CN114835897B - 一种具有pH敏感性以及主动靶向性功能材料及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药物合成应用技术领域，公开了一种具有pH敏感性以及主动靶向性功能材料及其制备方法和应用。制备方法具体为：S1.将叶酸加入到有机溶剂中，搅拌使其溶解，形成一定浓度的叶酸溶液；S2.另取NH2‑PEOZ‑CHMC溶于有机溶剂；得到NH2‑PEOZ‑CHMC溶液；S3.将步骤S1得到的叶酸溶液加入到步骤S2得到的NH2‑PEOZ‑CHMC溶液中，同时加入三乙胺，15～26℃条件下搅拌12小时；S4.向步骤S3中加入不良试剂，之后过滤，精制，干燥，得到通式(I)所示化合物A。合成了具有生物相容性、生物降解性和pH敏感性以及主动靶向性的功能材料。

Description

一种具有pH敏感性以及主动靶向性功能材料及其制备方法和 应用
技术领域
本发明属于药物合成应用技术领域领域，本发明涉及一种具有pH敏感性以及主动靶向性功能材料及其制备方法和应用。
背景技术
最新的全球肿瘤统计结果显示，目前为止，全球估计有1819万癌症新增病例以及960万癌症死亡病例。而我国每天约有1万人确诊癌症，相当于平均每分钟就有7个人确诊癌症，我国癌症患病率处于国际中等偏上水平。最新数据显示，全球总人口(统指两性人口)最新癌症的发病率排行分别为：第一位是肺癌，占癌症总发病人口的11.6％；第二位是女性乳腺癌，占癌症总发病人口的11.6％；第三位是前列腺癌，占癌症总发病人口的7.1％；第四位分别是结直肠癌，占癌症总发病人口的5.7％。目前临床针对癌症的治疗手段主要有化疗、放疗、新辅助化疗以及靶向治疗，化疗仍然是最广泛的治疗手段。但是目前使用的化疗药物缺乏靶向性，在杀死肿瘤细胞的同时对健康组织和细胞也会造成伤害，带来极大的副作用，使患者生存质量降低。如何能够安全有效的治疗癌症成为科学领域需要迫切解决的难题。
人体正常组织的pH值在7.4左右，而肿瘤的快速增殖导致肿瘤内部需氧量远小于摄氧量，葡萄糖过度酵解，淋巴循环不畅，酸性物质累积，使肿瘤环境pH值为6.5-6.7。肿瘤细胞特殊的pH环境不但造成许多碱性化学治疗药物被隔离在酸性区室内，还上调了糖蛋白的表达和活性，使药物分子在肿瘤细胞外酸性环境中大量质子化后难以透过胞膜脂质层进入胞内，造成药物无法到达癌细胞靶点发挥作用。
利用人体正常环境与肿瘤微酸性环境间的pH差异，本领域技术人员开发了一些具有pH 敏感性的材料，用这些材料制备的药物制剂可以在pH 7.4的生理环境中，保持其结构完整，药物不会释放；而在pH较低的肿瘤微酸环境中，药物制剂的结构发生改变，而快速释放药物。但是这些发明存在着控释机制、聚合物的选择、毒理学等方面的问题。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种具有pH敏感性以及主动靶向性功能材料及其制备方法和应用，合成了具有生物相容性、生物降解性和pH敏感性以及主动靶向性的功能材料。可以在pH较低的肿瘤微酸环境中释放出携带的药物。可以增加药物的生物利用度，降低毒副作用。
本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：
一种具有pH敏感性以及主动靶向性功能材料，为通式(I)所示化合物A：”
Figure BDA0003614994530000021
其中n大于2。
上述一种具有pH敏感性以及主动靶向性功能材料的制备方法，制备步骤具体如下所示：
Figure BDA0003614994530000022
S1.将叶酸加入到有机溶剂中，搅拌使其溶解，形成一定浓度的叶酸溶液；
