CN110585132A - 一种槲皮素纳米胶束及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种槲皮素纳米胶束及其制备方法和用途。该槲皮素纳米胶束是由槲皮素和双亲性聚合物为原料制备而成，所述槲皮素和双亲性聚合物的质量比为1:(1～20)。本发明槲皮素纳米胶束在水溶液中的分散性良好，能够显著改善药效释放的稳定性。同时，本发明槲皮素纳米胶束能够有效抑制甲状腺未分化癌细胞的增殖和生长，减少甲状腺未分化肿瘤的体积和重量，可以有效治疗甲状腺未分化癌。本发明槲皮素纳米胶束在临床治疗癌症，特别是甲状腺未分化癌中具有良好的应用前景。

Description

一种槲皮素纳米胶束及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及一种槲皮素纳米胶束及其制备方法和用途。
背景技术
甲状腺未分化癌(Anaplastic Thyroid Carcinoma，ATC)是人类最具侵袭性的实体肿瘤之一，也是甲状腺癌中恶性程度最高的恶性肿瘤。近年来，甲状腺癌在世界范围内的迅速增长，有研究显示，近十年来，甲状腺癌的发病率已增长至全身性癌症的1％，在内分泌恶性肿瘤中所占比例更是高达90％以上。2013年统计数据显示，ATC的发病率在世界范围内占甲状腺癌的1.3-9.8％。尽管整体来看ATC的发病率依然较低，但其起病隐匿、病情进展快，确诊时多数已侵犯周围组织或器官，如气管、食管、神经、肌肉等，且约50％的患者已伴肺、骨、肝、脑等远处转移，已无手术治愈机会。由于ATC无摄碘能力，且其生长不受促甲状腺激素的影响，导致放射性碘治疗以及TSH抑制治疗对其均无效。另外，ATC对传统放化疗不敏感，导致现有的放化疗治疗策略不能有效控制疾病进展。ATC的5年生存率低于20％，死亡率高达100％，占所有甲状腺癌死亡人数的39-50％以上，通常确诊后的中位生存时间仅为5-6个月。尽管近年来各种新的治疗手段的在临床治疗中不断涌现，但ATC的预后在近50年并未得到明显改善。因此，如何寻找有效的治疗方法对于改善ATC预后至关重要。
随着肿瘤治疗的深入和肿瘤异质性这一概念得到公认。肿瘤的治疗逐渐从单一药物治疗转变为多种药物联合治疗，从而能使药物治疗效力最大化。目前药物联合方式主要有三种形式：(1)与传统小分子联用；(2)与分子靶向药物联用；(3)与小分子药物和核酸药物联用。但ATC治疗手段仍极其有限且效果差。目前，ATC患者术后联用顺铂(40mg/m2)和多柔比星(60mg/m2)是目前最有效的治疗手段，缓解率明显高于单用多柔比星。但是，到目前为止，ATC患者的5年生存率仍然低于20％。并且作为细胞毒性药物(顺铂，多柔比星)，其毒副作用也是不容忽视的。因此，尚需要探索疗效更好，副作用更低的治疗甲状腺未分化癌的方法。
槲皮素(Quercetin)，结构式如式(I)所示，又名栎精，槲皮黄素，溶于冰醋酸，碱性水溶液呈黄色，几乎不溶于水，乙醇溶液味很苦。可作为药品，具有较好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用。此外还有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉，增加冠脉血流量等作用。常用于治疗慢性支气管炎，对冠心病及高血压患者也有辅助治疗作用。同时，近年来，槲皮素皮素也被发现能抑制多种恶性肿瘤细胞的生长。
然而，尚未见槲皮素可以治疗甲状腺未分化癌的报道。同时，槲皮素水中分散性极差，阻碍其进一步利用到临床；此外，槲皮素广泛的体内分布会导致副作用明显，所以增强槲皮素水中分散性以及增强槲皮素靶向肿瘤部位作用有助于槲皮素的进一步利用。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种槲皮素纳米胶束及其制备方法和用途。
