CN113429456B - 多肽衍生物钌类络合物及其制备方法和应用 - Google Patents

多肽衍生物钌类络合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了多肽衍生物钌类络合物及其制备方法和应用，属于生物医药技术领域。本发明中钌类络合物能够靶向肿瘤细胞和血小板表面高表达的整合素受体，对肿瘤细胞具有选择性的杀伤作用，并能促进药物(即所述钌类络合物)进入肿瘤细胞；在体内实验中，采用BABL/C Nude小鼠A549荷瘤模型评价了钌类络合物对原发肿瘤以及肿瘤转移的抑制作用，采用ICP‑MS测定了其在生物体内的分布，对肿瘤组织进行免疫组化和免疫荧光分析，采用大鼠颈外动脉体外循环模型评价了钌类络合物抗动脉血栓的活性。结果显示，本发明中钌类络合物对原发肿瘤以及肿瘤转移均具有抑制作用，且生物活性高，同时能够剂量依赖性的抑制动脉血栓的形成。

Description

多肽衍生物钌类络合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及多肽衍生物钌类络合物及其制备方法和应用。
背景技术
随着肿瘤发病率的逐年增加，抗肿瘤药物的研发受到越来越多的重视。顺铂是一种临床上广为应用的金属络合物抗肿瘤药物，但是其具有严重的肝肾毒性。除了铂类抗肿瘤药物之外，钌基金属络合物由于其独特的生物化学特征，在过去几十年中得到了大量研究，一些钌金属络合物，如NAMI-A(Pelillo,C.；Mollica,H.；Eble,J.A.；Grosche,J.；Herzog,L.；Codan,B.；Sava,G.；Bergamo,A.Inhibition of adhesion,migration and ofα5β1integrin in the HCT-116colorectal cancer cells treated with the rutheniumdrug NAMI-A.J.Inorg.Biochem.2016,160,225-235)和KP1339(Trondl,R.；Heffeter,P.；Kowol,C.R.；Jakupec,M.A.；Berger,W.；Keppler,B.K.NKP-1339,the first ruthenium-based anticancer drug on the edge to clinical application.Chem.Sci 2014,5,2925-2932)，已经证实有抑制肿瘤转移的作用，但对原发肿瘤没有抑制作用，且生物活性仍有待提高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种多肽衍生物钌类络合物及其制备方法和应用，本发明提供的多肽衍生物钌类络合物能够靶向肿瘤细胞及血小板表面的整合素受体，对原发肿瘤以及肿瘤转移均具有抑制作用，且生物活性高。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种多肽衍生物钌类络合物，具有式I所示结构：
Figure BDA0003112000310000021
本发明提供了上述技术方案所述多肽衍生物钌类络合物的制备方法，包括以下步骤：
将具有式a所示结构的配体化合物、顺式-二氯双(2,2'-联吡啶)钌、乙醇和水混合后进行络合反应，得到具有式I所示结构的多肽衍生物钌类络合物；
Figure BDA0003112000310000022
优选地，所述具有式a所示结构的配体化合物与顺式-二氯双(2,2'-联吡啶)钌的摩尔比为1：1；所述顺式-二氯双(2,2'-联吡啶)钌、乙醇和水的用量比为0.1mmol：(8～12)mL：(8～12)mL。
优选地，所述络合反应的温度为15～35℃，时间为20～30h。
优选地，所述具有式a所示结构的配体化合物的制备方法，包括以下步骤：
将具有式b所示结构的配体化合物、1-羟基苯并三唑、二环己基碳二亚胺与四氢呋喃混合，进行活化处理，得到第一料液；
Figure BDA0003112000310000031
将R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl与四氢呋喃混合，采用N-甲基吗啡啉调节所得混合物的pH值为7.8～8.2，得到第二料液；
将所述第一料液与第二料液混合，采用N-甲基吗啡啉调节所得混合物的pH值为7.8～8.2，进行缩合反应，得到KQ-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl；
将所述KQ-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl、钯碳与甲醇混合，在H2存在条件下进行还原反应，得到具有式a所示结构的配体化合物。
优选地，所述R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl的制备方法，包括以下步骤：
将Boc-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl与HCl的乙酸乙酯溶液混合，进行水解反应，得到R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl。
优选地，所述具有式b所示结构的配体化合物的制备方法，包括以下步骤：
将色氨酸甲酯和喹啉-2-甲醛混合，在三氟乙酸作用下进行Pictet-Spengler反应，得到混合中间产物；所述混合中间产物包括未氧化产物和第一氧化产物；将所述未氧化产物进行脱氢氧化反应，得到第二氧化产物，将所述第一氧化产物和第二氧化产物合并，作为第二中间产物；
将所述第二中间产物进行水解反应，得到具有式b所示结构的配体化合物。
本发明提供了上述技术方案所述多肽衍生物钌类络合物在制备抗肿瘤药物、抗肿瘤转移药物或抗血栓药物中的应用。
优选地，所述肿瘤包括肝癌或肺癌。
优选地，所述血栓为动脉血栓。
本发明提供了一系列多肽衍生物钌类络合物，本发明提供的多肽衍生物钌类络合物，对原发肿瘤以及肿瘤转移均具有抑制作用，且生物活性高。本发明提供的钌类络合物能够靶向肿瘤细胞和血小板表面高表达的整合素受体，对肿瘤细胞具有选择性的杀伤作用，能够在体外形成比较稳定的球状纳米分子，并能促进药物(即所述钌类络合物)进入肿瘤细胞；在体内实验中，采用BABL/CNude小鼠A549荷瘤模型评价了钌类络合物对原发肿瘤以及肿瘤转移的抑制作用，并且利用ICP-MS测定了其在生物体内的分布，对肿瘤组织进行免疫组化和免疫荧光分析；此外，还运用大鼠颈外动脉体外循环模型评价了钌类络合物抗动脉血栓的活性。结果显示，本发明提供的钌类络合物在生物体内能够抑制原发瘤的生长，并且能够抑制肿瘤在肺上的转移，同时能够剂量依赖性的抑制动脉血栓的形成。
