CN114042043A - 一种雷公藤甲素线粒体靶向脂质体及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及雷公藤甲素线粒体靶向脂质体的制备方法及其应用，可有效解决提高雷公藤甲素的抗癌疗效，并降低毒性的问题，方法是，将抗癌药物、靶向载体、卵磷脂及聚乙二醇分别用有机溶剂溶解，将分别溶解得到的溶液混匀，旋转蒸发除去有机溶剂，得到在器壁形成的薄膜；将薄膜放入真空干燥箱内干燥，进一步除去有机溶剂，加入水化溶剂溶解，磁力搅拌水化，得水化物；水化物进行超声，再通过孔径为1.0～0.1μm的聚碳酸酯膜，挤压破碎，即得雷公藤甲素线粒体靶向脂质体。本发明组分配伍科学合理，制备方法易操作，所带的正电荷易富集于线粒体，从而达到线粒体靶向给药的作用，是脂质体的线粒体靶向性制剂上的创新，开拓了治疗肿瘤药物的新途径。

Description

一种雷公藤甲素线粒体靶向脂质体及其应用
技术领域
本发明涉及医药，特别是一种雷公藤甲素线粒体靶向脂质体及其应用。
背景技术
线粒体间隙带有大量正电荷，其基质中带有大量负电荷，从而形成线粒体内膜的跨膜电位(MTP)。MTP内负外正，在机体正常细胞中，其值为-130mV～150mV，当亲脂性阳离子(DLC)在线粒体富集到线粒体膜内外电位平衡的时候，则会在线粒体内聚集。肿瘤细胞的线粒体膜电位往往高于正常细胞，因此，将亲脂性阳离子与小分子通过共价键直接连接，可仅仅依赖于静电吸附，不通过复杂的机制穿透线粒体膜，随后，释放出的生物活性分子直接在线粒体中发挥作用，诱导肿瘤细胞死亡或凋亡。水苏碱(N，N-二甲基-L-脯氨酸)是益母草叶中的一种带正电的成分，具有多种生物活性，包括抗癌、抗炎和降低氧化应激。水苏碱主要通过诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖发挥抗癌作。通过水苏碱与十八醇的酯化反应，合成了线粒体靶向头部(2S)-1，1-二甲基吡咯-2-十八烷基甲酸酯-1-氯化铵(SS)。
雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)是卫矛科雷公藤属植物，具有抗炎、免疫抑制、抗肿瘤、抗生育等多种药理作用，广泛应用于风湿性关节炎、类风湿性关节炎、肾炎、哮喘、系统性红斑狼疮、皮肤病等多种自身免疫和炎性疾病。雷公藤甲素(Triptolide，TP)是从雷公藤中提取到的主要活性物质，系一种环氧二萜单体成分。现代药理研究证实其具有抗炎、免疫抑制、抗肿瘤、抗生育等多种作用。体内外的研究表明，雷公藤甲素对胰腺癌、乳腺癌、白血病、淋巴瘤、前列腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、结直肠癌、膀胱癌等各类肿瘤细胞均具有明显的抑制增殖作用，呈现出广谱的抗肿瘤活性。目前雷公藤甲素的抗肿瘤作用已得到广泛关注，可在多靶点、多途径发挥广谱抗肿瘤功效。尽管雷公藤甲素具有广谱、高效的抗肿瘤活性，起初被认为是一种很有潜力的化疗药物，但其具有水溶性差、体内消除速度快和毒副作用强等缺点，限制了雷公藤甲素的临床应用。基于纳米级的颗粒将药物输送到特定的器官或组织。这些系统的特点是制备简单、载药量高和稳定性好，使药物积累增加，毒性反而降低。
因此，需要开发一种基于脂质的线粒体靶向制剂，来提高雷公藤甲素的疗效并降低雷公藤甲素的毒副作用。该脂质体中含有聚乙二醇(PEG)，其肿瘤组织部位具有良好的渗透与滞留时间(EPR)效应，被动蓄积在肿瘤细胞部位，可使雷公藤甲素具有较长的血液循环和肿瘤靶向性，可减少在其他组织和器官中的分布，从而降低雷公藤甲素的毒性。线粒体靶向分子(SS)，将其修饰到雷公藤甲素脂质体的表面，使雷公藤甲素脂质体具有了线粒体靶向性，可通过介导线粒体损伤诱导癌细胞凋亡，进而提高雷公藤甲素的抗癌疗效，但至今未见有公开报导。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种雷公藤甲素线粒体靶向脂质体的制备方法及其应用，可有效解决提高雷公藤甲素的抗癌疗效，并降低毒性的问题。