本发明提供了一种槲皮素纳米胶束，它是由槲皮素和双亲性聚合物为原料制备而成，所述槲皮素和双亲性聚合物的质量比为1:(1～20)。
进一步地，所述槲皮素和双亲性聚合物的质量比为1:(2.33～19)；
优选地，所述槲皮素和双亲性聚合物的质量比为1:9。
进一步地，所述双亲性聚合物为聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸共聚物或聚乙二醇-聚己内酯；优选地，所述双亲性聚合物为聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺。
进一步地，所述槲皮素纳米胶束的制备方法包括如下步骤：
将双亲性聚合物和槲皮素溶于有机溶剂中，完全溶解后，将有机溶剂蒸干，形成水化膜，在水化膜中加入生理盐水，振摇水化，即得。
进一步地，所述有机溶剂为丙酮；和/或，所述有机溶剂与槲皮素的体积质量比为(30～40):1(mL/mg)；和/或，所述生理盐水与槲皮素的体积质量比为(20～30):1(mL/mg)；
优选地，所述有机溶剂与槲皮素的体积质量比为30:1(mL/mg)；和/或，所述生理盐水与槲皮素的体积质量比为25:1(mL/mg)。
进一步地，所述将有机溶剂蒸干的方法为在65℃下旋蒸；和/或，所述生理盐水为50℃的生理盐水；和/或，所述振摇水化为使用旋转蒸发仪振摇水化，旋转速度为100r/min。
本发明还提供了一种前述的槲皮素纳米胶束的制备方法，它包括如下步骤：
将双亲性聚合物和槲皮素溶于有机溶剂中，完全溶解后，将有机溶剂蒸干，形成水化膜，在水化膜加入的生理盐水，振摇水化，即得。
进一步地，所述有机溶剂为丙酮；和/或，所述有机溶剂与槲皮素的体积质量比为(30～40):1(mL/mg)；和/或，所述生理盐水与槲皮素的体积质量比为(20～30):1(mL/mg)；
优选地，所述有机溶剂与槲皮素的体积质量比为30:1(mL/mg)；和/或，所述生理盐水与槲皮素的体积质量比为25:1(mL/mg)。
进一步地，所述将有机溶剂蒸干的方法为在65℃下旋蒸；和/或，所述生理盐水为50℃的生理盐水；和/或，所述振摇水化为使用旋转蒸发仪振摇水化，旋转速度为100r/min。
本发明还提供了前述的槲皮素纳米胶束在制备治疗癌症的药物中的用途；优选地，所述癌症为甲状腺癌；更优选地，所述甲状腺癌为甲状腺未分化癌。
本发明还提供了槲皮素在制备治疗甲状腺癌的药物中的用途；优选地，所述甲状腺癌为甲状腺未分化癌。
本发明中，双亲性聚合物是指由亲水端和疏水端两部件组成，构成双亲性的聚合物。
本发明中，聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的英文缩写为PEG2000-DSPE，结构式如式(II)所示：
该PEG2000-DSPE的分子量均值为2000。
本发明槲皮素纳米胶束在水溶液中的分散性良好，能够显著改善药效释放的稳定性。同时，本发明槲皮素纳米胶束能够有效抑制甲状腺未分化癌细胞的增殖和生长，减少甲状腺未分化肿瘤的体积和重量，可以有效治疗甲状腺未分化癌。本发明槲皮素纳米胶束在临床治疗癌症，特别是甲状腺未分化癌中具有良好的应用前景。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为本发明槲皮素纳米胶束自组装示意图。
图2为槲皮素和本发明槲皮素胶束在水中的分散性。
图3为本发明实施例2载药胶束的粒径分布图。
图4为本发明实施例2载药胶束的透射电镜图。
图5为材料PEG2000-DSPE对C643细胞活性的影响。