本发明提供的具有式I所示结构的钌络合物修饰有RGD肽，RGD肽是一类含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)的短肽，是细胞表面整合素受体与其配体相互作用的识别位点，能够介导细胞与细胞外基质及细胞之间的相互作用。肿瘤细胞特异表达αvβ3等整合素，血小板表面能够特异性表达αIIbβ3，因此，RGD肽可以作为载体在肿瘤靶向治疗以及血栓靶向治疗中发挥重要作用。本发明中用RGD肽修饰钌类络合物，用MTT法测定其对不同肿瘤细胞和正常细胞的细胞毒作用，结果显示本发明提供的钌类络合物对肿瘤细胞具有选择性的杀伤作用，为了探索其作用机制，用激光共聚焦显微镜对其肿瘤细胞摄取情况进行测定，发现其能够促进药物(即所述钌类络合物)进入肿瘤细胞；在体内实验中，采用A549小鼠肿瘤模型评价了钌类络合物对原发肿瘤的抑制作用和对肺癌的抗转移作用，并且利用ICP-MS测定了其在生物体内的分布，结果显示，本发明提供的钌类络合物在生物体内能够抑制原发瘤的生长，并且能够抑制肿瘤在肺上的转移。此外，采用大鼠颈外动脉循环模型评价了钌类络合物对动脉血栓的抑制作用，发现钌类络合物能够剂量依赖性的抗动脉血栓的形成，并且活性优于相应的配体化合物。
附图说明
图1为测试例2中A549细胞中配体BF以及络合物BF-Ru的荧光强度图；
图2为测试例2中A549细胞中配体KQ以及络合物KQ-Ru的荧光强度图；
图3为测试例2中A549细胞中配体KS以及络合物KS-Ru的荧光强度图；
图4为测试例3中各受试化合物在细胞内分布图；
图5为测试例4中各受试化合物的免疫荧光染色结果图。
具体实施方式
本发明提供了一种多肽衍生物钌类络合物，具有式I所示结构：
Figure BDA0003112000310000051
本发明提供了上述技术方案所述多肽衍生物钌类络合物的制备方法，包括以下步骤：
将具有式a所示结构的配体化合物、顺式-二氯双(2,2'-联吡啶)钌、乙醇和水混合后进行络合反应，得到具有式I所示结构的多肽衍生物钌类络合物；
Figure BDA0003112000310000052
在本发明中，若无特殊说明，所用制备原料均为本领域技术人员熟知的市售商品。
本发明将具有式a所示结构的配体化合物(记为配体KS)、顺式-二氯双(2,2'-联吡啶)钌、乙醇和水混合后进行络合反应，得到具有式I所示结构的多肽衍生物钌类络合物。在本发明中，所述配体KS与顺式-二氯双(2,2'-联吡啶)钌的摩尔比优选为1：1，所述顺式-二氯双(2,2'-联吡啶)钌、乙醇与水的用量比优选为0.1mmol：(8～12)mL：(8～12)mL，更优选为0.1mmol：10mL：10mL。本发明对配体KS、顺式-二氯双(2,2'-联吡啶)钌、乙醇和水的混合方式没有特殊限定，保证各组分混合均匀即可，具体可以将各组分混合后超声溶解，之后再进行所述络合反应。在本发明的实施例中，所述顺式-二氯双(2,2'-联吡啶)钌具体为顺式-二氯双(2,2'-联吡啶)钌二水合物。
在本发明中，所述络合反应的温度优选为15～35℃，更优选为20～25℃，具体可以在室温条件下进行所述络合反应，在本发明的实施例中，所述室温具体为25℃；所述络合反应的时间优选为20～30h，更优选为24h。
所述络合反应后，本发明优选将所得产物体系旋转蒸发至干，残余物经中性氧化铝柱层析，得到具有式I所示结构的多肽衍生物钌类络合物(记为络合物KS-Ru)。在本发明中，进行所述中性氧化铝柱层析所用试剂优选为二氯甲烷-甲醇混合试剂，所述二氯甲烷和甲醇的体积比优选为50：1。
在本发明中，所述配体KS的制备方法，优选包括以下步骤：
将具有式b所示结构的配体化合物、1-羟基苯并三唑、二环己基碳二亚胺与四氢呋喃混合，进行活化处理，得到第一料液；
Figure BDA0003112000310000061
将R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl与四氢呋喃混合，采用N-甲基吗啡啉调节所得混合物的pH值为7.8～8.2，得到第二料液；
将所述第一料液与第二料液混合，采用N-甲基吗啡啉调节所得混合物的pH值为7.8～8.2，进行缩合反应，得到KQ-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl；
将所述KQ-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl、钯碳与甲醇混合，在H2存在条件下进行还原反应，得到配体KS。
本发明将具有式b所示结构的配体化合物(记为配体KQ)、1-羟基苯并三唑(HOBt)、二环己基碳二亚胺(DCC)与四氢呋喃混合，进行活化处理，得到第一料液。在本发明中，所述配体KQ、HOBt与DCC的摩尔比优选为0.23：(1.8～2.1)：(1.8～2.1)，更优选为0.23：(1.9～2.0)：(1.9～2.0)。在本发明中，所述四氢呋喃作为反应溶剂，用量没有特殊限定，保证活化处理顺利进行即可。在本发明中，所述配体KQ、HOBt、DCC与四氢呋喃混合，优选是将配体KQ、HOBt与部分四氢呋喃在冰浴(0℃)条件下混合，之后与DCC的四氢呋喃(即剩余四氢呋喃)溶液混合。在本发明中，所述活化处理优选在冰浴条件下进行，所述活化处理的时间优选为25～35min，更优选为30min；所述活化处理优选在搅拌条件下进行。
本发明将R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl与四氢呋喃混合，采用N-甲基吗啡啉(NMM)调节所得混合物的pH值为7.8～8.2，得到第二料液。在本发明中，所述四氢呋喃作为反应溶剂，用量没有特殊限定，充分溶解R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl即可。本发明优选采用NMM调节所述混合物的pH值为8。
得到第一料液和第二料液后，本发明将所述第一料液与第二料液混合，采用N-甲基吗啡啉调节所得混合物的pH值为7.8～8.2，进行缩合反应，得到KQ-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl。在本发明中，所述配体KQ与R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl的摩尔比优选为1：(0.8～1.2)，更优选为1：(1.0～1.1)。本发明优选采用NMM调节所述混合物的pH值为8。在本发明中，所述第一料液与第二料液混合，优选是在冰浴条件下，将所述第二料液加入至第一料液中。在本发明中，所述缩合反应优选在室温条件下进行；所述缩合反应的时间优选为3～5h，更优选为4h。本发明优选采用TLC监测反应进程，按体积比计，所用展开剂优选为二氯甲烷：甲醇：冰醋酸＝20：1：0.1。
所述缩合反应后，本发明优选将所得产物体系进行抽滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，得到的残余物与乙酸乙酯混合后置于分液漏斗中，之后依次用饱和NaHCO3溶液、饱和NaCl溶液、、5wt％KHSO4溶液、、饱和NaCl溶液、、饱和NaHCO3溶液和饱和NaCl溶液洗涤，将洗涤后分离出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥剂干燥，抽滤去除干燥剂，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残余物经硅胶柱层析纯化，最终所得白色粉末为KQ-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl。在本发明中，按体积比计，所述硅胶柱层析纯化所用试剂优选为石油醚：乙酸乙酯＝1：1。
