KR102653875B1 - 꼬리진달래의 액아를 이용한 기내 대량증식 배양 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명의 액아 배양을 이용한 꼬리진달래 대량 증식 배양 방법은 신초유도, 다경유도 및 발근유도의 각 배양 단계에 적합한 배지를 이용함으로써, 꼬리진달래의 생존율, 신초 발생율, 신초 길이, 신초 수, 발근율, 뿌리수, 뿌리 길이 등의 생육 특성이 우수한 기내 식물체를 배양하고, 상기 방법에 따라 신초, 다경 및 발근이 유도된 식물체를 기외순화를 위한 적합한 토양에 식재함으로써 생존율 및 신초길이, 신초 수 등의 생육 특성이 우수한 꼬리진달래를 대량증식하는데 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 액아배양을 이용한 꼬리진달래 식물체의 대량증식 배양 방법에 관한 것으로, 상세하게는 꼬리진달래의 액아가 존재하는 신초를 초대배양하여 신초 유도한 후, 다경 유도(multiple shoot), 발근 유도하는 단계에서 우수한 생육 특성을 갖는 최적의 배지 조성을 제공하고, 유식물체를 기외순화하여 우수한 생육특성을 나타내는 꼬리진달래의 대량증식 배양 방법에 관한 것이다.
꼬리진달래(Rhododendron micranthum)는 진달래과(Ericaceae) 진달래속(Rhododendron)의 상록활엽관목으로, Rhododendron micranthum Turcz. 이라는 학명을 가지며, 한국, 중국, 만주 등지에 분포하는 다년생 식물이다. 꼬리진달래는 「수목원ㆍ정원의 조성 및 진흥에 관한 법률」에 따라 희귀식물로 지정되었으며, 준위협(NT) 등급이다. 꼬리진달래는 진달래과의 진달래속의 관목으로 경북, 강원, 충북의 일부 지역에서 자란다. 높이는 1~2m이고 가지가 한 마디에서 2~3개씩 나오며 2년지는 갈색이 돌며 털이 있고 골속은 갈색이다. 잎은 호생하고 가지 윗부분에서 3~4개씩 달리며, 길이는 2~3.5cm로 톱니가 없고 표면은 녹색이다. 꽃은 6~7월에 원추화서로 피며, 20개 정도의 꽃이 달린다. 열매는 긴 타원형이고 길이 5~8mm로서 9월에 익는다.
한편, 식물의 종자를 이용한 실생번식은 유전적 다양성을 보존하면서 식물을 증식시킬 수 있는 장점이 있다. 그러나, 이는 발아율이 낮은 종자를 대량 번식시키는데는 적용하기 어렵고, 멸종위기종, 희귀종 등과 같이 개체수가 적은 식물을 증식시키기에는 한계가 있다.
식물체는 여러 종류의 기관 즉 뿌리, 줄기, 잎, 화기 등으로 구성되어 있는데 모든 기관이 분화능을 가지고 있으나, 기관의 종류에 따라 분화능력에 차이가 있기 때문에 적절한 배양기관의 선정은 중요한데, 대부분 경정부(정단부, Shoot tip), 액아(곁눈, Axillary bud), 잎 절편(엽편, Leaf segment)등을 이용하여 배양한다. 식물이 가지고 있는 고유의 분화능력을 전형성능(全形成能, Totipotency,)이라 하는데, 단세포 혹은 식물 조직 일부분으로부터 완전한 식물체가 재생되는 능력을 말한다. 모든 세포가 전형성능을 지니고 있지만 세포 조직의 분화 정도, 채취 부위, 배지의 조성, 배양 환경 등에 따라 발현되는 결과는 현저히 차이가 나므로, 식물의 종류 또는 품종의 종류에 따른 배양 조건의 최적화가 필요하다.
특히 식물의 조직이나 기관이 기내(器內, 배양 시험관이나 유리병과 같은 배양용기 상태)라는 특수한 환경에서 생장 증식하기 위해서는 여러 영양분이 필요한데, 영양분의 요구되는 식물의 종류에 따라 또는 배양조직이나 기관의 종류에 따라서 차이가 나므로 배양하고자 하는 식물이나 조직의 특성에 맞는 배지를 개발하여야 한다. 이에, 식물의 종류 및 배양 목적에 따라 최적의 배지조성을 선택하여 배양하여야 하며, 이 때 기본배지 이외에도 특정 무기염류, 탄소원, 기타 유기물, 비타민류 및 식물생장조절제 등을 첨가하거나 농도 및 일부 성분의 함량을 변화시켜 사용하는 것이 필요하다.
꼬리진달래에 대한 종래의 선행기술로서 대한민국 공개특허 제 10-2019-0042823호는 꼬리진달래를 발효소재로 이용하기 위한 제조방법에 관한 것으로, 꼬리진달래의 추출물을 발효한 소재가 항산화, 주름개선 및 미백효능이 있음을 개시하고 있다. 또한, 꼬리진달래의 번식을 위한 줄기 삽목 및 열매를 탈각하여 얻은 종자의 번식에 관한 연구에서는 삽목번식 시 발근율이 10% 미만임을 개시하고 있다(희귀식물 꼬리진달래의 자생지 생육환경 및 삽목, 종자번식, 김낭영 외. Journal of Forest Science Vol. 29 no. 2 pp.165-172).
상기의 선행문헌과 같이 꼬리진달래는 항산화, 주름 개선, 미백효과 등 기존 연구를 통해 검증된 기능성 식물로 이용 가치는 높으나, 자생지가 희소하고 희귀식물로 지정된 상황으로 개체수는 많지 않다. 또한 꼬리진달래는 통상적인 번식 방법(종자 발아, 삽목) 등으로 번식이 어려워 개체수 보전 또는 기능성 식물로 이용하고자 할 경우 효율적인 대량증식 방법이 필요하다.
이에, 본 발명자는 꼬리진달래가 줄기 삽목 방법이나 종자번식을 통한 번식이 어려운 식물인 것을 고려하여 조직배양을 통한 대량증식방법을 개발하게 되었으며 꼬리진달래의 액아를 이용한 기내에서 대량증식에 적합한 최적배지조성 및 배양 조건과 식물 생장조절물질을 구명하고 꼬리진달래의 재배에 필요한 기초기술을 개발하였고, 본 발명의 각 단계별 배지에서 조직 배양 시 우수한 생육특성을 나타내는 것을 확인하고, 기외 순화율을 높이는 최적의 환경과 토양을 찾아 생육하여 희귀식물인 꼬리진달래의 대량증식 배양 방법을 완성하였다.
본 발명의 목적은 희귀식물인 꼬리진달래(Rhododendron micranthum)의 액아 배양으로부터 신초 유도, 다경 유도, 발근 유도 및 기외순화 기술에 의한 대량 증식 배양 방법 및 꼬리진달래의 대량 증식 배양 방법으로 배양된 꼬리진달래 묘목을 제공하고자 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여,
본 발명은
1) 꼬리진달래(Rhododendron micranthum)의 액아(Axillary bud)가 존재하는 신초를 채취하고, 채취한 신초를 WPM배지, ER배지 또는 MS배지에 초대배양하여 신초를 유도하는 단계;
2) 상기 생육된 신초를 제아틴, 2ip 또는 BAP를 첨가한 WPM배지, ER배지 또는 MS배지에 치상하여 다경(multiple shoot)을 유도하는 단계;
3) 상기 다경 유도된 꼬리진달래의 다경 기부를 IBA, IAA 또는 NAA를 첨가한 ½WPM 배지, ½ER 배지 또는 ½MS배지에 치상하여 발근을 유도하는 단계; 및
4) 상기 발근 유도된 꼬리진달래 식물체를 토양에 식재하여 기외순화하는 단계;를 포함하는 꼬리진달래 대량증식 배양 방법을 제공한다.
본 발명의 액아 배양을 이용한 꼬리진달래 대량 증식 배양 방법은 신초유도, 다경유도 및 발근유도의 각 배양 단계에 적합한 배지를 이용함으로써, 꼬리진달래의 생존율, 신초 발생율, 신초 길이, 신초 수, 발근율, 뿌리수, 뿌리 길이 등의 생육 특성이 우수한 기내 식물체를 배양하고, 상기 방법에 따라 신초, 다경 및 발근이 유도된 식물체를 기외순화를 위한 적합한 토양에 식재함으로써 생존율 및 신초길이, 신초 수 등의 생육 특성이 우수한 꼬리진달래를 대량증식하는데 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 꼬리진달래의 액아배양을 통한 초대배양시 신초 발생율(%)을 나타낸 도이다.
도 2는 꼬리진달래의 액아배양을 통한 초대배양시 신초 수(개) 및 신초 길이(mm)를 나타낸 도이다.
도 3은 꼬리진달래의 초대배양 4주 후 모습을 나타낸 이미지이다.
도 4는 꼬리진달래 신초의 다경유도를 통한 WPM 배지에서 제아틴, 2ip 또는 BAP의 농도별 다경 발생율(%)을 나타낸 도이다.
도 5는 꼬리진달래 신초의 다경유도를 통한 ER 배지에서 제아틴, 2ip 또는 BAP의 농도별 다경 발생율(%)을 나타낸 도이다.
도 6은 꼬리진달래 신초의 다경유도를 통한 MS 배지에서 제아틴, 2ip 또는 BAP의 농도별 다경 발생율(%)을 나타낸 도이다.
