CN112175987B - 黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1在抗瓜类疫病中的应用 - Google Patents

黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1在抗瓜类疫病中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明首次公开了黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1在抗瓜类疫病中的应用。特别是CsPS1对侵染瓜类的瓜类疫霉(Phytophthora melonis)具有抗病功能。过量表达CsPS1基因能够使黄瓜、南瓜子叶对疫病的抗性较对照明显增强，而在黄瓜子叶中瞬时沉默CsPS1基因则使黄瓜子叶对疫病的抗性较对照明显减弱。CsPS1基因对黄瓜、南瓜等瓜类抗疫病起着非常重要的作用，具有广泛的应用前景。

Description

黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1在抗瓜类疫病中的应用
技术领域
本发明涉及植物分子生物学与植物遗传工程领域，更具体地，涉及黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1在抗瓜类疫病中的应用。
背景技术
瓜类疫病是一种世界性卵菌病害，病原菌为瓜类疫霉(Phytophthora melonis)，引起黄瓜、南瓜、冬瓜、苦瓜等瓜类叶、茎、果变褐致死或死苗。该病在我国种植瓜类地区具有发生，
在北方以夏秋露地栽培及春季保护地瓜类发生较重；南方则以春季及夏秋高温多湿的季节发生较重。瓜类整个生长期及各个部位均可受害，幼苗被害生长点及嫩茎基部呈水渍状缢缩，萎蔫死亡。成株期茎被害，基部和节部呈水渍状、黑褐色病斑，逐渐软化缢缩，叶片下垂、植株萎蔫、死亡；叶片多在近叶缘处出现暗绿色、边缘不清晰的大型病斑；瓜果在受害处呈现水渍状、近圆形的凹陷斑，迅速腐烂，表面长出白色或灰白色稀疏霉层。一旦发病，化学药剂控制效果不理想，造成经济损失。控制该病害的最根本途径是培育抗疫病瓜类新品种，要培育高抗疫病瓜类新品种，就需要挖掘瓜类疫病抗性基因并进行应用。黄瓜CsPS1基因属于捕光叶绿素a/b结合蛋白基因。以往的研究表明，捕光叶绿素a/b结合蛋白在植物发育、植物胁迫特别是非生物胁迫中发挥重要的作用。
发明内容
本发明第一个方面的目的，在于提供黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1在抗瓜类疫病中的应用。
本发明第二个方面的目的，在于提供编码黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的核苷酸序列在抗瓜类疫病中的应用。
本发明第三个方面的目的，在于提供含有编码黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的基因序列的病毒、载体在抗瓜类疫病中的应用。
本发明第四个方面的目的，在于提供含有编码黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的基因序列的重组菌、转基因细胞系在抗瓜类疫病中的应用。
本发明第五个方面的目的，在于提供靶向上调黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的表达量或增强黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1活性的试剂在抗瓜类疫病中的应用。
本发明第六个方面的目的，在于提供一种增强瓜类植物疫病抗性的试剂或组合物。
本发明第七个方面的目的，在于提供一种防治瓜类植物疫霉菌疫病的药物。
本发明所采取的技术方案是：
本发明的第一个方面，提供黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1在抗瓜类疫病中的应用，所述黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明的第二个方面，提供编码黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的核苷酸序列在抗瓜类疫病中的应用，所述黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。
根据本发明第二个方面所述的应用，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
本发明的第三个方面，含有编码黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的基因序列的病毒、载体在抗瓜类疫病中的应用，所述黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明的第四个方面，提供含有编码黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的基因序列的重组菌、转基因细胞系在抗瓜类疫病中的应用，所述黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明的第五个方面，提供靶向上调黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的表达量或增强黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1活性的试剂在抗瓜类疫病中的应用。
