CN106386495A - 一种新型石斛培养方法 - Google Patents

一种新型石斛培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种新型石斛培养方法，包括如下步骤：将成熟铁皮石斛种子进行消毒浸种处理后播种于自制培养基中培养直至萌发形成绿色圆球茎后转入加蕨根发酵粉的自制培养基中培养，使得圆球茎堆积在培养基中，并出现叶原基和分化苗；将圆球茎分化苗用清水冲洗后转入改良1/2MS培养基中培养，经诱导产生叶原基后转入改良MS培养基中进行壮苗培养，高度达到1.5‑2.5cm的幼苗出现后转入加花宝1号和2号的改良培养基进行诱导生根。本发明通过优化和改进各个步骤的培养基对铁皮石斛组织培养，可促进种子萌发并缩短萌发时间，为种子萌发提供充足的营养，加快了组培苗的生长速率，减少时间消耗，降低成本，提高所得铁皮石斛的品质。

Description

一种新型石斛培养方法
技术领域
本发明涉及农业技术领域，具体涉及一种新型石斛培养方法。
背景技术
铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)是兰科石斛属多年生附生草本植物，是一种名贵的中药材，具有悠久的应用历史，被列为九大仙草之首，是药中黄金。《神农本草经》记载：“石斛除痹下气，补五脏虚劳羸瘦，强阴益精，久服厚肠胃”。金元四大名医之一朱丹溪称石斛有卓著的滋阴健阳功效，并且在中医补阴药物中，石斛是独树一帜的。古往今来石斛被称为滋阴补肾、养生保健之上品，一年四季皆可服用，且对各脏器的阴虚之证有通补之效。长期的临床试验和科学研究的结果表明石斛具有补阴强身、健壮筋骨，延缓衰老、润肤养颜，治疗眼疾、降低血糖、滋养肝阴、利胆溶石等多种功效，同时这些功效与石斛中所含的丰富的营养成分密切相关，现代医学研究表明：铁皮石斛中所含有的石斛多糖，氨基酸、生物碱及菲类化合物等具有较高的医疗保健作用，能够提高机体免疫力。
长期以来，应用铁皮石斛主要以采集野生资源为主。近年来，随着人们对铁皮石斛药用价值认识的日益提高，铁皮石斛的需求量也不断提高，传统的野生资源已不能满足人们的需求量，甚至有些地区的野生资源面临枯竭。为了更好地保护和利用铁皮石斛资源，越来越多的科研工作者开始响应国家号召，开始关注于铁皮石斛的研发工作，包括铁皮石斛人工驯化栽培，无性繁殖等，铁皮石的组织培养技术是铁皮石斛繁殖的一种重要手段，也是大力推广铁皮石斛种植、繁殖苗木的关键途径，但是一般组织培养过程中幼苗生长周期较长，消耗大量资源，增加组培生产成本，且所得的培育的过程中容易发生病虫害，所得的石斛品质也很难保证。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种新型石斛培养方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种新型石斛培养方法，包括如下步骤：
S1、将成熟铁皮石斛种子置于浸种剂消毒浸泡20～40min，所述浸种剂由以下重量份的原料制备而成：
0.1-0.3份MnSO4粉末、0.05-0.15份CuSO4粉末、0.1-0.3份ZnSO4粉末、0.2-0.4份NiSO4粉末、0.2-0.5份(NH4)6Mo7O24.4H2O粉末、3～5份多菌灵、10～20份EM原露100倍稀释液；
S2、将消毒浸种完成后的种子播种于自制培养基中培养15-20天，经过种胚膨大、萌发形成绿色圆球茎；培养条件为27-30℃，光照为1800-2300lx，光照时间为13-14h/d；
S3、将圆球茎转入加蕨根发酵粉的自制培养基中培养23-28天，使得圆球茎堆积在培养基中，并出现叶原基和分化苗；培养条件：温度25-26℃，光照度1700-2100lx，光照时间为13-14h/d；
S4、将圆球茎分化苗用清水冲洗后转入改良1/2MS培养基中培养20-30天，经诱导产生叶原基；