도 7은 꼬리진달래 신초의 다경유도를 통한 WPM 배지에서 제아틴, 2ip 또는 BAP의 농도별 신초 수(개) 및 신초 길이(mm)를 나타낸 도이다.
도 8은 꼬리진달래 신초의 다경유도를 통한 ER 배지에서 제아틴, 2ip 또는 BAP의 농도별 신초 수(개) 및 신초 길이(mm)를 나타낸 도이다.
도 9는 꼬리진달래 신초의 다경유도를 통한 MS 배지에서 제아틴, 2ip 또는 BAP의 농도별 신초 길이(mm) 및 신초 수(개)를 나타낸 도이다.
도 10은 꼬리진달래 신초의 다경유도를 통한 WPM 배지에서 제아틴, 2ip 또는 BAP의 농도별 생장한 모습을 나타낸 이미지이다.
도 11은 꼬리진달래 신초의 다경유도를 통한 ER 배지에서 제아틴, 2ip 또는 BAP의 농도별 생장한 모습을 나타낸 이미지이다.
도 12는 꼬리진달래 신초의 다경유도를 통한 MS 배지에서 제아틴, 2ip 또는 BAP의 농도별 생장한 모습을 나타낸 이미지이다.
도 13은 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 발근 발생율(%)을 나타낸 도이다.
도 14는 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 발근 수(개)와 발근 길이(mm)를 나타낸 도이다.
도 15는 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 발근 모습을 나타낸 도이다.
도 16은 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 ½ WPM 배지에서 IBA, IAA 또는 NAA의 농도별 발근유도 발생룰(%)을 나타낸 도이다.
도 17은 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 ½ ER 배지에서 IBA, IAA 또는 NAA의 농도별 발근유도 발생룰(%)을 나타낸 도이다.
도 18은 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 ½ MS 배지에서 IBA, IAA 또는 NAA의 농도별 발근유도 발생룰(%)을 나타낸 도이다.
도 19는 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 ½ WPM 배지에서 IBA, IAA 또는 NAA의 농도별 발근유도 발생룰(%)을 나타낸 도이다.
도 20은 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 ½ ER 배지에서 IBA, IAA 또는 NAA의 농도별 발근유도된 발근 수(개)와 발근 길이(mm)를 나타낸 도이다.
도 21은 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 ½ MS 배지에서 IBA, IAA 또는 NAA의 농도별 발근유도된 발근 수(개)와 발근 길이(mm)를 나타낸 도이다.
도 22는 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 ½ WPM 배지에서 IBA, IAA 또는 NAA의 농도별 발근유도 발생 모습을 나타낸 이미지이다.
도 23은 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 ½ ER 배지에서 IBA, IAA 또는 NAA의 농도별 발근유도 발생 모습을 나타낸 이미지이다.
도 24는 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 ½ MS 배지에서 IBA, IAA 또는 NAA의 농도별 발근유도 발생 모습을 나타낸 이미지이다.
도 25는 꼬리진달래 순화 후 토양 별 생존율(%)을 나타낸 도이다.
도 26은 꼬리진달래 순화 후 토양 별 신초 길이(mm) 및 뿌리 길이(mm)를 나타낸 도이다.
도 27은 꼬리진달래 순화 4주 후 토양 별 순화묘의 모습을 나타낸 이미지이다.
도 28은 본 발명에 따라 생산된 꼬리진달래의 조직배양 묘목을 나타낸 이미지이다.
도 2는 꼬리진달래의 액아배양을 통한 초대배양시 신초 수(개) 및 신초 길이(mm)를 나타낸 도이다.
도 3은 꼬리진달래의 초대배양 4주 후 모습을 나타낸 이미지이다.
도 4는 꼬리진달래 신초의 다경유도를 통한 WPM 배지에서 제아틴, 2ip 또는 BAP의 농도별 다경 발생율(%)을 나타낸 도이다.
도 5는 꼬리진달래 신초의 다경유도를 통한 ER 배지에서 제아틴, 2ip 또는 BAP의 농도별 다경 발생율(%)을 나타낸 도이다.
도 6은 꼬리진달래 신초의 다경유도를 통한 MS 배지에서 제아틴, 2ip 또는 BAP의 농도별 다경 발생율(%)을 나타낸 도이다.
도 7은 꼬리진달래 신초의 다경유도를 통한 WPM 배지에서 제아틴, 2ip 또는 BAP의 농도별 신초 수(개) 및 신초 길이(mm)를 나타낸 도이다.
도 8은 꼬리진달래 신초의 다경유도를 통한 ER 배지에서 제아틴, 2ip 또는 BAP의 농도별 신초 수(개) 및 신초 길이(mm)를 나타낸 도이다.
도 9는 꼬리진달래 신초의 다경유도를 통한 MS 배지에서 제아틴, 2ip 또는 BAP의 농도별 신초 길이(mm) 및 신초 수(개)를 나타낸 도이다.
도 10은 꼬리진달래 신초의 다경유도를 통한 WPM 배지에서 제아틴, 2ip 또는 BAP의 농도별 생장한 모습을 나타낸 이미지이다.
도 11은 꼬리진달래 신초의 다경유도를 통한 ER 배지에서 제아틴, 2ip 또는 BAP의 농도별 생장한 모습을 나타낸 이미지이다.
도 12는 꼬리진달래 신초의 다경유도를 통한 MS 배지에서 제아틴, 2ip 또는 BAP의 농도별 생장한 모습을 나타낸 이미지이다.
도 13은 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 발근 발생율(%)을 나타낸 도이다.
도 14는 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 발근 수(개)와 발근 길이(mm)를 나타낸 도이다.
도 15는 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 발근 모습을 나타낸 도이다.
도 16은 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 ½ WPM 배지에서 IBA, IAA 또는 NAA의 농도별 발근유도 발생룰(%)을 나타낸 도이다.
도 17은 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 ½ ER 배지에서 IBA, IAA 또는 NAA의 농도별 발근유도 발생룰(%)을 나타낸 도이다.
도 18은 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 ½ MS 배지에서 IBA, IAA 또는 NAA의 농도별 발근유도 발생룰(%)을 나타낸 도이다.
도 19는 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 ½ WPM 배지에서 IBA, IAA 또는 NAA의 농도별 발근유도 발생룰(%)을 나타낸 도이다.
도 20은 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 ½ ER 배지에서 IBA, IAA 또는 NAA의 농도별 발근유도된 발근 수(개)와 발근 길이(mm)를 나타낸 도이다.
도 21은 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 ½ MS 배지에서 IBA, IAA 또는 NAA의 농도별 발근유도된 발근 수(개)와 발근 길이(mm)를 나타낸 도이다.
도 22는 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 ½ WPM 배지에서 IBA, IAA 또는 NAA의 농도별 발근유도 발생 모습을 나타낸 이미지이다.
도 23은 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 ½ ER 배지에서 IBA, IAA 또는 NAA의 농도별 발근유도 발생 모습을 나타낸 이미지이다.
도 24는 꼬리진달래 다경 기부의 발근배양을 통한 ½ MS 배지에서 IBA, IAA 또는 NAA의 농도별 발근유도 발생 모습을 나타낸 이미지이다.
도 25는 꼬리진달래 순화 후 토양 별 생존율(%)을 나타낸 도이다.
도 26은 꼬리진달래 순화 후 토양 별 신초 길이(mm) 및 뿌리 길이(mm)를 나타낸 도이다.
도 27은 꼬리진달래 순화 4주 후 토양 별 순화묘의 모습을 나타낸 이미지이다.
도 28은 본 발명에 따라 생산된 꼬리진달래의 조직배양 묘목을 나타낸 이미지이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명은
1) 꼬리진달래(Rhododendron micranthum)의 액아(Axillary bud)가 존재하는 신초를 채취하고, 채취한 신초를 WPM배지, ER배지 또는 MS배지에 초대배양하여 신초를 유도하는 단계;
2) 상기 생육된 신초를 제아틴, 2ip 또는 BAP를 첨가한 WPM배지, ER배지 또는 MS배지에 치상하여 다경(multiple shoot)을 유도하는 단계;
3) 상기 다경 유도된 꼬리진달래의 다경 기부를 IBA, IAA 또는 NAA를 첨가한 ½WPM 배지, ½ER 배지 또는 ½MS배지에 치상하여 발근을 유도하는 단계; 및
4) 상기 발근 유도된 꼬리진달래 식물체를 토양에 식재하여 기외순화하는 단계;를 포함하는 꼬리진달래 대량증식 배양 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 꼬리진달래의 식물체 배양 방법은 꼬리진달래의 생장점이 존재하는 액아가 존재하는 신초를 치상하여 초대배양하는 단계를 포함할 수 있다.
생장점(growing point)은 새로운 줄기와 잎을 만드는 부분으로, 보통 식물의 정아(Normal bud) 또는 액아(Axillary bud)에 있고, 뿌리의 끝부분에도 존재한다. 즉, 생장점은 슈트(shoot) 중의 가장 어린 부분으로서, 아직 줄기와 잎으로 분화하지 않은 곳인데, 여기에 슈트의 정단 분열 조직이 있다.
생장점(growing point)은 보통 '돔형'이라고 하는 산 모양으로서, 그 곁에서 잎이 발생한다. 그러나 생장점의 모양은 매우 다양하여, 높은 돔형으로부터 보통 볼 수 있는 낮은 돔형, 또한 평탄한 형에서 역으로 다소 움푹 팬 모양에 이르기까지 여러 가지 형태가 있다. 따라서, 생장점의 높이나 넓이도 매우 다양하다. 이와 같은 높이와 넓이의 기준은 명확히 밝혀져 있지는 않지만, 일반적으로 생장점의 높이는 가장 어린 잎이 붙어 있는 부분의 윗부분 높이를 말하며, 넓이는 그 붙어 있는 부분에서의 지름을 가리킨다.