根据本发明第一至第六个方面任一项所述的应用，所述抗瓜类疫病为瓜类疫霉菌(Phytophthora melonis)引发的病害。
本发明的第六个方面，提供一种增强瓜类植物疫病抗性的试剂或组合物，、所述试剂或组合物中含有如下Ⅰ～Ⅳ中任一种物质：
Ⅰ.氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的蛋白分子、肽段或其变体；
Ⅱ.含有编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的DNA分子、核苷酸片段或其变体；
Ⅲ.含有编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的核苷酸序列的病毒、载体、重组菌或转基因细胞系；
Ⅳ.黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的表达量或增强黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1活性的试剂或组合物。
具体地，Ⅰ中包括SEQ IDNO.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且能提供瓜类抗疫病的由SEQ ID NO.1衍生的蛋白质。
本发明的第七个方面，提供一种防治瓜类植物疫霉菌疫病的药物，所述药物中含有如下Ⅰ～Ⅳ中任一种物质：
Ⅰ.氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的蛋白分子、肽段或其变体；
Ⅱ.含有编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的DNA分子、核苷酸片段或其变体；
Ⅲ.含有编码SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的核苷酸序列的病毒、载体、重组菌或转基因细胞系；
Ⅳ.黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的表达量或增强黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1活性的试剂或组合物。
具体地，Ⅰ中包括SEQ IDNO.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且能提供瓜类抗疫病的由SEQ ID NO.1衍生的蛋白质。
根据本发明的地七个方面所述的药物，所述药物还包括药学上可接受的载体或辅料。
本发明的有益效果是：
本发明首次发现CsPS1对侵染瓜类的瓜类疫霉(Phytophthora melonis)具有抗病功能。在过量表达CsPS1基因的黄瓜子叶上接种瓜类疫霉菌，病斑面积明显减小，而在沉默CsPS1基因的黄瓜子叶上接种瓜类疫霉菌，病斑面积明显增大。CsPS1基因对黄瓜、南瓜等瓜类抗疫病起着非常重要的作用，具有广泛的应用前景。
附图说明
图1pGWB5载体图谱。
图2pK7GWIW载体图谱。
图3用注射器对黄瓜子叶打孔。
图4黄瓜CsPS1蛋白表达量的检测。
图5黄瓜CsPS1基因疫病抗性功能鉴定(黄瓜子叶)。A：结果对比图；B：结果统计图。
图6黄瓜CsPS1基因疫病抗性功能鉴定(南瓜子叶)。A：结果对比图；B：结果统计图。
具体实施方式
为了能够更清楚地理解本发明的技术内容，特举以下实施例结合附图详细说明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(NewYork:Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。
实施例1黄瓜CsPS1基因过表达载体的构建
黄瓜CsPS1基因属于捕光叶绿素a/b结合蛋白基因。以往的研究表明，捕光叶绿素a/b结合蛋白在植物发育、植物胁迫特别是非生物胁迫中发挥重要的作用。将黄瓜CsPS1基因CDS全长构建到pGWB5(质粒图谱如附图1所示)上，得到过量表达载体；将黄瓜基因CDS非保守区段207bp长度的片段及其互补片段构建到pK7GWIW上(质粒图谱如附图2所示)，得到基因沉默载体上。
黄瓜CsPS1蛋白的氨基酸序列为(267aa)：
MAASSMALSSPSFAGQAVKLSPTASDLLGEGRITMRKTAGKPKPVSSGSPWYGPDRVKYLGPFSGEPPSYLTGEFPGDYGWDTAGLSADPETFAKNRELEVIHSRWAMLGALGCVFPELLSRNGVKFGEAVWFKAGSQIFSEGGLDYLGNPSLVHAQSILAIWACQVVLMGAVEGYRIAGGPLGEITDPIYPGGSFDPLGLADDPEAFAELKVKELKNGRLAMFSMFGFFVQAIVTGKGPLENLADHLADPVNNNAWAYATNFVPGK(SEQ ID NO.1)。
黄瓜CsPS1基因CDS(801bp)序列为：