本发明解决的技术方案是，一种雷公藤甲素线粒体靶向脂质体，该脂质体是由抗癌药物、靶向载体、卵磷脂、聚乙二醇(PEG)及去离子无菌水制成，包括以下步骤：
1)原料溶解：
将抗癌药物、靶向载体、卵磷脂及聚乙二醇(PEG)分别用有机溶剂溶解，在超声功率100～500w，超声至完全溶解；
所述的抗癌药物为雷公藤甲素，但不局限于此，药物还可以是用于治疗癌症的其他药物；
所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、异丙醇、四氢呋喃、二甲基亚砜、乙酸乙酯之一或以上任意组合的有机溶剂；
所述的靶向载体为(2S)-1,1-二甲基吡咯-2-十八烷基甲酸酯-1-氯化铵，(2S)-1,1-二甲基吡咯-2-十八烷基甲酸酯-1-氯化铵的制备方法是，通过水苏碱与十八醇的酯化反应，将水苏碱2.0680g加入250mL烧瓶中，加入氯化亚砜4mL，加入转子，加装干燥管，尾气处理装置，室温下反应1.5h，60℃减压蒸馏抽去多余的氯化亚砜，得水苏碱酰氯；用二氯甲烷溶解水苏碱酰氯，得水苏碱酰氯溶液，加入无水碳酸钾1.9902g，在搅拌下缓慢再加入十八醇2.6831g，接干燥管，在冰浴条件下继续反应3h，反应过程中点样观察，展开剂为体积比二氯甲烷︰甲醇＝5︰1，分别以紫外254nm、碘化铋钾溶液显色，待反应完成后，加水淬灭反应，过滤，旋干，柱色谱分离纯化，初始洗脱剂为体积比二氯甲烷︰甲醇＝30︰1，柱色谱分离纯化后得到的产物为淡黄色固体，在60℃下减压干燥24h(经称重计算，重3.1083g，得率为68.9％，分子式为C25H50NO2Cl，分子量为432.13，结构式如下：
Figure BDA0003376180770000021
2)混合：
将步骤1)分别溶解得到的溶液混合在一起，混匀，得混合液，旋转蒸发除去有机溶剂，得到在器壁形成的薄膜；
所述的混合液中抗癌药物与卵磷脂的质量比为1︰5～15，抗癌药物与靶向载体的质量比为1︰1～5，抗癌药物与PEG的质量比为1︰1～10，抗癌药物与有机溶剂的质量体积比为1︰20～30(即抗癌药物︰卵磷脂︰靶向载体︰聚乙二醇︰有机溶剂＝1︰5～15︰1～5︰1～10︰20～30)，所述的质量体积比是指固体以mg计，液体以mL计；
3)干燥、水化：
将薄膜放入真空干燥箱内干燥，进一步除去有机溶剂，加入水化溶剂溶解，在温度30～80℃下，磁力搅拌水化1～5h，得水化物；
所述的水化溶剂为去离子无菌水、质量浓度0.9％氯化钠水溶液或者pH7.4磷酸盐缓冲液中的任意一种；
4)将步骤3)中所得水化物进行超声，超声功率100～500w、超声时间1～10min，然后在40～70℃下依次通过孔径为1.0～0.1μm的聚碳酸酯膜，挤压破碎，即得雷公藤甲素线粒体靶向脂质体。
该雷公藤甲素线粒体靶向脂质体可有效用于制备抗肿瘤药物，实现雷公藤甲素线粒体靶向脂质体在制备抗肿瘤药物中的应用。
所述的肿瘤为胰腺癌、乳腺癌、白血病、淋巴瘤、前列腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、结直肠癌或膀胱癌。
所述的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体在制备对癌症治疗增强抗肿瘤效果药物中的应用。
所述的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体在制备对癌症治疗减轻诱导脏器损伤药物中的应用。
所述的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体在制备对癌症治疗时减轻诱导氧化应激反应药物中的应用。
所述的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体在制备对癌症治疗减轻诱导肝肾功损伤药物中的应用。