S5、将步骤S4中产生的小苗转入改良MS培养基中进行壮苗，经过60-70天壮苗培养，高度达到1.5-2.5cm的幼苗出现，培养条件：温度25-26℃，光照度1700-2100lx，光照时间为13-14h/d；
S6、将步骤S5得到的幼苗转入加花宝1号和2号的改良培养基进行诱导生根；
S7、将步骤S6得到的生根苗进行炼苗驯化。
优选地，所述自制培养基通过以下步骤制备所得：
步骤一、取苔藓泥炭土36-48份、酒糟8-10份、树皮块18-22份、硝酸钾0.5-0.9份、碳酸钙纤维2-3份、蔗糖1-2份、磷酸二氢钾0.5-1.5份、尿素0.2-0.4份、醋糟8-12份、豆饼粉8-12份分别进行粉碎后混合搅拌均匀，加水，使其含水量达60％-70％，搅拌20-40分钟，pH控制在7.0-7.5，其颗粒大小在5mm以下，颗粒粗细度均匀；
步骤二、将拌匀后的原料堆积发酵，做成高1.1-1.3米、底宽1.3-1.7米、长度不限的梯形堆，在其上打一些通气孔，发酵9-10天，发酵结束后再加入适量的水，拌匀，调节含水量在60-70％之间；
步骤三、常压下先将温度升至110-115℃，保温20-25min；然后将温度上升至120-125℃，保温60-70min；再将温度升至130-145℃，在压力为0.13-0.14MPa的情况下保温60-70min，最后再闷置30-35min，停止加热，让其自然冷却到25℃以下，得自制培养基。
优选地，所述加蕨根发酵粉的自制培养基由以下重量份的原料制备而成：
苔藓泥炭土36-48份、酒糟8-10份、树皮块18-22份、硝酸钾0.5-0.9份、碳酸钙纤维2-3份、蔗糖1-2份、磷酸二氢钾0.5-1.5份、尿素0.2-0.4份、醋糟8-12份、豆饼粉8-12份、蕨根发酵粉为10-20份。
优选地，所述步骤S4中的改良1/2MS培养基的配方为硝酸钾19000mg/L、硝酸铵16500mg/L、磷酸二氢钾1700mg/L、氨基酸螯合镁3700mg/L、碘酸钙4400mg/L、碘化钾166mg/L、硼酸1240mg/L、硫酸锰2230mg/L、硫酸锌860mg/L、钼酸钠50mg/L、硫酸铜5mg/L、三氯化六氨合钴5mg/L、硫酸亚铁2780mg/L、乙二胺四乙酸二钠3730mg/L、肌醇20000mg/L、甘氨酸400mg/L、盐酸硫胺素100mg/L、盐酸吡哆醇100mg/L、烟酸100mg/L、蕨根发酵粉15g/L、蔗糖30g/L、琼脂6.5-8g/L。
优选地，所述步骤S5中的改良MS培养基的配方为：硝酸钾38000mg/L、硝酸铵33000mg/L、磷酸二氢钾3400mg/L、氨基酸螯合镁7400mg/L、碘酸钙8800mg/L、碘化钾166mg/L、硼酸1240mg/L、硫酸锰4460mg/L、硫酸锌1720mg/L、钼酸钠50mg/L、硫酸铜5mg/L、三氯化六氨合钴5mg/L、硫酸亚铁5560mg/L、乙二胺四乙酸二钠7460mg/L、肌醇20000mg/L、甘氨酸400mg/L、盐酸硫胺素100mg/L、盐酸吡哆醇100mg/L、烟酸100mg/L、NAA6ml/L、蕨根发酵粉15g/L、蔗糖30g/L、琼脂6.5-8g/L。
优选地，所述步骤S6中的加花宝1号和2号的改良培养基的配方为：花宝1号2000mg/L、花宝2号2000mg/L、肌醇20000mg/L、甘氨酸400mg/L、盐酸硫胺素100mg/L、盐酸吡哆醇100mg/L、烟酸100mg/L、碘酵母100g/L、NAA5ml/L、IBA5ml/L、蔗糖30g/L、琼脂6.5-8g/L。
优选地，所述蕨根发酵粉通过以下步骤制备所得：