본 명세서에서 사용된 용어, "배지"는 꼬리진달래의 액아 부위로부터 신초 유도, 다경 유도, 발근 유도하는 단계에 사용되는 배지로서, 조직배양을 위해 식물의 조직으로부터 신초 유도, 다경 유도, 발근 유도하는데 사용될 수 있는 일반적인 기본 배지를 포함한다. 상기 배양 배지는 인위적으로 제조하여 사용하거나, 상업적으로 시판되는 것을 사용할 수 있다.
상기 시판되고 있는 배양 배지의 구체적인 예는 MS(Murashige and Skoog basal), WPM(woody plant medium), B5(Gamborg B5), W(White), LMWP(Lloyd and McCown Woody Plant basal), VW(Vacin and Went), Km(Knudson C modified orchid), M(Mitra replate/maintenance), NN(Nitsch and Nitsch), Anderson, BDS(modified B5 of Dunstan and Short), ER 및 SH(Schenk & Hildebrandt basal salt) 배지 등이 있으나, 바람직하게는 WPM배지, ER배지 또는 MS배지를 이용할 수 있다.
본 발명에서 사용된 배지는 WPM배지, ER배지 또는 MS배지를 기본으로 사용할 수 있다.
상기 WPM 배지는 나무나 관목의 싹을 배양하기 위해 개발된 배지로서, 관상용 관목과 나무의 상업적 기내 번식 시 널리 사용되는 배지이다.
상기 ER 배지는 식물세포의 현탁 배양을 위해 개발된 배지로서, Rhododendron fortunei(Wei, Xiangying et al, 2018), Rhododendron hybridum(Jinshou, Wu et al, 2004) 등 진달래과(Ericaceae) 식물의 조직배양 증식에도 사용된 배지이다. ER배지는 질산염 함량이 낮고 인산염 함량이 높은 것이 특징이다.
상기 MS 배지는 1962년 Murashige와 Skoog가 담배 조직배양을 위해 개발한 배지로서, 쌍떡잎식물과 외떡잎식물 모두에서 가장 일반적으로 사용되고 있는 배지이다. MS 배지는 고체상태와 액체상태 배지로 이용되고, 매우 높은 질산염, 칼륨 및 암모니아 농도인 것이 특징이다.
상기 기본 배지를 바탕으로 식물의 종류 및 배양 목적에 따라 농도 및 일부 성분의 함량을 변화시켜 최적의 배지조성을 선택할 수 있다. 이때 첨가 및 함량이 변화되는 구성물은 특정 무기염류, 탄소원, 기타 유기물, 비타민류 및 생장조절제가 있으나, 이에 한정되지 않는다.
상기 배양 배지를 제조하여 사용할 때, 상기 배양 배지는 탄소원, 대량원소, 미량원소, 비타민 및 아미노산으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있다. 상기 탄소원은 수크로스, 글루코스, 말토오스, 락토오스 및 프룩토오스로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있고, 구체적으로 수크로스일 수있다. 상기 탄소원은 1 내지 30 g/L, 구체적으로 8 내지 22 g/L, 더욱 구체적으로 12 내지 18 g/L의 농도로 포함될 수 있다.
상기 대량원소는 MgSO4·7H2O, CaCl2·2H2O, NH4NO3, KH2PO4, Ca(NO3)2·4H2O, K2SO4, KI, KNO3, NaH2PO4·H2O 및 (KH4)2SO4로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있다. 구체적으로 WPM배지는 MgSO4·7H2O, CaCl2·2H2O, NH4NO3, KH2PO4, Ca(NO3)2·4H2O 및 K2SO4로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있고, ER배지는 MgSO4·7H2O, CaCl2·2H2O, NH4NO3, KH2PO4, KNO3 및 (KH4)2SO4 로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있고, MS배지는 MgSO4·7H2O, CaCl2·2H2O, NH4NO3, KH2PO4, KI 및 KNO3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
WPM배지에서 상기 MgSO4·7H2O는 150 내지 210 ㎎/L, 구체적으로 160 내지 200 ㎎/L, 더욱 구체적으로 170 내지 190 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 CaCl2·2H2O는 40 내지 100 ㎎/L, 구체적으로 50 내지 90 ㎎/L, 더욱 구체적으로 60 내지 80 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 NH4NO3는 370 내지 430 ㎎/L, 구체적으로 380 내지 420 ㎎/L, 더욱 구체적으로 390 내지 410 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 KH2PO4는 140 내지 200 ㎎/L, 구체적으로 150 내지 190 ㎎/L, 더욱 구체적으로 160 내지 180 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 Ca(NO)2·4H2O는 440 내지 500 ㎎/L, 구체적으로 450 내지 490 ㎎/L, 더욱 구체적으로 460 내지 480 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 또한, 상기 K2SO4는 960 내지 1,020 ㎎/L, 구체적으로 970 내지 1,010 ㎎/L, 더욱 구체적으로 980 내지 1,000 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다.
또한, ER배지에서 상기 MgSO4·7H2O는 150 내지 210 ㎎/L, 구체적으로 160 내지 200 ㎎/L, 더욱 구체적으로 170 내지 190 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 CaCl2·2H2O는 300 내지 360 ㎎/L, 구체적으로 310 내지 350 ㎎/L, 더욱 구체적으로 320 내지 340 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 NH4NO3는 370 내지 430 ㎎/L, 구체적으로 380 내지 420 ㎎/L, 더욱 구체적으로 390 내지 410 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 KH2PO4는 380 내지 440 ㎎/L, 구체적으로 390 내지 430 ㎎/L, 더욱 구체적으로 400 내지 420 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 KNO3는 170 내지 230 ㎎/L, 구체적으로 180 내지 220 ㎎/L, 더욱 구체적으로 190 내지 210 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 또한, 상기 (KH4)2SO4는 100 내지 160 ㎎/L, 구체적으로 110 내지 150 ㎎/L, 더욱 구체적으로 120 내지 140 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다.
또한, MS배지에서 상기 MgSO4·7H2O는 150 내지 210 ㎎/L, 구체적으로 160 내지 200 ㎎/L, 더욱 구체적으로 170 내지 190 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 CaCl2·2H2O는 300 내지 360 ㎎/L, 구체적으로 310 내지 350 ㎎/L, 더욱 구체적으로 320 내지 340 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 NH4NO3는 1,620 내지 1,680 ㎎/L, 구체적으로 1,630 내지 1,670 ㎎/L, 더욱 구체적으로 1,640 내지 1,660 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 KH2PO4는 140 내지 200 ㎎/L, 구체적으로 150 내지 190 ㎎/L, 더욱 구체적으로 160 내지 180 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 KI는 0.2 내지 1.5 ㎎/L, 구체적으로 0.5 내지 1.2 ㎎/L, 더욱 구체적으로 0.7 내지 1.0 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 또한, 상기 KNO3는 1,870 내지 1,930 ㎎/L, 구체적으로 1,880 내지 1,920 ㎎/L, 더욱 구체적으로 1,890 내지 1,910 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다.
상기 미량원소는 MnSO4·H2O, ZnSO4·7H2O, CuSO4·5H2O, H3BO3, NaFeEDTA, Na2MoO4·2H2O 및 CoCl2·6H2O로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있다. 구체적으로 WPM배지는 MnSO4·H2O, ZnSO4·7H2O, CuSO4·5H2O, H3BO3, NaFeEDTA 및 Na2MoO4·2H2O로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있고, ER배지는 MnSO4·H2O, ZnSO4·7H2O, CuSO4·5H2O, H3BO3, NaFeEDTA, Na2MoO4·2H2O 및 CoCl2·6H2O로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있고, MS배지는 MnSO4·H2O, ZnSO4·7H2O, CuSO4·5H2O, H3BO3, NaFeEDTA, Na2MoO4·2H2O 및 CoCl2·6H2O로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
상기 WPM배지에서 MnSO4·H2O는 10 내지 34 ㎎/L, 구체적으로 14 내지 30 ㎎/L, 더욱 구체적으로 17 내지 27 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 ZnSO4·7H2O는 6 내지 11 ㎎/L, 구체적으로 7 내지 10 ㎎/L, 더욱 구체적으로 8 내지 9 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 CuSO4·5H2O는 0.05 내지 0.45 ㎎/L, 구체적으로 0.15 내지 0.35 ㎎/L, 더욱 구체적으로 0.20 내지 0.30 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 H3BO3는 4 내지 9 ㎎/L, 구체적으로 5 내지 8 ㎎/L, 더욱 구체적으로 6 내지 7 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 또한, 상기 NaFeEDTA는 22 내지 50 ㎎/L, 구체적으로 28 내지 44 ㎎/L, 더욱 구체적으로 32 내지 40 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 Na2MoO4·2H2O는 0.05 내지 0.45 ㎎/L, 구체적으로 0.15 내지 0.35 ㎎/L, 더욱 구체적으로 0.20 내지 0.30 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다.
