CN114934054B - 菜心乳胶蛋白基因BraMLP1在抗霜霉病中的应用 - Google Patents
菜心乳胶蛋白基因BraMLP1在抗霜霉病中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了菜心乳胶蛋白基因BraMLP1在抗霜霉病中的应用，所述菜心BraMLP1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明首次发现了菜心乳胶蛋白基因BraMLP1可以调控菜心抗霜霉病抗性。而且本发明中还提供了可用于调节菜心抗霜霉病抗性的产品，其能够通过上调菜心中BraMLP1基因的表达从而达到提高菜心抗霜霉病抗性的作用，从而可以将其用于预防菜心霜霉病、培育抗菜心霜霉病转基因植物等相关方面，具有极高的实用价值。
Description
技术领域
本发明属于植物分子生物学与植物遗传工程领域，具体涉及菜心乳胶蛋白基因BraMLP1在抗霜霉病中的应用。
背景技术
菜心霜霉病是由寄生霜霉菌(hyaloperonospora brassucae)所引发的菜心专性寄生性病害，在菜心苗期、成株期、开花期至结荚期均可发生，主要危害菜心叶片、种荚、花梗、茎顶等。发病一般由菜心的下部叶片开始，初呈水渍状褪绿病斑，逐渐扩大，受叶脉限制呈现黄褐色多角形斑。天气潮湿时病斑背面产生疏密不等的白色霉状物，严重时病斑融合成片。发病后期病斑破裂，病叶干枯变为暗褐色。当菜心采种株的茎顶及花梗染病时，多呈肥肿畸形，俗称“龙头拐”，种荚染病后会出现不同程度的变形。菜心霜霉病在20-24℃和高湿条件(如华南地区的冬季)下易发，降雨量比温度对病害的发展影响更为重要。生长发育较差、种植密度大或已感染其他病毒病的植株更易发生霜霉病，且往往发病更为严重。
因此，开发或培育抗病菜心品种是控制菜心霜霉病最经济、环保、有效的途径之一，而挖掘抗霜霉病基因(或蛋白)则是抗病育种的基础。
发明内容
本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出菜心乳胶蛋白基因BraMLP1在抗霜霉病中的应用，发明人发现菜心乳胶蛋白基因BraMLP1对菜心抗霜霉病具有重要作用，可用于预防菜心霜霉病、制备抗菜心霜霉病的产品、培育抗菜心霜霉病转基因植物，具有广泛的应用前景。
本发明的第一个方面，提供调控菜心BraMLP1基因表达的产品在调控作物抗菜心霜霉病中的应用，所述菜心BraMLP1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
发明人首次发现了一种菜心乳胶蛋白基因BraMLP1，并通过试验验证该基因对菜心霜霉病具有抗性调节作用，其在抗霜霉病菜心材料(R128)中受霜霉病菌诱导的表达量显著高于感霜霉病菜心材料(S002)受霜霉病菌诱导的表达量，且在过量表达BraMLP1基因的菜心叶片上接种菜心霜霉病菌，叶片感染面积比对照显著减小，而在沉默表达BraMLP1基因的菜心叶片上接种菜心霜霉病菌，叶片感染面积比对照显著增大。从而说明菜心乳胶蛋白基因BraMLP1对菜心抗霜霉病具有重要作用。
根据本发明的第一个方面，在本发明的一些实施方式中，所述产品具有下述(1)～(5)中至少一项所述的功能；
(1)上调菜心BraMLP1基因表达；
(2)下调或阻断菜心BraMLP1基因表达；
(3)促进菜心BraMLP1蛋白的分泌；
(4)抑制菜心BraMLP1蛋白的分泌；
(5)靶向结合菜心BraMLP1蛋白受体或靶向结合菜心BraMLP1蛋白。
在本发明的一些实施方式中，所述菜心BraMLP1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。
根据本发明的第一个方面，在本发明的一些实施方式中，所述产品包括下述(1)～(6)中任意一项：
(1)含有SEQ ID NO：1所示核酸分子的表达盒；
(2)含有SEQ ID NO：1所示核酸分子的微生物或细胞；
(3)含有(1)中所述表达盒的微生物或细胞；
(4)含有SEQ ID NO：4所示核酸分子的表达盒；
(5)含有SEQ ID NO：4所示核酸分子的微生物或细胞；
(6)含有(4)中所述表达盒的微生物或细胞。
在本发明的一些实施方式中，所述作物为菜心。
发明人发现，上述BraMLP1基因能够正调控叶菜霜霉病的抗性，尤其是对于菜心而言，经试验验证发现其在过量表达BraMLP1基因的菜心叶片上接种菜心霜霉病菌，叶片感染面积比对照显著减小，而在沉默表达BraMLP1基因的菜心叶片上接种菜心霜霉病菌，叶片感染面积比对照显著增大。而且菜心中的寄生霜霉菌具有极强的专化性，不会发生跨种属传播的情况，因此，通过上述产品能够大大的提高菜心在抗霜霉病中的抗病力。