ATGGCAGCTTCATCCATGGCTCTCTCCTCCCCTTCCTTCGCCGGCCAAGCCGTCAAATTATCCCCCACCGCCTCCGACCTCCTCGGCGAAGGCCGCATTACCATGAGAAAAACCGCCGGAAAGCCCAAGCCCGTTTCCTCCGGTAGCCCATGGTACGGCCCCGATCGTGTCAAATACCTTGGCCCATTCTCTGGAGAACCCCCATCCTATCTTACCGGAGAATTCCCCGGTGACTACGGTTGGGACACTGCCGGCCTCTCCGCCGACCCCGAAACCTTCGCCAAAAACCGTGAACTCGAAGTAATCCACTCGAGATGGGCCATGCTCGGAGCCTTAGGCTGCGTATTCCCGGAGCTCCTCTCCCGCAACGGAGTCAAATTCGGCGAGGCTGTGTGGTTCAAAGCTGGATCACAAATCTTCAGCGAAGGTGGGCTCGACTACTTGGGGAACCCAAGCTTGGTGCACGCACAGAGCATTCTAGCGATTTGGGCTTGTCAAGTAGTGCTCATGGGCGCAGTGGAAGGGTACAGAATTGCTGGGGGTCCGTTGGGTGAAATCACTGACCCGATTTACCCAGGTGGGAGCTTTGATCCATTGGGGCTGGCTGATGATCCAGAGGCATTCGCGGAATTGAAAGTGAAGGAGCTTAAGAATGGTAGATTGGCTATGTTCTCGATGTTCGGATTTTTCGTACAAGCAATTGTAACTGGGAAAGGGCCATTGGAGAATTTGGCTGATCACTTGGCTGACCCTGTTAACAACAATGCTTGGGCCTATGCTACTAACTTTGTACCTGGAAAG(SEQ ID NO.2)。
黄瓜CsPS1全长基因序列为：
AAGTGGAAGGAAGCAAATAACATACATTTGTAATTGTGGATGATAAACTGCCATATGGCAATTGAAAATAAACTAAATAAAAACAAAAATCTTGGGAGTGTTCATTTTAGCCAATGAGGAAACAGATAGAGATCTCATCAAGATAAGGACCCTATTCTCTTCTTCATCTATAAAACAAAAACAAATCAAACCCTCAACTCACTCATACAAACCAAAAACTACTCCAATTCTAACTAACAGATACGATGGCAGCTTCATCCATGGCTCTCTCCTCCCCTTCCTTCGCCGGCCAAGCCGTCAAATTATCCCCCACCGCCTCCGACCTCCTCGGCGAAGGCCGCATTACCATGAGAAAAACCGCCGGAAAGCCCAAGCCCGTTTCCTCCGGTAGCCCATGGTACGGCCCCGATCGTGTCAAATACCTTGGCCCATTCTCTGGAGAACCCCCATCCTATCTTACCGGAGAATTCCCCGGTGACTACGGTTGGGACACTGCCGGCCTCTCCGCCGACCCCGAAACCTTCGCCAAAAACCGTGAACTCGAAGTAATCCACTCGAGATGGGCCATGCTCGGAGCCTTAGGCTGCGTATTCCCGGAGCTCCTCTCCCGCAACGGAGTCAAATTCGGCGAGGCTGTGTGGTTCAAAGCTGGATCACAAATCTTCAGCGAAGGTGGGCTCGACTACTTGGGGAACCCAAGCTTGGTGCACGCACAGAGCATTCTAGCGATTTGGGCTTGTCAAGTAGTGCTCATGGGCGCAGTGGAAGGGTACAGAATTGCTGGGGGTCCGTTGGGTGAAATCACTGACCCGATTTACCCAGGTGGGAGCTTTGATCCATTGGGGCTGGCTGATGATCCAGAGGCATTCGCGGAATTGAAAGTGAAGGAGCTTAAGAATGGTAGATTGGCTATGTTCTCGATGTTCGGATTTTTCGTACAAGCAATTGTAACTGGGAAAGGGCCATTGGAGAATTTGGCTGATCACTTGGCTGACCCTGTTAACAACAATGCTTGGGCCTATGCTACTAACTTTGTACCTGGAAAGTGAGGTGTAAGTTGTTAGTGTAATTGTGTGTGTGTTCTCTTCATGTGCCCACGGATTCTTGTTTTTAATGCATCCTTTTATAATGTGTTTATTATTATAGTTTTATGTTTGTTAATGGAATTCTCAACTTTTTAATTGGGTGTGTGTTGTGAATGTTAACTAATCTTACATTTTTGTTGATTTTCTTGTTCCACCTTTTATCATCAACTGCATTTTCAGGAACAGTATAAA(SEQ IDNO.3)。
黄瓜基因CDS非保守区段207bp长度的片段如下所示：
AAATAACATACATTTGTAATTGTGGATGATAAACTGCCATATGGCAATTGAAAATAAACTAAATAAAAACAAAAATCTTGGGAGTGTTCATTTTAGCCAATGAGGAAACAGATAGAGATCTCATCAAGATAAGGACCCTATTCTCTTCTTCATCTATAAAACAAAAACAAATCAAACCCTCAACTCACTCATACAAACCAAAAACTA(SEQ ID NO.4)。