S2.另取NH2-PEOZ-CHMC溶于有机溶剂；得到NH2-PEOZ-CHMC溶液；
S3.将步骤S1得到的叶酸溶液加入到步骤S2得到的NH2-PEOZ-CHMC溶液中，同时加入三乙胺，15～26℃条件下搅拌12小时；
S4.向步骤S3中加入不良试剂，之后过滤，精制，干燥，得到通式(I)所示化合物A。
进一步的，步骤S1和步骤S2中所述的有机溶剂为：二甲基亚砜、二氯甲烷、N、N-二甲基甲酰胺、N、N-二甲基乙酰胺、乙腈、乙醇、醋酸、甲基吡咯烷酮、酚吡啶中的任一种或两种以上。
进一步的，步骤S1所述的形成叶酸溶液的浓度为10～200mg/ml。
进一步的，步骤S3中按照叶酸：NH2-PEOZ-CHMC摩尔比1～50：1的比例加入。
进一步的，步骤S4中的不良试剂为丙酮、苯、甲苯、乙醚、氯仿中的任一种或两种以上。
上述具有pH敏感性以及主动靶向性功能材料的用途，具体为制备具有PH敏感性以及主动靶向性的脂质体。
该pH敏感性以及主动靶向性的脂质体，其制备方法具体是：称取药物、磷脂、胆固醇和化合物A，放入梨形瓶中，以适量有机溶剂充分溶解，于40℃真空减压旋转蒸发除去有机溶剂，形成脂质薄膜，真空干燥后，加入PBS缓冲液(0.01M，pH 7.4)水化薄膜，以超声波细胞粉碎机处理后，依次挤压通过0.45、0.22μm微孔滤膜，即得。
进一步的，药物：磷脂：胆固醇：化合物A的摩尔比为：1:1～15:1～3:0.5～3。
进一步的，所述的磷脂是指大豆卵磷脂SPC、豆磷脂、氢化磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、甘油磷脂酸中的任一种。
该pH敏感性以及主动靶向性的脂质体的制备方法，其特征为：所述的有机溶剂为甲醇、氯仿中的任一单一溶剂或者两者的混合溶剂。
本发明与现有技术相比的有益效果是：
1、本发明是为了克服现有技术的不足而提供的一种具有pH敏感性以及主动靶向性功能材料，该功能材料具有良好的水溶性，良好的生物相容性和生物降解性，毒性低，可以在pH 较低的肿瘤微酸环境中，被肿瘤细胞的溶酶体、核内体吞噬，从而释放出携带的药物。可以增加药物的生物利用度，降低毒副作用。
2、本发明的具有pH敏感性以及主动靶向性功能材料的制备方法，原料廉价易得，叶酸的羧基直接与NH2-PEOZ-CHMC裸露的氨基进行偶联，制备过程操作简单、反应条件温和，环境友好。
3、本发明的具有pH敏感性以及主动靶向性功能材料制备的脂质体可以提高载药量，还可以主动靶向于叶酸受体，对乳腺癌等叶酸受体高表达的癌症具有很好的应用前景。
4、本发明的具有pH敏感性以及主动靶向性功能材料制备的脂质体可以改善肿瘤纤维化环境，使药物更好地发挥疗效。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明 进一步说明：
图1是化合物A的红外光谱图。
图2是化合物A的1H-NMR图。
图3是实施例5粒径分布图。
图4是化合物A在生物体内安全性评价的小鼠脏器H&E染色结果图。
图5是解剖荷瘤小鼠的肿瘤照片。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
1、叔丁氧羰基-氨基-2-乙基-2-噁唑啉(Boc-NH-PEOZ-OH)的合成
将洗净的仪器于80℃烘干，趁热组装，反应体系抽真空充N2。在N2保护下，加入经分子筛无水处理的2-乙基-2-噁唑啉(EOZ)(20mmol)和引发剂叔丁氧羰基-十八烷基三氯硅烷(Boc-OTS)(1mmol)，溶于20mL乙腈中。在N2保护下，于10min内迅速升温至80℃搅拌24h，降至常温，加入10mL氢氧化钾/甲醇溶液(0.1M)终止反应，继续反应12h引入端羟基(-OH)。结束反应，以60-100目粗硅胶过滤除去小分子杂质，旋转蒸发除去滤液，得到淡黄色粘稠液体，再将其滴加至25mL冰乙醚中并不断搅拌，至产生沉淀物后弃去冰乙醚，真空干燥24h，得到Boc-NH-PEOZ-OH的白色晶体颗粒。