将洗净后的蕨根沥干，置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.7-1.5MPa，爆破处理7-23min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.5-2.1MPa，蒸汽爆破处理0.8-2.8min后，按照接种量1.5-1.7％的比例接种微生物发酵剂，保持温度25-35℃，发酵48-54小时后，高温灭菌，冷冻干燥，得蕨根发酵粉。
本发明具有以下有益效果：
本发明通过优化和改进各个步骤的培养基对铁皮石斛组织培养，可促进种子萌发并缩短萌发时间，为种子萌发提供充足的营养，铁皮石斛萌发率高，且萌发时间短，加快了组培苗的生长速率，减少时间消耗，降低成本，且提高了所得铁皮石斛的品质。
具体实施方式
为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明实施例提供了一种新型石斛培养方法，包括如下步骤：
S1、将成熟铁皮石斛种子置于浸种剂消毒浸泡20～40min，所述浸种剂由以下重量份的原料制备而成：
0.1-0.3份MnSO4粉末、0.05-0.15份CuSO4粉末、0.1-0.3份ZnSO4粉末、0.2-0.4份NiSO4粉末、0.2-0.5份(NH4)6Mo7O24.4H2O粉末、3～5份多菌灵、10～20份EM原露100倍稀释液；
S2、将消毒浸种完成后的种子播种于自制培养基中培养15-20天，经过种胚膨大、萌发形成绿色圆球茎；培养条件为27-30℃，光照为1800-2300lx，光照时间为13-14h/d；
S3、将圆球茎转入加蕨根发酵粉的自制培养基中培养23-28天，使得圆球茎堆积在培养基中，并出现叶原基和分化苗；培养条件：温度25-26℃，光照度1700-2100lx，光照时间为13-14h/d；
S4、将圆球茎分化苗用清水冲洗后转入改良1/2MS培养基中培养20-30天，经诱导产生叶原基；
S5、将步骤S4中产生的小苗转入改良MS培养基中进行壮苗，经过60-70天壮苗培养，高度达到1.5-2.5cm的幼苗出现，培养条件：温度25-26℃，光照度1700-2100lx，光照时间为13-14h/d；
S6、将步骤S5得到的幼苗转入加花宝1号和2号的改良培养基进行诱导生根；
S7、将步骤S6得到的生根苗进行炼苗驯化。
所述自制培养基通过以下步骤制备所得：
步骤一、取苔藓泥炭土36-48份、酒糟8-10份、树皮块18-22份、硝酸钾0.5-0.9份、碳酸钙纤维2-3份、蔗糖1-2份、磷酸二氢钾0.5-1.5份、尿素0.2-0.4份、醋糟8-12份、豆饼粉8-12份分别进行粉碎后混合搅拌均匀，加水，使其含水量达60％-70％，搅拌20-40分钟，pH控制在7.0-7.5，其颗粒大小在5mm以下，颗粒粗细度均匀；
步骤二、将拌匀后的原料堆积发酵，做成高1.1-1.3米、底宽1.3-1.7米、长度不限的梯形堆，在其上打一些通气孔，发酵9-10天，发酵结束后再加入适量的水，拌匀，调节含水量在60-70％之间；
步骤三、常压下先将温度升至110-115℃，保温20-25min；然后将温度上升至120-125℃，保温60-70min；再将温度升至130-145℃，在压力为0.13-0.14MPa的情况下保温60-70min，最后再闷置30-35min，停止加热，让其自然冷却到25℃以下，得自制培养基。
所述加蕨根发酵粉的自制培养基由以下重量份的原料制备而成：
苔藓泥炭土36-48份、酒糟8-10份、树皮块18-22份、硝酸钾0.5-0.9份、碳酸钙纤维2-3份、蔗糖1-2份、磷酸二氢钾0.5-1.5份、尿素0.2-0.4份、醋糟8-12份、豆饼粉8-12份、蕨根发酵粉为10-20份。
所述步骤S4中的改良1/2MS培养基的配方为硝酸钾19000mg/L、硝酸铵16500mg/L、磷酸二氢钾1700mg/L、氨基酸螯合镁3700mg/L、碘酸钙4400mg/L、碘化钾166mg/L、硼酸1240mg/L、硫酸锰2230mg/L、硫酸锌860mg/L、钼酸钠50mg/L、硫酸铜5mg/L、三氯化六氨合钴5mg/L、硫酸亚铁2780mg/L、乙二胺四乙酸二钠3730mg/L、肌醇20000mg/L、甘氨酸400mg/L、盐酸硫胺素100mg/L、盐酸吡哆醇100mg/L、烟酸100mg/L、蕨根发酵粉15g/L、蔗糖30g/L、琼脂6.5-8g/L。