本发明的第二个方面，提供一种试剂，所述试剂中包括下述(1)～(3)中任意一项：
(1)含有SEQ ID NO：1所示核酸分子的表达盒；
(2)含有SEQ ID NO：1所示核酸分子的微生物或细胞；
(3)含有(1)中所述表达盒的微生物或细胞。
根据本发明的第二个方面，在本发明的一些实施方式中，所述试剂用于提高菜心的菜心霜霉病抗性。
发明人发现，通过构建过表达质粒上调菜心中的BraMLP1基因表达量，能够显著增强菜心的霜霉病抗性。
本发明的第三个方面，提供一种培育抗菜心霜霉病作物的方法，包括如下步骤：上调菜心中BraMLP1基因的表达。
根据本发明的第三个方面，在本发明的一些实施方式中，所述BraMLP1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：1所示。
在本发明的一些实施方式中，所述BraMLP1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
在本发明的一些实施方式中，所述作物为菜心。
在本发明的一些优选实施方式中，所述方法具体为：
(1)构建BraMLP1基因过表达载体；
(2)将BraMLP1基因过表达载体转化农杆菌，筛选阳性克隆，感染作物，即得。
在本发明的一些优选实施方式中，步骤(1)中具体的构建方法为：将BraMLP1基因构建到pGWB5质粒中，具体插入位置为35S启动子后的attR1和attR2之间(具体为通过基因重组交换替代了pGWB5质粒中的ccdB基因)，从而得到了BraMLP1基因过表达载体。
本发明的有益效果是：
1.本发明首次发现了菜心乳胶蛋白基因BraMLP1在调控菜心抗霜霉病抗性中的应用，从而可以将其用于预防菜心霜霉病、制备抗菜心霜霉病的产品、培育抗菜心霜霉病转基因植物，具有广泛的应用前景。
2.本发明提供了可用于调节菜心抗霜霉病抗性的产品，其能够通过上调菜心中BraMLP1基因的表达从而达到提高菜心抗霜霉病抗性的作用，从而可以将其用于预防菜心霜霉病、培育抗菜心霜霉病转基因植物等相关方面，具有极高的实用价值。
附图说明
图1是BraMLP1基因在菜心抗病材料R128和感病材料S002中转录表达分析图。
图2是pGWB5质粒图谱。
图3是pK7GWIW质粒图谱。
图4是BraMLP1基因瞬时过量表达和空白对照(CK)的菜心叶片中BraMLP1基因的表达情况。
图5是BraMLP1基因沉默和空白对照(CK)的菜心叶片中BraMLP1基因的表达情况。
图6是过量表达菜心乳胶蛋白基因BraMLP1的菜心叶片与空白对照(CK)叶片的抗性鉴定分析。
图7是沉默菜心乳胶蛋白基因BraMLP1的菜心叶片与空白对照(CK)叶片的抗性鉴定分析。
具体实施方式
为了使本发明的发明目的、技术方案及其技术效果更加清晰，以下结合具体实施方式，对本发明进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的具体实施方式仅仅是为了解释本发明，并非为了限定本发明。
所使用的实验材料和试剂，若无特别说明，均为常规可从商业途径所获得的耗材和试剂。
下述实施例中，所用的菜心材料均由广东省农业科学院蔬菜研究所农业新技术研究室提供。其中，所用的菜心霜霉病菌来自广州白云区钟落潭实验地菜心霜霉病病株，且经鉴定确认无误。
BraMLP1基因在抗、感菜心材料中转录表达测试
菜心BraMLP1基因是一种乳胶蛋白基因，发明人是通过对菜心抗、感材料的转录组分析中发现的。为了确定该基因在不同品种菜心中均可稳定表达，发明人在霜霉病菌接种前后，对菜心BraMLP1基因在菜心抗病材料R128(于2018年在广州柯木塱种业博览会上收集，现保存于广东省农业科学院设施农业研究所)和感病材料S002(于2018年在广州柯木塱种业博览会上收集，现保存于广东省农业科学院设施农业研究所)中的转录表达水平进行检测(数据来自转录组测序，由广州基迪奥生物科技有限公司负责测序)。
结果如图1所示。
可以发现，在霜霉病菌接种前，菜心BraMLP1基因在菜心抗病材料R128和感病材料S002中的转录表达水平均较低。而在接种霜霉病菌24小时后，BraMLP1基因在R128中的转录表达水平迅速上升，达到接种前的64.6倍，而S002中的表达量仅提高至接种前的3.86倍；接种24h后，BraMLP1基因在R128中的表达量是其在S002接种后的表达量的6.8倍。说明菜心BraMLP1基因是潜在的抗霜霉病基因。