图6为槲皮素以及槲皮素胶束对甲状腺ATC系肿瘤细胞活性的影响；A为与C643细胞共同培养24小时，B为与OCUT-2细胞共同培养24小时。
图7为槲皮素胶束降低甲状腺ATC系肿瘤细胞的克隆形成试验：(A)C643细胞在浓度为0、10、50μmol/L的槲皮素胶束中培养24h，进行平板克隆形成实验，结晶紫染色结果；(B)Ocut-2C细胞在浓度为0、10、50μmol/L的槲皮素胶束中培养24h，进行平板克隆形成实验，结晶紫染色结果；(C)C643细胞在浓度为0、10、50μmol/L的槲皮素胶束中培养24h，进行平板克隆形成实验，显微镜下克隆形成计数结果；(D)Ocut-2C细胞在浓度为0、10、50μmol/L的槲皮素胶束中培养24h，进行平板克隆形成实验，显微镜下克隆形成计数结果；其中*代表与对照组(0μmol/L)相比P<0.05。
图8为槲皮素胶束影响甲状腺ATC系肿瘤细胞的生存状态显微镜下观察结果：(A)C643细胞在不同浓度(0、5、10、50μmol/L)槲皮素胶束作用下培养24h，固定后显微镜下观察细胞的状态，显微镜放大40倍；(B)Ocut-2C细胞在在不同浓度(0、5、10、50μmol/L)槲皮素胶束作用下培养24h，固定后显微镜下观察细胞的状态。
图9为槲皮素胶束抑制裸鼠体内ATC肿瘤生长结果：(A)BALB/c裸鼠皮下接种C643细胞，成瘤后实验组(槲皮素胶束4mg/kg)和对照组(等量生理盐水)给药4周后肿瘤大小拍照结果；(B)实验组(槲皮素胶束4mg/kg)和对照组(等量生理盐水)肿瘤体积每周测量统计结果；(C)实验组(槲皮素胶束4mg/kg)和对照组(等量生理盐水)给药4周后瘤体重量统计结果；其中*代表与对照组(0μmol/L)相比P<0.05。
具体实施方式
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
实施例1、本发明槲皮素纳米胶束的制备
采用薄膜水化法制备：称取1mg槲皮素，19mg聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)置于圆底烧瓶中，再用30mL丙酮完全溶解槲皮素和PEG2000-DSPE。待完全溶解后，使用旋转蒸发仪在65℃条件下旋蒸圆底烧瓶中的丙酮溶液至完全蒸干，在圆底烧瓶底部形成黄色透明的水化膜；停止旋蒸，加入25mL，50℃的生理盐水，使用旋转蒸发仪振摇水化，旋转速度为100r/min，则得到目标产物槲皮素纳米胶束。用HPLC法测定该槲皮素纳米胶束载药量为4.9％，包封率为98％。图1为本发明槲皮素纳米胶束自组装示意图。
实施例2、本发明槲皮素纳米胶束的制备
采用薄膜水化法制备：称取1mg槲皮素，9mg聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)置于圆底烧瓶中，再用30mL丙酮完全溶解槲皮素和PEG2000-DSPE。待完全溶解后，使用旋转蒸发仪在65℃条件下旋蒸圆底烧瓶中的丙酮溶液至完全蒸干，在圆底烧瓶底部形成黄色透明的水化膜；停止旋蒸，加入25mL，50℃的生理盐水，使用旋转蒸发仪振摇水化，旋转速度为100r/min，则得到目标产物槲皮素纳米胶束。用HPLC法测定该槲皮素纳米胶束载药量为9.5％，包封率为95％。
实施例3、本发明槲皮素纳米胶束的制备
采用薄膜水化法制备：称取1mg槲皮素，4mg聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)置于圆底烧瓶中，再用30mL丙酮完全溶解槲皮素和PEG2000-DSPE。待完全溶解后，使用旋转蒸发仪在65℃条件下旋蒸圆底烧瓶中的丙酮溶液至完全蒸干，在圆底烧瓶底部形成黄色透明的水化膜；停止旋蒸，加入25mL，50℃的生理盐水，使用旋转蒸发仪振摇水化，旋转速度为100r/min，则得到目标产物槲皮素纳米胶束。用HPLC法测定该槲皮素纳米胶束载药量为16.3％，包封率为78％。
