CN114903927A - 一种防治肝纤维化的药物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种防治肝纤维化的药物及其制备方法，该药物包括碱蓬黄酮，所述碱蓬黄酮是由如下方法提取得到的混合物：将脱脂碱蓬用乙醇于50~70℃条件下超声提取得到乙醇提取液，浓缩、冷冻后即得所述碱蓬黄酮。由含松苓新酸的膜包封形成纳米颗粒后，生物利用率更高。本发明的防治肝纤维化的药物，可通过减轻肝脏糖原蓄积而发挥抗肝纤维化作用。同时，该药物制备方法简单，成本低廉，粒径小且在胃肠道内结构稳定，有利于临床应用。

Description

一种防治肝纤维化的药物及其制备方法
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种防治肝纤维化的药物及其制备方法。
背景技术
肝纤维化是一个动态且高度整合多种分子、细胞和组织的复杂过程。因此，临床治疗肝纤维化有多种途径，包括保护肝细胞、抑制肝星状细胞（HSCs）活化、加快细胞外基质降解、协调免疫等。目前，以肝细胞为中心的途径有抑制肝细胞凋亡及氧化应激、降低肝细胞内脂质蓄积、恢复肠道稳态以减轻病原模式物对肝细胞损害等。由HSCs活化而来的成纤维化细胞是细胞外基质的主要生产细胞，因此及时阻断HSCs活化或加快已活化HSCs凋亡可减少细胞外基质的产生。加快基质降解无疑是治疗发展期及严重期肝纤维化最直接有效的途径。由于巨噬细胞参与肝细胞损伤的促炎反应，调节其介导的先天免疫反应也作为抗纤维化途径之一。虽然治疗途径众多，但仍未满足临床防治肝纤维化医疗需求。这一临床现状迫使研究者继续探索防治肝纤维化的新思路。
基于众多病因诱导肝纤维化几乎都起源于肝细胞损伤，可谓肝细胞损伤是肝纤维化的“源头”，要想在早期防治肝纤维化，关注点还应该聚焦于肝细胞损伤。目前已发现脂质过载和胆固醇代谢紊乱是诱导肝细胞损伤的两个主要原因，但据已公布的临床试验结果显示，针对以上诱因的受试药物效果差强人意。
目前临床上尚缺乏防治肝纤维化的特效药物。碱蓬（Suaeda glauca）属石竹亚纲石竹目藜科，是一种抗盐耐海水植物，广泛分布于盐城滩涂，全草可入药，性凉微咸，归肾经。中医理论认为“乙葵同源，肝肾同治”。碱蓬虽归肾经，但现代药理学研究发现碱蓬多种活性成分，具有良好的增强免疫力、降血脂或抗氧化的作用。碱蓬黄酮因其具有强大的抗氧化活性也备受学者关注，但由于其口服生物利用度低，限制学者对其药用作用的研究。
发明内容
针对上述现有技术的问题，本发明提供一种防治肝纤维化的药物，其尤其对早期肝纤维化的防治具有优良的功效，且其生物利用率高。
为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：
一种防治肝纤维化的药物，包括碱蓬黄酮，所述碱蓬黄酮是由如下方法提取得到的混合物：
将脱脂碱蓬用乙醇于50~70℃条件下超声提取得到乙醇提取液，浓缩、冷冻后即得所述碱蓬黄酮。
优选的，所述脱脂碱蓬由如下方法制得：将碱蓬置于石油醚中超声脱脂，过滤、干燥后即得。
优选的，所述碱蓬为粉末形态。
优选的，所述石油醚的体积:所述碱蓬的质量为5~10:1（mL/g）。
优选的，所述超声脱脂的温度为60~90℃，所述超声脱脂的时间为2.0~4.0h。
优选的，所述乙醇的体积:所述脱脂碱蓬的质量为20~50:1（mL/g）。
优选的，所述乙醇为85%（v/v）的乙醇溶液。
优选的，所述超声提取的时间为2~4h。
优选的，所述碱蓬黄酮的提取方法还包括将提取液离心、过滤去除固体杂质的步骤。优选的，所述离心为于4500 r/min 离心15 min。
优选的，所述冷冻具体为先进行低温预冻后再进行真空冷冻。