BraMLP1基因过表达载体和基因沉默载体的构建
基于上述发现，发明人进一步构建BraMLP1基因过表达载体和基因沉默载体以用于进一步验证BraMLP1基因与菜心霜霉病抗性之间的关系。
(1)BraMLP1基因过表达载体的构建：
采用本领域中基因重组常规方法，将BraMLP1基因CDS全长序列构建到pGWB5质粒(来自中科院遗传与发育生物学研究所唐定中课题组，pGWB5质粒图谱如图2所示)中，具体插入位置为35S启动子后的attR1和attR2之间(具体为通过基因重组交换替代了pGWB5质粒中的ccdB基因)，从而得到了BraMLP1基因过表达载体pGWB5-BraMLP1。
其中，本实施例中所用的BraMLP1基因CDS全长序列长度为456bp，具体核苷酸序列为：
5’-ATGGCGACGTCGGGAACATACGTGACGGAGGTTCCATTGAAAGGGACGATGGAGAAACACTACAAGAGGTGGAGGAGCGAGAACCATGCCATCCCGGAAGCCATTGGTCACCACATCCAAAATGTCACCATTCACGAAGGCGAATGGGACTCTCACGGGGCCATCAAGACTTGGGACTACACATGCGATGGGAAGCCGGAGGTGCTCAAGGAAAGGACAGAGATAGACGATGAGAAGAAAACGGTAACGTTTAGAGGACTTGAAGGTCACTTCATGGAACAACTCAAGGTGTATGACGTCATCTTTGAATTTATTCCGAAGTTGGAGGATGGCTGCGTCTGCAAAATCACTATGATATGGGAGAAGCGTAACGATGAGTTCCCCGAGCCAAGCAACTACATGAAAGTCGTCAAGAGCATGGTTGCTGACATGGAAGACCATGTTCTCAAAGCTTAA-3’(SEQ ID NO：1)。
BraMLP1基因的基因组DNA全长序列为：
5’-ATGGCGACGTCGGGAACATACGTGACGGAGGTTCCATTGAAAGGGACGATGGAGAAACACTACAAGAGGTGGAGGAGCGAGAACCATGCCATCCCGGAAGCCATTGGTCACCACATCCAAAATGTCACCATTCACGAAGGCGAATGGGACTCTCACGGGGCCATCAAGACTTGGGACTACACATGCGGTATTACTTATACTTTCTAATTCGCCCTATATATATATTCCAACACTATGTACACACTATTAAGTTAAAACTATAGCCTATTTATGAAAGCAGGGTATTGCTAGTAGTACTACTATATGCTGCCTTATGAATTATGATTATTATCTATGGTTATATATTGAACAAAAAAAAAATCTATGGTTATATAAGAAATATATATATGTGTGTGTAGATCCGATATGTCATAAGTACCTCGAGAATACATATGGATACATCATACATTTACATACGTCTAAATATTTCCAATTCCCTCGGTTTTTGCATTTGTATGTGTTGTTATATGTATGAAGTAACTTAAAAAGAAAACGTCTACAGAATCAAGACATAATATGTGAACTAGCAAATGCAAACACTTTTGCCTCTAGTGTTTCTGTTTACTATTAACAAACAAAAAAATTACTTGCTTATGATGTCATGTTATCAATATAGTAACAATATATTCTTAAGTATTTTAGTTAAGTAACTAAATTGAAAAAAAACAGAAAAGTTGAATAAACCAATAGAATCAAAGCAATTGTTTCAAGAACTTTTCAAAATTTTCATTATATAAGAAACCATTTCAATTTTTCTCTACAGTTTTATTATTTAAACTATTTTATGTTGAGAGACCTACTGAAAAACTTTCACATGACTAGTAGGGTGTGGAAAAAAGAAATATAAATGTGACCGATCAAAAATTAAAAACATATGTGTTCGTGTAAAAAGATGGGAAGCCGGAGGTGCTCAAGGAAAGGACAGAGATAGACGATGAGAAGAAAACGGTAACGTTTAGAGGACTTGAAGGTCACTTCATGGAACAACTCAAGGTGTATGACGTCATCTTTGAATTTATTCCGAAGTTGGAGGATGGCTGCGTCTGCAAAATCACTATGATATGGGAGAAGCGTAACGATGAGTTCCCCGAGCCAAGCAACTACATGAAAGTCGTCAAGAGCATGGTTGCTGACATGGAAGACCATGTTCTCAAAGCTTAA-3’(SEQ ID NO：2)。