2、叔丁氧羰基-氨基-2-乙基-2-噁唑啉-胆固醇碳酸甲酯(Boc-NH-PEOZ-CHMC)的合成
取Boc-NH-PEOZ-OH(0.8mmol)放入避光的三口瓶中，抽真空充N2条件下加入4-二甲氨基吡啶(DMAP)(0.4mmol)和三乙胺(TEA)(1.08mmol)，冰浴条件下缓慢滴加含有胆固醇甲酰氯(CHM)(1.2mmol)的乙腈溶液20mL，冰浴1h后，撤掉冰浴，室温继续反应24h终止反应。将粗产物缓慢倒入分液漏斗中，1M盐酸连续洗涤3次，然后以饱和碳酸氢钠调pH至中性，最后以去离子水洗涤3次，无水硫酸镁进行干燥，采用柱层析进行分离提纯，真空干燥24h得到Boc-NH-PEOZ-CHMC白色晶体。
3、氨基-聚(2-乙基-2-噁唑啉)-胆固醇碳酸甲酯(NH2-PEOZ-CHMC)的合成
在冰浴条件下将三氟乙酸(27mmol)滴加至10mL含有2g Boc-NH-PEOZ-CHMC(1mmol)的DCM中，搅拌反应2h后，将反应液滴入适量冰乙醚中沉淀，收集沉淀，将得到的产物真空干燥备用。
4、化合物A的制备
取叶酸加入到N、N-二甲基甲酰胺溶液中，搅拌使其溶解，制成浓度为100mg/ml的溶液。
另取氨基-聚(2-乙基-2-噁唑啉)-胆固醇碳酸甲酯(NH2-PEOZ-CHMC)0.33mmol溶于N、N-二甲基甲酰胺溶液10ml中。
将叶酸溶液按照叶酸：NH2-PEOZ-CHMC摩尔比为47:1的比例滴加入NH2-PEOZ-CHMC溶液中。同时加入三乙胺9.88mmol，26℃条件下搅拌12小时。
向反应溶液中加入大量乙醚，并过滤，回收乙醚，并用透析袋(MWCO:1kDa)透析24h，将透析完毕的液体冷冻干燥得到疏松黄色粉末状，既得化合物A。
实施例2
步骤1-3同实施例1。
4、化合物A的制备
取叶酸加入到二甲基亚砜溶液中，搅拌使其溶解，制成浓度为150mg/ml的溶液。
另取NH2-PEOZ-CHMC 0.33mmol溶于二甲基亚砜溶液10ml中。
将叶酸溶液按照叶酸：NH2-PEOZ-CHMC摩尔比为50:1的比例滴加入NH2-PEOZ-CHMC溶液中。同时加入三乙胺11.3mmol，20℃条件下搅拌12小时。
向反应溶液中加入大量丙酮，并过滤，回收部分丙酮，采用柱层析进行分离提纯，真空干燥24h得到疏松黄色粉末状，既得化合物A。
实施例3
步骤1-3同实施例1。
4、化合物A的制备
取叶酸加入到酚吡啶溶液中，搅拌使其溶解，制成浓度为90mg/ml的溶液。
另取NH2-PEOZ-CHMC 0.33mmol溶于酚吡啶溶液10ml中。
将叶酸溶液按照叶酸：NH2-PEOZ-CHMC摩尔比为30:1的比例滴加入NH2-PEOZ-CHMC溶液中。同时加入三乙胺7.52mmol，16℃条件下搅拌12小时。
向反应溶液中加入大量氯仿，并过滤，回收部分氯仿，并用透析袋(MWCO:1kDa)透析 24h，将透析完毕的液体冷冻干燥得到疏松黄色粉末状，既得化合物A。
实施例4
步骤1-3同实施例1。
4、化合物A的制备
取叶酸加入到甲基吡咯烷酮溶液中，搅拌使其溶解，制成浓度为170mg/ml的溶液。
另取NH2-PEOZ-CHMC0.33mmol溶于甲基吡咯烷酮溶液10ml中。
将叶酸溶液按照叶酸：NH2-PEOZ-CHMC摩尔比为22:1的比例滴加入NH2-PEOZ-CHMC溶液中。同时加入三乙胺19.32mmol，22℃条件下搅拌12小时。