为了进一步提高生物利用率，本发明还进一步将上述防治肝纤维化的药物被膜包封形成纳米颗粒，所述膜包括松苓新酸。
优选的，所述膜还包括表面活性剂。
优选的，所述表面活性剂与所述松苓新酸的质量比为1:5~15。
优选的，所述表面活性剂为聚乙烯醇、聚环氧乙烷、环氧乙烷、聚丙烯酸钠或聚丁二烯中的一种或多种。
本发明还提供上述防治肝纤维化的药物（纳米颗粒）的制备方法，包括以下步骤：
（1）将松苓新酸、所述防治肝纤维化的药物溶于有机溶剂形成第一溶液；
（2）向所述第一溶液中缓慢加入第一水相溶液，超声处理后，缓慢加入第二水相溶液，形成乳液；
所述第一水相溶液和所述第二水相溶液为表面活性剂的水溶液；
（3）蒸干所述乳液中的有机溶剂，之后将所得颗粒从水中分离出，即得防治肝纤维化的药物（纳米颗粒）。
优选的，所述纳米颗粒的粒径为100~200 nm。
优选的，所述有机溶剂为三氯甲烷、乙醇、正丁醇、丙二醇或甘油中的一种或多种；优选为二氯甲烷和甲醇的混合溶剂。更优选的，二氯甲烷和甲醇的体积比为1:1~3。
优选的，所述第一水相溶液中表面活性剂的浓度大于所述第二水相溶液中表面活性剂的浓度。优选的，所述第一水相溶液中表面活性剂的浓度与所述第二水相溶液中表面活性剂的浓度的比为8~15:1。
本发明的有益效果在于：
肝脏内糖原代谢主要发生在肝细胞，当糖原代谢酶缺陷时会导致糖原过度累积。慢性肝病阶段普遍存在肝脏糖原累积现象，且这种病理变化会持续到肝纤维化阶段，这意味着糖原累积参与肝纤维化进展。本发明的防治肝纤维化的药物，可通过减轻肝脏糖原蓄积而发挥抗肝纤维化作用。同时，该药物制备方法简单，成本低廉，粒径小且在胃肠道内结构稳定，有利于临床应用。
附图说明
图1是实施例1制得的碱蓬黄酮纳米粒粒径及多分散系数图。
图2是实施例1制得的碱蓬黄酮纳米粒Zeta电位图。
图3是实施例1制得的碱蓬黄酮纳米粒的TEM图。
图4是实施例1制得的碱蓬黄酮纳米粒在模拟胃液中的缓释曲线。
图5是实施例1制得的碱蓬黄酮纳米粒在模拟肠液中的缓释曲线。
图6是实施例1制得的碱蓬黄酮纳米粒对肝纤维化模型小鼠血清ALT和AST活性影响（n = 6-7）结果。
图7是实施例1制得的碱蓬黄酮纳米粒对肝纤维化模型小鼠血清HA和Laminin水平影响（n = 6-7）结果。
图8是实施例1制得的碱蓬黄酮纳米粒对肝纤维化模型小鼠肝脏羟脯氨酸水平影响（n = 6-7）结果。
图9是实施例1制得的小鼠肝脏组织H&E（×200）和Sirius red（×100）染色病理图片。
图10是实施例1制得的小鼠肝脏组织糖原累积（×200）染色病理图片。
图11是实施例2制得的碱蓬黄酮纳米粒的TEM图。
图12是实施例3制得的碱蓬黄酮纳米粒的TEM图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
（1）碱蓬黄酮的提取：
取一定质量的碱蓬粉末，按1:5料液比（质量g:体积mL）加入石油醚（60℃），在超声仪中超声浸泡除脂2.5 h，过滤收集滤渣，烘干得到脱脂碱蓬粉末。
然后称取一定质量的脱脂碱蓬粉末，按料液比1:30（质量g:体积mL）加入体积分数为85%的乙醇溶液，在60 ℃条件下超声浸泡3 h，然后将提取液经4500 r/min 离心15 min。弃去沉淀，再减压抽滤进一步除去杂质，收集滤液。减压浓缩滤液，经低温预冻后，真空冷冻预冻物即得碱蓬黄酮。
（2）碱蓬黄酮纳米粒的制备：
称取适量松苓新酸和碱蓬黄酮溶于二氯甲烷和甲醇的混合有机溶剂（二者体积比为1:1），逐滴加入一定体积的质量分数2.5%的聚乙烯醇的水溶液（第一水相），超声后缓慢加入质量分数0.3%的聚乙烯醇的水溶液（第二水相），使得聚乙烯醇和松苓新酸的质量比达到1:10；减压蒸发后，经18000 rpm离心30 min收集沉淀。然后将沉淀重悬于蒸馏水，经18000 rpm离心30 min，弃上清后得到碱蓬黄酮纳米粒。