实施例2构建瞬时过量表达/基因沉默的黄瓜子叶模型
(1)将实施例1中过量表达载体和沉默载体分别转化农杆菌GV3101，在相应抗性的培养基上倒置培养48-72h。
(2)挑取单克隆加入到4mL含有相应抗生素及利福平的LB培养基中，28℃，180rpm摇菌24-36h。
(3)按1:100比例加入新鲜含有相应抗生素及利福平的LB培养基中，28℃，180rpm摇菌到OD600值约3.0。
(4)3000rpm离心5分钟收集菌体，用悬浮液(10mM MES,10mM MgCl2)重悬菌体，并调整OD600值到0.4左右，加入200mM乙酰丁香酮。
(5)室温静置3-5h。
(6)用注射器针头在黄瓜子叶主叶脉两侧各扎一个针孔(具体操作见图3)。
(7)用1mL注射器吸取静置过后的菌液，注射器对准背面的针孔，正面用手堵住，注射进菌液。
(8)注射后的黄瓜幼苗黑暗培养12h后22℃光照培养3至4天。
通过Western Blot检测CsPS1基因瞬时过量表达、沉默及野生型对照的黄瓜离体子叶中检测CsPS1蛋白的表达量。
具体步骤如下：
(1)将收集的黄瓜子叶液氮速冻后研磨加入蛋白提取液(50mM Tris-HCl pH 7.5,150mM NaCl,0.1％Triton X-100,0.2％NP-40,1mM PMSF,1╳plant protease inhibitorcocktail)混匀置于冰上30分钟。
(2)4℃14000rpm离心10min，收集上清液80uL加入20uL蛋白上样缓冲液均匀混合后沸水浴10分钟。
(3)取20uL样品在SDS-PAGE凝胶上进行电泳分离。
(4)将电泳后的蛋白样品转到PVDF膜上，用5％PBST牛奶孵育封膜。
(5)在封闭液中加入一抗(CsPS1单克隆抗体)孵育2小时，用PBST洗膜，每次5min，洗4次。
(6)随后加入二抗，孵育30min，用PBST洗膜，每次5min，洗4次，
(7)对膜进行扫描显色，结果见附图4。
结果表明CsPS1基因瞬时过量表达的黄瓜子叶中CsPS1蛋白表达量显著高于野生型对照，而CsPS1基因沉默的黄瓜子叶中CsPS1蛋白表达量明显小于野生型对照。说明CsPS1瞬时过量表达的黄瓜子叶模型以及CsPS1基因沉默的黄瓜子叶模型均构建成功。
实施例3黄瓜子叶抗病实验
对实施例2中构建成功的CsPS1瞬时过量表达的黄瓜子叶模型、CsPS1基因沉默的黄瓜子叶模型以及野生型的黄瓜子叶，将注射后的黄瓜幼苗黑暗培养12h后22℃光照培养3至4天后将黄瓜子叶离体，并接种瓜类疫霉菌后将黄瓜子叶于28℃培养皿中，黑暗培养24h。
依据不同处理的黄瓜离体子叶病斑大小来判断目的基因对疫病的抗性功能，结果如附图5所示。
结果显示在黄瓜子叶中瞬时过量表达CsPS1基因能够使黄瓜子叶对疫病的抗性较对照明显增强，而在黄瓜子叶中瞬时沉默CsPS1基因则使黄瓜子叶对疫病的抗性较对照明显减弱。对每个处理的50个叶片病斑面积统计取均数(利用photoshop的像素数代替面积)，随后，利用过量表达、沉默、对照的叶面积进行显著性分析和比较。结果显示，过量表达CsPS1基因叶片的病斑面积较对照显著减小，而沉默CsPS1基因基因叶片的病斑面积显著增大(图5)。
实施例4南瓜子叶抗病实验
采用与实施例2中方法相同的操作步骤，同样构建了CsPS1瞬时过量表达以及CsPS1基因沉默的南瓜子叶。将注射后的南瓜幼苗黑暗培养12h后22℃光照培养3至4天后将南瓜子叶离体，并接种瓜类疫霉菌后将黄瓜子叶于28℃培养皿中，黑暗培养24h。
依据不同处理的黄瓜离体子叶病斑大小来判断目的基因对疫病的抗性功能，对每个处理的50个叶片病斑面积统计取均数(利用photoshop的像素数代替面积)，随后，利用过量表达、沉默、对照的叶面积进行显著性分析和比较，结果如附图6所示。
结果显示：瞬时过量表达CsPS1基因叶片的病斑面积较对照显著减小，抗病性明显增强。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 广东省农业科学院蔬菜研究所
<120> 黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1在抗瓜类疫病中的应用
<130>
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 267
<212> PRT
<213> 黄瓜CsPS1蛋白
<400> 1
Met Ala Ala Ser Ser Met Ala Leu Ser Ser Pro Ser Phe Ala Gly Gln
1 5 10 15
Ala Val Lys Leu Ser Pro Thr Ala Ser Asp Leu Leu Gly Glu Gly Arg
20 25 30
Ile Thr Met Arg Lys Thr Ala Gly Lys Pro Lys Pro Val Ser Ser Gly
35 40 45
Ser Pro Trp Tyr Gly Pro Asp Arg Val Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Ser
50 55 60
Gly Glu Pro Pro Ser Tyr Leu Thr Gly Glu Phe Pro Gly Asp Tyr Gly
65 70 75 80
Trp Asp Thr Ala Gly Leu Ser Ala Asp Pro Glu Thr Phe Ala Lys Asn