本发明组分配伍科学合理，制备方法易操作，采用过膜挤压法制得线粒体靶向脂质体，水苏碱与十八醇的酯化反应生成靶向载体，其所带的正电荷易富集于线粒体，从而达到线粒体靶向给药的作用，是脂质体的线粒体靶向性制剂上的创新，开拓了治疗肿瘤(癌症)药物的新途径，有显著的经济和社会效益。
附图说明
图1为本发明雷公藤甲素线粒体靶向脂质体的粒径分布图。
图2为本发明制备的雷公藤甲素脂质体(TP LPs)与雷公藤甲素线粒体靶向脂质体(SS-TP LPs)的表面电荷对比图。
图3为本发明雷公藤甲素的标准曲线图。
图4为本发明雷公藤甲素线粒体靶向脂质体(SS-TP LPs)的稳定性曲线图，(A、B、C)在去离子水中4℃下放置15天的粒径、PDI和Zeta电位的变化。(D、E、F)在PBS、含10％胎牛血清的DMEM培养基中37℃下放置48h的粒径、PDI和Zeta电位的变化。
图5为本发明制备的SS-TP LPs与空白脂质体、TP和TP LPs和在24h的Pan02细胞存活率柱状图。
图6为本发明制备的SS-TP LPs对胰腺癌模型体内的药效学评价图，(A)不同的治疗方法肿瘤体积随时间变化。(B)不同治疗方法肿瘤生长抑制率。
图7为本发明制备的SS-TP LPs与生理盐水、TP和TP LPs各治疗组小鼠体重随时间变化曲线图。
具体实施方式
以下结合具体情况和实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明在具体实施中，可由以下实施例给出。
实施例1
本发明一种雷公藤甲素线粒体靶向脂质体：
1)原料溶解：
将抗癌药物雷公藤甲素1mg、靶向载体5mg、卵磷脂10mg及聚乙二醇(PEG)1mg分别用有机溶剂二氯甲烷22mL溶解，在超声功率300w，超声至完全溶解；
2)混合：
将步骤1)分别溶解得到的溶液混合在一起，混匀，得混合液，20r/min、40℃旋转蒸发除去有机溶剂，得到在器壁形成的薄膜；
3)干燥、水化：
将薄膜放入真空干燥箱内40℃干燥2h，进一步除去有机溶剂，加入水化溶剂去离子无菌水5mL溶解，在温度65℃下，磁力搅拌水化2h，得水化物；
4)将步骤3)中所得水化物进行超声，超声功率250w、超声时间5min，然后在60℃下依次通过孔径为0.4μm、0.2μm、0.1μm的聚碳酸酯膜，挤压破碎，即得雷公藤甲素线粒体靶向脂质体。
实施例2
本发明一种雷公藤甲素线粒体靶向脂质体：
1)原料溶解：
将抗癌药物雷公藤甲素1mg、靶向载体10mg、卵磷脂1mg及聚乙二醇1.0mg分别用有机溶剂乙醇25mL溶解，在超声功率200w，超声至完全溶解；
2)混合：
将步骤1)分别溶解得到的溶液混合在一起，混匀，得混合液，20r/min、40℃旋转蒸发除去有机溶剂，得到在器壁形成的薄膜；
3)干燥、水化：
将薄膜放入真空干燥箱内40℃干燥2h，进一步除去有机溶剂，加入水化溶剂质量浓度0.9％氯化钠水溶液6mL溶解，在温度35℃下，磁力搅拌水化5h，得水化物；
4)将步骤3)中所得水化物进行超声，超声功率400w、超声时间3min，然后在45℃下依次通过孔径为0.9μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm的聚碳酸酯膜，挤压破碎，即得雷公藤甲素线粒体靶向脂质体。
实施例3
本发明一种雷公藤甲素线粒体靶向脂质体：
1)原料溶解：
将抗癌药物雷公藤甲素1mg、靶向载体2.0mg、卵磷脂10mg及聚乙二醇10mg分别用有机溶剂二甲基亚砜27mL溶解，在超声功率400w，超声至完全溶解；
2)混合：
将步骤1)分别溶解得到的溶液混合在一起，混匀，得混合液，20r/min、40℃旋转蒸发除去有机溶剂，得到在器壁形成的薄膜；
3)干燥、水化：
将薄膜放入真空干燥箱内40℃干燥2h，进一步除去有机溶剂，加入水化溶剂磷酸盐缓冲液4mL溶解，在温度70℃下，磁力搅拌水化1.5h，得水化物；
