CN109699495A - 一种提高金毛狗脊孢子萌发率的方法 - Google Patents
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Abstract
提供了一种提高金毛狗脊孢子萌发率的方法，具体为在组成为1/8MS+BA0.04mg/L+IAA0.02mg/L的金毛狗脊孢子萌发的培养基中加入经细菌过滤器过滤过滤处理后的金毛狗脊提取液，金毛狗脊提取液的加入量为金毛狗脊提取液加入后的混合液浓度的1‑2％之间。该方法能将萌发率从14.7％提高到31％以上，显著提高孢子萌发率。
Description
技术领域
本发明总体地涉及金毛狗脊开发利用技术领域，具体地涉及一种提高金毛狗脊孢子萌发率的方法。
背景技术
金毛狗脊为国家II级保护植物，是我国民间应用历史悠久的药用植物之一，但长期以来由于对药用植物金毛狗脊认识不足和缺乏科学的引导，没有明确的产业发展目标和措施，这一宝贵的药用植物没有得到开发利用，更没有对其野生变人工种植进行系统科学的研究，以致于药用植物金毛狗脊一直处于自然生长缓慢发展状态。
在金毛狗脊繁育技术方面：李雪，叶清梅，詹启成等(李雪，叶清梅，詹启成.金毛狗离体培养及再生植株体系的建立[J].北方园艺，2010，6：152-155.)的研究表明金毛狗脊孢子采用2％次氯酸钠消毒10-12min，获得最佳无菌材料。邓洪平等(邓洪平，刘光华，伍莲等.重点保护药用植物金毛狗配子体发育过程的研究[J].中国中药杂志，2007，32(18)：1850-1853.)研究发现使用金毛狗脊孢子为材料，1-2周后孢子萌发，萌发类型为书带蕨型；多数配子体发育无明显的丝状体阶段，25d后发育为片状体，40d后形成原叶体，播种60d精子器产生，颈卵器在精子器发生10d后形成。邓洪平等(邓洪平，刘光华，伍莲等.重点保护药用植物金毛狗配子体发育过程的研究[J].对金毛狗孢子萌发和配子体发育的阶段性和多样性分析也发现金毛狗脊孢子萌发类型为向心型，配子体的发育多数无明显的丝状体阶段，直接进入片状体阶段；但在不同培养基类型、不同培养条件下，其配子体发育各阶段表现出明显的多样性，配子体发育过程中原始特征与进化特征并存；在发育类型表现出进化特征的同时，发育的整个阶段未出现毛状体，初生假根具有叶绿体等较原始特征也同时存在。张祖荣等(张祖荣，张绍彬.国家二级保护药用与观赏植物金毛狗的孢子繁殖技术初探[J],北方园艺，2010(13)：203～206.)以原生境土为基质,在人工无菌环境下，白天光照和自然变温的条件下，发现金毛狗脊生长发育良好。蒲立立等(蒲立立,黄海波,付铨盛.金毛狗脊孢子萌发影响因素的研究[J].种子,2015,34(7):84-86.)以土壤为基质进行常规孢子繁殖试验，采用裂区试验设计考察了不同光照温度、不同基质的配比和播种密度，初步探索出适宜金毛狗脊孢子萌发、配子体发育和幼孢子体生长发育的光照温度、最佳培养基质和播种密度，并通过分株繁殖，初步探索出金毛狗脊分株繁殖的最佳时期以及分株规格。
可以看出，金毛狗脊的孢子量大易得，可通过配制培养基，在可控的实验条件下促进孢子大量萌发最后形成孢子体，然后通过移栽迅速增加其种群数量，这为金毛狗脊的保护和开发提供一条捷径。但目前金毛狗脊繁殖主要是孢子繁殖和分株繁殖，孢子繁殖存在问题是，萌发率偏低，分株繁殖虽然存活率高，存在成本高周期长等问题。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种提高金毛狗脊孢子萌发率的方法，在金毛狗脊孢子萌发的培养基中加入适量的金毛狗脊提取液，可以显著提高孢子萌发率。
本发明的技术方案是，一种提高金毛狗脊孢子萌发率的方法，所述方法为在金毛狗脊孢子萌发的培养基中加入金毛狗脊提取液。
进一步的，上述金毛狗脊孢子萌发的培养基为MS培养基。
MS培养基，即Murashige和Skoog设计，是目前应用最广泛的一种培养基。其特点是无机盐浓度高，具有高含量的氮、钾，尤其是铵盐和硝酸盐的含量很大，能够满足迅速增长的组织对营养元素的需求，有加速愈伤组织和培养物生长的作用，当培养物久不转移时仍可维持其生存。但它不适合生长缓慢、对无机盐浓度要求比较低的植物。
进一步的，上述MS培养基的组成为：1/8MS+BA 0.04mg/L+IAA0.02mg/L。
在MS培养基配方中，1/8MS表示无机盐离子浓度为MS培养基中的1/8，该培养基能有效降低无机盐浓度，同时加入适量的有促进细胞分裂的作用的激动素BA(激动素，6-苄氨基腺嘌呤)和促生长作用的生长素IAA(生长素，吲哚乙酸)，上述含量的组合有利于孢子萌发。
进一步的，上述金毛狗脊提取液的加入量为金毛狗脊提取液加入后的混合液浓度的1-2％之间，低于或者超出该范围，孢子萌发率降低。
进一步的，上述所述在金毛狗脊孢子萌发的培养基中加入金毛狗脊提取液的方法为：在无菌条件下，金毛狗脊孢子萌发的培养基温度处于50℃左右尚未凝固时加入金毛狗脊提取液，然后立即混匀混合液。