所述步骤S5中的改良MS培养基的配方为：硝酸钾38000mg/L、硝酸铵33000mg/L、磷酸二氢钾3400mg/L、氨基酸螯合镁7400mg/L、碘酸钙8800mg/L、碘化钾166mg/L、硼酸1240mg/L、硫酸锰4460mg/L、硫酸锌1720mg/L、钼酸钠50mg/L、硫酸铜5mg/L、三氯化六氨合钴5mg/L、硫酸亚铁5560mg/L、乙二胺四乙酸二钠7460mg/L、肌醇20000mg/L、甘氨酸400mg/L、盐酸硫胺素100mg/L、盐酸吡哆醇100mg/L、烟酸100mg/L、NAA6ml/L、蕨根发酵粉15g/L、蔗糖30g/L、琼脂6.5-8g/L。
所述步骤S6中的加花宝1号和2号的改良培养基的配方为：花宝1号2000mg/L、花宝2号2000mg/L、肌醇20000mg/L、甘氨酸400mg/L、盐酸硫胺素100mg/L、盐酸吡哆醇100mg/L、烟酸100mg/L、碘酵母100g/L、NAA5ml/L、IBA5ml/L、蔗糖30g/L、琼脂6.5-8g/L。
所述蕨根发酵粉通过以下步骤制备所得：
将洗净后的蕨根沥干，置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.7-1.5MPa，爆破处理7-23min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.5-2.1MPa，蒸汽爆破处理0.8-2.8min后，按照接种量1.5-1.7％的比例接种微生物发酵剂，保持温度25-35℃，发酵48-54小时后，高温灭菌，冷冻干燥，得蕨根发酵粉。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种新型石斛培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、将成熟铁皮石斛种子置于浸种剂消毒浸泡20～40min，所述浸种剂由以下重量份的原料制备而成：
0.1-0.3份MnSO4粉末、0.05-0.15份CuSO4粉末、0.1-0.3份ZnSO4粉末、0.2-0.4份NiSO4粉末、0.2-0.5份(NH4)6Mo7O24.4H2O粉末、3～5份多菌灵、10～20份EM原露100倍稀释液；
S2、将消毒浸种完成后的种子播种于自制培养基中培养15-20天，经过种胚膨大、萌发形成绿色圆球茎；培养条件为27-30℃，光照为1800-2300lx，光照时间为13-14h/d；
S3、将圆球茎转入加蕨根发酵粉的自制培养基中培养23-28天，使得圆球茎堆积在培养基中，并出现叶原基和分化苗；培养条件：温度25-26℃，光照度1700-2100lx，光照时间为13-14h/d；
S4、将圆球茎分化苗用清水冲洗后转入改良1/2MS培养基中培养20-30天，经诱导产生叶原基；
S5、将步骤S4中产生的小苗转入改良MS培养基中进行壮苗，经过60-70天壮苗培养，高度达到1.5-2.5cm的幼苗出现，培养条件：温度25-26℃，光照度1700-2100lx，光照时间为13-14h/d；
S6、将步骤S5得到的幼苗转入加花宝1号和2号的改良培养基进行诱导生根；
S7、将步骤S6得到的生根苗进行炼苗驯化。
2.如权利要求1所述的一种新型石斛培养方法，其特征在于，所述自制培养基通过以下步骤制备所得：
步骤一、取苔藓泥炭土36-48份、酒糟8-10份、树皮块18-22份、硝酸钾0.5-0.9份、碳酸钙纤维2-3份、蔗糖1-2份、磷酸二氢钾0.5-1.5份、尿素0.2-0.4份、醋糟8-12份、豆饼粉8-12份分别进行粉碎后混合搅拌均匀，加水，使其含水量达60％-70％，搅拌20-40分钟，pH控制在7.0-7.5，其颗粒大小在5mm以下，颗粒粗细度均匀；