得到KQ-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl后，本发明将所述KQ-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl、钯碳与甲醇混合，在H2存在条件下进行还原反应，得到配体KS。在本发明中，所述钯碳(Pd/C)作为催化剂，用量没有特殊限定，保证还原反应顺利进行即可。在本发明中，所述甲醇作为反应溶剂，用量没有特殊限定，保证还原反应顺利进行即可。在本发明中，所述还原反应优选在室温条件下进行；所述还原反应的时间优选为3～5h，更优选为4h。本发明优选采用TLC监测反应进程，按体积比计，所用展开剂优选为二氯甲烷：甲醇＝20：1。
所述还原反应后，本发明优选将所得产物体系进行过滤，以去除钯碳，滤液旋干，最终得到的白色粉末为配体KS。
在本发明中，制备配体KS的反应路线如下所示：
Figure BDA0003112000310000081
其中，ⅰ：DCC，HOBt，THF，R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl；ⅱ：H2，Pd/C。
在本发明中，所述R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl的制备方法，优选包括以下步骤：
将Boc-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl与HCl的乙酸乙酯溶液混合，进行水解反应，得到R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl。
在本发明中，所述Boc-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl优选按照文献(Wang,X.；Wang,Y.；Wu,J.；Gui,L.；Zhang,X.；Zheng,M.；Wang,Y.；Zhao,S.；Li,Z.；Zhao,M.et al.Dockingbased design ofdiastereoisomeric MTCA as GPIIb/IIIareceptor inhibitor.Bioorg.Med.Chem.Lett.2017,27,5114-5118)中方法制备得到。在本发明中，所述HCl的乙酸乙酯溶液中HCl的浓度优选为3.5～4.5mol/L，更优选为4mol/L；所述HCl的乙酸乙酯溶液的用量保证水解反应顺利进行即可。在本发明中，所述水解反应优选在室温条件下进行；所述水解反应的时间优选为3～5h，更优选为4h。本发明优选采用TLC监测反应进程，按体积比计，所用展开剂优选为二氯甲烷：甲醇＝20：1。
所述水解反应后，本发明优选采用循环水泵将所得产物体系中溶剂抽干，所得白色粉末即为R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl。
在本发明中，所述配体KQ的制备方法，优选包括以下步骤：
将色氨酸甲酯和喹啉-2-甲醛混合，在三氟乙酸作用下进行Pictet-Spengler反应，得到混合中间产物；所述混合中间产物包括氧化产物(记为第一氧化产物)和未氧化产物，将所述未氧化产物进行脱氢氧化反应，得到氧化产物(记为第二氧化产物)，将所述第一氧化产物和第二氧化产物合并，作为第二中间产物；
将所述第二中间产物进行水解反应，得到配体KQ。
本发明将色氨酸甲酯和喹啉-2-甲醛混合，在三氟乙酸作用下进行Pictet-Spengler反应，得到混合中间产物。在本发明中，所述色氨酸甲酯和喹啉-2-甲醛的摩尔比优选为1：(0.9～1.2)，更优选为1：(1.0～1.1)；所述色氨酸甲酯与三氟乙酸的用量比优选为17.3g：(18～22)mL，更优选为17.3g：20mL。在本发明中，所述Pictet-Spengler反应优选以二氯甲烷作为溶剂，所述色氨酸甲酯与二氯甲烷的用量比优选为17.3g：(180～220)mL，更优选为17.3g：200mL。
本发明优选将色氨酸甲酯溶解于二氯甲烷中，在冰浴及搅拌条件下，将三氟乙酸滴加至所得体系中，之后加入喹啉-2-甲醛，进行Pictet-Spengler反应。在本发明中，所述三氟乙酸的滴加速率优选为15～25滴/min，更优选为20滴/min，本发明优选控制其缓慢滴加，作用是防止局部pH值过小，导致色氨酸消旋。在本发明中，所述Pictet-Spengler反应的温度优选为室温；所述Pictet-Spengler反应的时间优选为20～30h，更优选为24h；在本发明的实施例中，具体是采用TLC监测反应进程，按体积比计，展开剂优选为石油醚：乙酸乙酯＝5：1，茚三酮染色后产物至淡黄色为止。
所述Pictet-Spengler反应后，本发明优选在温水浴(35～45℃)中用水泵抽去体系中的酸气，将所得产物体系用二氯甲烷洗涤2次，得到混合中间产物；采用中压制备柱对所述混合中间产物进行纯化，洗脱剂优选为乙酸乙酯-石油醚体系，按体积比计，25％乙酸乙酯比例下得到化合物1，35％乙酸乙酯比例下得到化合物2，采用质谱氢谱对所述化合物1和化合物2进行鉴定，发现化合物1为氧化产物(记为KQ-OMe，第一氧化产物)，化合物2为未氧化产物(记为4H-KQ-OMe)。
本发明将所述未氧化产物进行脱氢氧化反应，得到氧化产物(记为第二氧化产物)，将所述第一氧化产物和第二氧化产物合并，作为第二中间产物(即实际上为总氧化产物)。在本发明中，所述脱氢氧化反应优选以甲醇作为溶剂，所述甲醇的用量能够充分溶解未氧化产物即可。在本发明中，所述脱氢氧化反应优选在Pd/C催化作用下进行，所述Pd/C的质量优选为未氧化产物质量的10％。在本发明中，所述脱氢氧化反应优选在体系回流条件下进行，所述脱氢氧化反应的时间优选为8～12h，更优选为10h；在本发明的实施例中，具体是采用TLC监测反应进程，按体积比计，展开剂优选为二氯甲烷：甲醇＝20：1；经TLC监测，发现未氧化产物被氧化为氧化产物(即第二氧化产物)，将其与第一氧化产物合并，作为第二中间产物。
得到第二中间产物后，本发明将所述第二中间产物进行水解反应，得到配体KQ。在本发明中，所述水解反应优选以甲醇和二氯甲烷为溶剂，具体是将第二中间产物溶解于甲醇和二氯甲烷中，在冰浴条件下，加入NaOH溶液调节所得体系的pH值为12，之后进行水解反应。在本发明中，所述第二中间产物与甲醇、二氯甲烷的用量比优选为27.9mmol：(80～120)mL：(80～120)mL，更优选为27.9mmol：100mL：100mL；所述NaOH溶液的浓度优选为1.8～2.2mol/L，更优选为2mol/L。在本发明中，所述水解反应优选在冰浴条件下进行，所述水解反应的时间优选为10～15h，更优选为12h；在本发明的实施例中，具体是采用TLC监测反应进程，按体积比计，展开剂优选为石油醚：乙酸乙酯＝5：1。本发明优选用饱和KHSO4水溶液调节反应体系的pH值为7，使反应终止。