4)将步骤3)中所得水化物进行超声，超声功率500w、超声时间1min，然后在50℃下依次通过孔径为0.9μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm的聚碳酸酯膜，挤压破碎，即得雷公藤甲素线粒体靶向脂质体。
实施例4
本发明一种雷公藤甲素线粒体靶向脂质体：
1)原料溶解：
将抗癌药物雷公藤甲素2mg、靶向载体5mg、卵磷脂10mg及聚乙二醇1mg分别用有机溶剂丙酮30mL溶解，在超声功率500w，超声至完全溶解；
2)混合：
将步骤1)分别溶解得到的溶液混合在一起，混匀，得混合液，20r/min、40℃旋转蒸发除去有机溶剂，得到在器壁形成的薄膜；
3)干燥、水化：
将薄膜放入真空干燥箱内40℃干燥3h，进一步除去有机溶剂，加入水化溶剂去离子无菌水9mL溶解，在温度40℃下，磁力搅拌水化4h，得水化物；
4)将步骤3)中所得水化物进行超声，超声功率200w、超声时间8min，然后在60℃下依次通过孔径为0.4μm、0.2μm、0.1μm的聚碳酸酯膜，挤压破碎，即得雷公藤甲素线粒体靶向脂质体。
上述实施例方法制备的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体在制备治疗肿瘤药物中的应用。
上述给出的仅是实施例，用于说明本发明的实施方式，而不是用于限制本发明的保护范围，凡是采用等同、等效替代手段所作出的在本质上与本发明相同的技术方案，均属于本发明的保护范围。
本发明制备的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体具有很好的抗肿瘤功能，可有效用于对肿瘤的治疗，并经实验取得了非常好的有益技术效果，有关实验资料如下(以实施例1为例)：
1、性能试验
雷公藤甲素线粒体靶向脂质体制备及表征。本发明经过多次反复试验，制得的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体有合适的粒径、表面电荷和载药量及较好的体外稳定性。对胰腺癌细胞的凋亡作用明显优于雷公藤甲素，相关实验资料如下：
(1)大小、形状和表面电荷的确定
采用动态光散射(DLS)和透射电子显微镜(TEM)对雷公藤甲素线粒体靶向脂质体(SS-TPLPs)的形状、大小及表面电荷进行测定。平均粒径128.45nm，多分散系数0.216，表面电荷+73.37mV，见图1、图2所示。
(2)包封率和载药量的测定
采用高效液相色谱法测定不同浓度梯度的TP含量，取0.2mL SS-TPLPs加入5倍量的无水甲醇，超声5min，破坏脂质体结构，高效液相检测TP的含量。取1.0ml脂质体冷冻干燥24h后称重。用以下公式计算包封率和载药量：
包封率＝脂质体内包裹的药物量/(脂质体内包裹的药物量+未包裹的游离药物量)×100％
载药量＝包裹于脂质体内的药量/载药脂质体的总重量×100％
根据高效液相色谱结果，绘制TP的浓度-峰面积曲线，如图所示，根据标准曲线一式三分计算测得包封率为62.67±4.59％，载药量为0.76±0.01％。TP的标准曲线如图3所示。
(3)体外稳定性试验
为了临床转化的成功，用动态光散射研究了纳米粒子在4℃和37℃下的稳定性。将200μL的SS-TP LPs溶液分别用去离子水、PBS和含10％胎牛血清的DMEM细胞培养液稀释至1mL，放置在4℃(冰箱)或37℃(培养箱)中15d和48h，在预定的时间点测定粒径、PDI值和Zeta电位。结果如图5所示。储存15天后粒径基本不变，PDI从第12天后稍微有所增加，Zeta电位由下降后又上升，但整体保持在较高的正电荷，表明在4℃的储存环境中有良好的稳定性。为模拟体内环境，将SS-TPLPs分别加入PBS和含有10％胎牛血清的DMEM中，并存放在37℃的培养箱中。结果如图所示，在PBS中，粒径与在去离子水中相比变化不大，而PDI和Zeta电位有所下降，可能是受PBS中的盐离子影响，但还是保持在相对稳定的状态。在含有10％胎牛血清的DMEM中，粒径在36h后有所增加，PDI下降后保持稳定，Zeta电位较在去离子水中有所降低，可能是受其中部分蛋白的影响，点仍然有较高的正电荷，且保持稳定。