步骤二、将拌匀后的原料堆积发酵，做成高1.1-1.3米、底宽1.3-1.7米、长度不限的梯形堆，在其上打一些通气孔，发酵9-10天，发酵结束后再加入适量的水，拌匀，调节含水量在60-70％之间；
步骤三、常压下先将温度升至110-115℃，保温20-25min；然后将温度上升至120-125℃，保温60-70min；再将温度升至130-145℃，在压力为0.13-0.14MPa的情况下保温60-70min，最后再闷置30-35min，停止加热，让其自然冷却到25℃以下，得自制培养基。
3.如权利要求1所述的一种新型石斛培养方法，其特征在于，所述加蕨根发酵粉的自制培养基由以下重量份的原料制备而成：
苔藓泥炭土36-48份、酒糟8-10份、树皮块18-22份、硝酸钾0.5-0.9份、碳酸钙纤维2-3份、蔗糖1-2份、磷酸二氢钾0.5-1.5份、尿素0.2-0.4份、醋糟8-12份、豆饼粉8-12份、蕨根发酵粉为10-20份。
4.如权利要求1所述的一种新型石斛培养方法，其特征在于，所述步骤S4中的改良1/2MS培养基的配方为硝酸钾19000mg/L、硝酸铵16500mg/L、磷酸二氢钾1700mg/L、氨基酸螯合镁3700mg/L、碘酸钙4400mg/L、碘化钾166mg/L、硼酸1240mg/L、硫酸锰2230mg/L、硫酸锌860mg/L、钼酸钠50mg/L、硫酸铜5mg/L、三氯化六氨合钴5mg/L、硫酸亚铁2780mg/L、乙二胺四乙酸二钠3730mg/L、肌醇20000mg/L、甘氨酸400mg/L、盐酸硫胺素100mg/L、盐酸吡哆醇100mg/L、烟酸100mg/L、蕨根发酵粉15g/L、蔗糖30g/L、琼脂6.5-8g/L。
5.如权利要求1所述的一种新型石斛培养方法，其特征在于，所述步骤S5中的改良MS培养基的配方为：硝酸钾38000mg/L、硝酸铵33000mg/L、磷酸二氢钾3400mg/L、氨基酸螯合镁7400mg/L、碘酸钙8800mg/L、碘化钾166mg/L、硼酸1240mg/L、硫酸锰4460mg/L、硫酸锌1720mg/L、钼酸钠50mg/L、硫酸铜5mg/L、三氯化六氨合钴5mg/L、硫酸亚铁5560mg/L、乙二胺四乙酸二钠7460mg/L、肌醇20000mg/L、甘氨酸400mg/L、盐酸硫胺素100mg/L、盐酸吡哆醇100mg/L、烟酸100mg/L、NAA6ml/L、蕨根发酵粉15g/L、蔗糖30g/L、琼脂6.5-8g/L。
6.如权利要求1所述的一种新型石斛培养方法，其特征在于，所述步骤S6中的加花宝1号和2号的改良培养基的配方为：花宝1号2000mg/L、花宝2号2000mg/L、肌醇20000mg/L、甘氨酸400mg/L、盐酸硫胺素100mg/L、盐酸吡哆醇100mg/L、烟酸100mg/L、碘酵母100g/L、NAA5ml/L、IBA5ml/L、蔗糖30g/L、琼脂6.5-8g/L。
7.如权利要求1所述的一种新型石斛培养方法，其特征在于，所述蕨根发酵粉通过以下步骤制备所得：
将洗净后的蕨根沥干，置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.7-1.5MPa，爆破处理7-23min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.5-2.1MPa，蒸汽爆破处理0.8-2.8min后，按照接种量1.5-1.7％的比例接种微生物发酵剂，保持温度25-35℃，发酵48-54小时后，高温灭菌，冷冻干燥，得蕨根发酵粉。
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