CN114901698A - 抗肿瘤免疫抑制因子的工程化单克隆抗体的组合物和用途 - Google Patents

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Abstract

已发现CA125/MUC16蛋白质是体液免疫的抑制剂，特别是通过直接结合抗体子集介导的抗体介导的体液免疫的抑制剂。可以生成降低或消除了CA125结合但保留亲本抗体的抗原特异性的抗体变体。这些可以用于治疗升高的CA125的患者。开发CA125抗性抗体，并用于治疗。此外，在CA125存在下增强体液免疫的蛋白质可以用于对抗体液免疫的抑制。

Description

抗肿瘤免疫抑制因子的工程化单克隆抗体的组合物和用途
技术领域
本发明涉及体液免疫和体液免疫肿瘤学领域。特别地，本发明涉及可以克服CA125/MUC16蛋白质的免疫抑制效应以提高在抑制癌症生长和其他体液免疫抑制疾病方面的基于抗体的疗效的方法和药剂组合物。
背景技术
体液免疫是脊椎动物宿主生物监视且防御失调和转化宿主细胞的主要机制。在癌症生物学中，能够克服抑制的细胞介导免疫的免疫检查点抑制剂在释放活化的CD8+T细胞杀伤肿瘤亚群方面表现出强大的作用(Hodi FS等人,新英格兰医学杂志(N Engl J Med)363:711-723,2010)。已报道一些商业上批准的治疗性抗体通过体液介导的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)表现出其肿瘤杀伤作用(DiLillo DJ,RavetechJV,癌症免疫学研究(Cancer Immunol Res)3:704-713,2015；Ruck T等人,国际分子科学杂志(Int J Mol Sci.)16:16414–16439,2015；PelaiaC等人,国际生物医学研究(Biomed ResInt)4839230:1-9,2018)。最近的转化研究表明肿瘤产生的因子也能够抑制体液免疫途径，进而经由ADCC和CDC抑制肿瘤杀伤效应(Vergote I等人,临床肿瘤杂志(JClin Oncol)34:2271-2278；Kline JB等人,临床肿瘤杂志(JClin Oncol)5:15,2018；Wang W等人,细胞遗传学和基因组研究(Cytogenet Genome Res)152:169-179,2017；Kline JB等人,欧洲免疫学杂志(Eur J Immunol.)48:1872-1882,2018)。
抗体介导的体液免疫应答受抗体-细胞表面抗原结合的协调控制，这进而又将抗体定位在离细胞表面一定距离的抗原表位上。一旦结合，抗体可以分别与自然杀伤细胞(NK)或树突/骨髓/单核细胞(在本文任何参与ADCC的细胞都被称为“免疫效应细胞”)上的Fc-γ活化受体FCGR3A和FCGR2A结合，以启动ADCC以及与C1q补体启动蛋白结合以经由经典的补体CDC途径引发抗体结合细胞的靶细胞死亡(Reuschenbach M等人,癌症免疫现状(Cancer Immunol Immunother)58:1535-1544,2009)。已证明这些机制是治疗性抗体(诸如但不限于利妥昔单抗、曲妥珠单抗、西妥昔单抗、阿仑单抗以及许多实验性抗体)抗肿瘤效应的关键，(Zhou X等人,肿瘤学者(Oncologist)13:954-966,2008；Hsu YF等人,分子癌症(MolCancer)9:-8,2010；Spiridon CI等人,临床癌症研究(Clin Cancer Res)8:1720-1730,2002；Kline JB等人,欧洲免疫学杂志(Eur J Immunol)48:1872-1882,2018)。类似地，已证明体液免疫应答发生在患者自身的免疫系统内，以靶向对疫苗应答失调或转化的细胞以及那些有惰性疾病(产生具有抗增殖以及免疫介导的靶细胞杀伤活性的主要为IgM类的抗体)的细胞(StaffC等人,临床免疫学杂志(J Clin Immunol)32:855-865；Branden S等人,癌症研究(Cancer Res)63:7995-8005,2003)。然而，虽然已发现许多癌症患者产生针对肿瘤表达抗原的自身抗体，但它们的存在不足以控制肿瘤生长，这可能是由于肿瘤细胞利用的总体抗体水平和/或体液免疫抑制机制。
一些报道已发现肿瘤产生的蛋白质MUC16/CA125可以通过直接结合IgG1、IgG3和IgM型抗体的子集抑制体液免疫应答，进而扰乱Fc区的结构，使得IgG1和IgG3型抗体与免疫效应细胞上的Fc-γ活化受体FCGR2A(也称为CD32a)和FCGR3A(也称为CD16a)结合的效率较低和/或所有三种抗体类别与补体介导蛋白质(包括C1q)结合的效率较低(Pantankar MS等人,妇科肿瘤学(Gyncol Oncol)99:704-713,2005；Kline JB等人,肿瘤标靶(OncoTarget)8:52045-52060,2017；Kline JB等人,临床肿瘤杂志(J.Clin.Oncol.)5:15,2018；Wang W等人,细胞遗传学与基因组研究(Cytogenet Genome Res)152:169-179,2017；Kline JB等人,欧洲免疫学杂志48:1872-1882,2018)。依赖于免疫效应机制发挥药理活性的抗癌抗体的临床研究表明了升高的血清CA125水平与降低的临床结果有关。特别地，在患有霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤患者中对商业批准的利妥昔单抗抗体的临床研究中已经报道了这一点。当CA125水平在正常范围内时，接受利妥昔单抗加化学疗法[CHOP(环磷酰胺、阿霉素(羟基柔红霉素)、长春新碱
Figure BDA0003714748420000021
和泼尼松龙)]治疗的滤泡性淋巴瘤患者在5年无进展生存期(PFS)方面具有31.4％改善(Prochazka V等人,国际血液学杂志(Int J Hematol)96:58-64,2012)，与高于正常范围的具有统计学上显著的更差临床结果的那些患者形成对比。本领域持续需要开发可以克服癌症患者中由CA125/MUC16(本文称为CA125)和类似的肿瘤产生或诱导的蛋白质介导的体液免疫抑制以及其中体液免疫抑制因此类蛋白质的存在而活跃的其他疾病的工具和药剂。
发明内容
根据本发明的一个方面，提供了一种治疗癌症患者或患有炎症性疾病的患者的方法。将人C3B或C4B补体蛋白质施用于癌症患者或患有炎症性疾病的患者。经施用的蛋白质增强某些治疗性抗体的效应，诸如利妥昔单抗或自身抗体的效应。补体蛋白质可以是例如全长人补体蛋白质原C3B或C4B、人补体蛋白C3B或C4B的天然存在的蛋白质水解片段或能够结合IgG的人补体蛋白C3B或C4B的一部分。
根据本发明的另一方面，提供了包含SEQ ID NO:3的氨基酸残基序列的蛋白质或多肽。所述序列中的一个、两个或三个氨基酸残基被与SEQ ID NO:3中所示不同的氨基酸残基置换。相对于不含一个、两个或三个氨基酸置换的分离的蛋白质或多肽的结合，一个、两个或三个氨基酸置换降低或消除分离的蛋白质或多肽与免疫抑制蛋白质的结合。
本发明的另一方面是治疗患有与健康人群相比表达升高的CA125水平的疾病的患者的方法。将蛋白质或多肽施用于患者。蛋白质或多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸残基序列。序列中的一个、两个或三个氨基酸残基被与SEQ ID NO:3中所示不同的氨基酸残基置换。相对于不含一个、两个或三个氨基酸置换的分离的蛋白质或多肽的结合，一个、两个或三个氨基酸置换降低或消除分离的蛋白质或多肽与免疫抑制蛋白质的结合。
本发明的另一方面是一种用于监测表达与抗体结合的CA125的肿瘤的方法。将分离自患者的体液样本与人C3B或C4B补体蛋白质以及包含SEQ ID NO:3的氨基酸残基序列的蛋白质或多肽接触。序列中的一个、两个或三个氨基酸残基被与SEQ ID NO:3中所示不同的氨基酸残基置换。相对于不含一个、两个或三个氨基酸置换的分离的蛋白质或多肽，一个、两个或三个氨基酸置换降低或消除分离的蛋白质或多肽与免疫抑制蛋白质的结合。检测到与蛋白质或多肽结合的CA125。
本发明的又一方面是包含抗CD20抗体和人补体蛋白质C3B或C4B的组合。人补体蛋白质的形式可以是例如全长人补体蛋白质原质C3B或C4B、人补体蛋白质C3B或C4B的天然存在的蛋白质水解片段或能够结合IgG的人补体蛋白质C3B或C4B的一部分。可以在施用前在容器中形成组合。或者，可以在一段时间内分别施用每种成分，使得在体内形成组合。通常，这两者在一周、3天、2天、24小时、12小时、6小时、3小时、1小时内施用。
本发明的一个方面是重组蛋白质，该重组蛋白质包含含有人C3B(SEQ ID NO:1)或C4B(SEQ ID NO:2)补体蛋白质的抗体结合序列的全长或片段，该补体蛋白质(本文称为增强子蛋白质)可以与CA125-免疫抑制的治疗性抗体一起添加/组合使用以克服其免疫抑制。
本发明的另一个方面是编码遗传修饰的利妥昔单抗蛋白质的核酸载体，其中一个或多个密码子已被修饰，进而降低CA125与成熟抗体或抗体抗原结合片段或Fab结构域的结合。特别是对抗体重链(SEQ ID NO:3)内的区域的修饰。这些包括但不限于将氨基酸AVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPP(SEQ ID NO:3)改变为单个氨基酸置换或氨基酸置换组合的密码子。核酸载体可以在相对于其他元素的适当位置编码经遗传修饰的利妥昔单抗蛋白质，使得经遗传修饰的蛋白质在转染入细胞时从核酸中表达。
本发明的另一方面是编码具有以下氨基酸变化的全长利妥昔单抗重链(SEQ IDNO:5)的核酸载体(SEQ ID NO:4)：在密码子109处N到D、在密码子131处P到S以及在密码子136处S到Y。重链可以与利妥昔单抗轻链(SEQ ID NO:6)在重组细胞宿主中共表达以产生全功能CD20结合抗体。
本发明的另一方面是编码在密码子109处具有N到D的氨基酸变化的全长利妥昔单抗重链(SEQ ID NO:8)的核酸载体(SEQ ID NO:7)。重链可以与利妥昔单抗轻链(SEQ IDNO:6)在重组细胞宿主中共表达以产生全功能CD20结合抗体。
本发明的另一方面是编码在密码子131处具有P到S的氨基酸变化的全长利妥昔单抗重链(SEQ ID NO:10)的核酸载体(SEQ ID NO:9)。重链可以与利妥昔单抗轻链(SEQ IDNO:6)在重组细胞宿主中共表达以产生全功能CD20结合抗体。
本发明的另一方面是编码在密码子136处具有S到Y的氨基酸变化的全长利妥昔单抗重链(SEQ ID NO:12)的核酸载体(SEQ ID NO:11)。重链可以与利妥昔单抗轻链(SEQ IDNO:6)在重组细胞宿主中共表达以产生全功能CD20结合抗体。
本发明的另一方面是编码在密码子109处具有N到D以及在密码子131处具有P到S的氨基酸变化的全长利妥昔单抗重链(SEQ ID NO:14)的核酸载体(SEQ ID NO:13)。重链可以与利妥昔单抗轻链(SEQ ID NO:6)在重组细胞宿主中共表达以产生全功能CD20结合抗体。
本发明的另一方面是编码在密码子109处具有N到D以及在密码子136处具有S到Y的氨基酸变化的全长利妥昔单抗重链(SEQ ID NO:16)的核酸载体(SEQ ID NO:15)。重链可以与利妥昔单抗轻链(SEQ ID NO:6)在重组细胞宿主中共表达以产生全功能CD20结合抗体。
本发明的另一方面是编码在131处具有P到S以及在136处具有S到Y的氨基酸变化的全长利妥昔单抗重链(SEQ ID NO:18)的核酸载体(SEQ ID NO:17)。重链可以与重组细胞宿主中的利妥昔单抗轻链(SEQ ID NO:6)共表达以产生全功能CD20结合抗体。
本发明的另一方面是编码在密码子107处具有Y到C以及在密码子122处具有A到T的氨基酸变化的全长利妥昔单抗重链(SEQ ID NO:20)的核酸载体(SEQ ID NO:19)。重链可以与利妥昔单抗轻链(SEQ ID NO:6)在重组细胞宿主中共表达以产生全功能CD20结合抗体。
本发明的另一方面是编码在密码子107处具有Y到C的氨基酸变化的全长利妥昔单抗重链(SEQ ID NO:22)的核酸载体(SEQ ID NO:21)。重链可以与利妥昔单抗轻链(SEQ IDNO:6)在重组细胞宿主中共表达以产生全功能CD20结合抗体。
本发明的另一方面是编码在密码子122处具有A到T的氨基酸变化的全长利妥昔单抗重链(SEQ ID NO:24)的核酸载体(SEQ ID NO:23)。重链可以与利妥昔单抗轻链(SEQ IDNO:6)在重组细胞宿主中共表达以产生全功能CD20结合抗体。
本发明的另一方面是编码在密码子108处具有F到L以及在密码子130处具有F到Y的氨基酸变化的全长利妥昔单抗重链(SEQ ID NO:26)的核酸载体(SEQ ID NO:25)。重链可以与利妥昔单抗轻链(SEQ ID NO:6)在重组细胞宿主中共表达以产生全功能CD20结合抗体。
本发明的另一方面是编码在密码子108处具有F到L的氨基酸变化的全长利妥昔单抗重链(SEQ ID NO:28)的核酸载体(SEQ ID NO:27)。重链可以与利妥昔单抗轻链(SEQ IDNO:6)在重组细胞宿主中共表达以产生全功能CD20结合抗体。
本发明的另一方面是编码在密码子130处具有F到Y的氨基酸变化的全长利妥昔单抗重链(SEQ ID NO:30)的核酸载体(SEQ ID NO:29)。重链可以与利妥昔单抗轻链(SEQ IDNO:6)在重组细胞宿主中共表达以产生全功能CD20结合抗体。
本发明的另一方面是编码具有以下氨基酸变化的全长利妥昔单抗重链的核酸载体(SEQ ID NO:31)：在密码子103处G到C、在密码子134处P到S、在密码子169处S到T以及在密码子196(SEQ ID NO:32)处S到R。重链可以与利妥昔单抗轻链(SEQ ID NO:6)在重组细胞宿主中共表达以产生全功能CD20结合抗体。