其编码的蛋白的氨基酸序列为：
MATSGTYVTEVPLKGTMEKHYKRWRSENHAIPEAIGHHIQNVTIHEGEWDSHGAIKTWDYTCDGKPEVLKERTEIDDEKKTVTFRGLEGHFMEQLKVYDVIFEFIPKLEDGCVCKITMIWEKRNDEFPEPSNYMKVVKSMVADMEDHVLKA(SEQ ID NO：3)。
(2)BraMLP1基因沉默载体的构建：
采用本领域中基因重组常规方法，将BraMLP1基因CDS非保守区段的长度为256bp(CDS 201-456bp)的片段及其互补片段构建到pK7GWIW质粒(购自上海远慕生物科技有限公司，pK7GWIW质粒图谱如图3所示)具体插入位置为35S启动子后的attR1和attR2之间(具体为通过基因重组交换替代了pK7GWIW质粒中的ccdB基因)，从而得到了BraMLP1基因沉默载体pK7GWIW-BraMLP1。
其中，本实施例中所用的BraMLP1基因CDS非保守区段的长度为256bp(CDS 201-456bp)的片段具体核苷酸序列为：
5’-GGTGCTCAAGGAAAGGACAGAGATAGACGATGAGAAGAAAACGGTAACGTTTAGAGGACTTGAAGGTCACTTCATGGAACAACTCAAGGTGTATGACGTCATCTTTGAATTTATTCCGAAGTTGGAGGATGGCTGCGTCTGCAAAATCACTATGATATGGGAGAAGCGTAACGATGAGTTCCCCGAGCCAAGCAACTACATGAAAGTCGTCAAGAGCATGGTTGCTGACATGGAAGACCATGTTCTCAAAGCTTAA-3’(SEQ ID NO：4)。
瞬时过量表达/基因沉默的菜心叶片基因表达模型的构建
具体构建方法为：
(1)取上述实施例中构建得到的BraMLP1基因过表达载体pGWB5-BraMLP1和BraMLP1基因沉默载体pK7GWIW-BraMLP1分别转化农杆菌GV3101，然后在对应抗性的培养基上倒置培养48h。
(2)分别挑取阳性单克隆加入到4mL含有相应抗生素及利福平的LB培养基中，28℃，180rpm摇菌24h。
(3)取菌液，按1:100的体积比加入至新鲜的含有相应抗生素及利福平的LB培养基中，28℃，180rpm摇菌到OD600值约为3.0。
(4)3000rpm离心5min，收集菌体，用悬浮液(含有终浓度为10mM MES缓冲液和10mMMgCl2的混合溶液)重悬菌体，并调整OD600值约为0.4。
(5)加入终浓度为200mM的乙酰丁香酮，室温静置3h。
(6)用注射器针头在试验用菜心幼苗的叶片主叶脉两侧各扎一个针孔。用1mL注射器吸取等量静置过后的菌液，对准菜心叶片背面的针孔注射进菌液(菜心叶片正面用手堵住)。
(7)将注射后的菜心幼苗(两叶一心)黑暗培养12h后22℃光照培养3天。
(8)取104个/mL浓度的霜霉菌孢子溶液，点滴接种于菜心幼苗叶片注射针眼处，按照白天12h(20℃)/夜晚12h(14℃)的条件，培养7天。
(9)收集菜心幼苗叶片，进行基因表达水平检测。
设置空白对照(CK)。
具体检测方法为：
a.将叶片组织在液氮中磨碎，每100mg组织加入1mL TRIzol(InvitrogenTRIzol)，用匀浆仪进行匀浆处理。
b.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
c.每使用1mL TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。2-8℃10000×g离心15分钟。
d.把水相转移到新管中，用异丙醇沉淀水相中的RNA，每使用1mL TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。2-8℃10000×g离心10分钟，保留沉淀，移去上清。
e.用75％乙醇洗涤RNA沉淀，每使用1mL TRIzol加1mL 75％乙醇。2-8℃7000×g离心5分钟，弃上清。
f.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀，大约晾5-10分钟，加入25-200μL无RNase的水，用枪头吸打几次，55-60℃放置10分钟使RNA溶解，-70℃保存。