所述水解反应后，本发明优选旋蒸除去所得产物体系中的溶剂，得到糖浆类物质，将所述糖浆类物质与水混合，再用饱和KHSO4水溶液调节pH值为2，用乙酸乙酯萃取3次，合并每次萃取所得乙酸乙酯层，经无水硫酸钠干燥剂干燥，抽滤去除干燥剂，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，得到配体KQ。
在本发明中，制备配体KQ的反应路线如下所示：
Figure BDA0003112000310000111
其中，ⅰ：TFA，喹啉-2-甲醛，二氯甲烷；ⅱ：DDQ；ⅲ：2mol/L氢氧化钠溶液，MeOH。
本发明提供了上述技术方案所述多肽衍生物钌类络合物在制备抗肿瘤药物、抗肿瘤转移药物或抗血栓药物中的应用。在本发明中，所述肿瘤优选包括肝癌或肺癌，所述血栓优选为动脉血栓。在本发明中，所述抗肿瘤药物、抗肿瘤转移药物和抗血栓药物独立地包括活性成分和药学上可接受的辅料，所述活性成分为式I所示结构的多肽衍生物钌类络合物，所述活性成分的含量优选为1～99wt％，更优选为50～95wt％；本发明对所述药学上可接受的辅料没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的药学上可接受的辅料即可。本发明对所述抗肿瘤药物、抗肿瘤转移药物和抗血栓药物的剂型没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的剂型即可。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1制备Boc-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl
按照经典的液相缩合方法(Wang,X.；Wang,Y.；Wu,J.；Gui,L.；Zhang,X.；Zheng,M.；Wang,Y.；Zhao,S.；Li,Z.；Zhao,M.et al.Docking based design ofdiastereoisomeric MTCA as GPIIb/IIIa receptor inhibitor.Bioorg.Med.Chem.Lett.2017,27,5114-5118)，制备得到Boc-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl。
ESI/MS(m/z):754[M+H]+；1H NMR(300MHz,d6-DMSO),δ(ppm)＝
8.49(s,1H),8.27(d,J＝8.1Hz,1H),8.25(d,J＝7.9Hz,1H),8.07(t,J＝5.0Hz,1H),7.35(m,10H),6.98(d,J＝7.7Hz,1H),5.12(s,2H),5.08(d,J＝2.3Hz,2H),4.79(dt,J＝8.3Hz,5.2Hz,1H),4.38(m,1H),3.94(m,1H),3.72(d,J＝5.3Hz,2H),3.71(m,2H),3.13(dt,J＝6.6Hz,4.1Hz,1H),2.67(m,2H),1.66(m,2H),1.50(m,2H),1.38(s,9H)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6):δ(ppm)＝172.9,171.0,170.6,170.3,169.1,159.6,155.9,136.5,136.3,128.8,128.4,128.3,128.1,78.7,66.4,66.2,65.4,61.4,55.4,49.5,42.4,40.6,36.8,29.5,28.6,25.2。
实施例2制备R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl
称取2.98g(3.9mmol)Boc-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl于圆底烧瓶中，加入HCl的乙酸乙酯溶液(HCl的浓度为4mol/L)，在室温(25℃)条件下反应4h(用TLC监测反应进程，按体积比计，展开剂为二氯甲烷：甲醇＝20：1)；反应结束后，采用循环水泵将所得产物体系中溶剂抽干，得到2.68g(98.8％)目标产物，即R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl，为白色粉末。
ESI/MS(m/z):659[M+H]+。
实施例3制备KQ-OMe
量取200mL二氯甲烷于茄瓶中，加入色氨酸甲酯17.3g(79.4mmol)超声溶解，在冰浴及搅拌条件下，将20mL三氟乙酸(TFA)以20滴/min的速率缓慢滴加到茄瓶中，之后加入13.7g喹啉-2-甲醛，撤去冰浴，在室温及搅拌条件下反应24h(用TLC监测反应，按体积比计，展开剂为石油醚：乙酸乙酯＝5：1，茚三酮染色后产物至淡黄色为止)；
反应结束后，在温水浴(40℃)中用水泵抽去茄瓶中的酸气，将所得产物体系用二氯甲烷洗涤2次，每次洗涤所用二氯甲烷的体积为20mL，得到粗产物；采用中压制备柱对所述粗产物进行纯化，洗脱剂为乙酸乙酯-石油醚体系，按体积比计，25％乙酸乙酯比例下得到6.2g化合物1，35％乙酸乙酯比例下得到4.6g化合物2，采用质谱氢谱对所述化合物1和化合物2进行鉴定，发现化合物1为氧化产物KQ-OMe，化合物2为未氧化产物4H-KQ-OMe，二者都为白色固体；收集未氧化产物4H-KQ-OMe用甲醇溶解，加入10％的Pd/C，温水浴条件下回流反应10h，用TLC监测反应进程，按体积比计，展开剂为二氯甲烷：甲醇＝20：1，TLC监测发现未氧化产物4H-KQ-OMe被氧化为KQ-OMe。总计得到9.85g KQ-OMe，产率为35.2％。
KQ-OMe：ESI-MS:354[M+H]+；1H NMR(300MHz,d6-DMSO),δ(ppm)＝11.70(s,1H),8.89(d,J＝8.7Hz,1H),8.79(s,1H),8.21(d,J＝8.7Hz,1H),8.13(t,J＝8.1Hz,2H),7.79(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(t,J＝7.6Hz,1H),7.59(t,J＝8.4Hz,2H),7.53(t,J＝7.6Hz,1H),7.31(t,J＝7.1Hz,1H),4.07(s,3H)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6):δ(ppm)＝166.7,157.3,147.1,140.8,137.3,136.7,136.6,136.5,130.5,129.7,129.1,128.9,128.0,127.9,126.9,121.8,121.5,120.8,119.5,118.5,112.3,52.6。
实施例4制备配体KQ
将9.85g(27.9mmol)KQ-OMe溶于100mL二氯甲烷和100mL甲醇中，为淡黄色澄清透明溶液；在冰浴条件下，加入浓度为2mol/L的NaOH溶液，将混合物pH值调节至12，反在冰浴及搅拌条件下反应12h后，溶液变为橙黄色且有胶状物质出现(TLC监测反应进程，按体积比计，展开剂为石油醚：乙酸乙酯＝5：1)；