本发明的另一方面是编码在密码子103(SEQ ID NO:34)处具有到C的氨基酸变化的全长利妥昔单抗重链的核酸载体(SEQ ID NO:33)。重链可以与利妥昔单抗轻链(SEQ IDNO:6)在重组细胞宿主中共表达以产生全功能CD20结合抗体。
本发明的另一方面是编码在密码子134(SEQ ID NO:36)处具有P到S的氨基酸变化的全长利妥昔单抗重链的核酸载体(SEQ ID NO:35)。重链可以与利妥昔单抗轻链(SEQ IDNO:6)在重组细胞宿主中共表达以产生全功能CD20结合抗体。
本发明的另一方面是编码在密码子102(SEQ ID NO:38)处具有Y到F的氨基酸变化的全长利妥昔单抗重链的核酸载体(SEQ ID NO:37)。重链可以与利妥昔单抗轻链(SEQ IDNO:6)在重组细胞宿主中共表达以产生全功能CD20结合抗体。
本发明的另一方面是编码在密码子167(SEQ ID NO:40)处具有L到Q的氨基酸变化的全长利妥昔单抗重链的核酸载体(SEQ ID NO:39)。重链可以与利妥昔单抗轻链(SEQ IDNO:6)在重组细胞宿主中共表达以产生全功能CD20结合抗体。
本发明的另一方面是治疗患有与健康人群相比表达升高的CA125水平的疾病的患者的方法。将变体利妥昔单抗抗体(本文称为RTX-MT)施用于患者。抗体与CD20+靶细胞结合并引发体液免疫应答，诸如抗体依赖性细胞毒性(ADCC)或补体依赖性细胞毒性(CDC)，以杀死靶细胞。
本发明的另一方面是表达人蛋白质CA125和CD20的人癌细胞系。该人癌细胞系可以是不天然表达CD20的人卵巢癌细胞系。它可以通过用编码CD20的表达载体转导细胞系OVCAR3的细胞制备。其他人癌细胞系可以用于制备用于鉴定体液免疫抑制抗体的此类修饰细胞系。
在又一方面，本发明是一种筛选与CD20结合的候选抗体的方法。使候选抗体与表达人蛋白质CA125和CD20的人癌细胞系接触。然后确定由候选抗体引发的人癌细胞系的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)或补体依赖性细胞毒性(CDC)。
本发明的另一方面是一种用于检测和治疗患者体内表达CA125的肿瘤的方法。从患者分离的体液样本(组分(a))与包含SEQ ID NO:3(组分(b))的氨基酸序列的抗体接触。组分(a)也与包含SEQ ID NO:3的氨基酸残基序列的免疫抑制抗性蛋白质或多肽接触，其中所述序列中的一个、两个或三个氨基酸残基被与SEQ ID NO:3(组分c)中所示不同的氨基酸残基置换，其中相对于不含一个、两个或三个氨基酸置换的免疫抑制抗性蛋白质或多肽，一个、两个或三个置换的氨基酸残基降低或消除免疫抑制抗性蛋白质或多肽的结合。当确定体液样本(组分(a))中的CA125与组分(b)结合但不与组分(c)结合时，用组分(c)治疗患者。当确定体液样本中的CA125与组分(b)和/或组分(c)结合时，用全长补体蛋白质原C3B或C4B、能够结合IgG的补体蛋白质原C3B或C4B的天然存在的蛋白质水解片段或能够结合IgG的补体蛋白质原C3B或C4B的一部分治疗患者。
在阅读本说明书后，对于本领域的技术人员将是显而易见的本发明的这些和其他方面为本领域提供了用于改善CA125免疫抑制疾病(包括癌症以及非肿瘤疾病和非CA125升高的疾病类型)中抗CD20抗体介导的体液免疫应答的方法和组合物。
附图说明
图1A至1D.鉴定可以阻断CA125与受影响利妥昔单抗(Ab)结合的潜在蛋白质的筛选方法。(图1A)筛选能够克服CA125对受影响抗体的免疫抑制效应的潜在增强子蛋白质的方法的示意图。(图1B)鉴定阻断CA125结合并克服CA125对利妥昔单抗效应活性的免疫抑制的增强子蛋白质。简而言之，将96孔ELISA板包被1-5μg/mL利妥昔单抗(含或不含15KU/mL人CA125或1-10μg/mL人血清白蛋白(HSA))，并如前所述用1-2.5μg/mL生物素化的人C1q蛋白质进行探测(Kline JB等人,欧洲免疫学杂志(Eur J Immunol.)48:1872-1882,2018)。如图所示，与单独与利妥昔单抗或在HSA存在下孵育时相比，CA125降低了C1q与利妥昔单抗的结合。接下来，使用先前已报道与IgG1抗体结合的若干蛋白质来确定是否有任何蛋白质可以克服CA125对C1q结合的抑制。如图1C所示，人补体蛋白质C4B(SEQ ID NO:2)与其他所检测的(未显示)相比能够阻断CA125的抑制效应。类似地，C3B(SEQ ID NO:1)具有类似的效应。为了确定这种效应是否可以恢复免疫效应功能，将C4B蛋白质用于补体依赖性细胞毒性(CDC)测定，如前所述，使用利妥昔单抗和Daudi细胞来检测CDC测定中的C4B活性(Kline JB等人,欧洲免疫学杂志(Eur J Immunol)48:1872-1882,2018)。简而言之，将5,000个Daudi细胞在含或不含5μg/mL的C4B情况下，与单独2.5μg/mL的利妥昔单抗、15KU/mL的CA125或10μg/mL的HSA孵育。接下来，将1000单位的兔补体(Bio-Rad)添加到每个孔中，并将培养物孵育1.5小时，然后使用Cell Titer-Glo(Promega)对细胞存活率进行定量，并根据制造商的建议在Varioskan发光板读数仪上进行定量。信号强度是指CDC杀伤后的活细胞。(图1C)CA125在利妥昔单抗介导的CDC活性方面具有显著的抑制(P<0.00015)。C4B的添加能够显著克服CA125抑制(P＝0.00004)。用C3B(SEQ ID NO；1)蛋白质观察到类似的效应。这些数据提供了C3B和/或C4B蛋白质可以用于逆转CA125免疫抑制效应并充当增强子蛋白质的证据。(图1D)示出了C3B和CA125竞争与RTX-WT结合；方法与图1B中所述相同。
图2A至图2B.C3B/C4B增强子蛋白质通过阻断CA125与利妥昔单抗结合来克服CA125免疫抑制。为了揭示C4B通过CA125挽救利妥昔单抗免疫抑制的机制，使用ELISA测定来监测CA125-利妥昔单抗结合。简而言之，将96孔ELISA板包被用作阴性对照的15KU/mL的可溶性CA125或人血清白蛋白(HSA)，并通过用2.5μg/mL生物素化利妥昔单抗(含或不含5μg/mL C4B)探测来检测CA125结合。探测后，洗涤孔，用链霉亲和素-HRP(辣根过氧化物酶；Jackson Immunologicals)二次探测，并使用比色TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)底物(Pierce)进行定量。使用0.1N H2SO4停止反应，并使用Varioskan板读数仪在450nm处对孔进行定量。如图2A所示，C4B可以显著阻断利妥昔单抗与CA125的结合(P＝0.000017)。实验代表最少一式三份的孔。C4B蛋白质已显示与IgG1型抗体的互补决定区3(CDR3)和框架4(FW4)之间的区域结合，表明其对CA125结合的竞争可能在该区域内。为了确定CA125结合是否发生在免疫球蛋白的轻链、重链或两条免疫球蛋白链上，我们使用来自CA125的未受影响抗体帕妥珠单抗(PTZ)的轻链和重链生成嵌合利妥昔单抗(RTX)抗体(Kline JB等人，肿瘤标靶(OncoTarget),8:52045-52060)，然后检测每个CA125结合。如图2B所示，利妥昔单抗重链(RTX-hc/PTZ-lc)嵌合体仍可显著结合CA125(P<0.0009)，表明CA125与CDR3-FW4区内的利妥昔单抗重链结合。用利妥昔单抗轻链(PTZ-hc/RTX-lc)嵌合体未观察到CA125结合。使用与C4B类似的方法，C3B蛋白质(SEQ ID NO:1)和利妥昔单抗竞争与CA125结合(P<0.0001)并且似乎是特异性的，因为Fab结合蛋白质L不竞争性抑制(参见图1D)，这支持以下发现：CA125结合位于利妥昔单抗Fab结构域内，并且C3B/C4B蛋白值可以用于逆转CA125免疫抑制效应并充当增强子蛋白质。
图3A至图3B.生成具有降低的CA125结合的利妥昔单抗变体。(图3A)为确定CA125结合是否需要CDR3-FW4和CH1区(SEQ ID NO:3)内的一个或多个残基，我们使用与CDR3-FW4区(SEQ ID NO:50)的核苷酸序列互补的引物(SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:49)，经由PCR产物的随机诱变，在编码CDR3-FW4的残基之间时生成了利妥昔单抗重链变体文库。然后将重组重链与利妥昔单抗轻链(SEQ ID NO:6)共转染，并在96孔板中的HEK293细胞中瞬时表达。使用小鼠抗人IgG-HRP抗体作为探针，经由ELISA筛选用于抗体产生的培养上清液。然后使用ELISA检测阳性克隆上清液的CD20结合，其中利妥昔单抗结合肽Rp1-L(Favoino等人,国际分子科学(Int J Mol Sci.)20:1920,2019)用于包被孔并用利妥昔单抗突变体(RTX-MT)进行探测，用小鼠抗人IgG-HRP进行二次探测，并使用如上所述的TMB底物进行定量。然后如上所述经由ELISA检测结合CD20与亲本利妥昔单抗(RTX-WT)一样或更好的克隆的CA125结合。鉴定了若干结合CD20的克隆，并且似乎降低了CA125结合。对齐这些克隆的序列以鉴定常见的突变氨基酸(图3B)。然后扩增这些克隆的子集以产生纯化的抗体并重新检测CD20和CA125结合。
图4.选择并进一步分析从随机文库初级筛选中鉴定的具有最强CD20结合和大多数降低的CA125结合的突变利妥昔单抗(RTX-MT)克隆。将这些抗体中的每一种进行生物素化并经由ELISA重新检测CD20和CA125结合。简而言之，按照制造商的说明，使用EZ-LinkTMSulfo-NHS-Biotin(ThermoScientific)对抗体进行生物素化。生物素化的抗体通过Nanodrop进行定量，并使用抗IgG ELISA捕获测定验证信号强度，以测量每种抗体的信号强度。为了重新检测CD20和CA125结合，将96孔板包被10μg/mL的利妥昔单抗结合肽或15KU/mL的CA125，并使用每种生物素化的RTX-MT抗体或亲本抗体(RTX-MT)一式三份进行探测。洗涤孔，然后用链霉亲和素-HRP进行二次探测，并使用如上所述的TMB底物在Varioskan板读数仪上在450nm处进行定量。比较亲本和RTX-MT克隆的CD20与CA125结合的比率，并计算CA125结合的百分比降低。CA125降低超过20％的任何信号都被认为是阳性的。使用这些标准，选择全部表达野生型利妥昔单抗轻链(SEQ ID NO:6)的5个克隆用于进一步分析。克隆148(SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38)；克隆164(SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32)；克隆166(SEQID NO:4和SEQ ID NO:5)；克隆198(SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20)和克隆199(SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26)。
图5.在抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和CDC功能筛选中检测了如图4所述的选定的RTX-MT抗体。表达人CD20的Daudi细胞用于两种测定。如上所述进行CDC。ADCC活性是使用如前面所述的方法测量的(Kline JB等人,肿瘤标靶(OncoTarget),8:52045-52060)。如图所示，CA125对亲本抗体的CDC活性具有显著抑制(降低32％；P＝0.001)，而据发现本文检测的所有RTX-MT克隆对CA125免疫抑制更具抗性(≤15％CDC抑制；P<0.01)。ADCC也观察到了类似的效应。特别地，克隆164、166和198对CA125免疫抑制的抗性比亲本抗体高约3至4倍，而也发现其他克隆更具抗性但程度更低。在所有情况下，这些克隆在受影响结构域中都有多个突变。为了确定一个或两个氨基酸是否足以克服CA125免疫抑制，从每个克隆中生成单突变体或双突变体克隆，并重新检测CA125结合和免疫效应功能。
图6A至图6B.受影响结构域内的单突变和双突变足以降低CA125结合并生成CA125抗性利妥昔单抗抗体。源自克隆148、164、166、198和199的单和双RTX-MT抗体用于CD20和CA125ELISA结合测定(图6A)以及CD16a和C1q结合测定，以确定单突变或双突变是否足以降低CA125结合和免疫抑制。如图6A所示，克隆112-134(在密码子109处N到D以及密码子131处P到S的氨基酸变化，SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14)、克隆133(在密码子130处F到Y的氨基酸变化，SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30)、克隆106(在密码子103处G到C的氨基酸变化，SEQID NO:33和SEQ ID NO:34)和克隆137(在密码子134处P到S的氨基酸变化，SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36)具有最显著降低(P<0.0055)的与CA125的结合，并且它们像亲本抗体一样保留了CD20结合。两个最具抗性的克隆：112-134和133用于CD16a-生物素和C1q-生物素结合测定。如图6B所示，与亲本抗体相比，克隆112-134和133分别具有75％和62.5％的CD16a-生物素结合改善，并且两者都具有70％的C1q-生物素结合改善。