또한, 상기 ER배지에서 MnSO4·H2O는 6 내지 28 ㎎/L, 구체적으로 10 내지 24 ㎎/L, 더욱 구체적으로 13 내지 20 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 ZnSO4·7H2O는 6 내지 11 ㎎/L, 구체적으로 7 내지 10 ㎎/L, 더욱 구체적으로 8 내지 9 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 CuSO4·5H2O는 0.005 내지 0.045 ㎎/L, 구체적으로 0.015 내지 0.035 ㎎/L, 더욱 구체적으로 0.020 내지 0.030 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 H3BO3는 4 내지 9 ㎎/L, 구체적으로 5 내지 8 ㎎/L, 더욱 구체적으로 6 내지 7 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 NaFeEDTA는 40 내지 70 ㎎/L, 구체적으로 45 내지 65 ㎎/L, 더욱 구체적으로 50 내지 60 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 Na2MoO4·2H2O는 0.05 내지 0.45 ㎎/L, 구체적으로 0.15 내지 0.35 ㎎/L, 더욱 구체적으로 0.20 내지 0.30 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 CoCl2·6H2O는 0.005 내지 0.040 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.015 내지 0.035 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 0.020 내지 0.030 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다.
또한, 상기 MS배지에서 상기 MnSO4·H2O는 6 내지 28 ㎎/L, 구체적으로 10 내지 24 ㎎/L, 더욱 구체적으로 13 내지 20 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 ZnSO4·7H2O는 6 내지 11 ㎎/L, 구체적으로 7 내지 10 ㎎/L, 더욱 구체적으로 8 내지 9 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 CuSO4·5H2O는 0.005 내지 0.045 ㎎/L, 구체적으로 0.015 내지 0.035 ㎎/L, 더욱 구체적으로 0.020 내지 0.030 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 H3BO3는 4 내지 9 ㎎/L, 구체적으로 5 내지 8 ㎎/L, 더욱 구체적으로 6 내지 7 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 NaFeEDTA는 30 내지 54 ㎎/L, 구체적으로 34 내지 50 ㎎/L, 더욱 구체적으로 38 내지 46 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 Na2MoO4·2H2O는 0.05 내지 0.45 ㎎/L, 구체적으로 0.15 내지 0.35 ㎎/L, 더욱 구체적으로 0.20 내지 0.30 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 CoCl2·6H2O는 0.005 내지 0.040 ㎎/ℓ, 구체적으로 0.015 내지 0.035 ㎎/ℓ, 더욱 구체적으로 0.020 내지 0.030 ㎎/ℓ의 농도로 포함될 수 있다.
상기 비타민 및 아미노산은 글리신, 미오-이노시톨, 니코틴산, 피리독신·HCl 및 티아민·HCl로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있다. 구체적으로 WPM 배지는 글리신, 미오-이노시톨, 니코틴산, 피리독신·HCl 및 티아민·HCl로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있고, ER 배지는 미오-이노시톨 및 티아민·HCl로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있고, MS 배지는 글리신, 미오-이노시톨, 니코틴산, 피리독신·HCl 및 티아민·HCl로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
상기 WPM배지에서 상기 글리신은 0.5 내지 3.5 ㎎/L, 구체적으로 1.0 내지 3.0 ㎎/L, 더욱 구체적으로 1.5 내지 2.5 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 미오-이노스톨은 70 내지 130 ㎎/L, 구체적으로 80 내지 120 ㎎/L, 더욱 구체적으로 90 내지 110 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 니코틴산은 0.2 내지 0.8 ㎎/L, 구체적으로 0.3 내지 0.7 ㎎/L, 더욱 구체적으로 0.4 내지 0.6 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 피리독신·HCl은 0.2 내지 0.8 ㎎/L, 구체적으로 0.3 내지 0.7 ㎎/L, 더욱 구체적으로 0.4 내지 0.6 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 또한, 상기 티아민·HCl은 0.4 내지 1.6 ㎎/L, 구체적으로 0.6 내지 1.4 ㎎/L, 더욱 구체적으로 0.8 내지 1.2 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다.
상기 ER배지에서 상기 미오-이노스톨은 70 내지 130 ㎎/L, 구체적으로 80 내지 120 ㎎/L, 더욱 구체적으로 90 내지 110 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 또한, 상기 티아민·HCl은 0.1 내지 0.7 ㎎/L, 구체적으로 0.2 내지 0.6 ㎎/L, 더욱 구체적으로 0.3 내지 0.5 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다.
상기 MS배지에서 상기 글리신은 0.5 내지 3.5 ㎎/L, 구체적으로 1.0 내지 3.0 ㎎/L, 더욱 구체적으로 1.5 내지 2.5 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 미오-이노스톨은 70 내지 130 ㎎/L, 구체적으로 80 내지 120 ㎎/L, 더욱 구체적으로 90 내지 110 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 니코틴산은 0.2 내지 0.8 ㎎/L, 구체적으로 0.3 내지 0.7 ㎎/L, 더욱 구체적으로 0.4 내지 0.6 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 상기 피리독신·HCl은 0.2 내지 0.8 ㎎/L, 구체적으로 0.3 내지 0.7 ㎎/L, 더욱 구체적으로 0.4 내지 0.6 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다. 또한, 상기 티아민·HCl은 0.05 내지 0.15 ㎎/L, 구체적으로 0.07 내지 0.13 ㎎/L, 더욱 구체적으로 0.09 내지 0.11 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다.
상기 혼합 배지는 pH 5.0 내지 7.0, 구체적으로 pH 5.5 내지 6.5, 더욱 구체적으로 pH 5.8 내지 6.2로 조절될 수 있다.
상기 배양 배지는 배양 목적에 따라 액체 배지 또는 고체 배지로서 제조될 수 있고, 고체 배지로 제조하는 경우에는 한천 또는 젤라이트와 같은 성분이 추가로 첨가될 수 있다. 상기 한천은 상기 배양 배지에서 4.0 내지 8.0 ㎎/L, 구체적으로 5.0 내지 7.0 ㎎/L, 더욱 구체적으로 5.5 내지 6.5 ㎎/L의 농도로 포함될 수 있다.
상기 단계 1)의 신초를 유도하는 배지는 WPM배지, ER배지 또는 MS배지를 이용할 수 있으나, 가장 바람직하게는 MS 배지이다.
상기 단계 2)의 다경유도 배지는 제아틴, 2ip 또는 BAP를 WPM배지, ER배지 또는 MS배지에 1.0 내지 15.0mg/L로 단용 첨가하여 이용할 수 있다.
상기 단계 2)의 제아틴은 1.0 내지 15.0mg/L를 단용 첨가할 수 있으나, 바람직하게는 2.0 내지 12.0mg/L를 단용 첨가할 수 있고, 더 바람직하게는 3.0 내지 9.0mg/L를 단용 첨가할 수 있고, 가장 바람직하게는 3.5 내지 7.5mg/L 를 단용 첨가할 수 있다.
상기 단계 2)의 2ip는 1.0 내지 15.0mg/L를 단용 첨가할 수 있으나, 바람직하게는 2.0 내지 13.0mg/L를 단용 첨가할 수 있고, 더 바람직하게는 3.0 내지 11.0mg/L를 단용 첨가할 수 있고, 가장 바람직하게는 4.0 내지 9.0mg/L 를 단용 첨가할 수 있다.
상기 단계 2)의 BAP는 1.0 내지 15.0mg/L를 단용 첨가할 수 있으나, 바람직하게는 2.0 내지 12.0mg/L를 단용 첨가할 수 있고, 더 바람직하게는 3.0 내지 9.0mg/L를 단용 첨가할 수 있고, 가장 바람직하게는 3.5 내지 7.5 를 단용 첨가할 수 있다.
상기 단계 2)의 배지는 제아틴 4.0mg/L를 첨가한 MS배지, 제아틴 4.0mg/L를 첨가한 WPM배지, 제아틴 8.0mg/L를 첨가한 WPM배지, 제아틴 8.0mg/L를 첨가한 ER 배지의 신초 발생률이 높고 신초길이, 신초수의 생육 상황이 우수하였다(표 3, 표 4, 표 5, 도 4, 도 5, 도 6, 도 7, 도 8, 도 9, 도 10, 도 11 및 도 12).
상기 단계 3)의 발근 유도 배지는 IBA, IAA 또는 NAA를 ½WPM 배지, ½ER 배지 또는 ½MS배지에 0.01 내지 10.0mg/L로 단용 첨가하여 이용할 수 있다.
상기 단계 3)의 IBA는 0.01 내지 10.0mg/L, 0.04 내지 8.0mg/L, 0.08 내지 4.0mg/L, 2.5 내지 4.0mg/L 또는 1.5 내지 4.0mg/L를 단용 첨가할 수 있고, 가장 바람직하게는 0.09 내지 1.50mg/L 를 단용 첨가할 수 있다.
상기 단계 3)의 IAA는 0.01 내지 10.0mg/L, 0.04 내지 8.0mg/L, 0.08 내지 4.0mg/L, 2.5 내지 4.0mg/L 또는 1.5 내지 4.0mg/L를 단용 첨가할 수 있고, 가장 바람직하게는 1.5 내지 2.5mg/L 를 단용 첨가할 수 있다.
상기 단계 3)의 NAA는 0.01 내지 10.0mg/L, 0.04 내지 8.0mg/L, 0.08 내지 4.0mg/L, 2.5 내지 4.0mg/L 또는 1.5 내지 4.0mg/L를 단용 첨가할 수 있고, 가장 바람직하게는 2.5 내지 3.5mg/L 를 단용 첨가할 수 있다.
상기 단계 3)의 배지는 IBA 1.0mg/L를 첨가한 ½ER배지, IAA 2.0mg/L를 첨가한 ½WPM배지에서 높은 발근율 및 뿌리 발생 상황이 우수하였다(표 7, 표 8, 표 9, 도 16, 도 17, 도 18, 도 19, 도 20, 도 21, 도 22, 도 23 및 도 24).