实施例4、本发明槲皮素纳米胶束的制备
采用薄膜水化法制备：称取1mg槲皮素，2.33mg聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)置于圆底烧瓶中，再用30mL丙酮完全溶解槲皮素和PEG2000-DSPE。待完全溶解后，使用旋转蒸发仪在65℃条件下旋蒸圆底烧瓶中的丙酮溶液至完全蒸干，在圆底烧瓶底部形成黄色透明的水化膜；停止旋蒸，加入25mL，50℃的生理盐水，使用旋转蒸发仪振摇水化，旋转速度为100r/min，则得到目标产物槲皮素纳米胶束。用HPLC法测定该槲皮素纳米胶束载药量为21.0％，包封率为62％。
以下通过具体的试验例证明本发明的有益效果。
试验例1、本发明槲皮素纳米胶束在水中的分散性
1、试验方法
在5mL水中分别加入1mg的槲皮素和10mg实施例2制备的本发明槲皮素胶束，充分摇晃，使槲皮素和槲皮素胶束尽可能在水中分散均匀。然后观察槲皮素和本发明槲皮素胶束在水中的分散性。
2、试验结果
槲皮素和本发明槲皮素胶束在水中的分散性如图2所示。图2中NS为空白对照组(纯的水)。槲皮素在水中溶解度极小，所以槲皮素(图2中的Quercetin suspension组)在水中表现为悬浊液，而槲皮素胶束(图2中的Quercetin loaded micelles组)在水中则表现为澄清且带乳光的溶液。说明槲皮素通过制备成槲皮素胶束之后，显著增强槲皮素在水中的分散性。
试验例2、本发明槲皮素纳米胶束的表征
1、试验方法
检测实施例1～4所制备的不同载药量的槲皮素纳米胶束的粒径、PDI值和Zeta电位，以空载胶束为对照。其中，空载胶束的制备方法为：采用薄膜水化法制备：称取10mg聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)置于圆底烧瓶中，再用30mL丙酮完全溶解PEG2000-DSPE。待完全溶解后，使用旋转蒸发仪在65℃条件下旋蒸圆底烧瓶中的丙酮溶液至完全蒸干，在圆底烧瓶底部形成透明水化膜；停止旋蒸，加入25mL，50℃的生理盐水，使用旋转蒸发仪振摇水化，旋转速度为100r/min，则得到目标产物空载纳米胶束。
并采用透射电镜观察载药量9.5％的实施例2制备的的槲皮素纳米胶束。
2、试验结果
不同载药量的槲皮素纳米胶束的粒径、PDI值和Zeta电位如表1所示。
表1不同载药量的槲皮素纳米胶束的粒径、PDI值和Zeta电位
粒径 PDI 电位
空载胶束 32.32 0.191 -2.96
实施例1载药胶束(载药量4.9％) 34.69 0.170 -4.77
实施例2载药胶束(载药量9.5％) 33.41 0.230 -8.89
实施例3载药胶束(载药量16.3％) 47.32 0.354 -6.74
实施例4载药胶束(载药量21.0％) 52.67 0.386 -10.6
由表1可知：相比较实施例1载药胶束，实施例2载药胶束具有较大载药量。实施例3和4载药胶束的载药量虽然比实施例2载药胶束的载药量大，但是粒径PDI小于0.3时，粒径分布才更均匀，稳定性更好，而实施例3和4的PDI均大于0.3，说明实施例3和4制备的载药胶束粒径分布不均匀，稳定性差，而实施例2的载药胶束PDI小于0.3，其粒径分布更均匀，稳定性更好；同时，实施例3和4的包封率分别为78％和62％，远低于实施例2的包封率95％。综合考虑，作为载药载体，实施例2制备的载药胶束为最优的载药胶束。
实施例2载药胶束的和粒径分布图和透射电镜图如图3和图4所示。由图3和图4可知该载药胶束呈均一的球形结构，粒径均匀稳定。