图7A至图7D.RTX-MT克隆166变体突变的表征。在CA125存在下，比较单突变或双突变N109D、P131S、S136Y、N109D+P131S、N109D+S136Y、P131S+S136Y以及三突变RTX-MT克隆166(N109D+P131S+S136Y)的Fc受体结合(图7A)。将数据绘制为与CA125结合与没有与CA125结合的百分比。如图所示，在CA125存在下，与亲本RTX相比，携带至少N109D突变的RTX-MT具有更高的CD16a Fc受体结合。在CA125存在下比较了单突变体RTX-MTs N109D、P131S和S136Y的C1q结合(图7B)。将数据绘制为与CA125结合与没有与CA125结合的百分比。据发现，RTX-MT N109D受CA125的影响最小，保留约90％的C1q结合，相比之下，亲本利妥昔单抗(RTX)的C1q结合<65％。使用ELISA测定测量与CD20利妥昔单抗结合肽结合的抗体以确定CD20结合是否受N109D突变的影响(图7C)。如图所示，RTX-MT N109D CD20结合与亲本利妥昔单抗(RTX)(P>0.21)相当。CA125与RTX-MT N109D结合的ELISA分析表明，它与亲本利妥昔单抗(RTX)相比显著降低(降低50％，P<0.00009)(图7D)。为了确保在每次实验中使用相似量的抗体，ELISA测定包括抗人IgG包被的孔以捕获抗体输入量。如图7C和图7D中所示，每种抗体输入的量是相似的(带有方形标记的线)。在所有实验中，帕妥珠单抗(PTZ)用作阴性对照。使用学生T检验的代表性P值是*<0.05、**<0.01、***<0.001、****<0.0001。
图8A至图8D.RTX N1 09D CD20结合的表征。亲本利妥昔单抗(RTX WT)和RTXN109D直接与AlexaFluor 488染料结合，用于以0.78-100nM范围内的浓度对表达CD20(Ramos)的活细胞和无CD20(Jurkat)的细胞进行染色。图8A和图8B分别示出了两种抗体与CD20阳性细胞而非无CD20的细胞的特异性结合。图8C和图8D展示了使用单位点饱和结合的非线性回归分析在平衡时结合亲和力(Kd)外推为结合一半受体位点的抗体浓度。
图9A至图9B.RTX N109D与亲本利妥昔单抗(RTX)的补体介导杀伤(CDC)的比较。在补体存在下用每种抗体靶向表达CA125的CD20阳性细胞(图8A)。如图所示，与亲本利妥昔单抗相比，RTX N109D对CA125阳性细胞具有更高的CDC活性。为了证明CDC效应是特异性的，检测了表达CA125的CD20阳性和CD20阴性细胞的RTX N109D CDC活性(图9B)。如图所示，RTXN109D CDC杀伤对表达CD20的细胞具有特异性。使用学生T检验的代表性P值是*<0.05、**<0.01、***<0.001、****<0.0001。
图10A至图10C.RTX-MT N109D和亲本利妥昔单抗(RTX)对Fc-γ受体CD16a活性的CA125免疫抑制的比较。ELISA结合测定表明，与亲本利妥昔单抗相比，RTX-MT N109D对CA125抑制的CD16a受体结合具有抗性(>90％Fc受体结合)(<60％，P<0.0001)(图10A)。Jurkat CD16a报告基因分析表明，与亲本利妥昔单抗相比，RTX-MT N109D对CA125抑制的CD16a受体活化(P<0.0001)具有抗性(图10B)。使用原代人PBMC和Daudi靶细胞的ADCC测定显示RTX MT N109D对CA125抑制的ADCC具有抗性(P<0.01)(图10C)。使用学生T检验的代表性P值是*<0.05、**<0.01、***<0.001、****<0.0001。
具体实施方式
我们发现了可以阻断CA125与利妥昔单抗结合的药剂(称为增强子蛋白质)。我们使用它们来绘制利妥昔单抗抗体内对CA125结合及其免疫抑制活性至关重要的区域。此外，我们在对CA125结合很重要的利妥昔单抗抗体的特定区域内使用基因工程来生成对CA125的体液免疫抑制效应具有抗性的修饰抗体蛋白质。这些可以用于治疗疾病(包括其中CA125升高的癌症)中的CD20+细胞，以及CA125水平在正常范围内的患者。
我们在IgG1型抗体的区域(受影响结构域)内修饰了似乎结合CA125的残基；经修饰的残基使CA125免疫抑制抗体对CA125免疫抑制效应具有抗性。这些CA125抗性抗体可能能够克服CA125蛋白质的体液免疫抑制。它们可以用于治疗癌症以及其他CA125免疫抑制疾病。虽然不想受限于任何特定的理论或作用机制，但申请人认为CA125蛋白质与某些抗体的某些残基结合，并破坏通常由免疫效应细胞和/或补体介导的抗体介导的体液免疫应答。这些破坏包括抑制C1q-抗体(经典抗体-补体)复合物和/或抗体与免疫效应细胞(诸如但不限于NK和骨髓细胞)上的Fc-γ活化受体结合；这些破坏分别导致补体依赖性细胞毒性(CDC)和抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的下游抑制。
本文描述的方法可以用于开发额外的CA125抗性抗体(无论是否靶向CD20的抗体)以克服体液免疫抑制。能够逃避CA125对体液免疫应答(包括对受影响亲本抗体产生负面影响的ADCC和/或CDC)的抑制效应的经修饰抗体可以用于临床前和人体检测。
本文描述的方法和组合物可以分为至少两类。在一个类别中，检测含有一个或多个氨基酸变化的修饰重链(称为RTX-MT)以确定克服CA125对ADCC和/或CDC的抑制的最大有效性，如使用分子测定所测量的，该分子测定监测与CA125存在下的亲本抗体相比，Fc-γ活化受体CD16a或CD32a或C1q补体蛋白质与RTX-MT抗体的结合。在另一个类别中，将C3B(SEQID:1)或C4B蛋白质(SEQ ID:2)与亲本或RTX-MT抗体组合检测，以确定克服CA125对ADCC和/或CDC抑制的最大有效性，如使用细胞活力测定所确定的。可以将抗体添加到表达CA125的CD20抗原阳性靶细胞中，或将CA125外源添加到具有C3B或C4B蛋白质的非CA125表达细胞中，并通过添加免疫效应细胞(NK、树突/骨髓/单核细胞、外周血单核细胞或ADCC报告细胞系)测量ADCC活性。或者，人或兔补体可以用于监测CDC活性。在任一测定中，比较用亲本与RTX-MT抗体(含或不含C3B或C4B蛋白质)处理的细胞之间的细胞活力，以确定哪种RTX-MT和/或C3B或C4B的组合可以显著阻断CA125介导的体液免疫抑制。CA125可以从靶细胞产生或外源添加到细胞培养物中。采用本领域技术人员使用的多种方法确定细胞活力。
对于治疗性施用，C3B或C4B蛋白质可以与亲本RTX-WT或RTX-MT抗体(含或不含其他标准护理剂)组合施用。它们可以在施用利妥昔单抗抗体之前、期间或之后施用。
组合物可以在进行这些方法的过程中形成。它们可以是从利妥昔单抗重链突变文库筛选中鉴定的RTX(SEQ ID NO:3)的受影响结构域内具有改变的氨基酸的蛋白质组合或者是例如可以添加到亲本RTX-WT或RTX-MT抗体以增强免疫效应活性的其他增强子蛋白质组合。本文描述的抗体和/或增强子蛋白质(即，含有C3B和C4B蛋白质的抗体结合结构域的蛋白质)的任何选择可以在施用之前或之后形成为组合物。
虽然已知一些对CA125免疫抑制敏感的抗体，但如本文所述通过修饰SEQ ID NO:3中所示RTX的受影响结构域来开发组合物的方法对于其动态结构被CA125改变的任何抗体都是有用的，这导致经抑制的体液免疫应答。
抗体或蛋白质的“动态结构“是抗体在给定时间点的三维结构，其中此时间点与抗体和另一种蛋白质或药剂的结合一致，并且在该时间点之前的抗体结构响应抗体与另一种蛋白质或药剂的结合而在该时间点之后已变成不同的结构。可以在存在增强子蛋白质(诸如C3B和C4B)的情况下监测这种变化。在半抗原与抗体的CDR结构域结合的情况下，已经报道了蛋白质与抗体结合以及对其动态结构的影响的作用，进而变构地改变其Fc结构域，从而降低其与包括Fc受体的Fc结合蛋白质的结合(Janda A等人,微生物学前沿(FrontMicrobiol)7:22,2016)。先前的研究还表明，当抗体与其抗原结合时，(FAB')2结构域的动态结构受到影响(Werner TC等人,美国国家科学院院刊(Proc Natl Acad Sci)69:795-799,1972)。最近，Kline等人报道，虽然一些人源化单克隆IgG1型抗体具有类似的氨基酸结构，但CA125结合它们的能力存在显著差异(Kline JB等人,肿瘤标靶(OncoTarget),8:52045-52060,2017)。
鉴于越来越多的证据表明肿瘤利用各种途径来逃避宿主免疫防御，以及继续采用基于抗体的方法来对抗各种癌症类型以及炎症和传染病这一事实，重要的是鉴定诸如C3B和C4B的药剂以及受影响抗体内的区域，这些区域可以被修饰以确定可以克服受影响抗体的体液免疫抑制的方法。这些药剂或经修饰的抗体组合物和方法进而能够选择可以克服CA125免疫抑制的先导抗体，并且可以用于患者筛查。例如，如果发现检测抗体受CA125影响，则可以预先筛选患有CD20阳性癌症的患者以确定他们是否具有升高的CA125。对于那些这样做的患者，可以使用可以克服CA125对体液应答的抑制效应的优化的RTX-MT。或者，可以使用增强子蛋白质诸如C3B或C4B以及亲本RTX-WT或RTX-MT抗体来增强肿瘤细胞杀伤。
我们提供用于在CA125存在下筛选抗CD20抗体动态结构的组合物和方法，CA125可以影响抗体动态结构并在与其细胞表面靶抗原结合后抑制其下游免疫效应功能。该方法包括以下步骤：经由随机诱变包含在SEQ ID NO:3内的受影响结构域从利妥昔单抗亲本抗体制备经修饰的重链并在也表达利妥昔单抗免疫球蛋白轻链(SEQ ID NO:6)的细胞系中表达它们以及筛选以鉴定那些具有降低的CA125结合或ADCC或CDC免疫效应活性的蛋白质。此外，可以与其他蛋白质一起筛选亲本利妥昔单抗，以鉴定在CA125存在下可以增强其免疫效应活性的那些蛋白质或其他试剂。图1A至图1D提供了在CA125存在下将蛋白质与利妥昔单抗组合以鉴定可以阻断CA125与亲本抗体结合和/或增强其ADCC或CDC活性的那些的实例。
在一种实施方式中，用编码表达构建体的人CD20转导天然表达CA125的人卵巢癌细胞以产生可以用于筛选CD20靶向抗体的CA125免疫抑制的CA125阳性和CD20阳性细胞。其他癌细胞类型可以用于制备细胞系，特别是源自上皮细胞的癌症，如卵巢癌细胞。曾经，此种细胞系是OVCAR。
在一些实施方式中，RTX-MT在受影响结构域(SEQ ID NO:3)内包含一个或多个氨基酸变化，并检测RTX-MT抗体克服ADCC或CDC的CA125体液免疫抑制的能力。
在一种用于测量增强子蛋白质与亲本或RTX-MT抗体组合或单独的RTX-MT抗体有效克服CA125体液免疫抑制的能力的方法中，检测抗体的直接CA125结合和/或经由ELISA或本领域技术人员已知的其他方法在CA125存在下结合CD16a或C1q蛋白质的能力。
在一些实施方式中，功能性方法用于使用ADCC或CDC测量RTX-MT在克服CA125引起的体液免疫抑制方面的效应。术语“效应”通常是指当药剂与单独的检测抗体一起孵育时，与具有CA125的抗体相比，ADCC或CDC靶细胞杀伤的10％或更大的变化。根据所使用的抗体和药剂，它也可以指至少5％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、70％或75％的变化。
与所附描述的各个方面相关的各种术语和用语在本文档的整个说明书和权利要求书中使用。除非另有特别说明，否则这些术语将被赋予其在本领域中的普通含义。其他特别定义的术语应以与提供的定义一致的方式解释。
如在本说明书和所附权利要求中使用的，单数形式的“一个”、“一种”和“该”也包括复数指代，除非内容另有明确规定。例如，提及“一个细胞”可以包括两个或更多个细胞的组合等。提及“探针”可以包括检验抗体、增强子蛋白质或独立探针，以经由本领域技术人员已知的任何分析方法监测体液免疫应答。
当提及诸如量、时间段和/或类似的量化值时使用的术语“约”意在涵盖从指定值至多±9％的变化，因为这样的变化适合于执行所公开的方法。除非另有说明，否则在说明书和权利要求书中使用的所有表示药剂量的值，诸如分子量、摩尔浓度、反应条件、百分比等，都应理解为在所有情况下通过术语“约”量化。因此，除非有相反的说明，以下说明书和所列权利要求中列出的数值是近似值，其可以取决于组合药剂的期望性质和/或本发明寻求获得的方法而变化。至少，而不是试图限制本申请的范围，每个数值应该至少由报告的有效数字和通过本领域技术人员已知的普通四舍五入方法来取值。
所使用的术语“抗体”是广义的，包括免疫球蛋白(也称为“Ig”)或抗体分子，其包括多克隆抗体(也称为pAb)、单克隆抗体(也称为mAb)包括鼠、人、人源化和嵌合mAb、双特异性抗体(也称为BSP)和抗体片段。通常，抗体是与特定抗原结合的蛋白质或多肽链。抗原是被给定抗体特异性识别的结构。典型抗体包含糖基化蛋白质的异四聚体，由通过二硫键和氢键的复合物排列而成的两条轻链和两条重链组成。术语“其二硫键桥”是指包含在重链铰链区内的二硫键桥，这是本领域技术人员公知的。每条重链都有一个可变结构域(可变区)(VH)，后面是多个恒定结构域(称为Fc结构域)。每条轻链都有可变结构域(VL)和恒定结构域；轻链的恒定结构域与重链的第一恒定结构域对齐，并且轻链VL与重链的可变结构域对齐。任何种类的抗体轻链基于其恒定结构域内的氨基酸序列，即kappa(κ)和lambda(λ)，被分配到两种不同类型中的一种。
免疫球蛋白分为类别或同种型，取决于Fc结构域的类型，即IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，这取决于其重链恒定结构域内所含的序列。IgA和IgG同种型进一步由亚类组成，如同种型IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
免疫球蛋白VL区或VH区由被三个“抗原结合位点”中断的“框架(FW)”区组成，根据报道的序列变异性，该“抗原结合位点”也称为互补决定区(CDR)(Wu TT,Kabat EA.实验医学杂志(J Exp Med),132:211-250,1970)。通常，抗原结合位点由六个CDR组成，其中三个位于重链(CDRH1、CDRH2、CDRH3)可变结构域内，三个位于轻链(CDRL1、CDRL2、CDRL3)可变结构域内(Kabat EA等人,第5版.PHS,美国马里兰州贝塞斯达国立卫生研究院(NationalInstitutes of Health),1991)。