(4)细胞存活率试验
将Pan02细胞复苏传代，待生长状态良好时，用0.25％胰酶消化，接种细胞密度为5×103个/孔，在37℃、5％CO2培养箱中进行培养24h，然后加药。分别为空白脂质体组、TP组、TP LPs组和SS-TP LPs组，设定给药浓度均为5、10、20、40、80、160、320、640nmol/mL，每个质量浓度设6个复孔，加药后继续孵育24h，然后添加10μL的CCK-8溶液，孵育2h后取出，再于450nm波长处检测下吸光度值，空白组为空白培养基，对照组不加任何药物，按照该公式计算细胞存活率，并计算IC50，细胞存活率＝(加药组吸光度值/空白组吸光度)/(对照组吸光度-空白组吸光度)×100％。各浓度下胰腺癌细胞活性如图5所示。空白脂质体对Pan02细胞的很低，说明载体材料是安全的。TP、TP LPs和SS-TP LPs随着给药的浓度增大，均显示出良好的抑制作用，其中同样浓度下SS-TP LPs抑制作用最强。
(5)药效学试验
选用6周龄C57BL/6J雌性小鼠40只，体重(14±2)g，适应饲养一周后，将约1×106个Pan02细胞接种于小鼠右侧皮下，建立荷瘤小鼠模型。以接种细胞5天后，在接种部位可触摸到结节为模型建立成功标准。用游标卡尺测量瘤体的长度和宽度，用以下公式计算瘤体的体积：
体积＝(长×宽2)/2
在荷瘤小鼠体内瘤体生长约80mm3时随机分成4组，每组8只。分别为生理盐水组，TP组、TP LPs组和SS-TP LPs组。生理盐水组尾静脉注射生理盐水0.1mL，其他组分别尾静脉注射TP、TP LPs和SS-TP LPs，给药剂量为0.4mg/Kg(TP)，隔一天给药一次，连续给药7次。给药期间每隔一天测量一次瘤体体积。给药7次后摘眼球取血，颈椎脱臼处死小鼠，剥离瘤体，并称量瘤体重量，根据公式计算肿瘤生长抑制率(Tumor growth inhibition，TGI)。
TGI＝(1-(治疗组平均瘤体质量)/(生理盐水组瘤体平均质量))×100％
结果如图6所示，在肿瘤抑制作用方面，与生理盐水对照、TP和TP LPs相比，SS-TPLPs表现出优异的抗肿瘤效果，肿瘤体积及肿瘤质量是所有治疗组最小的。同样，SS-TP LPs的肿瘤抑制率为72.1±12.0％，分别是TP和TPLPs的2.0倍和1.4倍。通过绘制抗癌疗法期间小鼠体重的曲线以评估全身毒性，如图7，与生理盐水组比较TP组与TPLPs组小鼠体重明显下降，其中TP组小鼠下降最明显，而SS-TP LPs组小鼠体重与生理盐水组相比下降不明显。说明SS-TP LPs能减小对小鼠的全身毒性。
在上述对实施例1试验的基础，还对其他实施例进行了相同的试验，均取得了相同和相近似的结果，这里不再一一列举，表明产品性能稳定、可靠，且无明显的毒副作用，具有临床应用的实际价值。
本发明采用过膜挤压法制得线粒体靶向纳米粒，质量好，包封率为62.67±4.59％，载药量为0.76±0.01％，平均粒径131.91nm，平均多分散系数0.219，表面电荷+51.32～73.37mV，TP包封率62.67±4.59％，载药量为0.76±0.01％，疗效稳定、可靠。该脂质体利用SS，其所带的正电荷易富集于线粒体，从而达到线粒体靶向给药的作用，是脂质体的线粒体靶向性制剂上的创新，可有效用于癌症的治疗，开拓了治疗癌症药物的新途径，具有实际的临床意义和推广价值，经济和社会效益巨大。

Claims (10)

1.一种雷公藤甲素线粒体靶向脂质体，其特征在于，该脂质体是由抗癌药物、靶向载体、卵磷脂、聚乙二醇及去离子无菌水制成，具体是：
1）原料溶解：
将抗癌药物、靶向载体、卵磷脂及聚乙二醇分别用有机溶剂溶解，在超声功率100～500w，超声至完全溶解；
所述的抗癌药物为雷公藤甲素；