向反应溶液中加入大量乙醚，并过滤，回收部分乙醚，并用透析袋(MWCO:1kDa)
透析24h，将透析完毕的液体冷冻干燥得到疏松黄色粉末状，既得化合物A。
应用例1
具有pH敏感性以及主动靶向性的人参皂苷Rg3(G-Rg3)脂质体的制备
仪器
FA1204B电子天平(精密科学仪器有限公司，上海)
UV-1200紫外可见分光光度计(美普达仪器有限公司，上海)
JY92-2D超声波细胞粉碎机(新芝生物科技股份有限公司，宁波)
BCD-215TS海尔冰箱(海尔集团有限公司，青岛)
KQ5200B型高功率数控超声波清洗器(超声仪器有限公司，昆山)
LC-100高效液相色谱仪(伍峰科学仪器有限公司，上海)
SC-05离心机(中科中佳科学仪器有限公司，安徽)
移液枪(Thermo Fisher Scientific，上海)
试药与试剂
胆固醇(Biosharp，日本)
大豆卵磷脂SPC(艾韦特医药科技有限公司，上海)
氯仿、甲醇(分析纯，科密欧化学试剂有限公司，天津)
PBS缓冲液(索莱宝科技有限公司，北京)
制备方法
按照G-Rg3：大豆卵磷脂SPC：胆固醇：化合物A的摩尔比例为：1:10:1.3:1.6称取物料，放入梨形瓶中。以适量甲醇和氯仿(3:2，v:v)混合溶液充分溶解，于40℃真空减压旋转蒸发除去有机溶剂，形成脂质薄膜，真空干燥4h，加入PBS缓冲液(0.01M，pH 7.4)水化薄膜，以超声波细胞粉碎机处理8min(超声工艺为200w×2min，400w×2min，600w×4 min)后，依次挤压通过0.45、0.22μm微孔滤膜，即得具有PH敏感性以及主动靶向性的G- Rg3脂质体。
应用例2
具有pH敏感性以及主动靶向性的紫杉醇脂质体的制备
按照紫杉醇：氢化磷脂：胆固醇：化合物A的摩尔比例为：1:4:1.2:0.6称取物料，放入梨形瓶中。以适量氯仿溶液充分溶解，于40℃真空减压旋转蒸发除去有机溶剂，形成脂质薄膜，真空干燥6h，加入PBS缓冲液(0.01M，pH 7.4)水化薄膜，以超声波细胞粉碎机处理10min(超声工艺为200w×3min，400w×3min，600w×4min)后，依次挤压通过0.45、0.22 μm微孔滤膜，即得具有PH敏感性以及主动靶向性的紫杉醇脂质体。
应用例3
具有pH敏感性以及主动靶向性的喜树碱脂质体的制备
按照喜树碱：磷脂酰乙醇胺：胆固醇：化合物A的摩尔比例为：1:13.2.:1.2:2.8称取物料，放入梨形瓶中。以适量甲醇溶液充分溶解，于40℃真空减压旋转蒸发除去有机溶剂，形成脂质薄膜，真空干燥5h，加入PBS缓冲液(0.01M，pH 7.4)水化薄膜，以超声波细胞粉碎机处理16min(超声工艺为200w×4min，400w×4min，600w×8min)后，依次挤压通过0.45、0.22μm微孔滤膜，即得具有PH敏感性以及主动靶向性的紫杉醇脂质体。
试验例1
化合物A的IR和1H-NMR分析
红外灯下取适量实施例1制备的化合物A，以新烘干的溴化钾1:100比例混合压片后，采用IR测定红外吸收。由结果可知：产物在3300cm-1处出现一宽峰(氨基，-NH2)特征峰，同时兼具1210cm-1(羧酸，C-O)，1700cm-1(羧酸，C＝O)，
1190cm-1(酯基，C-O)，1740cm-1(酯基，C＝O)，1420cm-1(酰胺，C-N)，1580cm-1(酰胺，-NH)和1630cm-1(酰胺，C＝O)等特征峰。