“特异性结合”或“特异地结合”是指抗体或抗原结合片段与抗原(包括抗体本身所含的序列)的结合具有对齐其他抗原更大的亲和力。通常，特异性抗体或抗原结合片段以约5×10-8M或更小的平衡解离常数KD结合靶抗原。
术语“抗体动态结构”是指可以影响抗体体液功能(即Fc受体或C1q结合等)的任何结构变化。
术语“单克隆抗体(mAb)”是指源自单细胞克隆的抗体，包括任何真核或原核细胞克隆或噬菌体克隆，而不是其产生方法。因此，术语“单克隆抗体”不限于通过杂交瘤技术产生的抗体，而是还可以包括重组方法。
“Fab结构域”是指本领域技术人员已知的抗体铰链二硫键区N端的任何抗体序列。
“Fc结构域”是指本领域技术人员已知的抗体铰链二硫键区C端的并包括该抗体铰链二硫键区的任何抗体序列。
“受影响结构域”是指位于SEQ ID NO:3内鉴定的利妥昔单抗重链(SEQ ID NO:45)上的区域。
“抗原”是抗体或抗体片段特异性结合的实体。这包括与感兴趣的抗体或蛋白质结合。
术语“亲本抗体”是指由SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:47组成的利妥昔单抗抗体。
术语“RTX-MT”是指由SEQ ID NO:6和在受影响结构域(SEQ ID NO:3)内含有一个或多个氨基酸变化的重链组成的抗体。
术语“CA125-抗性”是指具有比亲本利妥昔单抗抗体更好的ADCC和/或CDC的RTX-MT抗体，特别是在CA125存在的情况下。
术语“药剂”或“增强子蛋白质”是指能够阻断或降低CA125与受影响抗体或亲本抗体结合的任何蛋白质，包括C3B(SEQ ID NO:1)和C4B(SEQ ID NO:2)蛋白质。
术语“受影响抗体”是指其体液免疫功能被CA125降低的抗体。
术语“利妥昔单抗”是指FDA批准的抗体[FDA参考号：4274293(万维网地址：accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2018/103705s5450lbl.pdf)]或任何含有编码SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ IDNO:44的CDR序列的抗体。
术语“CD20”是指由B细胞表达的人细胞表面蛋白，并且是利妥昔单抗特异性结合的靶抗原。
术语“CA125”是指由MUC16基因(HGNC:15582；OMIM:606154)产生的基因产物，其以可溶性和膜结合的形式存在。据报道，它与抗体结合并影响结合抗体的体液免疫功能(Kline JB等人,肿瘤标靶(OncoTarget),8:52045-52060,2017)。
术语“癌症”、“恶性”、“失调”和“肿瘤”在本领域中是众所周知的，是指存在具有不受调节的细胞生长和形态特征的细胞，这些细胞与类似来源的正常细胞类型不同，也称为失调细胞。恶性是指那些能够导致发病和/或死亡的癌细胞。如所使用的，“癌症和肿瘤”包括癌前和恶性类型。
如所使用的，术语“可溶的”是指不附着于细胞的细胞膜的蛋白质或非蛋白质试剂。例如，试剂可以从正常或癌细胞脱落、分泌或输出到生物流体中，包括血清、全血、血浆、尿液或细胞的微流体，包括肿瘤。
如所使用的，包括增强子蛋白质或RTX-MT抗体和CA125的特定蛋白质或非蛋白质试剂的“水平”是指使用本领域已知的用于体外或体内测量蛋白质和/或非蛋白质试剂水平的任何方法确定的试剂的一种或多种水平。此类方法包括凝胶电泳、毛细管电泳、高效液相色谱(HPLC)、薄层色谱(TLC)、超扩散色谱、流体或凝胶沉淀反应、吸收光谱、比色测定、分光光度测定、流式细胞术、免疫扩散(单或双)、溶液相测定、免疫电泳、Western印迹、放射免疫测定(RIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫荧光测定、荧光共振能量转移(FRET)、福斯特共振能量转移、电化学发光免疫测定等。在一种实施方式中，CA125的水平使用基于探针的技术来确定，如更详细描述的。
术语“体液免疫-抑制或体液免疫抑制”是指与CA125直接结合并改变其动态结构的任何抗体、抗体片段或双特异性抗体(BSP)。据报道，CA125由来自正常周围上皮细胞的淋巴瘤诱导(Sanusi等人,国际腹膜透析(Perit Dial Int.)21:495–500,2001)并且可以结合某些抗体并改变它们的动态结构，从而影响它们的生物活性(包括ADCC、CDC、视蛋白化、内化和/或PK、PD和PL谱)。
术语“双特异性抗体(BSP)”是指可以结合两种或更多种不同抗原的任何抗体。BSP可以包含至少但不限于两种全长抗体、一种全长抗体和一种单链抗体、或两种单链抗体，其中每一种结合不同抗原或同一抗原上的不同表位。
术语“抗体依赖性细胞毒性(ADCC)”是指一种体外或体内过程，其中抗体可以与细胞表面上的抗原结合，然后经由抗体Fc结构域内的序列与免疫效应细胞结合，进而导致它们释放可以杀死结合的细胞的毒素。
术语“补体依赖性细胞毒性(CDC)”是指一种体外或体内过程，其中抗体可以与真核或原核细胞表面上的抗原结合，然后经由抗体Fc结构域内的序列与C1q蛋白质结合，进而导致可以杀死结合的细胞的经典补体级联反应的启动。
术语“调理作用”是指一种过程，其中抗体可以与细胞表面的抗原结合，然后经由其Fc结构域内的序列与免疫细胞结合，进而导致免疫细胞吞噬、消耗并最终杀死抗体结合的细胞。
术语“药代动力学(PK)”是指抗体在施用于受试者时保持其稳态浓度的时间。
术语“药效学(PD)”是指对基于抗体的药物的生化和生理效应及其作用机制的研究，包括当施用于受试者时它们的作用和效应与其生化结构的相关性。
术语“药理学(PL)”是指抗体在体外或体内对控制或杀死疾病细胞的已知效应。
术语“样本”是指从受试者中分离的类似液体、细胞或组织以及存在于受试者体内的液体、细胞或组织的总称。流体可以包括生物流体，其包括与受试者或生物源接触的液体溶液，包括细胞和类器官培养基、尿液、唾液、灌洗液等。
如所使用的，术语“对照样本”是指任何临床或非临床相关的对照样本，包括例如来自未患特定癌症类型的健康受试者的样本或不同于其亲代细胞的细胞。
术语“对照水平”是指蛋白质或非蛋白质试剂的可接受或预定水平，其用于与源自受试者或用于体外测定的样本中的相同试剂的水平进行比较。
如所使用的，在存在或不存在增强子蛋白质的情况下，对照设置中的抗体信号与被CA125结合的抗体信号之间的“差异”通常是可以使用本领域技术人员常用的统计方法统计确定的任何差异，并且与对照相比，至少有10％或更大的差异。根据所使用的抗体和探针，它也可以指至少5％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、70％或75％的变化。
术语“抑制”或“其抑制”是指降低统计学上可测量的量，或完全防止。
在根据所述方法使用的抗体、含抗体部分(即BSP等)或增强子蛋白质的上下文中，术语“功能性”表示抗体和/或增强子蛋白质能够分别降低或阻断断CA125与受影响抗体的结合，和/或能够比单独的亲本抗体更好地在体外或体内杀死靶细胞。
术语“靶细胞”是指表达特定抗体或含抗体部分的抗原的真核或原核细胞或细胞群。
术语“药学上可接受的”是指从药理学和毒理学方面可接受施用于患者并且使用本领域技术人员已知的方法制造的物质。这些包括由联邦或州政府的监管机构批准或在美国药典或其他公认的药典中列出的用于动物和人类的药剂。术语“药学上相容的成分”是指与抗癌剂一起施用的药学上可接受的稀释剂、佐剂、赋形剂或基质载体。“药学上可接受的载体”是指不干扰一种或多种活性成分的生物活性的有效性并且对宿主无毒的基质。
术语“有效量”和“治疗有效”可互换使用，并且在以足以在患者中产生增强的临床结果的量施用药剂的上下文中使用。根据“有效方案”中描述的方法施用有效量的药剂。术语“有效方案”是指足以为患有特定癌症的患者实现增强的临床结果的药剂的量和给药频率的组合。当给患者施用能够比亲本化合物更好地克服发病率的药剂或能够增强有效方案的临床结果的药剂时，增强的功效是改善的临床结果。如在本文中的上下文中，有效量是指与亲本抗体或不含增强子蛋白质的抗体治疗相比时证明功效或差异所需的RTX-MT和/或增强子蛋白质的量。
术语“患者”和“受试者”可互换使用，指接受治疗剂治疗的人和其他非人动物，包括兽医受试者。术语“非人动物”包括所有脊椎动物。在一种实施方式中，受试者是人。
“治疗剂”通常基本上不含不希望的污染物。这意味着药剂通常至少约50％w/w(重量/重量)纯并且基本上不含干扰性蛋白质和污染物。
术语“免疫效应细胞”是指在与抗体结合的靶细胞结合后可以赋予抗体依赖性细胞毒性(ADCC)或吞噬作用(调理作用)的任何细胞，包括但不限于NK、骨髓细胞、单核细胞、树突状细胞。细胞可以被纯化或以混合物形式以外周血单核细胞(PBMC)的形式存在。
炎症性疾病包括自身免疫性疾病，以及类风湿性关节炎、肉芽肿性多血管炎、特发性血小板降低性紫癜、寻常型天疱疮、重症肌无力和Epstein-Barr病毒阳性皮肤粘膜溃疡。
术语“失调细胞”是指被认为对亲代细胞异常的任何细胞。这些包括转化细胞、恶性细胞、病毒感染细胞、经由自动调节自主生长的细胞或原核病原体。
术语“体液应答”是指ADCC、CDC或抗体通过检测抗体内化到靶细胞中。
术语“筛选”可以指在受影响抗体或含抗体部分(即，BSP、ADC、单链抗体、抗体片段等)存在的情况下检测可以与CA125结合的蛋白质并寻找监测ADCC或CDC杀伤的增强的生物应答。该术语可以用在其他环境中，其中正测定大量的检测元素以确定检测元素中的哪些元素具有特定的属性。类似地，它可以用来指对那些具有特定特性的患者样本进行测定。
术语“显著(地)”是指由包括学生T检验在内的任意数量的程序确定的P值小于0.05的统计结果。
治疗性增强子蛋白质和经修饰的利妥昔单抗抗体的组合物；以及用于产生和克服CA125介导的体液免疫抑制的方法。
增强子蛋白质(药剂)和其他化学或生物药剂可以通过受影响亲本和RTX-MT抗体有效阻断CA125的体液免疫应答抑制。在一些实施方式中，用于鉴定最优的增强子蛋白质和RTX-MT抗体的方法包括在受影响结构域(SEQ ID NO:3)中生成含有一个或多个氨基酸变化的RTX-MT抗体，并检测RTX-MT抗体在用于介导针对表达CD20的靶细胞的ADCC或CDC杀伤时所具有的显著改善的生物活性的能力。在一些实施方式中，RTX-MT抗体由一个氨基酸变化组成。在其他实施方式中，RTX-MT抗体由两个或更多个氨基酸变化组成。在RTX-MT抗体、表达CA125和CD20的靶细胞的存在下，可以使用功能性ADCC或CDC杀伤测定确定最优的氨基酸变化。实例示意性地示出于图1中。通过采用本领域技术人员常用的ADCC或CDC杀伤测定来鉴定能够显著克服CA125引起的体液免疫抑制的抗CA125的RTX-MT抗体。
在又一种实施方式中，RTX-MT抗体具有与亲本RTX抗体相似或更高的结合亲和力。
在一些用于鉴定抗CA125的RTX-MT抗体的方法中，将抗体添加到靶细胞培养物中，其中靶细胞天然或重组表达CD20和CA125。可以使用标准ADCC或CDC杀伤测定监测用于比较在RTX-MT与亲本抗体存在下的体液应答的培养物。至少10％的变化通常被认为是对ADCC和/或CDC功能有意义的效应。根据所采用的抗体和测定，有意义的效应也可以定义为至少5％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、70％或75％的变化。靶细胞系可以是天然表达CA125并用人CD20表达构建体转导的工程化癌细胞。
本文还提供了用抗CA125的RTX-MT抗体治疗癌症受试者的方法。例如，患者可能患有表达CD20的癌症，诸如但不限于，霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、大细胞淋巴瘤或慢性淋巴细胞白血病。一些报告发现，在患有此类癌症的患者中CA125表达升高，并且已经报道利妥昔单抗对CA125血清水平高于正常范围的患者中的效果较差。在此种情况下，RTX-MT抗体可能是理想的实体。
在用RTX-MT抗体治疗受试者的方法的一些实施方式中，可以单独用RTX-MT抗体或与标准护理疗法组合来治疗患有表达CA125的CD20+癌症的患者。在本文描述的治疗患有表达CA125的癌症的受试者的方法的一些实施方式中，将RTX-MT抗体施用于受试者，其中受试者具有高于正常范围的基线CA125水平。在本文所述的治疗患有表达CA125的癌症的受试者的方法的一些实施方式中，该方法包括单独施用RTX-MT抗体。在又一种实施方式中，RTX-MT抗体与化学疗法组合施用。化学疗法可以是在治疗受试者时被认为是特定癌症适应症的标准护理的任何化学疗法剂。在本文描述的治疗方法中，CA125表达水平可以通过本领域已知的任何方式确定并且由本领域技术人员定义为在正常范围内或以上。
在本文描述的治疗方法的一些实施方式中，RTX-MT抗体由受影响结构域(SEQ IDNO:3)中的一个氨基酸变化组成。RTX-MT抗体用于施用于患有表达CA125的CD20阳性(CD20+)癌症的患者。已知产生CA125的示例性CD20阳性癌症是霍奇金和非霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、大细胞淋巴瘤和慢性淋巴细胞性白血病。其他癌症也可以接受这种治疗，包括但不限于间皮瘤、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、结直肠癌、胃肠癌、子宫内膜癌和胰腺癌。
本方法可以与其他治疗手段组合，诸如手术(例如减瘤手术)、放射、靶向治疗、化学疗法、免疫疗法、使用生长因子抑制剂或抗血管生成因子。RTX-MT抗体或亲本抗体加增强剂可以同时施用于进行手术、化学疗法或放射疗法治疗的患者。或者，患者可以在RTX-MT抗体或亲本抗体加增强剂施用之前或之后进行手术、化学疗法或放射疗法至少一小时至至多几个月，例如在标准护理治疗施用之前或之后至少一小时、五小时、12小时、一天、一周、一个月或三个月。本文提供的治疗方法的一些实施方式涉及除了增强子蛋白质之外，还向受试者施用治疗有效量的化学疗法加受影响抗体，诸如针对肿瘤特异性抗原的抗CD20抗体。