之后用饱和KHSO4水溶液调节反应体系的pH值为7，使反应终止；旋蒸除去所得产物体系中的二氯甲烷和甲醇，得到糖浆类物质，将所述糖浆类物质与水混合，再用饱和KHSO4水溶液调节pH值为2，用乙酸乙酯萃取3次，合并每次萃取所得乙酸乙酯层，经无水硫酸钠干燥剂干燥，抽滤去除干燥剂，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，得到7.645g(80.8％)目标产物，即配体KQ，为白色粉末。
ESI-MS(m/e):340[M+H]+.1H NMR(300MHz,d6-DMSO),δ＝1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ(ppm)＝12.80(s,1H),12.38(s,1H),9.10(s,1H),9.07(d,J＝8.7Hz,1H),8.79(d,J＝8.4Hz,1H),8.63(d,J＝8.8Hz,1H),8.50(d,J＝7.8Hz,1H),8.09(m,2H),7.93(m,1H),7.71(m,2H),7.40(t,J＝7.3Hz,1H)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6):δ(ppm)＝167.0,157.1,147.6,142.0,137.5,137.2,135.8,131.1,130.3,130.2,129.4,128.3,128.1,127.8,122.6,121.3,121.1,119.8,118.6,114.0。
实施例5制备KQ-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl
称取770mg(0.23mmol)配体KQ和269mg 1-羟基苯并三唑(HOBt)，冰浴(0℃)条件下加入到茄瓶中，并用100mL干燥THF溶解；加入由409mg二环己基碳二亚胺(DCC)和5mL THF配制而成的溶液，在冰浴以及搅拌条件下进行活化0.5h，得到A液；将167mg(0.233mmol)R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl用50mL干燥THF溶解，逐滴加入N-甲基吗啡啉(NMM)调节pH值到8，得到B液；将所述B液加入到A液中，逐滴加入NMM调节pH值到8，撤去冰浴，在室温(25℃)条件下反应4h(用TLC监测反应进程，按体积比计，展开剂为二氯甲烷：甲醇：冰醋酸＝20：1：0.1)；
反应结束后，将所得产物体系进行抽滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，得到的残余物与乙酸乙酯混合后置于分液漏斗中，之后依次用饱和NaHCO3溶液洗3次、饱和NaCl溶液洗3次、5wt％KHSO4溶液洗3次、饱和NaCl溶液洗3次、饱和NaHCO3溶液洗3次、饱和NaCl溶液洗3次，将洗涤后分离出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥剂干燥，抽滤去除干燥剂，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残余物经硅胶柱层析纯化(按体积比计，所用试剂为石油醚：乙酸乙酯＝1：1)，得到680mg(30.5％)目标化合物，即KQ-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl，为白色粉末。
ESI/MS(m/z):981[M+H]+,1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ(ppm)＝12.34(s,1H),9.04(s,1H),9.02(s,1H),9.01(s,1H),8.80(d,J＝8.5Hz,1H),8.64(d,J＝8.7Hz,1H),8.55(t,J＝5.3Hz,1H),8.47(d,J＝7.9Hz,1H),8.34(d,J＝8.2Hz,1H),8.28(d,J＝7.6Hz,1H),8.08(t,J＝4.3Hz,1H),8.06(d,J＝4.7Hz,1H),7.94(m,2H),7.72(t,J＝7.6Hz,1H),7.70(t,J＝8.0Hz,1H),7.31(m,10H),5.09(s,2H),5.05(d,J＝5.2Hz,2H),5.03(m,1H),4.82(m,1H),4.73(m,1H),4.38(m,1H),3.83(m,2H),3.70(m,2H),3.25(m,2H),2.72(m,2H),1.95(m,2H),1.66(m,2H)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6):δ(ppm)＝172.4,171.0,170.6,170.3,169.1,165.0,159.8,156.8,147.6,142.1,139.1,137.7,136.6,136.4,136.3,135.7,131.4,130.3,129.4,128.8,128.4,128.2,128.0,127.8,122.5,121.4,121.0,119.5,115.8,114.0,66.4,66.1,61.6,55.5,52.9,49.6,42.5,36.9,30.3。
实施例6制备KQ-RGDS(即配体KS)
称取196mg(0.02mmol)KQ-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl置于茄瓶中，加20mL甲醇溶解后加入40mg钯碳(Pd/C)，将反应气氛置换成H2后，在室温条件下反应4h(TLC监测反应进程，按体积比计，展开剂为二氯甲烷：甲醇＝20：1)；反应结束后过滤去除钯碳，滤液旋干，得到132mg(85.7％)目标化合物，即配体KS，为白色粉末。
ESI/MS(m/z):753[M-H]-,1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ(ppm)＝1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ(ppm)＝12.34(s,1H),9.03(s,1H),8.97(d,J＝8.7Hz,1H),8.79(d,J＝8.5Hz,1H),8.64(d,J＝8.9Hz,1H),8.49(d,J＝7.8Hz,1H),8.31(s,1H),8.06(s,1H),8.04(s,1H),7.93(t,J＝7.5Hz,1H),7.70(t,J＝7.1Hz,1H),7.69(t,J＝7.6Hz,1H),7.37(t,J＝7.5Hz,1H),4.70(m,1H),4.66(m,1H),4.35(t,J＝7.1Hz,1H),3.94(s,2H),3.82(m,2H),3.15(m,1H),3.01(m,1H),2.93(m,1H),2.61(m,1H),1.90(m,2H),1.64(m,2H)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6):δ(ppm)＝172.6,172.5,172.3,171.1,169.1,164.9,157.4,156.8,147.6,142.1,139.1,137.7,136.7,135.7,131.4,130.3,129.5,128.4,128.1,127.8,122.6,121.3,121.1,119.5,115.8,114.0,61.8,55.4,52.8,49.8,42.6,40.9,36.9,30.4,25.5。