（3）包封率的测定：
借助高效液相分析仪测定包封率。计算公式如下：
包封率 =
Figure 917813DEST_PATH_IMAGE001
) ×100% （公式一）
其中，Cf为游离药物的量，Ct为纳米粒悬液中药物的总量。
测得碱蓬黄酮纳米粒包封率为88.7%。
（4）粒径、多分散系数和Zeta电位检测：
取新制备的碱蓬黄酮纳米粒混悬液，采用粒度分析仪测定其粒径、多分散系数和Zeta电位。
如图1=2所示，碱蓬黄酮纳米粒的粒径在107 nm左右，多分散性指数（PDI）为8.6％，Zeta电位为5.7 mV。
（5）形貌观察：
借助透射电镜观察碱蓬黄酮纳米粒形态。如图3所示，可见碱蓬黄酮纳米粒呈圆形或椭圆形，且分布较为均匀，粒径在100~200nm范围。
（6）模拟胃肠液中结构稳定性评价：
将碱蓬黄酮纳米粒经离心（18000 rpm，30 min），收集纳米粒，经重悬后进行透析。取1 mL重悬的碱蓬黄酮纳米粒溶液及1 mL碱蓬黄酮溶液分别放于透析袋中，加入模拟胃液250 mL，在37 ℃、100 rpm条件下搅拌，分别于搅拌0、20、40、60、80、100、120 min后取样1mL，取样同时补加相同体积的释放介质。碱蓬黄酮纳米粒在模拟胃液释放2 h后，经离心收集再次加入模拟肠液，分别于1 h、2 h、5 h、7 h、9 h和12 h取样1 mL，同时补加同体积的释放介质。
用高效液相分析仪检测模拟胃肠液中12次取样中碱蓬黄酮的含量，按如下公式计算释放率：
Figure 569374DEST_PATH_IMAGE002
    （公式二）
假定在120 min时，对碱蓬黄酮溶液完全释放至模拟胃液。将时间作为x轴，释放率为y轴，得到两种样品在模拟胃液中释放曲线图。从图4可知，对碱蓬黄酮溶液而言，在40min时，已有40%碱蓬黄酮释放进入模拟胃液，100 min时释放率已达90%左右；而碱蓬黄酮纳米粒每个时间点释放率均明显小于碱蓬黄酮溶液，且释放缓慢，在120 min时释放率仅达17.63%。以上实验结果表明，碱蓬黄酮纳米粒在模拟胃液中结构稳定，仅有少量药物被释放。
假定在12 h时，对碱蓬黄酮溶液完全释放至模拟肠液。将时间作为x轴，释放率为y轴，得到两种样品在模拟肠液中释放曲线图。从图5可知，对碱蓬黄酮溶液而言，在4 h时，已有70%碱蓬黄酮释放进入模拟肠液，6 h时释放率已达90%左右；而碱蓬黄酮纳米粒每个时间点释放率均明显小于碱蓬黄酮溶液，且释放缓慢，在12 h时释放率仅达48.8%。以上实验结果表明，碱蓬黄酮纳米粒在经过模拟胃液作用2 h，继续在模拟肠液中作用12 h后结构稳定性依然较好，这就为提高碱蓬黄酮生物利用度奠定结构基础。
（7）碱蓬黄酮纳米粒抗肝纤维化作用评价：
造模及给药：
选择雄性SPF级C57BL/6小鼠，体重20-22 g。购自于南通大学实验动物中心，实验动物生产许可证号：SCXK（苏）2019-0001。环境适应1周后，随机分为正常对照组和肝纤维化模型组。所有动物在实验期间均自由摄取饲料和饮用水。正常对照组动物腹腔注射生理盐水，模型组动物腹腔注射四氯化碳（v四氯化碳/v橄榄油=1/10），一周两次，连给4周。4周后，模型组进一步分为生理盐水组、3个剂量（75、150和300 mg/kg）碱蓬黄酮纳米粒治疗组和异甘草酸镁组（70 mg/kg，阳性药对照组），继续给与四氯化碳4周，同时每天灌胃给与碱蓬黄酮纳米粒，腹腔注射异甘草酸镁。
生物样本收集：