在本文描述的治疗方法的一些实施方式中，在施用对由所述癌症和增强子蛋白质表达的抗原具有特异性的受影响抗体之前，受试者可能已经接受了肿瘤的一线手术切除、用于治疗癌症的一线化学疗法。
在本文所述的治疗方法的一些实施方式中，在施用抗性抗体或亲本抗体加增强子蛋白质之前，受试者可能已经接受了肿瘤的一线手术切除、用于治疗癌症的一线化学疗法，其中抗体对由所述癌症表达的抗原具有特异性，并且增强子蛋白质可以特异性阻断体液免疫抑制蛋白质诸如CA125。
根据本文所述的治疗方法施用RTX-MT抗体和/或增强子蛋白质可以通过本领域已知的任何方式进行。通常，抗体是静脉内输注的。
在又一种实施方式中，可以使用包含以下可以指导抗体与CD20抗原结合的CDR序列的治疗性抗体：作为CDRH1的SEQ ID NO:41(GYTFTSYN)、作为CDRH2的SEQ ID NO:42(IYPGNGDT)、作为CDRH3的SEQ ID NO:43(ARSTYYGGDWYFNV)、作为CDRL1的SEQ ID NO:44(SSSVSY)、作为CDRL2的SEQ ID NO:45(ATS)和作为CDRL3的SEQ ID NO:46(QQWTSNPPT)，根据
Figure BDA0003714748420000201
(国际ImMunoGeneTics信息系统
Figure BDA0003714748420000202
)编号并且具有受影响结构域(SEQ ID NO:3)的突变。抗体可以与增强子蛋白质共同施用或单独施用于CD20阳性的疾病适应症以及其中CA125高于正常范围的情况。增强子蛋白质的剂量水平可以高达临床确定的最大耐受剂量(MTD)或低于MTD的水平。增强子蛋白质的施用可以在抗体施用之前、同时或之后。治疗可以包括手术以及标准护理治疗。增强子蛋白质或其他化学或生物增强剂可以与抗体一起、组合或分开施用。例如，它可以口服、皮内、皮下、肌肉内或静脉内施用。
可以使用各种递送系统来施用RTX-MT抗体或增强子蛋白质，必要时包括皮内、肌肉内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外和口服途径。可以例如通过输注或推注，经由全身或局部途径通过上皮或粘膜皮肤内层(例如，口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)吸收来施用它们。
可以经由注射器、导管、栓剂或任何可植入基质或设备注射施用RTX-MT抗体或增强子蛋白质。
如本文所述用途的RTX-MT抗体或增强子蛋白质及其药物组合物可以以任何可接受的剂型(诸如胶囊、片剂、水性混悬剂、溶液等)口服施用。
RTX-MT抗体或增强子蛋白质的合适的施用方法包括但不限于以适合有效治疗的最终浓度静脉内注射和腹膜内施用。
RTX-MT抗体或增强子蛋白质与其他药物组合可以作为药物组合物施用，该药物组合物包含治疗或预防有效量的治疗剂和一种或多种药学上可接受或相容的成分。
可以通过标准临床技术来确定在癌症或非肿瘤疾病的治疗或预防中有效的治疗剂的量。此外，可以任选地采用体外测定来帮助鉴定RTX-MT抗体或增强子蛋白质所需的最优的剂量范围。有效剂量可以从源自体外或动物模型检测系统的RTX-MT抗体或增强子蛋白质的剂量-应答曲线外推。
例如，可以通过用于确定LD50(对50％的人群致死的剂量)和ED50(在50％的人群中治疗有效的剂量)值的标准药学规程在细胞培养物或实验动物中确定RTX-MT抗体或增强子蛋白质的毒性和疗效。毒性和疗效之间的剂量比是治疗指数，其可以表示为比值LD50/ED50。表现出大治疗指数的药剂是合适的。当药剂表现出毒副作用时，可以使用将药剂靶向受影响组织部位的递送系统，以最小化对不表达CD20的细胞的潜在损害，从而降低副作用。
例如，核酸载体可以是质粒、病毒或亚病毒。优选地，核酸将通过具有有效的复制起点而保持在所需的宿主细胞中，但在某些情况下，可能需要瞬时表达。通常，需要表达突变抗体，这需要载体上的表达控制序列和宿主细胞中的适当辅助蛋白。通常，为了产生大量抗体或抗体部分，将形成表达全部或部分抗体的稳定细胞系。例如，抗体部分可以是整个轻链或重链。
给药和剂量方案可以根据活性药物浓度而变化，这可以取决于受试者的需要、大小和状态。
实施例1-筛选可以克服受影响抗体的CA125免疫抑制的蛋白质并绘制CA125抗体结合图
图1A至图1D示出了鉴定可以阻断受影响抗体的CA125免疫抑制效应的蛋白质的筛选方法和结果，以及使用它们的结合来绘制CA125可以结合的受影响抗体上的区域。
增强子蛋白质阻断CA125对受影响抗体的免疫抑制效应；受影响抗体是利妥昔单抗。筛选测定涉及96孔板ELISA，其中孔包被含或不含CA125蛋白质的利妥昔单抗，然后用含或不含C3B或C4B蛋白质的生物素化的人CD16a探测孔并测量CD16a结合。先前研究表明，CA125可以抑制CD16a或C1q蛋白质与受影响抗体结合的效应。如图1B所示，含RTX的孔结合CD16a和C1q蛋白质，而含RTX加CA125的孔则显著降低了任何一种蛋白质的结合。接下来，将C4B蛋白质(SEQ ID NO:2)添加到含RTX加CA125的孔中。将C4B添加到含利妥昔单抗加CA125的孔中导致CD16a和C1q结合恢复。为了证明这种效应导致了功能性结果，用含或不含外源添加的CA125的RTX处理人CD20阳性的Daudi细胞，并如下所述筛选ADCC或CDC活性。如图1C所示，CA125抑制CDC活性。接下来，将C4B添加到类似的培养物中，发现它可以恢复用RTX加CA125处理的孔中的CDC活性。这种效应似乎是C4B与RTX抗体结合而不是与CA125结合的结果，因为经由ELISA的直接结合测定发现生物素化的C4B可以与包被RTX而不是CA125的孔结合(未示出)。对C3B也观察到了类似的效果，一部分数据提供于图1D中。
使用ADCC报告基因生物活性检检测剂盒(Reporter Bioassay Core Kit)的一部分的Jurkat-Luc效应细胞进行CD16A活化测定，并按照供应商(Promega)的建议进行测定。简而言之，将2x104个靶细胞一式三份接种于测定缓冲液(RPMI+L-谷氨酰胺+1％超低Ig血清)(Gibco)中的黑色不透明96孔板中过夜。第二天，将1x105个Jurkat-Luc效应细胞以效靶比5:1添加到测定缓冲液中的孔中。抗体、效应细胞和靶细胞在37℃/5％CO2下孵育16小时。板在室温下平衡10分钟。将五十微升Bio-glo试剂(Promega)添加到孔中，并使用VarioskanLUX板读数仪(ThermoFisher)对发光进行定量。
如下进行在CA125存在下RTX与CD20结合的竞争。简而言之，ELISA板在4℃下用0.05M碳酸盐缓冲液(pH 9.5)中的稀释抗原包被过夜。包被的抗原是10μg/mL的CD20/MS4A1线性肽(Rp1-L；Favoino等人,国际分子科学(Int J Mol Sci.)2019年四月；20(8):1920)。用含有5％BSA的0.05M磷酸盐缓冲液(pH7.2(PBS))在室温下封闭板1小时，然后用PBS洗涤两次。生物素化的RTX(通过EZ-link Sulfo-NHS-LC-Biotin,ThermoFisher)或阴性对照人血清白蛋白(HSA)以5μg/mL的浓度在室温下添加到PBS中的板中1小时。通过在一些反应中添加10μg/mL未标记的RTX(2倍过量)或30KU/mL的CA125来进行竞争。用PBS洗涤孔3次，然后在室温下添加PBS/BSA中的链霉亲和素-HRP1小时。洗涤后，通过添加75μL的TMB底物(Pierce)使反应展开长达10分钟并通过添加75μL的0.1NH2SO4使反应停止。在Varioskan板读数仪(ThermoFisher)中测量450nm处的吸光度。
先前报告显示CA125可以与受影响抗体的Fab结构域结合(Kline JB等人,肿瘤标靶(OncoTarget),8:52045-52060,2017；Nicolaides NC等人,癌症生物学与治疗(CancerBiol Ther)13:1-22,2018)。先前已经报道C3B和C4B与IgG1型抗体的Fab结构域结合(Campbell RD等人,生物化学杂志(Biochem J),189:67-80,1980；Sahu A和Pangburn MK,生物化学杂志(J BiolChem),269:28997-29002,1994)。
为了确定C3B和/或C4B是否可以经由阻断其结合利妥昔单抗的能力来阻断CA125免疫抑制，使用ELISA进行了竞争性结合测定。如图2A所示，如先前报道的生物素化的利妥昔单抗能够结合CA125(Kline JB等人,肿瘤标靶(OncoTarget),8:52045-52060,2017)。添加重组C4B蛋白质能够阻断利妥昔单抗与CA125的结合，从而证实降低的CA125免疫抑制效应是通过抑制CA125与受影响抗体结合来实现的。用C3B观察到类似的效应(图1D)。相比之下，其他IgG结合蛋白质(诸如蛋白质L)不阻断CA125结合，证实了C3B和C4B效应的特异性(图1D)。虽然已经报道了C3B或C4B与抗体的Fab结构域的结合，但对其结合的免疫球蛋白结构域(轻链或重链，或两者)的确定是模棱两可的。为了更好地确定CA125是否与利妥昔单抗的轻链、重链或两条免疫球蛋白链结合，使用未受影响抗体帕妥珠单抗(PTZ)的轻链和重链的嵌合抗体(Kline JB等人,肿瘤标靶(OncoTarget),8:52045-52060,2017)与利妥昔单抗的重链和轻链组合产生嵌合抗体。然后将这些抗体生物素化并检测CA125结合。如图2B所示，含利妥昔单抗重链的嵌合抗体(RTX-hc/PTZ-lc)仍然能够结合CA125，而含轻链的嵌合抗体(PTZ-hc/RTX-lc)则不能，从而完善了CA125与含CDR3区域内的重链和二硫键铰链区N端残基的假定结合。此外，利妥昔单抗-CA125相互作用可以由与重链CH1结构域结合的补体蛋白质C3B(图1D)竞争，但不能由与轻链可变结构域结合的蛋白质L竞争。这些数据提供了CA125结合位点位于利妥昔单抗重链内以及C3B(SEQ ID NO:1)可以用于逆转CA125免疫抑制效应的证据。
实施例2——鉴定CA125结合和CA125-抗性利妥昔单抗抗体生成所需的关键残基
已显示C3B和C4B蛋白质分别与抗体的CDR3-框架4(CDR3-FW4)和CH1区结合，并且图1和图2中所示结果表明这些蛋白质竞争CA125与亲本利妥昔单抗(RTX-WT)的结合，表明CA125可能与CDR3-FW4和CH1区结合。因为RTX-WT重链也足以结合CA125，我们应用随机诱变文库方法来尝试确定CA125与利妥昔单抗重链结合是否需要一个或多个特定残基。我们采用本领域技术人员常用的随机诱变PCR方法来创建在受影响结构域CDR3-FWR4和CH1(SEQID NO:3)内具有突变残基的利妥昔单抗重链文库，然后使用真核表达载体在HEK293细胞中将其与利妥昔单抗轻链(SEQ ID NO:6)组合重组表达。生成了超过1000个克隆的文库。由于CDR3内的突变可能对CD20抗原结合产生负面影响，因此经由ELISA筛选培养上清液的抗体产生和CD20结合。然后分析了超过200个利妥昔单抗克隆的CA125结合，发现五个保留了与亲本抗体类似的或更高的CD20结合，并且显著降低了CA125结合。然后对来自这些克隆的重链进行测序，并且发现所有这些都在目标区域内具有突变。如图3所示，所有克隆都具有多个突变，并且一些具有重叠的突变氨基酸。如图4所示，克隆148(SEQ ID NO:37和EQ ID NO:38)、164(SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32)、166(SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5)、198(SEQ IDNO:19和SEQ ID NO:20))和199(SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26)具有最强的CD20结合和降低的CA125结合。我们扩增了这些克隆，纯化了它们的特异性RTX-MT抗体，并且在功能性ADCC和CDC测定中对其进行了检测。如图5所示，克隆164(SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32)、166(SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5)和198(SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20)对CA125最具抗性。这些RTX-MT抗体现已准备好进行临床前和临床检测。为了进一步描述这些抗体内的一个或多个突变是否需要降低CA125结合，我们将单突变或双突变工程化到利妥昔单抗重链中并重新筛选CA125结合。如图6A所示，RTX-MT克隆112-134(在密码子109处N到D以及在密码子131处P到S的氨基酸变化，SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14)、克隆133(在密码子130处F到Y的氨基酸变化，SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30)、克隆106(在密码子103处G到C的氨基酸变化，SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34)和克隆137(在密码子134处P到S的氨基酸变化，SEQID NO:35和SEQ ID NO:36)显示与CA125的结合降低(P<0.0055)同时仍保留与其亲本抗体一样的CD20结合。与亲本抗体相比，RTX-MT克隆112-134和133在CA125存在下展示出改善的CD16a-生物素和C1q-生物素结合(图6B)，证实了CA125或其缺乏与抗体的结合和抗体免疫-效应复合物的形成和功能之间的联系。