进一步的，上述所述金毛狗脊提取液经细菌过滤器过滤，以过滤除去包括细菌、真菌等微生物。提取液里通常含有一些内生菌等微生物会造成污染，但是提取液不能高温灭菌，否则里面的成分会变化，只能通过细菌过滤器过滤除菌达到此目的。
更进一步的，上述金毛狗脊提取液的制备方法为：10克洗净的金毛狗脊块根加上90毫升蒸馏水用组织匀浆机以30000转每分钟的速度匀浆3-5分钟，然后用台式高速离心机以5000转每分钟的速度离心10分钟，用注射器取上清液注入细菌过滤器，过滤除去包括细菌和真菌的微生物，以防污染。
可以看出，本发明在培养基中适当加入经细菌过滤器过滤的金毛狗脊提取液，可以使萌发率从14.7％提高到31％以上，明显利于提高孢子萌发率。
具体实施方式
为了使本领域技术人员更好地理解本发明，下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
实施例1
采用浦立立等(2015)的孢子萌发最佳培养基(1/8MS+BA0.04mg/L+IAA0.02mg/L)为对照(CK1)，分别在对照中加入经细菌过滤器的金毛狗脊块茎提取液作为处理，观察孢子萌发情况。每个处理平行3个重复。
接种播种15d后，每隔3d用显微镜观察并记录孢子的萌发情况。将孢子壁破裂，具有1个含叶绿素的细胞和1条假根时定为孢子已萌发。播种15d后计算萌发率，并进行记录。数据采用Duncan检验进行。
结果如表1所示，可以看出，最佳培养基(CK1)、处理1(最佳培养基+1％提取液)和处理2(最佳培养基+2％提取液)三种处理条件下，孢子萌发率分别为14.7％、39.3％和、31.9％，即在培养基中适当加入提取液，有利于提高孢子萌发率。
表1不同培养基处理对孢子萌发的影响
(a：差异显著水平<5％，A：差异显著水平<1％)
实施例2
采用王益和(王益和.金毛狗脊蕨孢子繁殖研究简报[J].闽西职业技术学院学报,2012,14(1):87-88,108)的孢子萌发培养基(MS+GA2mg/L)为对照(CK2)，分别在对照中加入经细菌过滤器的金毛狗脊块茎提取液作为处理，观察孢子萌发情况。每个处理平行3个重复。
接种播种15d后，每隔3d用显微镜观察并记录孢子的萌发情况。将孢子壁破裂，具有1个含叶绿素的细胞和1条假根时定为孢子已萌发。播种15d后计算萌发率，并进行记录。数据采用Duncan检验进行。
结果如表2所示，可以看出，CK2、处理A(CK2+1％提取液)和处理B(CK2+2％提取液)三种处理条件下，孢子萌发率分别为14.7％、39.3％和、31.9％，即在培养基中适当加入提取液，有利于提高孢子萌发率。
表2不同培养基处理对孢子萌发的影响
(a：差异显著水平<5％，A：差异显著水平<1％)
以上已经描述了本发明的各实施例，上述说明是示例性的，并非穷尽性的，并且也不限于所披露的各实施例。在不偏离所说明的各实施例的范围和精神的情况下，对于本技术领域的普通技术人员来说许多修改和变更都是显而易见的。因此，本发明的保护范围应该以权利要求的保护范围为准。
Claims (7)
1.一种提高金毛狗脊孢子萌发率的方法，其特征在于，所述方法为在金毛狗脊孢子萌发的培养基中加入金毛狗脊提取液。
2.如权利要求1所述的提高金毛狗脊孢子萌发率的方法，其特征在于，所述金毛狗脊孢子萌发的培养基为MS培养基。
3.如权利要求2所述的提高金毛狗脊孢子萌发率的方法，其特征在于，所述MS培养基的组成为：1/8MS+BA 0.04mg/L+IAA0.02mg/L。
4.如权利要求1所述的提高金毛狗脊孢子萌发率的方法，其特征在于，所述金毛狗脊提取液的加入量为金毛狗脊提取液加入后的混合液浓度的1-2％之间。
5.如权利要求1所述的提高金毛狗脊孢子萌发率的方法，其特征在于，所述在金毛狗脊孢子萌发的培养基中加入金毛狗脊提取液的方法为：在无菌条件下，金毛狗脊孢子萌发的培养基温度处于50℃左右尚未凝固时加入金毛狗脊提取液，然后立即混匀混合液。
6.如权利要求1所述的提高金毛狗脊孢子萌发率的方法，其特征在于，所述金毛狗脊提取液经细菌过滤器过滤，以过滤除去包括细菌、真菌等微生物。
7.如权利要求1或6所述的提高金毛狗脊孢子萌发率的方法，其特征在于，所述金毛狗脊提取液的制备方法为：10克洗净的金毛狗脊块根加上90毫升蒸馏水用组织匀浆机以30000转每分钟的速度匀浆3-5分钟，然后用台式高速离心机以5000转每分钟的速度离心10分钟，用注射器取上清液注入细菌过滤器，过滤除去包括细菌和真菌的微生物，以防污染。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117089510A (zh) * | 2023-08-30 | 2023-11-21 | 毕节市中药研究所 | 诱导金毛狗脊孢子萌发增殖的培养基组合及诱导原叶体的方法和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109699495B (zh) | 2022-04-08 |
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