g.以EF1α基因为内参基因，目的基因表达量与内参基因表达量比值为基因的相对表达量。其中，BraMLP1基因表达扩增引物为F:5’-GGTGCTCAAGGAAAGGACAGAGA-3’(SEQ IDNO：5)，R:5’-CTTCCATGTCAGCAACCATGCTC-3’(SEQ ID NO：6)；EF1α基因表达扩增引物为：F:5’-ACTCCTCCCACATTGCTGTTA-3’(SEQ ID NO：7)，R:5’-CCTCAAGAACTTGGGCTCCTT-3’(SEQ IDNO：8)。
结果如图4和图5所示。
可以发现，BraMLP1基因瞬时过量表达的菜心叶片中BraMLP1基因的表达量在霜霉病菌接种前后均显著高于未处理的对照(CK)(图4)。而BraMLP1基因沉默的菜心叶片中BraMLP1基因的表达量在接种霜霉病24h后，显著小于未处理的对照(CK)(图5)。上述结果说明BraMLP1基因瞬时过量表达和基因沉默的菜心叶片模型均构建成功。
菜心叶片抗病实验
取上述实施例中构建得到的BraMLP1基因瞬时过量表达和基因沉默的菜心叶片模型，按照上述实施例中的方法接种霜霉菌后培养7天，根据培养后的菜心叶片病斑大小来判断目的基因对霜霉病的抗性功能。以未处理的菜心作为空白对照。每个组设置30个样本。
对每个组中的30个叶片病斑面积进行统计，取平均数，并对不同组之间进行显著性分析和比较，检测方法同上述实施例，实验结果如图6和图7所示。
结果发现，在菜心叶片中瞬时过量表达BraMLP1基因(通过pGWB5-BraMLP1)能够使菜心叶片对霜霉病的抗性较对照(CK)明显增强，而在菜心叶片中瞬时沉默BraMLP1基因(pK7GWIW-BraMLP1)则使菜心叶片对霜霉病的抗性较对照(CK)显著减弱。上述结果说明通过调控BraMLP1基因能够实现对于菜心霜霉病抗性的调控。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 广东省农业科学院设施农业研究所
<120> 菜心乳胶蛋白基因BraMLP1在抗霜霉病中的应用
<130>
<160> 8
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 456
<212> DNA
<213> BraMLP1
<400> 1
atggcgacgt cgggaacata cgtgacggag gttccattga aagggacgat ggagaaacac 60
tacaagaggt ggaggagcga gaaccatgcc atcccggaag ccattggtca ccacatccaa 120
aatgtcacca ttcacgaagg cgaatgggac tctcacgggg ccatcaagac ttgggactac 180
acatgcgatg ggaagccgga ggtgctcaag gaaaggacag agatagacga tgagaagaaa 240
acggtaacgt ttagaggact tgaaggtcac ttcatggaac aactcaaggt gtatgacgtc 300
atctttgaat ttattccgaa gttggaggat ggctgcgtct gcaaaatcac tatgatatgg 360
gagaagcgta acgatgagtt ccccgagcca agcaactaca tgaaagtcgt caagagcatg 420
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<211> 1200
<212> DNA
<213> BraMLP1
<400> 2
atggcgacgt cgggaacata cgtgacggag gttccattga aagggacgat ggagaaacac 60
tacaagaggt ggaggagcga gaaccatgcc atcccggaag ccattggtca ccacatccaa 120
aatgtcacca ttcacgaagg cgaatgggac tctcacgggg ccatcaagac ttgggactac 180
acatgcggta ttacttatac tttctaattc gccctatata tatattccaa cactatgtac 240
acactattaa gttaaaacta tagcctattt atgaaagcag ggtattgcta gtagtactac 300