称取适量实施例1制备的化合物A样品于核磁管中，加入适量氘代DMSO，待样品溶解完全后利用1H-NMR测定物质中各种氢原子的化学位移。由试验结果可知，1H NMR(500MHz, DMSO，δppm)：8.66(d,J＝10.3,1H，H-a)，7.99-7.83(m,1H，H-b)，7.64(d,J＝8.7,2H，H- c)，6.63(dd,J＝14.2,8.8,2H，H-d)，5.56(d,J＝7.9,2H，H-i)，4.48(d,J＝6.1,1H，H-e)，4.33(s, 1H，H-f)，3.71-3.13(m,171H，H-g)，2.30(m,98H，H-h)，1.11-0.74(m,131H，H-i)。
综合IR和1H-NMR结果，证明成功合成了化合物A。
试验例2
脂质体基本形态的考察
对所有应用例1～3制得的pH敏感性以及主动靶向性的脂质体进行质量评价，将应用例 1所得的粒径制备为粒径分布图，所述分布图见图3；应用例2与应用例3所得结果相似。质量评价结果见下表1。
表1应用例1-应用例3制备的脂质体质量评价结果
Figure BDA0003614994530000081
实验结论表明，本发明制备的pH敏感性以及主动靶向性的脂质体为半透明状态，具有淡黄色乳光的液体；当Zeta电位绝对值>30mv时，表明脂质体具有良好的稳定性，且Zeta电位绝对值越高稳定性越好，本发明制得的脂质体电位在-31.9mv～-35.4mv之间，稳定性优异；本发明制得脂质体粒径在97.95nm～102.45nm，粒径较小且分布集中，适合用作给药的载体。
试验例3
pH敏感性以及主动靶向性的Rg3脂质体的EE和储存稳定性的测定
移取脂质体，缓慢加至凝胶柱顶端，静置10min，以2000g离心力离心30min，收集滤液，甲醇定容至2mL容量瓶中，涡旋混匀，HPLC测定药物浓度，记为C1。另移取100μL 脂质体，甲醇定容至2mL容量瓶中，涡旋混匀，利用HPLC测定药物含量，记为C0。根据下面的公式计算制剂的EE。
Figure BDA0003614994530000082
将脂质体置于4℃冰箱内保存，分别于第1、3、5、7天检测药物含量，并利用公式计算脂质体的EE。并通过紫外-可见分光度法于400nm处检测脂质体的浊度，按公式计算浊度变化率(Turbidity Change，TC)。
Figure BDA0003614994530000083
其中，An代表第n天脂质体浊度；A0代表脂质体的初始浊度。
利用葡聚糖凝胶微柱离心-HPLC法测得第一天的普通Rg3脂质体和应用例1脂质体的 EE分别为(89.12±2.11)％和(90.07±1.70)％(n＝3)，二者EE无显著差别且均超过80％。连续几天测定普通Rg3脂质体和应用例1脂质体的包封率和浊度如下表2所示，结果表明随着储存时间的增加，普通Rg3脂质体开始变得浑浊，EE也有所下降，这可能是因为包封的药物泄漏导致，与应用例1脂质体相比，普通Rg3脂质体的浊度变化率增加更为显著(P<0.01)，说明化合物A能在一定程度上增强脂质体的稳定性。
表2普通Rg3脂质体和应用例1脂质体的稳定性(n＝3)比较
Figure BDA0003614994530000091
注：ns表示无显著性差异，普通Rg3脂质体和实施例5组EE比较：*表示P<0.05，**表示P<0.01，普通Rg3脂质体和实施例5组TC比较：#表示P<0.05，##表示P<0.01。
试验例4
CCK-8法考察应用例1脂质体的细胞毒性
将4T1细胞以每孔5×103个细胞的密度接种于96孔板中，于培养箱中培养24h，除掉孔板中原有培养基，更换新的培养基，然后依次加入浓度为0.5、5、25、50、100、200μg/mL的应用例1脂质体、Rg3普通脂质体、Rg3药物溶液，未加药的培养基孔作为空白对照，然后将96孔板置于培养箱中孵育24h。每孔加入10μL CCK-8溶液，继续孵育4h。利用酶标仪在450nm波长。测定各组吸光度值，根据公式计算细胞存活率：