식물생장조절제(植物生長調節, Plant growth regulators)는 식물생장에 관여하는 식물호르몬을 총칭하는데, 옥신류(Auxin)류, 시토키닌(Cytokinin)류, 지베렐린(Gibberellin)류, 앱시스산(Abscisic acid) 등이 포함된다. 식물 조직배양 시에도 적정한 종류와 농도의 생장조절제가 배지에 첨가되어야만 배양의 목적에 맞게 배양체가 생육 및 분화할 수 있다.
상기 옥신(Auxin)류는 고등식물의 줄기와 뿌리에서 세포분열에 주로 관여하는 필수적인 호르몬으로 직접적인 세포분열 제어능력은 시토키닌류 보다 약하므로 배양체의 활발한 생육 및 증식을 유도하기 위해서는 시토키닌류와 혼용하여 사용하는 것이 일반적이며, 조직배양시 주로 뿌리 형성을 유도하기 위하여 일차적으로 사용될 수 있다. 옥신의 종류에는 나프탈렌아세트산(Naphthaleneacetic acid; NAA), 인돌아세트산(indolacetic acid, IAA), 인돌부티르산(indole butyric acid, IBA) 및 2,4-디클로로페녹시아세트산
(2,4-dichlorophenoxyacetic acid, 2,4-D) 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.
시토키닌(Cytokinin)류는 핵산(Nucleic acid)을 구성하는 퓨린 염기(Purin base) 중 하나인 아데닌(Adenine)의 유도체로 주로 세포분열을 자극하고 촉진하는데, 식물의 종류 및 세포의 분화상태에 따라 다르게 작용한다. 사용할 수 있는 시토키닌은 키네틴(kinetin), 제아틴(zeatin), 벤질아데닌(benzyladenine, BA), 6-벤질아미노퓨린(6-benzylamino purine; 6-BAP 또는 BAP) 및 디페닐우레아(diphenyl urea)등이 있으나, 이에 한정되지 않는다. 특히 본 발명에서 사용된 시토키닌 종류 중 하나인 키네틴은 세포분열시 DNA 합성을 증진시키며, BAP 또한 세포분열을 촉진한다. 특히 시토키닌 종류 중 하나인 키네틴은 세포분열 시 DNA 합성을 증진시키는 역할을 하며, 벤질아미노푸린(Benzylaminopurine, BAP) 또한 세포분열을 촉진하는 기능을 한다.
상기 시토키닌과 옥신 외에도 식물체의 조직배양에 필요한 비타민으로는 티아민 HCl(Thiamine HCI), 니코틴산(Nicotinic acid), 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl), 리보플라빈 (Riboflabin), 미오이노시톨(Myo-Inositol) 등 비타민 B 복합체가 있으며, 이는 기내 배양체의 생장을 촉진시킨다. 특히 티아민은 당류 대사작용(Carbohydrate metabolism)과 아미노산 생합성(Amino acid biosynthesis) 작용에 관여하고, 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl)은 세포의 생장을 촉진시키고, 노화를 방지해주는 작용을 하며, 니코틴산(Nicotinic acid)은 캘러스의 갈색 변화를 방지하는데 효과가 있으므로 장기간 계대배양을 할 때 넣어주면 효과적이다.
배지에 첨가되는 이노시톨(inositol)은 헥시톨(hexitol)의 일종으로 세포분열과 생장을 촉진하는 효과가 있고, 비교적 높은 농도에서도 독성이 거의 없다. 일반적으로 사용하는 적정 농도는 100mg/L이며, 미오이노시톨(Myo-Inositol)은 이노시톨의 9가지 입체상 중 생물학적 활성이 가장 큰 것으로 비타민 B 복합체이다. 어떤 식물에서는 생장에 필수적인 요소로 알려져 있다.
기내에서 배양된 식물체를 성공적으로 새로운 환경이나 기후조건에 대하여 식물체가 생리적으로 적응하는 과정을 순화(acclimation)라고 하며 자연적으로 또는 인위적으로 진행되고, 계절적 변화 등의 복잡한 환경요인과 광도 등의 특정 환경요인와 같이 식물이 적응 가능한 제한된 범위 내에서 이루어진다(백기엽, 2001)
상기 단계 4)의 토양은 유비상토, 마사토, 피트모스, 펄라이트, 적옥토, 녹소토, 코코피트를 단용처리 또는 혼용처리하여 사용할 수 있다.
상기 토양은 유비상토 100%, 유비상토:마사토(5:5), 유비상토:피트모스(5:5) , 유비상토:펄라이트(5:5), 유비상토: 적옥토(5:5), 유비상토:녹소토(5:5), 블루베리용 상토(피트모스:코코피트:펄라이트(6:2.5:1.5))인 것을 사용할 수 있으나, 바람직하게는 유비상토 100%, 유비상토:마사토(5:5), 유비상토:피트모스(5:5), 유비상토:펄라이트(5:5), 유비상토:녹소토(5:5), 블루베리용 상토를 사용할 수 있고, 가장 바람직하게는 블루베리용 상토를 사용할 수 있다.
블루베리용 상토는 피트모스, 코코피트, 펄라이트가 60 : 25 : 15의 비율로 섞여 있으며 피트모스는 부피의 약 10배~20배 가량의 물을 흡수하는 특성이 있으며 토양의 미생물을 촉진시켜 토양을 개량해 주고 토양 내 충분한 공극을 확보시켜 뿌리의 적절한 성장을 유도한다. 코코피트는 천연 유기질로 유용미생물이 풍부하고 보습력이 뛰어나 식물을 키우기에 적합하며 잡충의 빈도가 적어 청결하게 관리가 용이하다. 또한 펄라이트는 가볍고 배수성과 통기성이 매우 우수하며 쉽게 분해가 되지 않고 통기성이 오래 유지되어 뿌리가 숨을 쉴 수 있도록 도와준다. 이 세 가지 토양을 섞은 블루베리용 상토는 pH를 4.0~5.3으로 맞춰 꼬리진달래가 생육하는데 적합한 토양 환경을 제공한 것으로 판단된다.
본 발명은 실시예의 각 배양 단계의 배지를 이용하고 기외순화를 하여 꼬리진달래 대량증식 배양 방법에 의한 꼬리진달래를 제공한다. 상기 꼬리 진달래는 상기 배양 방법에 의해 생존율이 90 내지 100%인 것으로 나타내 높은 증식율을 나타내었다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자는 꼬리진달래의 기내 배양 증식시험을 수행하기 위해서 WPM배지, ER배지, MS배지를 기본배지로 사용하였다(표 1). 실시예 2에서 꼬리진달래의 액아가 존재하는 신초를 WPM배지, ER배지 또는 MS배지에 치상하여 초대배양하여 신초유도한 결과, 치상 8주 후 신초발생률은 WPM배지 45%, ER배지 65%, MS배지 45%인 것으로 나타났다(표 2, 도 1). 초대 배양 4 주 후 상기 WPM배지(A), ER배지(B), MS배지(C)에서의 생육한 신초의 모습을 확인하였다(도 3). 초대 배양 8 주 후 꼬리진달래의 신초는 WPM배지에서 신초 길이 5.61±2.46mm, 신초 수 1.00±0.00개 이었고, ER배지에서는 신초 길이 5.93±3.69mm, 신초 수 1.08±0.27개로 나타났고 MS배지에서는 신초 길이 13.15±6.73mm, 신초 수 1.33±0.47개인 것으로 나타났고(표 1 및 도 2), 생육상황이 가장 우수한 MS배지가 신초 유도 배지로 가장 적합하였다. 상기 유도된 꼬리진달래의 신초에서 실시예 3의 다경 유도를 위한 배지로 WPM배지, ER배지 또는 MS배지에 제아틴, 2ip 또는 BAP를 농도별로 첨가하여 신초를 치상한 결과, MS 배지에 제아틴 4.0mg/L를 첨가한 배지에서 신초 발생률 100%, 신초 길이 9.72±3.92mm, 신초 수 4.90±1.61개로 가장 좋은 결과를 보였다(표 5, 도 6, 도 9 및 도 12). 또한, WPM배지에 제아틴 4.0mg/L 또는 제아틴 8.0mg/L를 첨가한 처리구, ER 배지에 제아틴 8.0mg/L를 첨가한 처리구도 양호한 생육상황과 80% 이상의 신초발생율을 나타내었다(표3, 표 4, 도 4, 도 5, 도 7, 도 8, 도 10 및 도 11). 실시예 4에서는 유도된 다경 기부를 생장조절제를 첨가하지 않은 ½WPM 배지와 ½ER 배지, ½MS배지에서 발근유도를 한 결과, ½ER 배지에서 발근 발생률 30%, 발근 길이 26.99±14.60 mm, 발근 수 1.33±0.75 개로 가장 우수한 결과를 나타냈다(표 6, 도 13, 도 14 및 도 15). 또한, 상기 ½WPM 배지와 ½ER 배지, ½MS배지의 기본배지에 IBA, IAA 또는 NAA를 농도별로 첨가한 배지에서 발근 유도한 결과, ½ER배지에 IBA 1.0mg/L를 첨가한 처리구에서 발근율 80%, 뿌리 수 3.44±1.80개, 뿌리 길이 12.28±5.65mm로 가장 우수한 뿌리 발생 결과를 나타내었다(표 8, 도 17, 도 20 및 도 23). 또한, ½WPM배지에 IAA 2.0mg/L를 첨가한 처리구는 그 다음으로 우수한 뿌리 발생 결과를 나타내었다(표 7, 도 16, 도 19 및 도 22). ½MS배지에 IAA 1.0mg/L 또는 2.0mg/L를 첨가한 처리구는 가장 저조한 뿌리발생 결과를 나타내었다(표 9, 도 18, 도 21 및 도 24). 마지막으로, 실시예 5에서는 꼬리진달래 식물체를 유비상토 100%, 유비상토:마사토(5:5), 유비상토:피트모스(5:5) , 유비상토:펄라이트(5:5), 유비상토: 적옥토(5:5), 유비상토:녹소토(5:5), 블루베리용 상토(피트모스:코코피트: 펄라이트(6:2.5:1.5)에 식재하여 4주 순화처리를 하였으며, 블루베리용 상토(피트모스:코코피트: 펄라이트(6:2.5:1.5)) 처리구가 생존율 100%, 신초길이 41.21mm, 뿌리길이 55.06mm로 모든 처리구 중 가장 결과가 우수하였다(표 10, 도 25, 도 26 및 도 27). 본 발명의 꼬리진달래의 대량증식 배양 방법에 따라 4주 동안 순화한 꼬리진달래의 순화묘의 모습을 확인하였다(도 28).
