广藿香生根培养专用培养基在广藿香组培苗生根炼苗培养中的应用步骤包括：
步骤1：在超净工作台上将广藿香生根材料接入广藿香专用培养基中，广藿香生根材料为单芽接入，长2～3.0cm，生长正常，每瓶接种6个芽；
步骤2：广藿香生根材料接入当天，使用食品级保鲜膜覆盖在接种材料的组培培养瓶口，盖上瓶盖，隔天放入炼苗塑料大棚内架子上进行炼苗及生根培养；
步骤3：塑料大棚炼苗生根培养。
2.根据权利要求1所述的一种广藿香生根培养专用培养基，其特征在于：所述花宝1号的用量为500mg/L，所述花宝2号的用量为500mg/L，所述硫酸亚铁的用量为27.8mg/L，所述乙二胺四乙酸二钠的用量为37.3mg/L，所述钼酸钠的用量为0.25mg/L，所述硫酸锰的用量为22.3mg/L，所述硫酸锌的用量为8.6mg/L，所述硫酸铜的用量为0.025mg/L，所述氯化钴的用量为0.025mg/L，所述硼酸的用量为6.2mg/L，所述α-萘乙酸的用量为0.2mg/L，所述活性炭的用量为1000mg/L，所述纳米银溶液的用量为400mg/L，所述青霉素的用量为16000单位/L，所述链霉素的用量为10000单位/L，所述卡拉胶的用量为7g/L。
3.根据权利要求1所述的一种广藿香生根培养专用培养基，其特征在于：所述花宝1号、花宝2号和活性炭为化学纯；
所述硫酸亚铁、乙二胺四乙酸二钠、钼酸钠、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钴、硼酸和α-萘乙酸为分析纯；
所述青霉素和链霉素为医用级；
所述卡拉胶为食品级。
4.如权利要求1-3任一项所述的一种广藿香生根培养专用培养基的配制方法，其特征在于，包括以下步骤，
步骤1：按要求准备好花宝1号、花宝2号、硫酸亚铁、乙二胺四乙酸二钠、钼酸钠、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钴、硼酸、α-萘乙酸、活性炭、卡拉胶各类化学物品及相应的操作工具，按顺序放在培养基配制台上；
步骤2：按要求准备好纳米银溶液、青霉素和链霉素粉剂，并用纯净水将其配制成混合溶液A 和混合溶液B；
所述混合溶液A中各组分的浓度分别为：纳米银溶液400mg/L、青霉素16000单位/L、链霉素10000单位/L；
所述混合溶液B 的容积为200mL，各组分的浓度分别为：纳米银溶液400mg/L、青霉素16000单位/L、链霉素10000单位/L；
步骤3：将培养瓶和瓶盖先用自来水冲洗干净，然后装入步骤2中配制的混合溶液A进行浸泡10min，晾干待用；
步骤4：称取7g的卡拉胶，放入洁净的不锈钢锅里；
步骤5：分别称取27.8mg硫酸亚铁和37.3mg乙二胺四乙酸二钠，并用100ml的纯净水溶解后倒入不锈钢锅里；
步骤6：分别称取500mg花宝1号，500mg花宝2号，0.25mg钼酸钠，22.3mg硫酸锰，8.6mg硫酸锌，0.025mg硫酸铜，0.025mg氯化钴，6.2mg硼酸，0.2mgα-萘乙酸，逐一用50ml的纯净水溶解后倒入容量瓶，并加入纯净水定容至700ml；
步骤7：将步骤6中定容好的溶液倒入不锈钢锅中，加热到90～95℃，不断搅拌直至卡拉胶完全溶解；
步骤8：用NaOH或HCl调整步骤7中混合溶液的pH 值至5.8；
步骤9：待调整好pH 值的培养基温度降到60～70℃时，加入1g活性炭，以及步骤2中配制好的混合溶液B，充分搅拌均匀，即得广藿香专用培养基；
步骤10：用烧杯将配制好的广藿香专用培养基分装到步骤3中清洁好的培养瓶中，盖上瓶盖，集中放入接种室待用。
5.如权利要求1-3任一项所述的一种广藿香生根培养专用培养基在广藿香组培苗生根炼苗培养中的应用，其特征在于，包括以下步骤，
步骤1：在超净工作台上将广藿香生根材料接入广藿香专用培养基中，广藿香生根材料为单芽接入，长2～3.0cm，生长正常，每瓶接种6个芽；
步骤2：广藿香生根材料接入当天，使用食品级保鲜膜覆盖在接种材料的组培培养瓶口，盖上瓶盖，隔天放入炼苗塑料大棚内架子上进行炼苗及生根培养；
步骤3：塑料大棚炼苗生根培养。
6.根据权利要求5所述的一种广藿香生根培养专用培养基在广藿香组培苗生根炼苗培养中的应用，其特征在于，步骤2中使用的保鲜膜为使用纳米银溶液、青霉素和链霉素混合液浸泡2小时后的保鲜膜，且使保鲜膜超出组培培养瓶瓶盖边缘1.5～2.0cm。
7.根据权利要求5所述的一种广藿香生根培养专用培养基在广藿香组培苗生根炼苗培养中的应用，其特征在于，步骤3中塑料大棚炼苗生根培养的条件为：温度15～35℃、光照强度8000～15000 Lux、光照时间7～11h、湿度35～85%；待生根炼苗培养15～25d，苗生根整齐、高4～5cm时即可移植。
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