所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、异丙醇、四氢呋喃、二甲基亚砜、乙酸乙酯之一或以上任意组合的有机溶剂；
所述的靶向载体为(2S)-1,1-二甲基吡咯-2-十八烷基甲酸酯-1-氯化铵，(2S)-1,1-二甲基吡咯-2-十八烷基甲酸酯-1-氯化铵的制备方法是，通过水苏碱与十八醇的酯化反应，将水苏碱2.0680g加入250mL烧瓶中，加入氯化亚砜4mL，加入转子，加装干燥管，尾气处理装置，室温下反应1.5h，60℃减压蒸馏抽去多余的氯化亚砜，得水苏碱酰氯；用二氯甲烷溶解水苏碱酰氯，得水苏碱酰氯溶液，加入无水碳酸钾1.9902g，在搅拌下缓慢再加入十八醇2.6831g，接干燥管，在冰浴条件下继续反应3h，反应过程中点样观察，展开剂为体积比二氯甲烷︰甲醇＝5︰1，分别以紫外254nm、碘化铋钾溶液显色，待反应完成后，加水淬灭反应，过滤，旋干，柱色谱分离纯化，初始洗脱剂为体积比二氯甲烷︰甲醇＝30︰1， 柱色谱分离纯化后得到的产物为淡黄色固体，在60℃下减压干燥24h；
2）混合：
将步骤1）分别溶解得到的溶液混合在一起，混匀，得混合液，旋转蒸发除去有机溶剂，得到在器壁形成的薄膜；
所述的混合液中抗癌药物与卵磷脂的质量比为1︰5～15，抗癌药物与靶向载体的质量比为1︰1～5，抗癌药物与PEG的质量比为1︰1～10，抗癌药物与有机溶剂的质量体积比为1︰20～30，所述的质量体积比是指固体以mg计，液体以mL计；
3）干燥、水化：
将薄膜放入真空干燥箱内干燥，进一步除去有机溶剂，加入水化溶剂溶解，在温度30～80℃下，磁力搅拌水化1～5h，得水化物；
所述的水化溶剂为去离子无菌水、质量浓度0.9%氯化钠水溶液或者pH7.4磷酸盐缓冲液中的任意一种；
4）将步骤3）中所得水化物进行超声，超声功率100～500w、超声时间1～10min，然后在40～70℃下依次通过孔径为1.0～0.1μm的聚碳酸酯膜，挤压破碎，即得雷公藤甲素线粒体靶向脂质体。
2.根据权利要求1所述的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体，其特征在于：
1）原料溶解：
将抗癌药物雷公藤甲素1mg、靶向载体5mg、卵磷脂10mg及聚乙二醇1mg分别用有机溶剂二氯甲烷22mL溶解，在超声功率300w，超声至完全溶解；
2）混合：
将步骤1）分别溶解得到的溶液混合在一起，混匀，得混合液，20r/min、40℃旋转蒸发除去有机溶剂，得到在器壁形成的薄膜；
3）干燥、水化：
将薄膜放入真空干燥箱内40 ℃干燥2 h，进一步除去有机溶剂，加入水化溶剂去离子无菌水5 mL溶解，在温度65℃下，磁力搅拌水化2h，得水化物；
4）将步骤3）中所得水化物进行超声，超声功率250 W、超声时间5 min，然后在60℃下依次通过孔径为0.4μm、0.2μm、0.1μm的聚碳酸酯膜，挤压破碎，即得雷公藤甲素线粒体靶向脂质体。
3.根据权利要求1所述的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体，其特征在于：
1）原料溶解：
将抗癌药物雷公藤甲素1 mg、靶向载体10 mg、卵磷脂1mg及聚乙二醇1.0 mg分别用有机溶剂乙醇25mL溶解，在超声功率200w，超声至完全溶解；
2）混合：
将步骤1）分别溶解得到的溶液混合在一起，混匀，得混合液，20r/min、40℃旋转蒸发除去有机溶剂，得到在器壁形成的薄膜；
3）干燥、水化：
将薄膜放入真空干燥箱内40℃干燥2h，进一步除去有机溶剂，加入水化溶剂质量浓度0.9%氯化钠水溶液6 mL溶解，在温度35 ℃下，磁力搅拌水化5h，得水化物；
4）将步骤3）中所得水化物进行超声，超声功率400w、超声时间3min，然后在45℃下依次通过孔径为0.9μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm的聚碳酸酯膜，挤压破碎，即得雷公藤甲素线粒体靶向脂质体。