实施例7制备络合物KS-Ru
称取76mg(0.1mmol)配体KS于茄瓶中，再加入52mg(0.1mmol)(bpy)2RuCl2(2H2O)、10mL乙醇以及10mL水，超声溶解后，在室温条件下反应24h(TLC监测反应进程，按体积比计，展开剂为二氯甲烷：甲醇＝20：1)；反应结束后，将所得产物体系旋转蒸发至干，残余物经中性氧化铝柱层析(按体积比计，洗脱剂为二氯甲烷：甲醇＝50：1)，得到80mg目标化合物，即络合物KS-Ru，为紫红色固体粉末。
ESI/MS(m/z):1169[M+H]+。
对比例1制备络合物BF-Ru
(1)制备BM-R(Tos)GD(OBzl)F-OBzl
称取321mg(1.5mmol)4'-甲基-[2,2'-联吡啶]-4-羧酸(BM)和269mg1-羟基苯并三唑(HOBt)，冰浴(0℃)条件下加入到茄瓶中，并用100mL干燥THF溶解；加入由409mg二环己基碳二亚胺(DCC)和5mLTHF配制而成的溶液，在冰浴以及搅拌条件下进行活化0.5h，得到A液；将405mg(1.65mmol)R(Tos)GD(OBzl)F-OBzl用50mL干燥THF溶解，逐滴加入N-甲基吗啡啉(NMM)调节pH值到8，得到B液；将所述B液加入到A液中，逐滴加入NMM调节pH值到8，撤去冰浴，在室温(25℃)条件下反应4h(用TLC监测反应进程，按体积比计，展开剂为二氯甲烷：甲醇：冰醋酸＝20：1：0.1)；
反应结束后，将所得产物体系进行抽滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，得到的残余物与乙酸乙酯混合后置于分液漏斗中，之后依次用饱和NaHCO3溶液洗3次、饱和NaCl溶液洗3次、5wt％KHSO4溶液洗3次、饱和NaCl溶液洗3次、饱和NaHCO3溶液洗3次、饱和NaCl溶液洗3次，将洗涤后分离出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥剂干燥，抽滤去除干燥剂，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残余物经硅胶柱层析纯化(按体积比计，所用试剂为石油醚：乙酸乙酯＝1：1)，得到809mg(52.7％)目标产物，即BM-R(Tos)GD(OBzl)F-OBzl，为白色粉末。
ESI-MS:1024[M+H]+；1H NMR(300MHz,d6-DMSO),δ(ppm)＝9.0728(d,1H,J＝7.4903Hz),8.8320(s,1H),8.7898(d,1H,J＝5.0383Hz),8.5776(d,1H,J＝4.9693,Hz),8.3901(m,1H),8.3275(m,1H),7.8555(d,1H,d,1H,J＝4.8375Hz),7.6245(d,2H,J＝8.0093Hz),7.3453(m,10H),7.2687(m,10H),6.9219(s,1H),5.0679(d,4H,J＝2.7303Hz),4.7363(d,1H,J＝5.1403Hz),4.4912(m,2H),3.7096(m,3H),3.0545(m,5H),2.7365(m,1H),2.6984(m,1H),1.7023(m,2H),1.6267(m,2H),1.5972(m,2H),1.2481(m,1H),1.0767(m,1H).13C NMR(75MHz,d6-DMSO),δ(ppm)＝172.1955,171.3988,170.8147,170.2326,169.0813,165.7239,157.1133,156.5406,155.0962,150.1551,149.5461,148.5758,142.7418,141.4659,137.3372,136.4415,136.0915,129.4943,128.7913,128.3816,126.9595,126.0222,125.7209,122.2925,121.8768,118.9179,66.5025,66.1314,54.3660,49.4747,49.0602,47.9792,36.9746,36.7214,33.8021,25.7892,24.9088,21.2444。
(2)制备BM-R(Tos)GDF(即配体BF)
将103mg(0.01mmol)BM-R(Tos)GD(OBzl)F-OBzl溶于10mL甲醇中，在冰浴条件下，加入浓度为2mol/L的NaOH溶液，将混合物pH值调节至12，之后在冰浴及搅拌条件下反应6h(TLC监测反应进程，按体积比计，展开剂为二氯甲烷：甲醇＝20：1)；
之后用KHSO4水溶液调节反应体系的pH值为7，使反应终止，将所得产物体系进行过滤，滤液经减压浓缩，得到糖浆类物质，将所述糖浆类物质与水混合，之后经过滤和干燥，得到48.6mg(57.6％)目标产物，即配体BF，为粉红色粉末。
ESI-MS(m/e):844[M+H]+.1HNMR(300MHz,d6-DMSO),δ＝9.0205(d,1H,J＝7.8034Hz),8.8205(d,1H,J＝4.3819),8.5928(d,1H,J＝4.9221Hz),8.3453(d,1H,J＝5.6274Hz),8.2775(s,1H),7.8663(d,1H,J＝5.9426Hz),7.6200(d,1H,J＝8.1035Hz),7.3335(d,1H,J＝4.8021Hz),7.2239(d,1H,J＝7.6833Hz),6.9832(d,1H,J＝45.3496Hz),6.5930(s,1H),4.5309(d,1H,J＝7.4432Hz),3.7705(d,1H,J＝2.6511),3.0815(s,1H),2.4357(s,1H),2.2816(s,4H),1.7437(m,3H),1.4957(s,3H).13C NMR(75MHz,d6-DMSO),δ(ppm)＝172.0604,171.5650,165.4519,157.1038,156.5268,155.1025,150.1909,149.5682,148.5987,142.8501,141.4372,129.4499,126.0145,125.7392,122.2989,121.8691,118.9172,53.5056,29.257,21.2217。
(3)制备络合物BF-Ru
称取84mg(0.1mmol)配体BF于茄瓶中，再加入52mg(0.1mmol)(bpy)2RuCl2(2H2O)、10mL乙醇以及10mL水，超声溶解后，在室温条件下反应24h(TLC监测反应进程，按体积比计，展开剂为二氯甲烷：甲醇＝20：1)；反应结束后，将所得产物体系旋转蒸发至干，残余物经中性氧化铝柱层析(按体积比计，洗脱剂为二氯甲烷：甲醇＝50：1)，得到95mg目标化合物，即络合物BF-Ru，为红色固体粉末。