85 90 95
Arg Glu Leu Glu Val Ile His Ser Arg Trp Ala Met Leu Gly Ala Leu
100 105 110
Gly Cys Val Phe Pro Glu Leu Leu Ser Arg Asn Gly Val Lys Phe Gly
115 120 125
Glu Ala Val Trp Phe Lys Ala Gly Ser Gln Ile Phe Ser Glu Gly Gly
130 135 140
Leu Asp Tyr Leu Gly Asn Pro Ser Leu Val His Ala Gln Ser Ile Leu
145 150 155 160
Ala Ile Trp Ala Cys Gln Val Val Leu Met Gly Ala Val Glu Gly Tyr
165 170 175
Arg Ile Ala Gly Gly Pro Leu Gly Glu Ile Thr Asp Pro Ile Tyr Pro
180 185 190
Gly Gly Ser Phe Asp Pro Leu Gly Leu Ala Asp Asp Pro Glu Ala Phe
195 200 205
Ala Glu Leu Lys Val Lys Glu Leu Lys Asn Gly Arg Leu Ala Met Phe
210 215 220
Ser Met Phe Gly Phe Phe Val Gln Ala Ile Val Thr Gly Lys Gly Pro
225 230 235 240
Leu Glu Asn Leu Ala Asp His Leu Ala Asp Pro Val Asn Asn Asn Ala
245 250 255
Trp Ala Tyr Ala Thr Asn Phe Val Pro Gly Lys
260 265
<210> 2
<211> 801
<212> DNA
<213> 黄瓜CsPS1基因CDS
<400> 2
atggcagctt catccatggc tctctcctcc ccttccttcg ccggccaagc cgtcaaatta 60
tcccccaccg cctccgacct cctcggcgaa ggccgcatta ccatgagaaa aaccgccgga 120
aagcccaagc ccgtttcctc cggtagccca tggtacggcc ccgatcgtgt caaatacctt 180
ggcccattct ctggagaacc cccatcctat cttaccggag aattccccgg tgactacggt 240
tgggacactg ccggcctctc cgccgacccc gaaaccttcg ccaaaaaccg tgaactcgaa 300
gtaatccact cgagatgggc catgctcgga gccttaggct gcgtattccc ggagctcctc 360
tcccgcaacg gagtcaaatt cggcgaggct gtgtggttca aagctggatc acaaatcttc 420
agcgaaggtg ggctcgacta cttggggaac ccaagcttgg tgcacgcaca gagcattcta 480
gcgatttggg cttgtcaagt agtgctcatg ggcgcagtgg aagggtacag aattgctggg 540
ggtccgttgg gtgaaatcac tgacccgatt tacccaggtg ggagctttga tccattgggg 600
ctggctgatg atccagaggc attcgcggaa ttgaaagtga aggagcttaa gaatggtaga 660
ttggctatgt tctcgatgtt cggatttttc gtacaagcaa ttgtaactgg gaaagggcca 720
ttggagaatt tggctgatca cttggctgac cctgttaaca acaatgcttg ggcctatgct 780
actaactttg tacctggaaa g 801
<210> 3
<211> 1277
<212> DNA
<213> 黄瓜CsPS1全长基因
<400> 3
aagtggaagg aagcaaataa catacatttg taattgtgga tgataaactg ccatatggca 60
attgaaaata aactaaataa aaacaaaaat cttgggagtg ttcattttag ccaatgagga 120
aacagataga gatctcatca agataaggac cctattctct tcttcatcta taaaacaaaa 180
acaaatcaaa ccctcaactc actcatacaa accaaaaact actccaattc taactaacag 240
atacgatggc agcttcatcc atggctctct cctccccttc cttcgccggc caagccgtca 300
aattatcccc caccgcctcc gacctcctcg gcgaaggccg cattaccatg agaaaaaccg 360