最后一次给药后1 h，以60 mg/kg剂量腹腔注射水合氯醛溶液，待小鼠麻醉后实施心脏采血，然后打开小鼠腹腔，取出肝脏并称重。切取1 cm3左右组织固定于4%多聚甲醛，用于病理学检测；其余分装于96孔板，在液氮中速冻。收集的血液在4 oC中静置过夜，经5000rpm离心10 min，收集血清。血清及肝脏组织保存于-80 ℃超低温冰箱以备用。
生化指标检测：
选择标准诊断试剂盒检测各组实验动物血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性。
采用ELISA试剂盒检测各组实验动物血清中透明质酸和层黏连蛋白含量；采用化学检测试剂盒检测各组实验动物肝组织内羟脯胺酸水平。
肝脏组织病理学检测：
肝脏组织经4%多聚甲醛室温固定24 h后制作石蜡切片，分别行苏木精-伊红（H&E）和Sirius red染色。
H&E染色 将制作好的石蜡切片放入二甲苯I、II脱蜡，10 min/次；然后依次放入无水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇各5 min，蒸馏水洗5 min。苏木精染色液染色10 min，浸入自来水去除多余的染色液。蒸馏水洗一次，浸入95%乙醇5 s。伊红染色液染色1min，然后经梯度酒精脱水、二甲苯透化，中性树胶封片。光学显微镜下观察、拍照并分析。
Masson染色 石蜡切片脱蜡水洗后用Regaud苏木精染核10 min，充分水洗，用Masson丽春红酸性复红液浸染10 min，然后以2%冰醋酸溶液浸洗片刻，1%磷钼酸溶液分化5min，不经水洗，直接用苯胺蓝或光绿液染色5 min，用0.2%冰醋酸溶液浸洗片刻。最后用95%酒精、无水酒精、二甲苯透明，中性树胶封片。光学显微镜下观察、拍照并分析。
肝脏糖原累积评价：
肝脏组织石蜡切片脱蜡水洗后浸入10 g/L过碘酸水溶液中10 min，蒸馏水冲洗数次，待完全干燥；放入雪夫液30 min，用自来水冲洗约5 min，再用蒸馏水冲，然后用20 g/L甲基绿复染20 min，水洗；最后用95%酒精、无水酒精、二甲苯透明，中性树胶封片。光学显微镜下观察、拍照并分析。（8）统计分析：
结果用Mean ± SEM表示。数据选用One-Way ANOVA结合Dunnett's posthoc test进行组间差异分析。以 P < 0.05表示统计学差异显著。用GraphPad Prism 5软件作图。
（9）结果：
（9.1）碱蓬黄酮纳米粒对四氯化碳诱导的小鼠肝功能影响：
如图6所示，与正常组比较，四氯化碳模型组小鼠血清ALT（P < 0.001）和AST（P <0.001）活性均显著升高。与四氯化碳模型组比较，碱蓬黄酮纳米粒低、中、高剂量组小鼠血清ALT（75、150和300 mg/kg：P < 0.001）和AST（75 mg/kg：P < 0.01；150和300 mg/kg：P <0.001）活性均显著降低。异甘草酸镁注射液也有类似作用。
上述结果表明，碱蓬黄酮纳米粒具有良好的肝功能保护作用。
小鼠血清ALT和AST活性采用标准诊断试剂盒进行检测。四氯化碳模型对照组与正常对照组比较，### P < 0.001；给药组与四氯化碳模型对照组比较，** P < 0.01，*** P <0.001。ALT：谷丙转氨酶；AST：谷草转氨酶；SGF：碱蓬黄酮纳米粒：MI：异甘草酸镁注射液。
3.2.2碱蓬黄酮纳米粒对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化血清指标的影响
（9.2）碱蓬黄酮纳米粒对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化血清指标的影响：