tatatgctgc cttatgaatt atgattatta tctatggtta tatattgaac aaaaaaaaaa 360
tctatggtta tataagaaat atatatatgt gtgtgtagat ccgatatgtc ataagtacct 420
cgagaataca tatggataca tcatacattt acatacgtct aaatatttcc aattccctcg 480
gtttttgcat ttgtatgtgt tgttatatgt atgaagtaac ttaaaaagaa aacgtctaca 540
gaatcaagac ataatatgtg aactagcaaa tgcaaacact tttgcctcta gtgtttctgt 600
ttactattaa caaacaaaaa aattacttgc ttatgatgtc atgttatcaa tatagtaaca 660
atatattctt aagtatttta gttaagtaac taaattgaaa aaaaacagaa aagttgaata 720
aaccaataga atcaaagcaa ttgtttcaag aacttttcaa aattttcatt atataagaaa 780
ccatttcaat ttttctctac agttttatta tttaaactat tttatgttga gagacctact 840
gaaaaacttt cacatgacta gtagggtgtg gaaaaaagaa atataaatgt gaccgatcaa 900
aaattaaaaa catatgtgtt cgtgtaaaaa gatgggaagc cggaggtgct caaggaaagg 960
acagagatag acgatgagaa gaaaacggta acgtttagag gacttgaagg tcacttcatg 1020
gaacaactca aggtgtatga cgtcatcttt gaatttattc cgaagttgga ggatggctgc 1080
gtctgcaaaa tcactatgat atgggagaag cgtaacgatg agttccccga gccaagcaac 1140
tacatgaaag tcgtcaagag catggttgct gacatggaag accatgttct caaagcttaa 1200
<210> 3
<211> 151
<212> PRT
<213> BraMLP1
<400> 3
Met Ala Thr Ser Gly Thr Tyr Val Thr Glu Val Pro Leu Lys Gly Thr
1 5 10 15
Met Glu Lys His Tyr Lys Arg Trp Arg Ser Glu Asn His Ala Ile Pro
20 25 30
Glu Ala Ile Gly His His Ile Gln Asn Val Thr Ile His Glu Gly Glu
35 40 45
Trp Asp Ser His Gly Ala Ile Lys Thr Trp Asp Tyr Thr Cys Asp Gly
50 55 60
Lys Pro Glu Val Leu Lys Glu Arg Thr Glu Ile Asp Asp Glu Lys Lys
65 70 75 80
Thr Val Thr Phe Arg Gly Leu Glu Gly His Phe Met Glu Gln Leu Lys
85 90 95
Val Tyr Asp Val Ile Phe Glu Phe Ile Pro Lys Leu Glu Asp Gly Cys
100 105 110
Val Cys Lys Ile Thr Met Ile Trp Glu Lys Arg Asn Asp Glu Phe Pro
115 120 125
Glu Pro Ser Asn Tyr Met Lys Val Val Lys Ser Met Val Ala Asp Met
130 135 140
Glu Asp His Val Leu Lys Ala
145 150
<210> 4
<211> 256
<212> DNA
<213> BraMLP1
<400> 4
ggtgctcaag gaaaggacag agatagacga tgagaagaaa acggtaacgt ttagaggact 60