이하, 본 발명을 실시예에 의하여 상세하게 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 꼬리진달래의 기내 배양 기본 배지의 조제
꼬리진달래의 기내배양 증식시험에 사용한 배지는 WPM(Lloyd and McCown, 1980), ER(Economou and Read, 1984), MS(Murashige and Skoog, 1962) 파우더 배지를 기본배지로 사용하였다(표 1). 배지의 pH는 6.0이 되도록 조절한 후, 0.6% 한천(Agar), 1.5% 수크로스(Sucrose)로 조제된 배지를 121℃로 15분간 고압멸균기로 멸균 후 시험관에 20ml를 분주하였다.
| 조성(mg/L) | WPM 배지 | ER 배지 | MS 배지 | |
| 다량원소 | MgSO₄·7H2O | 180.54 | 180.7 | 180.7 |
| CaCl₂·2H2O | 72.5 | 332.2 | 332.2 | |
| NH₄NO3 | 400 | 400 | 1650 | |
| KH2PO4 | 170 | 408 | 170 | |
| Ca(NO3)₂·4H2O | 471.26 | - | - | |
| K₂SO₄ | 990 | - | - | |
| KI | - | - | 0.83 | |
| KNO₃ | - | 202 | 1900 | |
| NaH₂PO₄·H₂O | - | - | - | |
| (NH₄)2·SO4 | - | 132 | - | |
| 미량원소 | MnSO₄·H₂O | 22.3 | 16.9 | 16.9 |
| ZnSO₄·7H₂O | 8.6 | 8.6 | 8.6 | |
| CuSO₄·5H₂O | 0.25 | 0.025 | 0.025 | |
| H₃BO₃ | 6.2 | 6.2 | 6.2 | |
| NaFeEDTA | 36.7 | 56 | 42.11 | |
| Na₂MoO₄·2H₂O | 0.25 | 0.25 | 0.25 | |
| CoCl₂·6H₂O | - | 0.025 | 0.025 | |
| 비타민 및 아미노산 | 글리신 | 2.0 | - | 2.0 |
| 미오-이노시톨 | 100 | 100 | 100 | |
| 니코틴산 | 0.5 | - | 0.5 | |
| 피리독신·HCl | 0.5 | - | 0.5 | |
| 티아민·HCl | 1.0 | 0.4 | 0.1 | |
| 탄소원 | 수크로스 | 15 | 15 | 15 |
| 한천 | 6.0 | 6.0 | 6.0 | |
| PH | 6.0 | 6.0 | 6.0 | |
<실시예 2> 꼬리진달래의 액아가 존재하는 신초를 이용한 초대배양을 통한 신초유도
본 발명자는 꼬리진달래의 액아(Axiliary bud, 당년에 잎으로 분화하는 곁눈)가 존재하는 신초를 채취하여 멸균 후 사용하였다. 멸균은 1차 증류수에서 8분씩 초음파세척기에서 3회 세척 후 70% 에탄올로 8분간 멸균하였다. 멸균된 신초를 클린벤치 안에서 2% 차아염소산나트륨(sodium hypochlorite, NaCIO) 용액에 Tween 20을 2∼3방울 첨가하여 30분간 추가 멸균 후 멸균수로 5회 수세한 뒤 생장조절제가 첨가되지 않은 WPM배지, ER배지 또는 MS배지에 처리구 당 신초를 10개씩 2회 반복하여 치상 후 12,000lux의 광에서 16L 8D, 24±1℃의 조건으로 배양하여 8주 후 관찰하였고, 처리구에 따른 신초의 발생률, 생육상황(신초 길이 및 신초 수)을 조사하였다.
생장조절제를 첨가하지 않은 WPM배지, ER배지 또는 MS배지에 꼬리진달래의 액아가 존재하는 신초를 채취하여 10개씩 2회 반복으로 치상하여 8주 후 신초 발생률을 조사한 결과는 다음과 같았다(표 2, 도 1, 도 2 및 도 3). 치상 8주 후 모든 기본배지에서 신초가 발생하였으며, WPM배지에서는 45%, ER배지에서는 65%, MS배지에서는 45%의 신초 발생률을 보였다(표 2 및 도 1). 치상 8주 후 조사한 결과 발생한 신초의 생육상황에 있어서 WPM배지는 신초 길이 5.61±2.46mm, 신초 수 1.00±0.00개를 보였고 ER배지에서는 신초 길이 5.93±3.69mm, 신초 수 1.08±0.27개로 나타났고 MS배지에서는 신초 길이 13.15±6.73mm, 신초 수 1.33±0.47개를 보였다(표 1 및 도 2). 초대배양 4 주 후 WPM배지(A), ER배지(B), MS배지(C)에서의 꼬리진달래의 생육한 신초의 모습을 확인할 수 있으며(도 3), 상기한 바와 같이 초대배양 8주 후의 생육상황을 확인한 결과, 꼬리진달래의 신초유도에는 신초 길이가 길고 신초 수가 가장 많은 것으로 나타난 MS배지를 사용하는 것이 적합한 것으로 나타났다.
| 배 지 | 치 상 | 신초 발생 수 (개) |
신초 발생률 (%) |
신초 길이 (mm) |
신초 수 (개) |
| WPM | 20 | 9 | 45% | 5.61±2.46 | 1.00±0.00 |
| ER | 20 | 13 | 65% | 5.93±3.69 | 1.08±0.27 |
| MS | 20 | 9 | 45% | 13.15±6.73 | 1.33±0.47 |
<실시예 3> 꼬리진달래 신초의 다경유도
실시예 2의 초대배양에 의해 유도된 꼬리진달래의 신초에서 다경(multiple shoot) 유도를 위해 WPM배지, ER배지 또는 MS배지에 사이토키닌 계통의 생장조절제인 제아틴[6-(4-히드록시-3-메틸-2-부테닐아미노)퓨린], 2ip(N6-(2-이소펜테닐)아데닌), BAP(N6-벤질아데닌)를 각각 농도별(4, 8, 12 mg/L)로 첨가한 처리구에 신초를 10개씩 2반복으로 치상 후 12,000lux의 광에서 16L 8D, 24±1℃의 조건으로 배양하여 8주간 관찰하였고, 처리구에 따른 신초의 발생률, 생육상황(신초 길이 및 신초 수)을 조사하였다(표 3, 표 4, 표 5, 도 4, 도 5, 도 6, 도 7, 도 8, 도 9, 도 10, 도 11 및 도 12).
꼬리진달래 신초를 배지에 치상한 후 8주 생장 조사를 한 결과, MS 배지에 제아틴 4.0mg/L를 첨가한 배지에서 신초 발생률 100%, 신초 길이 9.72±3.92mm, 신초 수 4.90±1.61개로 가장 좋은 결과를 보였다(표 5, 도 6, 도 9 및 도 12). 다음으로 양호한 결과를 보인 처리구는 WPM배지에 제아틴 4.0mg/L를 첨가한 처리구가 신초 발생률 80%, 신초 길이 7.84±3.38mm, 신초 수 3.56±1.73개를 보였고, WPM배지에 제아틴 8.0mg/L를 첨가한 처리구는 신초 발생률 80%, 신초 길이 5.67±2.29mm, 신초 수 3.50±1.80개의 결과를 나타냈다(표 3, 도 4, 도 7 및 도 10). 또한, ER 배지에 제아틴 8.0mg/L를 첨가한 처리구는 신초 발생률 85%, 신초 길이 8.81±2.60mm, 신초 수 2.65±1.57개로 양호한 생육 상황을 나타내었다(표 4, 도 5, 도 8 및 도 11). 그에 비해 WPM배지, ER배지 또는 MS배지에 BAP를 첨가한 처리구는 신초 발생률이 10 내지 40%이고, 신초수가 1.00±0.00개 내지 1.50±0.71개로 매우 저조한 결과를 나타내었다.