ccggaaagcc caagcccgtt tcctccggta gcccatggta cggccccgat cgtgtcaaat 420
accttggccc attctctgga gaacccccat cctatcttac cggagaattc cccggtgact 480
acggttggga cactgccggc ctctccgccg accccgaaac cttcgccaaa aaccgtgaac 540
tcgaagtaat ccactcgaga tgggccatgc tcggagcctt aggctgcgta ttcccggagc 600
tcctctcccg caacggagtc aaattcggcg aggctgtgtg gttcaaagct ggatcacaaa 660
tcttcagcga aggtgggctc gactacttgg ggaacccaag cttggtgcac gcacagagca 720
ttctagcgat ttgggcttgt caagtagtgc tcatgggcgc agtggaaggg tacagaattg 780
ctgggggtcc gttgggtgaa atcactgacc cgatttaccc aggtgggagc tttgatccat 840
tggggctggc tgatgatcca gaggcattcg cggaattgaa agtgaaggag cttaagaatg 900
gtagattggc tatgttctcg atgttcggat ttttcgtaca agcaattgta actgggaaag 960
ggccattgga gaatttggct gatcacttgg ctgaccctgt taacaacaat gcttgggcct 1020
atgctactaa ctttgtacct ggaaagtgag gtgtaagttg ttagtgtaat tgtgtgtgtg 1080
ttctcttcat gtgcccacgg attcttgttt ttaatgcatc cttttataat gtgtttatta 1140
ttatagtttt atgtttgtta atggaattct caacttttta attgggtgtg tgttgtgaat 1200
gttaactaat cttacatttt tgttgatttt cttgttccac cttttatcat caactgcatt 1260
ttcaggaaca gtataaa 1277
<210> 4
<211> 207
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
aaataacata catttgtaat tgtggatgat aaactgccat atggcaattg aaaataaact 60
aaataaaaac aaaaatcttg ggagtgttca ttttagccaa tgaggaaaca gatagagatc 120
tcatcaagat aaggacccta ttctcttctt catctataaa acaaaaacaa atcaaaccct 180
caactcactc atacaaacca aaaacta 207

Claims (6)

1.黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1在抗瓜类疫病中的应用，所述黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述瓜类疫病为瓜类疫霉菌引发的疾病。
2.编码黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的核苷酸序列在抗瓜类疫病中的应用，所述黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述瓜类疫病为瓜类疫霉菌引发的疾病。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.含有编码黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的基因序列的病毒、载体在抗瓜类疫病中的应用，所述黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述瓜类疫病为瓜类疫霉菌引发的疾病。
5.含有编码黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的基因序列的重组菌、转基因细胞系在抗瓜类疫病中的应用，所述黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示；所述瓜类疫病为瓜类疫霉菌引发的疾病。
6.靶向上调黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的表达量或增强黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1活性的试剂在抗瓜类疫病中的应用；所述黄瓜捕光叶绿素a/b结合蛋白CsPS1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述瓜类疫病为瓜类疫霉菌引发的疾病。
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