Figure BDA0003614994530000092
其中，A加药表示具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液孔的吸光度，A0加药表示具有细胞、CCK- 8溶液无药物溶液孔的吸光度，A空白表示具有培养基和CCK-8溶液无细胞孔的吸光度。试验结果见下表3。
表3经过三组制剂孵育的4T1细胞的IC50值(n＝3)
Figure BDA0003614994530000093
注：ns表示无显著性差异，Rg3药物溶液组与Rg3普通脂质体和实施例5组比较：*表示P<0.05，** 表示P<0.01，Rg3普通脂质体组与实施例5组比较：#表示P<0.05，##表示P<0.01。
试验结果表明，Rg3普通脂质体对细胞的IC50值显著低于Rg3药物溶液(P<0.05)，而应用例1脂质体对细胞的IC50值显著低于Rg3药物溶液和Rg3普通脂质体组(P<0.01)，体现出脂质体对4T1细胞具有很好的抑制作用，且化合物A能赋予脂质体一定的主动靶向性，表现出更强的细胞抑制作用。
试验例5
化合物A在生物体内安全性评价
给药方案
将9只雌性BALB/c小鼠随机分为应用例1脂质体溶液组、Rg3溶液组和空白对照组，分别按照G-Rg3药物浓度为50mg/kg尾静脉注射应用例1脂质体溶液和Rg3溶液，空白对照组注射等体积生理盐水，隔天给药，连续给药6次。
石蜡切片的制作
在最后一次给药两天后处死小鼠，迅速取出心、肝、脾、肺、肾，利用4％多聚甲醛固定，然后依次经过75％乙醇、85％乙醇、90％乙醇、95％乙醇、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ梯度脱水，再经过二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ透明后浸蜡包埋，将包埋好的石蜡块用切片机切成5μm的薄片贴于防脱载玻片上。
H&E染色
将制作好的石蜡切片置于37℃烘箱中过夜，依次经过二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ、95％乙醇、90％乙醇、85％乙醇、75％乙醇、蒸馏水脱蜡水化。将切片以苏木素染液染色数分钟，自来水冲洗5s，分化液分化5s后立即以自来水冲洗20s洗去分化液，反蓝液反蓝1min左右，立即用自来水冲洗20s，洗去反蓝液，伊红染色1min左右，自来水冲洗5s。
切片的观察
将染好的切片依次经过75％乙醇、85％乙醇、90％乙醇、95％乙醇、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ梯度脱水，再经过二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ透明，使用中性树胶封片。将制作好的切片置于显微镜下观察并拍照。
试验结果
给药后的小鼠脏器模型石蜡切片在显微镜下放大十倍观察拍照，如图3所示，注射应用例1脂质体对小鼠的心、肝、脾、肺、肾都没有明显的损伤，因此给药方案合理，化合物A在生物体内具有一定的安全性。
试验例6
应用例1脂质体的抗肿瘤实验
肿瘤模型的建立
取对数生长期4T1细胞，皮下接种于雌性BALB/c小鼠右侧第四乳房脂肪垫处，每只小鼠接种数量为1×107个细胞，接种体积为50μL。待接种4T1肿瘤大约一周后，小鼠接种处有明显的结节长出，建模成功，随即开始对小鼠进行分组治疗。
给药方案