进一步研究了源自RTX-MT克隆166的突变，因为观察到的CA125抗性表型是否需要所有氨基酸变化或其组合并不明显。序列分析显示RTX-MT克隆166(SEQ ID NO:5)具有3个氨基酸变化(在密码子109处的N到D、在密码子131处的P到S以及在密码子136处的S到Y。为了研究每个突变对观察到的表型的贡献，设计了额外的RTX-MT变体，每个变体都具有在RTX-MT克隆166中发现的三个氨基酸变化中的一个以及双突变的组合。对这些新的RTX-MT变体(命名为N109D、P131S、S136Y、N109D+P131S、N109D+S136Y和P131S+S136Y)的分析表明，N109D突变(密码子109处N到D的氨基酸变化)的存在与对CA125介导的Fc受体抑制(图7A)以及C1q结合(图7B)的敏感性降低相关。抗HER2抗体帕妥珠单抗(PTZ)用作CA125-抗性对照抗体。经进一步检测，N109D变体(本文称为RTX-MT或RTX N109D)显示以与亲本RTX相当的水平结合CD20(图7C)，重要的是，它与CA125的结合显著降低了50％(图7D)。总体而言，这些结果表明突变N109D(密码子109处N变为D)足以降低RTX N109D对CA125的敏感性。
RTX N109D被用作CA125-抗性RTX-MT变体的实例并且进行进一步表征。通过替代测定分析其与CD20的结合以确保与亲本RTX的CD20结合的可比性。抗体平衡解离常数(Kd)的测量通过使用基于细胞的荧光测定法进行，该测定涉及抗原阳性(Ramos)和抗原阴性(Jurkat)细胞系的免疫染色。在该测定中，用0.78至100nM范围内的488-标记抗体的2倍浓度滴定对细胞进行染色。简而言之，细胞在完全RPMI中悬浮生长。将活力>85％的汇合培养物以800RPM离心6分钟，并将细胞沉淀重悬于50mL试管中的4mL无动物阻滞剂(Vector实验室SP-5035)中以洗涤细胞。再次离心细胞并以1000万/mL重悬于无动物阻滞剂中。样本在冰上孵育20分钟以封闭任何非特异性结合位点。然后将细胞(200mL/200万个细胞/孔)转移到V型底聚丙烯96孔微孔板(Corning 3363)中，并在台式离心机中以1,500RPM离心2min。去除上清液并将细胞重悬于90mL/孔的无动物阻滞剂中。每种条件都在重复的孔中进行检测。将稀释的488-标记抗体(10μL/孔)添加到相应的孔中，并且将样本在冰上孵育1小时，每20分钟混合一次。然后使用100μL/孔的无动物阻滞剂洗涤细胞4次，并且在每次洗涤后以1,500RPM离心2分钟。最后一次洗涤后，用100μL/样本的10％福尔马林(LabChem,LC146702)固定细胞10分钟。再次离心样本，然后将细胞重悬于100μL/孔的无动物阻滞剂并且转移到黑色微孔板(Greiner Bio-One,655086)中。通过使用Varioskan LUX板读数仪测量每个样本在494nm激发/519nm发射下的荧光。从抗原阳性细胞的结合信号中减去与抗原阴性细胞结合的非特异性背景。使用GraphPad Prism版本8.4中“与一个位点的饱和结合”的非线性回归分析绘制减去的值。该模型将Kd确定为平衡时与一半受体位点结合的配体浓度。
使用该结合测定，RTX N109D以剂量依赖性方式与CD20阳性Ramos细胞结合，而它不与CD20阴性Jurkat细胞结合，证实了与亲本利妥昔单抗(RTX)相似的靶细胞特异性的保留(图8A至图8B)。此外，所测得的RTX和RTX N109D的亲和力/Kd分别为20.6和30.5nM(图8C至图8D)。虽然预计RTX N109D亲和力会小幅下降，并且与使用不同测定法的先前CD20结合数据一致(图7C)，但总体RTX N109D显示与亲本利妥昔单抗相当的CD20特异性结合和亲和力。
由于CA125抑制C1q与亲本利妥昔单抗的结合，导致CDC活性降低，因此研究了CA125对RTX N109D介导的CDC的影响。如前所示，与亲本利妥昔单抗(RTX)相比，C1q与RTXN109D的结合增加(图7B)。与使用表达免疫抑制性CA125以及CD20的靶细胞的RTX相比，这种C1q结合的增加导致RTX N109D介导的CDC活性增强(图9A)，而当使用CA125阳性但CD20阴性细胞时没有注意到显著的杀伤(图9B)。
因为CA125抑制了亲本利妥昔单抗与Fc受体的结合以及其信号活化和随后降低的ADCC活性，我们研究了使用RTX N109D时这种免疫抑制效应是否减弱。分析表明，RTX N109D与Fc受体结合并以比表达CA125的靶细胞中的亲本利妥昔单抗(RTX)显著更高的水平活化其信号传导，而当使用CA125阴性细胞时没有注意到显著差异(图10A至图10B)。PTZ用作CA125-抗性对照抗体。增强的Fc受体相互作用和活化的重要结果是，与亲本利妥昔单抗(RTX)相比，RTX N109D在免疫抑制CA125存在下能够介导针对靶细胞的更强的Fc受体依赖性细胞毒活性(ADCC)(图10C)。
这些数据表明，修饰利妥昔单抗重链受影响区域(SEQ ID NO:3)内的残基以产生CA125抗性抗体可以在CA125免疫抑制蛋白质的存在下改善CD20-阳性细胞杀伤。
本文件中引用的所有参考文献均明确并入本文。
序列识别(所有序列N到C，对于RTX-MT氨基酸序列，氨基酸变化以粗体表示)
SEQ ID NO:1C3B
MGPTSGPSLLLLLLTHLPLALGSPMYSIITPNILRLESEETMVLEAHDAQGDVPVTVTVHDFPGKKLVLSSEKTVLTPATNHMGNVTFTIPANREFKSEKGRNKFVTVQATFGTQVVEKVVLVSLQSGYLFIQTDKTIYTPGSTVLYRIFTVNHKLLPVGRTVMVNIENPEGIPVKQDSLSSQNQLGVLPLSWDIPELVNMGQWKIRAYYENSPQQVFSTEFEVKEYVLPSFEVIVEPTEKFYYIYNEKGLEVTITARFLYGKKVEGTAFVIFGIQDGEQRISLPESLKRIPIEDGSGEVVLSRKVLLDGVQNPRAEDLVGKSLYVSATVILHSGSDMVQAERSGIPIVTSPYQIHFTKTPKYFKPGMPFDLMVFVTNPDGSPAYRVPVAVQGEDTVQSLTQGDGVAKLSINTHPSQKPLSITVRTKKQELSEAEQATRTMQALPYSTVGNSNNYLHLSVLRTELRPGETLNVNFLLRMDRAHEAKIRYYTYLIMNKGRLLKAGRQVREPGQDLVVLPLSITTDFIPSFRLVAYYTLIGASGQREVVADSVWVDVKDSCVGSLVVKSGQSEDRQPVPGQQMTLKIEGDHGARVVLVAVDKGVFVLNKKNKLTQSKIWDVVEKADIGCTPGSGKDYAGVFSDAGLTFTSSSGQQTAQRAELQCPQPAARRRRSVQLTEKRMDKVGKYPKELRKCCEDGMRENPMRFSCQRRTRFISLGEACKKVFLDCCNYITELRRQHARASHLGLARSNLDEDIIAEENIVSRSEFPESWLWNVEDLKEPPKNGISTKLMNIFLKDSITTWEILAVSMSDKKGICVADPFEVTVMQDFFIDLRLPYSVVRNEQVEIRAVLYNYRQNQELKVRVELLHNPAFCSLATTKRRHQQTVTIPPKSSLSVPYVIVPLKTGLQEVEVKAAVYHHFISDGVRKSLKVVPEGIRMNKTVAVRTLDPERLGREGVQKEDIPPADLSDQVPDTESETRILLQGTPVAQMTEDAVDAERLKHLIVTPSGCGEQNMIGMTPTVIAVHYLDETEQWEKFGLEKRQGALELIKKGYTQQLAFRQPSSAFAAFVKRAPSTWLTAYVVKVFSLAVNLIAIDSQVLCGAVKWLILEKQKPDGVFQEDAPVIHQEMIGGLRNNNEKDMALTAFVLISLQEAKDICEEQVNSLPGSITKAGDFLEANYMNLQRSYTVAIAGYALAQMGRLKGPLLNKFLTTAKDKNRWEDPGKQLYNVEATSYALLALLQLKDFDFVPPVVRWLNEQRYYGGGYGSTQATFMVFQALAQYQKDAPDHQELNLDVSLQLPSRSSKITHRIHWESASLLRSEETKENEGFTVTAEGKGQGTLSVVTMYHAKAKDQLTCNKFDLKVTIKPAPETEKRPQDAKNTMILEICTRYRGDQDATMSILDISMMTGFAPDTDDLKQLANGVDRYISKYELDKAFSDRNTLIIYLDKVSHSEDDCLAFKVHQYFNVELIQPGAVKVYAYYNLEESCTRFYHPEKEDGKLNKLCRDELCRCAEENCFIQKSDDKVTLEERLDKACEPGVDYVYKTRLVKVQLSNDFDEYIMAIEQTIKSGSDEVQVGQQRTFISPIKCREALKLEEKKHYLMWGLSSDFWGEKPNLSYIIGKDTWVEHWPEEDECQDEENQKQCQDLGAFTESMVVFGCPN
SEQ ID NO:2 C4B
MRLLWGLIWASSFFTLSLQKPRLLLFSPSVVHLGVPLSVGVQLQDVPRGQVVKGSVFLRNPSRNNVPCSPKVDFTLSSERDFALLSLQVPLKDAKSCGLHQLLRGPEVQLVAHSPWLKDSLSRTTNIQGINLLFSSRRGHLFLQTDQPIYNPGQRVRYRVFALDQKMRPSTDTITVMVENSHGLRVRKKEVYMPSSIFQDDFVIPDISEPGTWKISARFSDGLESNSSTQFEVKKYVLPNFEVKITPGKPYILTVPGHLDEMQLDIQARYIYGKPVQGVAYVRFGLLDEDGKKTFFRGLESQTKLVNGQSHISLSKAEFQDALEKLNMGITDLQGLRLYVAAAIIESPGGEMEEAELTSWYFVSSPFSLDLSKTKRHLVPGAPFLLQALVREMSGSPASGIPVKVSATVSSPGSVPEVQDIQQNTDGSGQVSIPIIIPQTISELQLSVSAGSPHPAIARLTVAAPPSGGPGFLSIERPDSRPPRVGDTLNLNLRAVGSGATFSHYYYMILSRGQIVFMNREPKRTLTSVSVFVDHHLAPSFYFVAFYYHGDHPVANSLRVDVQAGACEGKLELSVDGAKQYRNGESVKLHLETDSLALVALGALDTALYAAGSKSHKPLNMGKVFEAMNSYDLGCGPGGGDSALQVFQAAGLAFSDGDQWTLSRKRLSCPKEKTTRKKRNVNFQKAINEKLGQYASPTAKRCCQDGVTRLPMMRSCEQRAARVQQPDCREPFLSCCQFAESLRKKSRDKGQAGLQRALEILQEEDLIDEDDIPVRSFFPENWLWRVETVDRFQILTLWLPDSLTTWEIHGLSLSKTKGLCVATPVQLRVFREFHLHLRLPMSVRRFEQLELRPVLYNYLDKNLTVSVHVSPVEGLCLAGGGGLAQQVLVPAGSARPVAFSVVPTAATAVSLKVVARGSFEFPVGDAVSKVLQIEKEGAIHREELVYELNPLDHRGRTLEIPGNSDPNMIPDGDFNSYVRVTASDPLDTLGSEGALSPGGVASLLRLPRGCGEQTMIYLAPTLAASRYLDKTEQWSTLPPETKDHAVDLIQKGYMRIQQFRKADGSYAAWLSRGSSTWLTAFVLKVLSLAQEQVGGSPEKLQETSNWLLSQQQADGSFQDLSPVIHRSMQGGLVGNDETVALTAFVTIALHHGLAVFQDEGAEPLKQRVEASISKASSFLGEKASAGLLGAHAAAITAYALTLTKAPADLRGVAHNNLMAMAQETGDNLYWGSVTGSQSNAVSPTPAPRNPSDPMPQAPALWIETTAYALLHLLLHEGKAEMADQAAAWLTRQGSFQGGFRSTQDTVIALDALSAYWIASHTTEERGLNVTLSSTGRNGFKSHALQLNNRQIRGLEEELQFSLGSKINVKVGGNSKGTLKVLRTYNVLDMKNTTCQDLQIEVTVKGHVEYTMEANEDYEDYEYDELPAKDDPDAPLQPVTPLQLFEGRRNRRRREAPKVVEEQESRVHYTVCIWRNGKVGLSGMAIADVTLLSGFHALRADLEKLTSLSDRYVSHFETEGPHVLLYFDSVPTSRECVGFEAVQEVPVGLVQPASATLYDYYNPERRCSVFYGAPSKSRLLATLCSAEVCQCAEGKCPRQRRALERGLQDEDGYRMKFACYYPRVEYGFQVKVLREDSRAAFRLFETKITQVLHFTKDVKAAANQMRNFLVRASCRLRLEPGKEYLIMGLDGATYDLEGHPQYLLDSNSWIEEMPSERLCRSTRQRAACAQLNDFLQEYGTQGCQV
SEQ ID NO:3(利妥昔单抗重链至铰链的残基)
AVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPP
SEQ ID NO:4
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTACGGCGGTGATTGGTACTTCGACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCGCATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCTCCCTGGCACCCTCCTACAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO:5在密码子109处N到D、在密码子131处P到S以及在密码子136处S到Y的氨基酸变化