如图7所示，与正常组比较，四氯化碳模型组小鼠血清HA（P < 0.001）和Laminin（P< 0.001）水平均显著升高。与四氯化碳模型组比较，碱蓬黄酮纳米粒中和高剂量组小鼠血清HA水平（150 mg/kg：P < 0.05；300 mg/kg：P < 0.01）显著降低，碱蓬黄酮纳米粒高剂量组小鼠血清Laminin水平（300mg/kg：P < 0.01）明显降低。异甘草酸镁注射液也有类似作用。
上述结果表明，碱蓬黄酮纳米粒能有效降低肝纤维化血清生化指标。
小鼠血清HA和Laminin水平采用ELISA试剂盒进行检测。四氯化碳模型对照组与正常对照组比较，### P < 0.001；给药组与四氯化碳模型对照组比较，* P < 0.05，** P < 0.01。HA：透明质酸；Laminin：层粘连蛋白；SGF：碱蓬黄酮纳米粒：MI：异甘草酸镁注射液。
（9.3）碱蓬黄酮纳米粒对四氯化碳诱导的小鼠肝脏羟脯氨酸水平的影响：
如图8所示，与正常组比较，四氯化碳模型组小鼠肝脏组织内羟脯氨酸含量显著升高（P < 0.001）。与四氯化碳模型组比较，碱蓬黄酮纳米粒中和高剂量组小鼠肝脏羟脯氨酸水平显著降低（150和300 mg/kg，P < 0.001）。异甘草酸镁注射液也有类似作用。
上述结果表明，碱蓬黄酮纳米粒能有效降低肝脏羟脯氨酸水平。
小鼠肝脏羟脯氨酸水平采用化学试剂盒进行检测。四氯化碳模型对照组与正常对照组比较，### P < 0.001；给药组与四氯化碳模型对照组比较，*** P < 0.001。SGF：碱蓬黄酮纳米粒：MI：异甘草酸镁注射液。
（9.4）碱蓬黄酮纳米粒对模型小鼠肝脏病理变化的影响：
如图9所示，空白对照组小鼠肝细胞形态规则，肝细胞索围绕中央静脉呈辐射状排列。模型组小鼠肝细胞淡染水肿，细胞内有大量脂肪空泡，结构排列紊乱，汇管区及点状细胞坏死区域周围可见大量炎性细胞浸润，中央静脉管腔明显扩大，有大量胶原蛋白沉积，局部形成假小叶结构，破坏肝脏组织正常结构。碱蓬黄酮纳米粒组小鼠肝细胞脂肪空泡逐渐减少，水肿减轻，排列渐趋规则，坏死细胞及炎性细胞浸润明显减少，中央静脉管腔逐渐缩小，沉积胶原蛋白逐渐减少。异甘草酸镁注射液也有类似作用。
上述结果表明，碱蓬黄酮纳米粒能有效缓解小鼠肝纤维化病变。
（9.5）碱蓬黄酮纳米粒对模型小鼠肝脏糖原累积的影响：
如图10所示，空白对照组小鼠肝细胞形态规则，几乎无糖原蓄积。模型组小鼠肝细胞内存在大量糖原蓄积。碱蓬黄酮纳米粒组小鼠肝细胞内糖原蓄积明显减少。异甘草酸镁注射液也有类似作用。
上述结果表明，碱蓬黄酮纳米粒能有效缓解肝纤维化小鼠肝脏糖原累积。
实施例2
（1）碱蓬黄酮的提取：
取一定质量的碱蓬粉末，按1:7料液比（质量g:体积mL）加入石油醚（75℃），在超声仪中超声浸泡除脂4 h，过滤收集滤渣，烘干得到脱脂碱蓬粉末。
然后称取一定质量的脱脂碱蓬粉末，按料液比1:50（质量g:体积mL）加入体积分数为85%的乙醇溶液，在70 ℃条件下超声浸泡2 h，然后将提取液经4500 r/min 离心15 min。弃去沉淀，再减压抽滤进一步除去杂质，收集滤液。减压浓缩滤液，经低温预冻后，真空冷冻预冻物即得碱蓬黄酮。
（2）碱蓬黄酮纳米粒的制备：
称取适量松苓新酸和碱蓬黄酮溶于正丁醇，逐滴加入一定体积的质量分数3.5%的聚丁二烯的水溶液（第一水相），超声后缓慢加入质量分数0.3%的聚丁二烯的水溶液（第二水相），使得聚丁二烯和松苓新酸的质量比达到1:15；减压蒸发后，经18000 rpm离心30 min收集沉淀。然后将沉淀重悬于蒸馏水，经18000 rpm离心30 min，弃上清后得到碱蓬黄酮纳米粒。
如图11所示，制得的碱蓬黄酮纳米粒的粒径在100~300nm范围。