4.根据权利要求1所述的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体，其特征在于：
1）原料溶解：
将抗癌药物雷公藤甲素1mg、靶向载体2.0mg、卵磷脂10mg及聚乙二醇10mg分别用有机溶剂二甲基亚砜27 mL溶解，在超声功率400W，超声至完全溶解；
2）混合：
将步骤1）分别溶解得到的溶液混合在一起，混匀，得混合液，20r/min、40 ℃旋转蒸发除去有机溶剂，得到在器壁形成的薄膜；
3）干燥、水化：
将薄膜放入真空干燥箱内40℃干燥2h，进一步除去有机溶剂，加入水化溶剂磷酸盐缓冲液4mL溶解，在温度70℃下，磁力搅拌水化1.5h，得水化物；
4）将步骤3）中所得水化物进行超声，超声功率500w、超声时间1min，然后在50℃下依次通过孔径为0.9μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm的聚碳酸酯膜，挤压破碎，即得雷公藤甲素线粒体靶向脂质体。
5.根据权利要求1所述的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体，其特征在于：
1）原料溶解：
将抗癌药物雷公藤甲素2mg、靶向载体5mg、卵磷脂10mg及聚乙二醇1mg分别用有机溶剂丙酮30mL溶解，在超声功率500w，超声至完全溶解；
2）混合：
将步骤1）分别溶解得到的溶液混合在一起，混匀，得混合液，20r/min、40℃旋转蒸发除去有机溶剂，得到在器壁形成的薄膜；
3）干燥、水化：
将薄膜放入真空干燥箱内40℃干燥3h，进一步除去有机溶剂，加入水化溶剂去离子无菌水9mL溶解，在温度40℃下，磁力搅拌水化4h，得水化物；
4）将步骤3）中所得水化物进行超声，超声功率200w、超声时间8min，然后在60℃下依次通过孔径为0.4μm、0.2μm、0.1μm的聚碳酸酯膜，挤压破碎，即得雷公藤甲素线粒体靶向脂质体。
6.权利要求1-5任一项所述的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体在制备治疗肿瘤药物中的应用，所述的肿瘤为胰腺癌、乳腺癌、白血病、淋巴瘤、前列腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、结直肠癌或膀胱癌。
7.权利要求6所述的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体在制备治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体在制备对癌症治疗增强抗肿瘤效果药物中的应用。
8.权利要求6所述的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体在制备治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体在制备对癌症治疗减轻诱导脏器损伤药物中的应用。
9.权利要求6所述的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体在制备治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体在制备对癌症治疗时减轻诱导氧化应激反应药物中的应用。
10.权利要求6中所述的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体在制备治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的雷公藤甲素线粒体靶向脂质体在制备对癌症治疗减轻诱导肝肾功损伤药物中的应用。
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