tgaaggtcac ttcatggaac aactcaaggt gtatgacgtc atctttgaat ttattccgaa 120
gttggaggat ggctgcgtct gcaaaatcac tatgatatgg gagaagcgta acgatgagtt 180
ccccgagcca agcaactaca tgaaagtcgt caagagcatg gttgctgaca tggaagacca 240
tgttctcaaa gcttaa 256
<210> 5
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
ggtgctcaag gaaaggacag aga 23
<210> 6
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
cttccatgtc agcaaccatg ctc 23
<210> 7
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
actcctccca cattgctgtt a 21
<210> 8
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
cctcaagaac ttgggctcct t 21
Claims (3)
1.过量表达菜心BraMLP1基因的载体在调控菜心抗菜心霜霉病中的应用，所述菜心BraMLP1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：1所示。
2.含有过量表达菜心BraMLP1基因的载体的微生物或细胞在调控菜心抗菜心霜霉病中的应用，所述菜心BraMLP1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：1所示。
3.一种培育抗菜心霜霉病作物的方法，包括如下步骤：通过过量表达菜心BraMLP1基因的载体上调菜心中BraMLP1基因的表达，所述BraMLP1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：1所示。
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| CN202210572764.2A CN114934054B (zh) | 2022-05-25 | 2022-05-25 | 菜心乳胶蛋白基因BraMLP1在抗霜霉病中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210572764.2A CN114934054B (zh) | 2022-05-25 | 2022-05-25 | 菜心乳胶蛋白基因BraMLP1在抗霜霉病中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114934054A CN114934054A (zh) | 2022-08-23 |
| CN114934054B true CN114934054B (zh) | 2023-03-24 |
Family
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Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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Application publication date: 20220823 Assignee: Guangdong Fujing Agricultural Technology Co.,Ltd. Assignor: Institute of facility agriculture, Guangdong Academy of Agricultural Sciences Contract record no.: X2023980047924 Denomination of invention: Application of Brassica oleifera latex protein gene BraMLP1 in resistance to downy mildew Granted publication date: 20230324 License type: Common License Record date: 20231122 |