| 생장조절제 | 치 상 | 신초발생 수 (개) |
신초 발생률 (%) |
신초길이 (mm) |
신초 수 (개) |
| Zeatin(4.0mg/L) | 20 | 16 | 80 | 7.84±3.38 | 3.56±1.73 |
| Zeatin(8.0mg/L) | 20 | 16 | 80 | 5.67±2.29 | 3.50±1.80 |
| Zeatin(12.0mg/L) | 20 | 15 | 75 | 7.07±2.66 | 2.53±1.50 |
| 2iP(4.0mg/L) | 20 | 9 | 45 | 6.81±1.94 | 1.22±0.42 |
| 2iP(8.0mg/L) | 20 | 15 | 75 | 3.77±1.07 | 1.20±0.40 |
| 2iP(12.0mg/L) | 20 | 15 | 75 | 4.23±1.50 | 1.40±0.61 |
| BAP(4.0mg/L) | 20 | 4 | 20 | 6.03±1.75 | 1.00±0.00 |
| BAP(8.0mg/L) | 20 | 5 | 25 | 4.41±1.42 | 1.00±0.00 |
| BAP(12.0mg/L) | 20 | 6 | 30 | 2.63±0.95 | 1.33±0.75 |
| 생장조절제 | 치 상 | 신초발생 수 (개) |
신초 발생률 (%) |
신초길이 (mm) |
신초 수 (개) |
| Zeatin(4.0mg/L) | 20 | 17 | 85 | 7.60±2.85 | 1.82±0.92 |
| Zeatin(8.0mg/L) | 20 | 17 | 85 | 8.81±2.60 | 2.65±1.57 |
| Zeatin(12.0mg/L) | 20 | 16 | 80 | 8.63±2.77 | 2.06±0.90 |
| 2iP(4.0mg/L) | 20 | 4 | 20 | 8.43±2.82 | 1.25±0.43 |
| 2iP(8.0mg/L) | 20 | 13 | 65 | 6.55±2.32 | 1.85±1.03 |
| 2iP(12.0mg/L) | 20 | 16 | 80 | 5.24±1.71 | 1.31±0.46 |
| BAP(4.0mg/L) | 20 | 8 | 40 | 5.03±1.44 | 1.50±0.71 |
| BAP(8.0mg/L) | 20 | 2 | 10 | 3.77±1.32 | 1.00±0.00 |
| BAP(12.0mg/L) | 20 | 5 | 25 | 5.21±1.28 | 1.20±0.40 |
| 생장조절제 | 치 상 | 신초발생 수 (개) |
신초 발생률 (%) |
신초길이 (mm) |
신초 수 (개) |
| Zeatin(4.0mg/L) | 20 | 20 | 100 | 9.72±3.92 | 4.90±1.61 |
| Zeatin(8.0mg/L) | 20 | 17 | 85 | 9.60±3.74 | 1.88±1.08 |
| Zeatin(12.0mg/L) | 20 | 16 | 80 | 6.30±3.04 | 2.13±1.22 |
| 2iP(4.0mg/L) | 20 | 17 | 85 | 5.09±1.59 | 1.41±0.60 |
| 2iP(8.0mg/L) | 20 | 17 | 85 | 4.94±2.04 | 2.06±1.00 |
| 2iP(12.0mg/L) | 20 | 8 | 40 | 3.92±1.41 | 1.13±0.33 |
| BAP(4.0mg/L) | 20 | 4 | 20 | 5.13±0.99 | 1.25±0.43 |
| BAP(8.0mg/L) | 20 | 5 | 25 | 6.44±3.85 | 1.00±0.00 |
| BAP(12.0mg/L) | 20 | 3 | 15 | 9.30±1.67 | 1.00±0.00 |
이에, 본 발명에서 꼬리진달래의 다경유도 시 가장 적합한 조건은 MS배지에 제아틴 4.0mg/L 첨가하였을 경우였으며, WPM배지에 제아틴 4.0mg/L 첨가한 처리구, WPM배지에 제아틴 8.0mg/L를 첨가한 처리구 및 ER배지에 제아틴 8.0mg/L를 첨가한 처리구도 다경유도 시 양호한 생육 결과를 나타나 꼬리진달래의 다경유도 시 효과적인 배지임을 확인하였다.
<실시예 4> 꼬리진달래 다경 기부의 발근유도
실시예 2의 다경유도 배양 시 유도된 꼬리진달래에서 다경 기부를 잘라 발근유도를 위해 대조구로는 생장조절제를 첨가하지 않은 ½WPM 배지와 ½ER 배지, ½MS배지를 기본배지를 사용하였다(표 6).
각 배지에 첨가한 생장조절제로는 옥신 계통의 IBA(4-(3-인돌일)부티르산), IAA(3-인돌 아세트산), NAA(1-나프틸 아세트산)를 농도별(1.0, 2.0, 3.0mg/L)로 첨가하여 배지를 조성한 후 시험관에 10개씩 2회 반복하여 치상하고 4,500lux의 광과 16L 8D, 24±1℃의 조건으로 배양하였다. 이후 8주간 관찰하여 처리구에 따른 발근율과 생육상황(뿌리길이, 뿌리 수)을 조사하였다(표 7, 표 8, 표 9, 도 16, 도 17, 도 18, 도 19, 도 20, 도 21, 도 22, 도 23 및 도 24).
꼬리진달래 신초의 기본배지 않은 ½WPM 배지와 ½ER 배지, ½MS배지의 발근 유도 결과, ½ER 배지에서 발근 발생률 30%, 발근 길이 26.99±14.60 mm, 발근 수 1.33±0.75 개로 가장 좋은 결과를 나타내었고, ½WPM 배지와 ½MS배지는 각각 발근 길이 20.88±17.26 mm, 23.86±0.00 mm이고, 발근 수 2.00±0.00 개, 1.00±0.00 개로 나타났고, 발근 발생률은 5%로 동일하여 저조한 결과를 나타내었다(표 6, 도 13, 도 14 및 도 15).
| 배 지 | 치 상 | 발근 발생 수 (개) |
발생율 (%) |
발근 길이 (mm) |
발근 수 (개) |
| ½WPM | 20 | 1 | 5% | 20.88±17.26 | 2.00±0.00 |
| ½ER | 20 | 6 | 30% | 26.99±14.60 | 1.33±0.75 |
| ½MS | 20 | 1 | 5% | 23.85±0.00 | 1.00±0.00 |
치상 8주 후 조사한 결과 가장 좋은 뿌리 발생 상황을 보인 처리구는 ½ER배지에 IBA 1.0mg/L를 첨가한 처리구에서 발근율 80%, 뿌리 수 3.44±1.80개, 뿌리 길이 12.28±5.65mm로 가장 우수한 뿌리 발생 결과를 보였으며(표 8, 도 17, 도 20 및 도 23). 그 다음으로는 ½WPM배지에 IAA 2.0mg/L를 첨가한 처리구에서 발근율 70%, 뿌리 수 3.07±1.44개, 뿌리 길이 20.63±9.47mm로 우수한 결과를 보였다(표 7, 도 16, 도 19 및 도 22). 기본배지에 생장조절제를 첨가한 처리구 중 가장 저조한 결과를 보인 처리구는 ½MS배지에 IAA 1.0mg/L 또는 2.0mg/L를 첨가한 두 처리구로 발근율 0%로 조사되었다(표 9, 도 18, 도 21 및 도 24).
| 생장조절제 | 치 상 | 뿌리 발생 수 (개) |
발근율 (%) |
뿌리 길이 (mm) |
뿌리 수 (개) |
| IBA(1.0mg/L) | 20 | 6 | 30 | 14.88±7.28 | 1.83±1.21 |
| IBA(2.0mg/L) | 20 | 7 | 35 | 15.15±5.81 | 1.43±0.73 |
| IBA(3.0mg/L) | 20 | 12 | 60 | 12.80±7.02 | 3.00±2.31 |
| IAA(1.0mg/L) | 20 | 6 | 30 | 24.41±10.59 | 2.33±0.75 |
| IAA(2.0mg/L) | 20 | 14 | 70 | 20.63±9.47 | 3.07±1.44 |
| IAA(3.0mg/L) | 20 | 9 | 45 | 16.33±6.62 | 3.33±1.15 |
| NAA(1.0mg/L) | 20 | 6 | 30 | 8.95±2.72 | 2.50±1.50 |
| NAA(2.0mg/L) | 20 | 7 | 35 | 9.06±3.08 | 3.57±2.13 |
| NAA(3.0mg/L) | 20 | 10 | 50 | 7.13±3.00 | 4.40±1.62 |
| 생장조절제 | 치 상 | 뿌리 발생 수 (개) |
발근율 (%) |
뿌리 길이 (mm) |
뿌리 수 (개) |
| IBA(1.0mg/L) | 20 | 16 | 80 | 12.28±5.65 | 3.44±1.80 |
| IBA(2.0mg/L) | 20 | 4 | 20 | 11.66±4.77 | 1.50±0.87 |
| IBA(3.0mg/L) | 20 | 3 | 15 | 9.88±4.94 | 3.00±1.63 |
| IAA(1.0mg/L) | 20 | 7 | 35 | 19.32±11.03 | 1.86±0.83 |
| IAA(2.0mg/L) | 20 | 8 | 40 | 21.49±9.33 | 2.25±1.56 |
| IAA(3.0mg/L) | 20 | 6 | 30 | 12.43±6.56 | 2.50±1.26 |
| NAA(1.0mg/L) | 20 | 5 | 25 | 9.07±2.10 | 3.80±2.64 |
| NAA(2.0mg/L) | 20 | 8 | 40 | 4.61±1.19 | 3.38±1.93 |
| NAA(3.0mg/L) | 20 | 7 | 35 | 4.85±1.80 | 3.57±1.76 |
| 생장조절제 | 치 상 | 뿌리발생 수 (개) |
발근율 (%) |
뿌리길이 (mm) |
뿌리 수 (개) |
| IBA(1.0mg/L) | 20 | 1 | 5 | 7.40±0.48 | 2.00±0.00 |
| IBA(2.0mg/L) | 20 | 5 | 25 | 17.23±6.50 | 1.00±0.00 |
| IBA(3.0mg/L) | 20 | 6 | 30 | 11.16±5.39 | 2.33±1.25 |
| IAA(1.0mg/L) | 20 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| IAA(2.0mg/L) | 20 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| IAA(3.0mg/L) | 20 | 1 | 5 | 5.58±0.00 | 1.00±0.00 |
| NAA(1.0mg/L) | 20 | 5 | 25 | 5.67±1.56 | 1.80±0.75 |
| NAA(2.0mg/L) | 20 | 3 | 15 | 5.97±0.66 | 1.33±0.47 |
| NAA(3.0mg/L) | 20 | 4 | 20 | 3.47±0.73 | 1.50±0.50 |
이에, 본 발명에서 꼬리진달래의 발근유도 시 가장 적합한 조건은 ½ER배지에 IBA 1.0mg/L를 첨가한 처리구인 것을 확인하였다. 또한, ½ER배지에 IBA 1.0mg/L를 첨가한 처리구도 발근 유도시 효과적인 배지임을 확인하였다.