Figure BDA0003714748420000291
SEQ ID NO:6
QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:7
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTACGGCGGCGATTGGTACTTCGACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCGCATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAA
SEQ ID NO:8在密码子109处N到D的氨基酸变化
Figure BDA0003714748420000301
SEQ ID NO:9
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTACGGCGGCGATTGGTACTTCAACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCGCATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCTCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAA
SEQ ID NO:10在密码子131处P到S的氨基酸变化
Figure BDA0003714748420000311
SEQ ID NO:11
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTACGGCGGCGATTGGTACTTCAACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCGCATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTACAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAA
SEQ ID NO:12在密码子136处S到Y的氨基酸变化
Figure BDA0003714748420000321
Figure BDA0003714748420000331
SEQ ID NO:13
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTACGGCGGCGATTGGTACTTCGACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCGCATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCTCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAA
SEQ ID NO:14在密码子109处N到D以及在密码子131处P到S的氨基酸变化
Figure BDA0003714748420000341
SEQ ID NO:15
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTACGGCGGCGATTGGTACTTCGACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCGCATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTACAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAA
SEQ ID NO:16在密码子109处N到D以及在密码子136处S到Y的氨基酸变化
Figure BDA0003714748420000351
SEQ ID NO:17
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTACGGCGGCGATTGGTACTTCAACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCGCATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCTCCCTGGCACCCTCCTACAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAA
SEQ ID NO:18在131处P到S以及在136处S到Y的氨基酸变化
Figure BDA0003714748420000361
SEQ ID NO:19
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTACGGCGGCGATTGGTGCTTCAACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCACATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO:20在密码子107处Y到C以及在密码子122处A到T的氨基酸变化
Figure BDA0003714748420000371
SEQ ID NO:21
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTACGGCGGCGATTGGTGCTTCAACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCGCATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAA
SEQ ID NO:22在密码子107处Y到C的氨基酸变化
Figure BDA0003714748420000381
SEQ ID NO:23
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTACGGCGGCGATTGGTACTTCAACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCACATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAA
SEQ ID NO:24在密码子122处A到T的氨基酸变化
Figure BDA0003714748420000391
SEQ ID NO:25
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTATGGCGGCGATTGGTACTTAAACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCGCATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTACCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO:26在密码子108处F到L以及在密码子130处F到Y的氨基酸变化
Figure BDA0003714748420000401
Figure BDA0003714748420000411
SEQ ID NO:27
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTACGGCGGCGATTGGTACTTAAACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCGCATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAA
SEQ ID NO:28在密码子108处F到L的氨基酸变化
Figure BDA0003714748420000421
SEQ ID NO:29
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTACGGCGGCGATTGGTACTTCAACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCGCATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTACCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAA
SEQ ID NO:30在密码子130处F到Y的氨基酸变化
Figure BDA0003714748420000431
SEQ ID NO:31
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTACTGCGGCGATTGGTACTTCAACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCGCATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCATCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTAAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCACCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCCGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO:32在密码子103处G到C、在密码子134处P到S、在密码子169处S到T以及在密码子196处S到R的氨基酸变化
Figure BDA0003714748420000441
SEQ ID NO:33
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTACTGCGGCGATTGGTACTTCAACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCGCATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAA
SEQ ID NO:34在密码子103处G到C的氨基酸变化
Figure BDA0003714748420000451
SEQ ID NO:35
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTACGGCGGCGATTGGTACTTCAACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCGCATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCATCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAA
SEQ ID NO:36在密码子134处P到S的氨基酸变化
Figure BDA0003714748420000461
SEQ ID NO:37
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTTCGGCGGCGATTGGTACTTCAACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCGCATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAA
SEQ ID NO:38在密码子102处Y到F的氨基酸变化
Figure BDA0003714748420000471
SEQ ID NO:39
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTACGGCGGCGATTGGTACTTCAACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCGCATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCAGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAA
SEQ ID NO:40在密码子167处L到Q的氨基酸变化
Figure BDA0003714748420000481
Figure BDA0003714748420000491
SEQ ID NO:41(CDRH1)GYTFTSYN
SEQ ID NO:42(CDRH2)IYPGNGDT
SEQ ID NO:43(CDRH3)ARSTYYGGDWYFNV
SEQ ID NO:44(CDRL1)SSSVSY
SEQ ID NO:45(CDRL2)ATS
SEQ ID NO:46(CDRL3)QQWTSNPPT
SEQ ID NO:47(利妥昔单抗重链野生型)
QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:48用于随机诱变PCR的正向引物
CGCCGTGTATTACTGTGCT
SEQ ID NO:49用于随机诱变PCR的反向引物
GGTGGGCATGTGTGAGTTT
SEQ ID NO:50(编码利妥昔单抗重链野生型的核酸)