将TNBC荷瘤小鼠随机分为应用例1脂质体溶液组、Rg3溶液组和空白对照组，每组4只，分别按照G-Rg3药物浓度为50mg/kg尾静脉注射应用例1脂质体溶液、Rg3溶液，空白对照组注射等体积生理盐水，隔天给药，连续给药6次。隔天记录小鼠体重变化情况。最后一次给药两天后，处死小鼠，将小鼠肿瘤取出并拍照。
表4小鼠体重平均值变化情况表(g，n＝4)
时间 应用例1脂质体溶液 Rg3溶液 空白对照组
第8天 24.3 24.7 24.6
第10天 24.2 24.2 24.0
第12天 24.1 23.7 23.4
第14天 24.2 23.5 22.8(1只死亡)
第16天 24.0 22.4 21.3
第18天 23.8 21.6(2只死亡) 19.5
第20天 23.8 20.2 18.5
试验结果：给药后记录小鼠体重变化所示，与各组初始体重相比，应用例1组体重没有显著的变化，Rg3溶液和空白对照组都出现了体重显著降低的情况，这是因为肿瘤的迅速生长使小鼠的生存质量降低。空白对照组和Rg3溶液组小鼠在治疗过程中均出现毛发光泽变暗淡，和不同程度小鼠死亡的情况，这可能是由于肿瘤的恶性增殖对小鼠的生存造成影响较大。在治疗过程中Rg3溶液组小鼠尾部均出现不同程度的损伤，这可能是由于Rg3溶液直接给药且剂量较大的情况下带来的不良反应，而应用例1脂质体组没有出现小鼠死亡情况，小鼠尾部始终保持良好状态，说明以脂质体形式给药不但有更显著的抑瘤作用，还能降低药物的毒副作用，是一种更为安全的给药形式。第20天解剖荷瘤小鼠肿瘤照片如图5所示，与空白对照组相比，应用例1脂质体组和Rg3溶液组肿瘤质量均有减少，其中应用例1脂质体组更为显著，说明应用例1脂质体具有良好的抑制TNBC作用。
以上所述实施方式仅为本发明的优选实施例，而并非本发明可行实施的全部实施例。对于本领域一般技术人员而言，在不背离本发明原理和精神的前提下对其所作出的任何显而易见的改动，都应当被认为包含在本发明的权利要求保护范围之内。

Claims (10)

1.一种具有pH敏感性以及主动靶向性功能材料，其特征是，为通式(I)所示化合物A：”
Figure FDA0004181078280000011
其中n大于2。
2.如权利要求1所述的一种具有pH敏感性以及主动靶向性功能材料的制备方法，其特征是，制备步骤具体如下所示：
Figure FDA0004181078280000012
S1.将叶酸加入到有机溶剂中，搅拌使其溶解，形成一定浓度的叶酸溶液；
S2.另取NH2-PEOZ-CHMC溶于有机溶剂；得到NH2-PEOZ-CHMC溶液；
S3.将步骤S1得到的叶酸溶液加入到步骤S2得到的NH2-PEOZ-CHMC溶液中，同时加入三乙胺，15～26℃条件下搅拌12小时；
S4.向步骤S3中加入不良试剂，之后过滤，精制，干燥，得到通式(I)所示化合物A；
进一步的，步骤S1和步骤S2中所述的有机溶剂为：二甲基亚砜、二氯甲烷、N、N-二甲基甲酰胺、N、N-二甲基乙酰胺、乙腈、乙醇、醋酸、甲基吡咯烷酮、酚吡啶中的任一种或两种以上。
3.如权利要求2所述的一种具有pH敏感性以及主动靶向性功能材料的制备方法，其特征是，步骤S1所述的形成叶酸溶液的浓度为10～200mg/ml。
4.如权利要求3所述的一种具有pH敏感性以及主动靶向性功能材料的制备方法，其特征是，步骤S3中按照叶酸：NH2-PEOZ-CHMC摩尔比1～50：1的比例加入。
5.如权利要求4所述的一种具有pH敏感性以及主动靶向性功能材料的制备方法，其特征是，步骤S4中的不良试剂为丙酮、苯、甲苯、乙醚、氯仿中的任一种或两种以上。
6.如权利要求1所述的pH敏感性以及主动靶向性功能材料的用途，其特征是，制备具有pH敏感性以及主动靶向性的脂质体。