ESI/MS(m/z):1258[M+H]+,1HNMR(300MHz,d6-DMSO),δ＝9.4201(s,1H),8.8267(s,1H),8.3719(s,5H),8.1636(s,6H),7.7934(m,3H),7.5372(m,4H),7.3867(s,8H),7.1677(m,2H),6.8840(s,3H),4.4529(m,1H),3.2950(m,2H),2.9735(s,2H),2.8886(s,1H),2.7265(s,1H),2.4936(s,4H),2.2595(s,4H),1.7692(m,3H),1.4715(m,3H),1.2340(m,1H)。
对比例2制备络合物KQ-Ru
制备方法基本同对比例1的步骤(3)，不同之处在于，将对比例1的步骤(3)中的“84mg(0.1mmol)配体BF”替换为“34mg(0.1mmol)配体化合物KQ”，最终得到25mg目标化合物，即络合物KQ-Ru，为红色固体粉末。
ESI/MS(m/z):754[M+H]+；1H NMR(300MHz,d6-DMSO),δ(ppm)＝11.3780(d,J＝41.8381,1H),9.0915(d,J＝20.1687,1H),8.7362(t,J＝7.8334,2H),8.6721(s,1H),8.5823(t,J＝8.8388,2H),8.5116(d,J＝4.0618,1H),8.2072(d,J＝9.2440,2H),8.1352(d,J＝8.2836,2H),7.8077(m,6H),7.6055(m,4H),7.4932(d,J＝8.7038,1H),7.4291(d,J＝6.7679,1H),7.1872(d,J＝6.0926,1H),7.1189(d,J＝5.3123,1H),6.9303(d,J＝5.4924,1H),6.6753(d,J＝7.3532,1H),6.3917(d,J＝6.5428,1H)。
测试例1评价钌络合物的体外抗肿瘤活性(MTT法)
将生长状态良好且处于对数生长期的贴壁细胞用PBS缓冲液洗3次，0.25％胰酶消化至大部分细胞从瓶壁脱落，加入相应培养基终止消化，沿壁吹打至细胞完全脱落，转移至15mL离心管中，于3000rpm条件下离心3min，弃去上清液，加培养基吹打重悬，计数，细胞密度为(3～4)×104个/mL，接种于96孔板中，接种时每孔加入量为100μL(96孔板外围每孔加100μL PBS缓冲液进行液封)；之后在37℃、5％CO2的孵箱中孵育4h，观察细胞贴壁情况，当贴壁率达到50％以上时给药，给药时每孔加入25μL受试样品液，轻轻晃动均匀(每板均须设置空白和阳性对照)，于37℃、5％CO2的孵箱中孵育48h后，每孔加入25μL浓度为5mg/mL的MTT溶液，继续于37℃、5％CO2的孵箱中孵育4h，吸去上清液，每孔加入150μLDMSO，振荡15min充分溶解沉淀；之后在5min内使用酶标仪于570nm和490nm波长下测定每孔OD(吸光度)值。
按照式a计算抑制率，重复三次，每次实验重复六孔，根据抑制率和受试化合物的浓度计算受试化合物的IC50(半数有效抑制浓度)值。结果见表1。
抑制率＝[(空白组的OD平均值–受试化合物组的OD平均值)/空白组的OD值]×100％式a。
表1受试化合物体外抗细胞增殖活性结果(IC50±SD，μM，n＝3)
受试化合物 HepG2 A549 HL7702
(bpy)<sub>2</sub>RuCl<sub>2</sub> ＞200 ＞200 ＞200
NAMI-A ＞200 ＞200 ＞200
BF 149.4±9.1 119.4±9.3 168.1±10.1
BF-Ru 110.2±8.4 106.4±7.8 ＞200
KQ 9.87±1.04 23.27±4.6 36.7±2.1
KQ-Ru ＞200 ＞200 ＞200
KS ＞200 ＞200 ＞200
KS-Ru 48.1±6.8 17.18±4.5 ＞200
如表1所示，采用MTT法测定受试化合物的细胞毒活性，结果显示配体KQ对肿瘤细胞(HepG2细胞和A549细胞)和正常肝细胞(HL7702细胞)都具有很大的杀伤作用，没有选择性；经过Ru修饰后的络合物KQ-Ru没有杀伤细胞的能力。配体BF和络合物BF-Ru在两种细胞中都没有表现出很好的生物活性。用RGD肽修饰KQ后得到的配体KS也没有细胞杀伤作用，这可能是因为与整合素介导的进入细胞效率较低有关；其络合物KS-Ru却具有很好的选择性，能够选择性的杀伤肿瘤细胞，尤其是肺癌A549细胞。
测试例2流式细胞仪测定钌络合物进入A549细胞的能力
将A549细胞(1mL，细胞浓度为105个/mL)接种于六孔板中，培养过夜，第二天加入250μL受试样品液，给药浓度为10μM，用培养基配制，每种受试化合物重复三孔，在37℃、5％CO2的孵箱中孵育24h；之后取出六孔板，将培养基吸出，用PBS缓冲液洗2次，胰酶消化收集到1.5mL EP管中，用PBS缓冲液洗3次后用500μL PBS缓冲液重悬，上机检测A549细胞中于450nm和620nm条件下的荧光强度。
图1为A549细胞中配体BF以及络合物BF-Ru的荧光强度图，图2为A549细胞中配体KQ以及络合物KQ-Ru的荧光强度图，图3为A549细胞中配体KS以及络合物KS-Ru的荧光强度图。由图1～3可知，RGD肽的引入使得络合物BF-Ru和络合物KS-Ru的细胞摄入量都增大，但是没有引入RGD肽的络合物KQ-Ru，细胞摄入量相比于配体KQ有所减少。
测试例3荧光显微镜观察钌络合物细胞分布
将A549细胞(1mL，细胞浓度为105个/mL)接种于六孔板中，培养过夜，第二天加入250μL受试样品液，给药浓度为10μM，用培养基配制，每种受试化合物重复三孔，在37℃、5％CO2的孵箱中孵育24h；之后取出六孔板，将培养基吸出，用PBS缓冲液洗2次，加入1mL4％多聚甲醛溶液，室温条件下固定30min，用PBS缓冲液洗2次之后于荧光显微镜下观察。
图4为各受试化合物在细胞内分布图，图4显示，荧光显微镜测试结果印证了流式细胞仪的实验结果，络合物KS-Ru以及络合物BF-Ru广泛分布在细胞质和细胞核中。
测试例4激光共聚焦观察整合素受体细胞表面表达情况
将A549细胞(1mL，细胞浓度为105个/mL)接种于cofocal小皿中，培养过夜，第二天加入250μL受试样品液，给药浓度为10μM，用培养基配制，在37℃、5％CO2的孵箱中孵育24h；之后取出cofocal小皿，将培养基吸出，用PBS缓冲液洗2次，加入1mL4％多聚甲醛溶液，室温条件下固定30min，用PBS缓冲液洗2次之后以抗αⅤ抗体为一抗，山羊抗兔免疫球蛋白IgGH&L Alexa 647为二抗，对细胞表面的整合素蛋白进行染色标记，并用DAPI对细胞核进行染色，观察目标化合物对整合素蛋白含量的影响。
图5为各受试化合物的免疫荧光染色结果图，其中，DAPI对细胞核进行染色，呈蓝色；山羊抗兔免疫球蛋白IgG H&LAlexa 647标记瓜氨酸化的H3组蛋白，呈绿色；受试化合物荧光为红色(Ex＝480nm，Em＝620nm)；Merge为三者叠加图。从图5中可以看出，给药24h后，络合物KS-Ru处理的细胞表面整合素表达明显降低。
测试例5评价钌络合物体内抑制肿瘤增殖和转移实验(异种移植性小鼠A549肺癌模型)
体内抗肿瘤细胞增殖实验(异种移植性小鼠A549肺癌模型)实验所用瘤源为A549人肺癌细胞，所用小鼠为BALB/C Nude，购买自北京维通利华实验动物技术有限公司。A549细胞每两天传代一次，传代扩增至第九代细胞收集计数，用PBS缓冲液重悬调整为细胞浓度为5×107个/mL，每只右侧背部肩胛部位注射0.1mL，完成实体瘤动物模型的建立。