实施例3
（1）碱蓬黄酮的提取：
取一定质量的碱蓬粉末，按1:10料液比（质量g:体积mL）加入石油醚（90℃），在超声仪中超声浸泡除脂2 h，过滤收集滤渣，烘干得到脱脂碱蓬粉末。
然后称取一定质量的脱脂碱蓬粉末，按料液比1:20（质量g:体积mL）加入体积分数为85%的乙醇溶液，在50 ℃条件下超声浸泡4 h，然后将提取液经4500 r/min 离心15 min。弃去沉淀，再减压抽滤进一步除去杂质，收集滤液。减压浓缩滤液，经低温预冻后，真空冷冻预冻物即得碱蓬黄酮。
（2）碱蓬黄酮纳米粒的制备：
称取适量松苓新酸和碱蓬黄酮溶于三氯甲烷和甘油的混合有机溶剂（二者体积比为1:3），逐滴加入一定体积的质量分数4.5%的环氧乙烷的水溶液（第一水相），超声后缓慢加入质量分数0.3%的环氧乙烷的水溶液（第二水相），使得环氧乙烷和松苓新酸的质量比达到1:5；减压蒸发后，经18000 rpm离心30 min收集沉淀。然后将沉淀重悬于蒸馏水，经18000rpm离心30 min，弃上清后得到碱蓬黄酮纳米粒。
如图12所述，制得的碱蓬黄酮纳米粒的粒径在500~600nm范围。

Claims (10)

1.一种防治肝纤维化的药物，其特征在于，包括碱蓬黄酮，所述碱蓬黄酮是由如下方法提取得到的混合物：
将脱脂碱蓬用乙醇于50~70℃条件下超声提取得到乙醇提取液，浓缩、冷冻后即得所述碱蓬黄酮；优选的，所述超声提取的时间为2~4h。
2.根据权利要求1所述的防治肝纤维化的药物，其特征在于，所述脱脂碱蓬由如下方法制得：将碱蓬置于石油醚中超声脱脂，过滤、干燥后即得。
3.根据权利要求2所述的防治肝纤维化的药物，其特征在于，所述超声脱脂的温度为60~90℃，所述超声脱脂的时间为2.0~4.0h。
4.根据权利要求1所述的防治肝纤维化的药物，其特征在于，所述乙醇的体积:所述脱脂碱蓬的质量为20~50:1。
5. 根据权利要求1所述的防治肝纤维化的药物，其特征在于，所述防治肝纤维化的药物被膜包封形成纳米颗粒，所述膜包括松苓新酸；优选的，所述纳米颗粒的粒径为100~200nm。
6.根据权利要求5所述的防治肝纤维化的纳米颗粒，其特征在于，所述膜还包括表面活性剂；优选的，所述表面活性剂与所述松苓新酸的质量比为1:5~15。
7.根据权利要求6所述的防治肝纤维化的纳米颗粒，其特征在于，所述表面活性剂为聚乙烯醇、聚环氧乙烷、环氧乙烷、聚丙烯酸钠或聚丁二烯中的一种或多种。
8.权利要求5-7任一所述防治肝纤维化的纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将松苓新酸、所述防治肝纤维化的药物溶于有机溶剂形成第一溶液；
（2）向所述第一溶液中缓慢加入第一水相溶液，超声处理后，缓慢加入第二水相溶液，形成乳液；
所述第一水相溶液和所述第二水相溶液为表面活性剂的水溶液；
（3）蒸干所述乳液中的有机溶剂，之后将所得颗粒从水中分离出，即得防治肝纤维化的纳米颗粒。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为三氯甲烷、乙醇、正丁醇、丙二醇或甘油中的一种或多种；优选为二氯甲烷和甲醇的混合溶剂；更优选的，二氯甲烷和甲醇的体积比为1:1~3。
10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述第一水相溶液中表面活性剂的浓度大于所述第二水相溶液中表面活性剂的浓度；优选的，所述第一水相溶液中表面活性剂的浓度与所述第二水相溶液中表面活性剂的浓度的比为8~15:1。
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