试验例3、本发明槲皮素纳米胶束的细胞毒性试验
1、试验方法
首先分别接种相同数量的甲状腺ATC系肿瘤细胞(C643细胞和OCUT-2细胞)于96孔板中，待24小时后细胞完全贴壁生长，分别加入相同体积(100μL)的不同浓度的试验材料(PEG2000-DSPE、槲皮素以及实施例2制备的槲皮素纳米胶束)，均继续培养24小时。培养结束后加入5mg/mL的MTT溶液，每孔20μL，继续培养4小时后，吸出孔中的液体，加入150μL的二甲基亚砜(DMSO)溶液，放置30min后，在酶标仪上使用570nm检测波长检测各个孔中的OD值，计算得到实验结果。
2、试验结果
由图5可知材料PEG2000-DSPE对C643细胞显示出低毒性，可以用于动物体内实验。
由图6可知槲皮素以及槲皮素胶束均表现出对甲状腺ATC系肿瘤细胞(C643细胞和OCUT-2细胞)具有毒性，会抑制C643细胞(图6A)和OCUT-2细胞(图6B)的生长。且槲皮素以及槲皮素胶束对C643细胞和OCUT-2细胞显示出浓度依赖性毒性，在24小时，两者均显示出对C643细胞和OCUT-2细胞浓度依赖性的杀伤作用，C643细胞和OCUT-2细胞的活性随着药物浓度增加而逐渐降低。
试验例4、本发明槲皮素纳米胶束对ATC细胞活性的影响
1、试验方法
在培养皿中分别培养甲状腺ATC系肿瘤细胞(C643细胞和Ocut-2C细胞)，至完全贴壁生长后，吹打细胞使完全分散成单个细胞。于培养瓶中接种细胞，接种密度为500个/瓶，接种细胞后分别将0μM、5μM、10μM和50μM实施例2制备的槲皮素胶束加入培养基中，培养观察24h取出，使用75％乙醇固定，结晶紫染色，计数大于50个的细胞克隆数。
2、试验结果
由图7可知本发明槲皮素纳米胶束对ATC系肿瘤细胞的增殖和生长抑制呈浓度依赖性。随着槲皮素纳米胶束浓度增加，C643细胞和Ocut-2C细胞的个数显著下降。
显微镜下观察显示(图8)：随着槲皮素胶束浓度的增加，ATC系肿瘤细胞的生长受到明显的抑制，存活细胞数量明显减少，形态发生明显的改变。细胞克隆形成实验显示：与对照组相比，槲皮素胶束处理后的C643和Ocut-2C细胞，克隆形成数均有明显下降，差异有统计学意义(P<0.05)，克隆形成数的下降与槲皮素胶束呈浓度依赖。
试验例5、本发明槲皮素纳米胶束对异种移植甲状腺ATC系肿瘤的影响
1、试验方法
选择对数生长期的甲状腺ATC系肿瘤细胞(C643细胞)，移植前一天更换新鲜培养基。用含EDTA的0.25％胰酶消化细胞，离心、去上清、计数，用无血清、双抗的培养基重悬细胞，细胞浓度调至1×107/mL。选择4-5周龄、SPF级，雌性的BALB/c裸鼠，适应饲养环境一周后。分组如下：A组：对照组(生理盐水对照)；B组：实验组(采用实施例2制备的槲皮素纳米胶束)。
每只裸鼠右腋中线处皮下注射100μL细胞悬液(1×106个细胞)。2-3天观察一次裸鼠背部肿瘤生长情况，待肿瘤生长到5×5mm时，进行灌胃给药处理。每隔2天给药一次，每次称量裸鼠体重、用游标卡尺测量肿瘤大小并记录。B组灌服实施例2制备的槲皮素纳米胶束(灌服槲皮素纳米胶束的剂量为4mg/kg)，给药时A组每次灌服等量无菌生理盐水。
给药4周后以颈椎脱臼法处死裸鼠，解剖取下肿瘤称重、测量大小。同时取心、肝、脾、肺、肾、骨组织置于4％多聚甲醛固定后H&E染色。
抑瘤率计算公式如下：
肿瘤体积(tumor volume,TV)＝π/6×长径×短径×短径(mm3)；
抑瘤率(％)＝[阴性对照组平均瘤重(g)-实验组平均瘤重(g)]/阴性对照组平均瘤重(g)×100％
2、试验结果