肿瘤生长到第15天开始给药，此时肿瘤体积约150mm3，各组隔天给药，称重，测量肿瘤体积，给药第21天后，断颈处死，用镊子固定小鼠右侧肩胛实体瘤生长部位，剖开皮肤，暴露肿瘤，之后钝性剥离，称重，按照式b计算各受试化合物对于实体瘤的抑制活性，并进行t检验。
抑瘤率＝[(空白对照组平均瘤重-试验组平均瘤重)/空白对照组平均瘤重]×100％式b。
剥离小鼠体内的实体瘤后，再剖离出其心、肝、脾、肾和脑并称取重量，按照式c进行心指数、肝指数、脾指数、肾指数和脑指数的测定，并进行单因素方差分析。
各器官指数＝(器官重量/处死体重)×100％式c。
通过移植性小鼠肺癌模型，小鼠体内瘤重结果如表2所示。
表2各受试化合物影响下小鼠体内瘤重结果
组别 剂量μmol/kg 瘤重±SDg 抑瘤率％
Vehicle / 1.57±0.26 /
Pt 17 0.82±0.23 47.8
KQ 10 1.01±0.28 35.7
KQ-Ru 10 1.13±0.17 28.0
KS 10 0.75±0.40<sup>a</sup> 52.2
KS-Ru 10 0.89±0.41<sup>a</sup> 43.3
注：Pt(顺铂)为阳性对照；剂量为17μmol/kg，尾静脉注射给药；其它受试化合物剂量如上表所示为10μmol/kg，尾静脉给药；Control为尾静脉注射生理盐水。结果经t检验，a代表与Control相比，p<0.01。
由表2可知，10μmol/kg剂量的络合物KS-Ru对原发肿瘤有很好的抑制作用，抑瘤率能够达到40％以上。
测试例6评价钌络合物体内抗动脉血栓形成实验(大鼠颈外动脉循环模型)
麻醉前30min灌胃给药，做好标记；大鼠按体重，腹腔注射20％乌拉坦(7mL/kg)；手术分离左侧动脉和右侧静脉进行插管，每只大鼠手术及循环时间总和控制在30min之内，循环时间固定为15min(切记插管前充满肝素生理盐水)；循环15min后，将循环插管在静脉插管端剪开，然后在动脉插管端剪开，取出挂栓的棉线，在干净、干燥的卫生纸上正反各沾一下，每次压线三下，尽量除去表面附着的浮血，装到EP管中，在天平上称重，计算栓重，并将大鼠脱颈处死。各受试化合物对大鼠动脉血栓的影响结果如表3所示，对大鼠动脉血栓的剂量依赖性结果如表4所示。
表3各受试化合物对大鼠动脉血栓的影响
组别 剂量mpk 栓重±SDmg
Vehicle / 46.70±10.24
阿司匹林 167 22.02±6.28<sup>a</sup>
BF 2 34.47±17.92
BF-Ru 2 39.12±11.18
KQ 2 41.10±21.76
KQ-Ru 2 27.83±5.55<sup>a</sup>
KS 2 33.55±13.88
KS-Ru 2 31.39±12.18<sup>a</sup>
注：结果经单因素方差分析，a代表与Vehicle相比，p<0.01。
表4各受试化合物对大鼠动脉血栓的剂量依赖性
Figure BDA0003112000310000231
Figure BDA0003112000310000241
注：结果经单因素方差分析，a代表与Vehicle相比，p<0.01。
由表3可知，经过初步筛查，络合物KQ-Ru和络合物KS-Ru能够抑制动脉血栓的形成。
由表4可知，络合物KQ-Ru和络合物KS-Ru能够剂量依赖性的抑制动脉血栓的形成，尤其是络合物KS-Ru在最低剂量下仍然表现出优秀的抗血栓活性，优于络合物KQ-Ru。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种多肽衍生物钌类络合物，具有式I所示结构：
Figure FDA0003112000300000011
2.权利要求1所述多肽衍生物钌类络合物的制备方法，包括以下步骤：
将具有式a所示结构的配体化合物、顺式-二氯双(2,2'-联吡啶)钌、乙醇和水混合后进行络合反应，得到具有式I所示结构的多肽衍生物钌类络合物；
Figure FDA0003112000300000012
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述具有式a所示结构的配体化合物与顺式-二氯双(2,2'-联吡啶)钌的摩尔比为1：1；所述顺式-二氯双(2,2'-联吡啶)钌、乙醇和水的用量比为0.1mmol：(8～12)mL：(8～12)mL。
4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述络合反应的温度为15～35℃，时间为20～30h。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述具有式a所示结构的配体化合物的制备方法，包括以下步骤：
将具有式b所示结构的配体化合物、1-羟基苯并三唑、二环己基碳二亚胺与四氢呋喃混合，进行活化处理，得到第一料液；
Figure FDA0003112000300000021
将R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl与四氢呋喃混合，采用N-甲基吗啡啉调节所得混合物的pH值为7.8～8.2，得到第二料液；
将所述第一料液与第二料液混合，采用N-甲基吗啡啉调节所得混合物的pH值为7.8～8.2，进行缩合反应，得到KQ-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl；
将所述KQ-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl、钯碳与甲醇混合，在H2存在条件下进行还原反应，得到具有式a所示结构的配体化合物。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl的制备方法，包括以下步骤：
将Boc-R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl与HCl的乙酸乙酯溶液混合，进行水解反应，得到R(NO2)GD(OBzl)S-OBzl。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述具有式b所示结构的配体化合物的制备方法，包括以下步骤：
将色氨酸甲酯和喹啉-2-甲醛混合，在三氟乙酸作用下进行Pictet-Spengler反应，得到混合中间产物；所述混合中间产物包括未氧化产物和第一氧化产物；将所述未氧化产物进行脱氢氧化反应，得到第二氧化产物，将所述第一氧化产物和第二氧化产物合并，作为第二中间产物；
将所述第二中间产物进行水解反应，得到具有式b所示结构的配体化合物。
8.权利要求1所述多肽衍生物钌类络合物在制备抗肿瘤药物、抗肿瘤转移药物或抗血栓药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括肝癌或肺癌。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述血栓为动脉血栓。
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