<실시예 5> 꼬리진달래 식물체의 기외순화
조직배양을 통해 발근 유도까지 이루어진 꼬리진달래를 대상으로 토양 이식 전에 외부 환경에 적응하고 포지 이식을 위한 적절한 토양조건을 구명하기 위하여 기내에서 줄기와 뿌리가 재생된 식물체를 기내에서 줄기와 뿌리가 재생된 식물체를 대상으로 순화 실험을 실시하였다. 토양의 종류에 따른 토양 이식의 적절한 조건을 알아보기 위하여 순화용 박스(66.5cm × 33cm × 19.5cm)에 각각 유비상토 100%, 유비상토:마사토(5:5), 유비상토:피트모스(5:5) , 유비상토:펄라이트(5:5), 유비상토: 적옥토(5:5), 유비상토:녹소토(5:5), 블루베리용 상토(피트모스:코코피트: 펄라이트(6:2.5:1.5)를 각각 채워 넣어 식재한 뒤 인공 광조건의 배양대에 거치하였다. 순화용 박스에 식재된 식물체는 4,500lux의 광과 16L 8D, 24±1℃의 조건으로 순화하였다. 순화용 박스 윗면에 5mm의 투명 아크릴 판을 덮어 습도를 유지하였고 매일 아크릴판을 열어주면서 공기를 통하게 하고 토양이 마르지 않게 스프레이로 관수하며 관리하였다. 순화시험 4주 후 생존율과 생육상황(신초 길이, 뿌리길이)을 조사하였다(표 10, 도 25, 도 26 및 도 27).
순화처리 4주 후 가장 우수한 결과를 보인 처리구는 블루베리용 상토(피트모스:코코피트: 펄라이트(6:2.5:1.5)) 처리구로 생존율 100%, 신초길이 41.21mm, 뿌리길이 55.06mm로 모든 처리구 중 가장 결과가 우수하였다(표 10, 도 25, 도 26 및 도 27). 또한, 유비상토 100%, 유비상토:마사토(5:5), 유비상토:피트모스(5:5) , 유비상토:펄라이트(5:5), 유비상토:녹소토(5:5)는 신초길이가 44.15 내지 51.21mm로서 블루베리용 상토보다 더 길었고, 뿌리길이는 28.23 내지 38.78mm로서 블루베리용 상토보다는 더 짧은 결과를 나타냈지만, 생존율 100%인 것으로 나타나 순화에 양호한 토양으로 조사되었다(표 10, 도 25, 도 26 및 도 27). 본 발명의 배양 방법에 따라 기내에서 발근된 꼬리진달래 식물체를 각 토양 조건에서 4주 동안 순화한 후 순화묘의 모습을 확인하였다(도 28).
| 조사항목 | 처 리 구 | |||||||
| 유비상토 (100%) |
유비상토: 마사토 (5:5) |
유비상토: 피트모스 (5:5) |
유비상토: 펄라이트 (5:5) |
유비상토: 적옥토 (5:5) |
유비상토: 녹소토 (5:5) |
블루베리용 상토 (100%) | ||
| 생존율(%) | 100.0 | 100.0 | 100.0 | 100.0 | 88.24 | 100.0 | 100.0 | |
| 뿌리 길이 (mm) |
평균 | 28.23 | 38.78 | 37.26 | 34.85 | 37.55 | 33.10 | 55.06 |
| 편차 | 12.42 | 15.02 | 15.78 | 14.36 | 14.02 | 11.70 | 10.08 | |
| 최소 | 9.50 | 11.40 | 9.91 | 8.99 | 9.73 | 16.91 | 37.15 | |
| 최대 | 54.15 | 59.74 | 68.98 | 73.63 | 65.35 | 62.51 | 70.45 | |
| 신초 길이 (mm) |
평균 | 44.15 | 46.12 | 51.21 | 44.71 | 51.35 | 44.28 | 41.21 |
| 편차 | 10.55 | 15.09 | 10.05 | 12.07 | 12.04 | 12.35 | 9.50 | |
| 최소 | 25.40 | 20.52 | 36.29 | 18.86 | 28.72 | 20.91 | 28.48 | |
| 최대 | 70.73 | 76.76 | 75.50 | 73.96 | 67.61 | 68.77 | 59.15 | |
꼬리진달래 식물체의 순화 4주 후 블루베리용 상토 처리구의 신초 길이는 유비상토:적옥토(5:5) 처리구의 신초 길이 51.35mm에 비해 작았지만, 뿌리 길이가 유비상토:적옥토(5:5) 처리구보다 17.5mm 더 긴 55.06mm로 지하부 생장이 우수하고 뿌리의 풍성함에서 제일 우수한 결과를 보여 주어, 블루베리용 상토가 꼬리진달래의 순화에 가장 적합한 토양으로 조사되었다.
Claims (12)
1) 꼬리진달래(Rhododendron micranthum)의 액아(Axillary bud)가 존재하는 신초를 채취하고, 채취한 신초를 MS배지에 초대배양하여 신초를 유도하는 단계;
2) 상기 생육된 신초를 제아틴을 첨가한 MS배지, 또는 제아틴을 첨가한 WPM배지에 치상하여 다경(multiple shoot)을 유도하는 단계;
3) 상기 다경 유도된 꼬리진달래의 다경 기부를 IBA를 첨가한 ½ER배지, 또는 IAA를 첨가한 ½WPM배지에 치상하여 발근 유도하는 단계; 및
4) 상기 발근 유도된 꼬리진달래 식물체를 토양에 식재하여 기외순화하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는, 꼬리진달래 대량증식 배양 방법.
2) 상기 생육된 신초를 제아틴을 첨가한 MS배지, 또는 제아틴을 첨가한 WPM배지에 치상하여 다경(multiple shoot)을 유도하는 단계;
3) 상기 다경 유도된 꼬리진달래의 다경 기부를 IBA를 첨가한 ½ER배지, 또는 IAA를 첨가한 ½WPM배지에 치상하여 발근 유도하는 단계; 및
4) 상기 발근 유도된 꼬리진달래 식물체를 토양에 식재하여 기외순화하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는, 꼬리진달래 대량증식 배양 방법.
삭제
제 1항에 있어서, 상기 단계 2)의 제아틴은 3.0 내지 9.0mg/L로 단용 첨가하는 것을 특징으로 하는, 꼬리진달래 대량증식 배양 방법.
삭제
제 1항에 있어서, 상기 단계 3)의 IBA는 0.09 내지 1.50mg/L로 단용 첨가하고, IAA는 1.5 내지 2.5mg/L로 단용 첨가하는 것을 특징으로 하는, 꼬리진달래 대량증식 배양 방법.
삭제
제 1항에 있어서, 상기 단계 4)의 토양은 유비상토, 마사토, 피트모스, 펄라이트, 적옥토, 녹소토, 코코피트를 단용처리 또는 혼용처리한 것을 특징으로 하는, 꼬리진달래 대량증식 배양 방법.
제 7항에 있어서, 상기 토양은 유비상토 100%, 유비상토:마사토(5:5), 유비상토:피트모스(5:5) , 유비상토:펄라이트(5:5), 유비상토: 적옥토(5:5), 유비상토:녹소토(5:5), 블루베리용 상토(피트모스:코코피트:펄라이트(6:2.5:1.5))인 것을 특징으로 하는, 꼬리진달래 대량증식 배양 방법.
제 8항에 있어서, 상기 토양은 유비상토 100%, 유비상토:마사토(5:5), 유비상토:피트모스(5:5), 유비상토:펄라이트(5:5), 유비상토:녹소토(5:5), 블루베리용 상토(피트모스:코코피트:펄라이트(6:2.5:1.5))인 것을 특징으로 하는, 꼬리진달래 대량증식 배양 방법.
제 8항에 있어서,
상기 토양은 블루베리용 상토(피트모스:코코피트:펄라이트(6:2.5:1.5))인 것을 특징으로 하는, 꼬리진달래 대량증식 배양 방법.
상기 토양은 블루베리용 상토(피트모스:코코피트:펄라이트(6:2.5:1.5))인 것을 특징으로 하는, 꼬리진달래 대량증식 배양 방법.
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