本发明槲皮素纳米胶束对异种移植甲状腺ATC系肿瘤的影响如图9所示。裸鼠C643细胞的异种移植模型体内试验显示：槲皮素胶束处理组的C643荷瘤裸鼠的肿瘤体积、瘤重较对照组显著降低，差异有统计学意义(P<0.05)，抑瘤率为59.26％。
综上，本发明槲皮素纳米胶束在水溶液中的分散性良好，能够显著改善药效释放的稳定性。同时，本发明槲皮素纳米胶束能够有效抑制甲状腺未分化癌细胞的增殖和生长，减少甲状腺未分化肿瘤的体积和重量，可以有效治疗甲状腺未分化癌。本发明槲皮素纳米胶束在临床治疗癌症，特别是甲状腺未分化癌中具有良好的应用前景。

Claims (11)

1.一种槲皮素纳米胶束，其特征在于：它是由槲皮素和双亲性聚合物为原料制备而成，所述槲皮素和双亲性聚合物的质量比为1:(1～20)。
2.根据权利要求1所述的槲皮素纳米胶束，其特征在于：所述槲皮素和双亲性聚合物的质量比为1:(2.33～19)；
优选地，所述槲皮素和双亲性聚合物的质量比为1:9。
3.根据权利要求2所述的槲皮素纳米胶束，其特征在于：所述双亲性聚合物为聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸共聚物或聚乙二醇-聚己内酯；优选地，所述双亲性聚合物为聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺。
4.根据权利要求1～3任一项所述的槲皮素纳米胶束，其特征在于：所述槲皮素纳米胶束的制备方法包括如下步骤：
将双亲性聚合物和槲皮素溶于有机溶剂中，完全溶解后，将有机溶剂蒸干，形成水化膜，在水化膜中加入生理盐水，振摇水化，即得。
5.根据权利要求4所述的槲皮素纳米胶束，其特征在于：所述有机溶剂为丙酮；和/或，所述有机溶剂与槲皮素的体积质量比为(30～40):1(mL/mg)；和/或，所述生理盐水与槲皮素的体积质量比为(20～30):1(mL/mg)；
优选地，所述有机溶剂与槲皮素的体积质量比为30:1(mL/mg)；和/或，所述生理盐水与槲皮素的体积质量比为25:1(mL/mg)。
6.根据权利要求4所述的槲皮素纳米胶束，其特征在于：所述将有机溶剂蒸干的方法为在65℃下旋蒸；和/或，所述生理盐水为50℃的生理盐水；和/或，所述振摇水化为使用旋转蒸发仪振摇水化，旋转速度为100r/min。
7.一种权利要求1～6任一项所述的槲皮素纳米胶束的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：
将双亲性聚合物和槲皮素溶于有机溶剂中，完全溶解后，将有机溶剂蒸干，形成水化膜，在水化膜加入的生理盐水，振摇水化，即得。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述有机溶剂为丙酮；和/或，所述有机溶剂与槲皮素的体积质量比为(30～40):1(mL/mg)；和/或，所述生理盐水与槲皮素的体积质量比为(20～30):1(mL/mg)；
优选地，所述有机溶剂与槲皮素的体积质量比为30:1(mL/mg)；和/或，所述生理盐水与槲皮素的体积质量比为25:1(mL/mg)。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述将有机溶剂蒸干的方法为在65℃下旋蒸；和/或，所述生理盐水为50℃的生理盐水；和/或，所述振摇水化为使用旋转蒸发仪振摇水化，旋转速度为100r/min。
10.权利要求1～6任一项所述的槲皮素纳米胶束在制备治疗癌症的药物中的用途；优选地，所述癌症为甲状腺癌；更优选地，所述甲状腺癌为甲状腺未分化癌。
11.槲皮素在制备治疗甲状腺癌的药物中的用途；优选地，所述甲状腺癌为甲状腺未分化癌。
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