7.如权利要求6所述的pH敏感性以及主动靶向性功能材料的用途，其特征是，其制备方法具体为：称取药物、磷脂、胆固醇和化合物A，放入梨形瓶中，以适量有机溶剂充分溶解，于40℃真空减压旋转蒸发除去有机溶剂，形成脂质薄膜，真空干燥后，加入PBS缓冲液水化薄膜，以超声波细胞粉碎机处理后，依次挤压通过0.45、0.22μm微孔滤膜，即得。
8.如权利要求7所述的pH敏感性以及主动靶向性功能材料的用途，其特征是，药物：磷脂：胆固醇：化合物A的摩尔比为：1:1～15:1～3:0.5～3。
9.如权利要求7所述的pH敏感性以及主动靶向性功能材料的用途，其特征是，所述的磷脂是指大豆卵磷脂SPC、氢化磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、甘油磷脂酸中的任一种。
10.如权利要求7所述的pH敏感性以及主动靶向性功能材料的用途，其特征是，所述的有机溶剂为甲醇、氯仿中的任一单一溶剂或者两者的混合溶剂。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101264057A (zh) * 2008-04-29 2008-09-17 上海微纳科技有限公司 pH敏感长循环脂质体组合物及其制备方法
CN101708335A (zh) * 2008-10-06 2010-05-19 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 pH敏感树枝状聚合物药物载体
CN106075459A (zh) * 2016-06-14 2016-11-09 东华大学 一种叶酸靶向的多功能超支化聚乙烯亚胺负载阿霉素的方法
CN114042043A (zh) * 2021-11-26 2022-02-15 河南中医药大学 一种雷公藤甲素线粒体靶向脂质体及其应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8263664B2 (en) * 2002-05-19 2012-09-11 University Of Utah Research Foundation pH-sensitive polymeric micelles for drug delivery

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101264057A (zh) * 2008-04-29 2008-09-17 上海微纳科技有限公司 pH敏感长循环脂质体组合物及其制备方法
CN101708335A (zh) * 2008-10-06 2010-05-19 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 pH敏感树枝状聚合物药物载体
CN106075459A (zh) * 2016-06-14 2016-11-09 东华大学 一种叶酸靶向的多功能超支化聚乙烯亚胺负载阿霉素的方法
CN114042043A (zh) * 2021-11-26 2022-02-15 河南中医药大学 一种雷公藤甲素线粒体靶向脂质体及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
透明质酸修饰纳米胶束用于靶向肿瘤治疗及药物释放行为的研究进展;孙晓峰;刘涛;凌芸;陈正炜;潘梓浩;徐子特;罗令;;中国药科大学学报(06);全文 *

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