CAAGTGCAGCTGCAGCAGCCGGGTGCAGAACTCGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCAAAGCCAGCGGCTACACCTTCACCTCCTACAACATGCACTGGGTCAAGCAAACTCCTGGACGCGGACTTGAGTGGATTGGTGCTATCTACCCCGGAAACGGCGACACCAGCTACAATCAGAAGTTTAAGGGGAAGGCCACTCTGACTGCCGACAAGTCGTCCTCGACGGCGTACATGCAGCTGAGCTCGCTGACCTCCGAGGACTCCGCCGTGTATTACTGTGCTCGGTCCACCTACTACGGCGGCGATTGGTACTTCAACGTCTGGGGAGCCGGAACCACTGTGACCGTGTCAGCCGCATCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAA。
序列表
<110> L•格拉索(Grasso, Luigi)
N•C•尼古拉德斯(Niicolaides, Nicholas)
J•B•克莱恩(Kline, James Bradford)
<120> 抗肿瘤免疫抑制因子的工程化单克隆抗体的组合物和用途
<130> 008966.00005
<160> 50
<170> 用于窗口操作系统版本4.0的FastSEQ
<210> 1
<211> 1663
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Gly Pro Thr Ser Gly Pro Ser Leu Leu Leu Leu Leu Leu Thr His
1 5 10 15
Leu Pro Leu Ala Leu Gly Ser Pro Met Tyr Ser Ile Ile Thr Pro Asn
20 25 30
Ile Leu Arg Leu Glu Ser Glu Glu Thr Met Val Leu Glu Ala His Asp
35 40 45
Ala Gln Gly Asp Val Pro Val Thr Val Thr Val His Asp Phe Pro Gly
50 55 60
Lys Lys Leu Val Leu Ser Ser Glu Lys Thr Val Leu Thr Pro Ala Thr
65 70 75 80
Asn His Met Gly Asn Val Thr Phe Thr Ile Pro Ala Asn Arg Glu Phe
85 90 95
Lys Ser Glu Lys Gly Arg Asn Lys Phe Val Thr Val Gln Ala Thr Phe
100 105 110
Gly Thr Gln Val Val Glu Lys Val Val Leu Val Ser Leu Gln Ser Gly
115 120 125
Tyr Leu Phe Ile Gln Thr Asp Lys Thr Ile Tyr Thr Pro Gly Ser Thr
130 135 140
Val Leu Tyr Arg Ile Phe Thr Val Asn His Lys Leu Leu Pro Val Gly
145 150 155 160
Arg Thr Val Met Val Asn Ile Glu Asn Pro Glu Gly Ile Pro Val Lys
165 170 175
Gln Asp Ser Leu Ser Ser Gln Asn Gln Leu Gly Val Leu Pro Leu Ser
180 185 190
Trp Asp Ile Pro Glu Leu Val Asn Met Gly Gln Trp Lys Ile Arg Ala
195 200 205
Tyr Tyr Glu Asn Ser Pro Gln Gln Val Phe Ser Thr Glu Phe Glu Val
210 215 220
Lys Glu Tyr Val Leu Pro Ser Phe Glu Val Ile Val Glu Pro Thr Glu
225 230 235 240
Lys Phe Tyr Tyr Ile Tyr Asn Glu Lys Gly Leu Glu Val Thr Ile Thr
245 250 255
Ala Arg Phe Leu Tyr Gly Lys Lys Val Glu Gly Thr Ala Phe Val Ile
260 265 270
Phe Gly Ile Gln Asp Gly Glu Gln Arg Ile Ser Leu Pro Glu Ser Leu
275 280 285
Lys Arg Ile Pro Ile Glu Asp Gly Ser Gly Glu Val Val Leu Ser Arg
290 295 300
Lys Val Leu Leu Asp Gly Val Gln Asn Pro Arg Ala Glu Asp Leu Val
305 310 315 320
Gly Lys Ser Leu Tyr Val Ser Ala Thr Val Ile Leu His Ser Gly Ser
325 330 335
Asp Met Val Gln Ala Glu Arg Ser Gly Ile Pro Ile Val Thr Ser Pro
340 345 350
Tyr Gln Ile His Phe Thr Lys Thr Pro Lys Tyr Phe Lys Pro Gly Met
355 360 365
Pro Phe Asp Leu Met Val Phe Val Thr Asn Pro Asp Gly Ser Pro Ala
370 375 380
Tyr Arg Val Pro Val Ala Val Gln Gly Glu Asp Thr Val Gln Ser Leu
385 390 395 400
Thr Gln Gly Asp Gly Val Ala Lys Leu Ser Ile Asn Thr His Pro Ser
405 410 415
Gln Lys Pro Leu Ser Ile Thr Val Arg Thr Lys Lys Gln Glu Leu Ser
420 425 430
Glu Ala Glu Gln Ala Thr Arg Thr Met Gln Ala Leu Pro Tyr Ser Thr
435 440 445
Val Gly Asn Ser Asn Asn Tyr Leu His Leu Ser Val Leu Arg Thr Glu
450 455 460
Leu Arg Pro Gly Glu Thr Leu Asn Val Asn Phe Leu Leu Arg Met Asp
465 470 475 480
Arg Ala His Glu Ala Lys Ile Arg Tyr Tyr Thr Tyr Leu Ile Met Asn
485 490 495
Lys Gly Arg Leu Leu Lys Ala Gly Arg Gln Val Arg Glu Pro Gly Gln
500 505 510
Asp Leu Val Val Leu Pro Leu Ser Ile Thr Thr Asp Phe Ile Pro Ser
515 520 525
Phe Arg Leu Val Ala Tyr Tyr Thr Leu Ile Gly Ala Ser Gly Gln Arg
530 535 540
Glu Val Val Ala Asp Ser Val Trp Val Asp Val Lys Asp Ser Cys Val
545 550 555 560
Gly Ser Leu Val Val Lys Ser Gly Gln Ser Glu Asp Arg Gln Pro Val
565 570 575
Pro Gly Gln Gln Met Thr Leu Lys Ile Glu Gly Asp His Gly Ala Arg
580 585 590
Val Val Leu Val Ala Val Asp Lys Gly Val Phe Val Leu Asn Lys Lys
595 600 605
Asn Lys Leu Thr Gln Ser Lys Ile Trp Asp Val Val Glu Lys Ala Asp
610 615 620
Ile Gly Cys Thr Pro Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Ala Gly Val Phe Ser
625 630 635 640
Asp Ala Gly Leu Thr Phe Thr Ser Ser Ser Gly Gln Gln Thr Ala Gln
645 650 655
Arg Ala Glu Leu Gln Cys Pro Gln Pro Ala Ala Arg Arg Arg Arg Ser
660 665 670
Val Gln Leu Thr Glu Lys Arg Met Asp Lys Val Gly Lys Tyr Pro Lys
675 680 685
Glu Leu Arg Lys Cys Cys Glu Asp Gly Met Arg Glu Asn Pro Met Arg
690 695 700
Phe Ser Cys Gln Arg Arg Thr Arg Phe Ile Ser Leu Gly Glu Ala Cys
705 710 715 720
Lys Lys Val Phe Leu Asp Cys Cys Asn Tyr Ile Thr Glu Leu Arg Arg
725 730 735
Gln His Ala Arg Ala Ser His Leu Gly Leu Ala Arg Ser Asn Leu Asp
740 745 750
Glu Asp Ile Ile Ala Glu Glu Asn Ile Val Ser Arg Ser Glu Phe Pro
755 760 765
Glu Ser Trp Leu Trp Asn Val Glu Asp Leu Lys Glu Pro Pro Lys Asn
770 775 780
Gly Ile Ser Thr Lys Leu Met Asn Ile Phe Leu Lys Asp Ser Ile Thr
785 790 795 800
Thr Trp Glu Ile Leu Ala Val Ser Met Ser Asp Lys Lys Gly Ile Cys
805 810 815
Val Ala Asp Pro Phe Glu Val Thr Val Met Gln Asp Phe Phe Ile Asp
820 825 830
Leu Arg Leu Pro Tyr Ser Val Val Arg Asn Glu Gln Val Glu Ile Arg
835 840 845
Ala Val Leu Tyr Asn Tyr Arg Gln Asn Gln Glu Leu Lys Val Arg Val
850 855 860
Glu Leu Leu His Asn Pro Ala Phe Cys Ser Leu Ala Thr Thr Lys Arg
865 870 875 880
Arg His Gln Gln Thr Val Thr Ile Pro Pro Lys Ser Ser Leu Ser Val
885 890 895
Pro Tyr Val Ile Val Pro Leu Lys Thr Gly Leu Gln Glu Val Glu Val
900 905 910
Lys Ala Ala Val Tyr His His Phe Ile Ser Asp Gly Val Arg Lys Ser
915 920 925
Leu Lys Val Val Pro Glu Gly Ile Arg Met Asn Lys Thr Val Ala Val
930 935 940
Arg Thr Leu Asp Pro Glu Arg Leu Gly Arg Glu Gly Val Gln Lys Glu
945 950 955 960
Asp Ile Pro Pro Ala Asp Leu Ser Asp Gln Val Pro Asp Thr Glu Ser
965 970 975
Glu Thr Arg Ile Leu Leu Gln Gly Thr Pro Val Ala Gln Met Thr Glu
980 985 990
Asp Ala Val Asp Ala Glu Arg Leu Lys His Leu Ile Val Thr Pro Ser
995 1000 1005
Gly Cys Gly Glu Gln Asn Met Ile Gly Met Thr Pro Thr Val Ile Ala
1010 1015 1020
Val His Tyr Leu Asp Glu Thr Glu Gln Trp Glu Lys Phe Gly Leu Glu
1025 1030 1035 1040
Lys Arg Gln Gly Ala Leu Glu Leu Ile Lys Lys Gly Tyr Thr Gln Gln
1045 1050 1055
Leu Ala Phe Arg Gln Pro Ser Ser Ala Phe Ala Ala Phe Val Lys Arg
1060 1065 1070
Ala Pro Ser Thr Trp Leu Thr Ala Tyr Val Val Lys Val Phe Ser Leu
1075 1080 1085
Ala Val Asn Leu Ile Ala Ile Asp Ser Gln Val Leu Cys Gly Ala Val
1090 1095 1100
Lys Trp Leu Ile Leu Glu Lys Gln Lys Pro Asp Gly Val Phe Gln Glu
1105 1110 1115 1120
Asp Ala Pro Val Ile His Gln Glu Met Ile Gly Gly Leu Arg Asn Asn
1125 1130 1135
Asn Glu Lys Asp Met Ala Leu Thr Ala Phe Val Leu Ile Ser Leu Gln
1140 1145 1150
Glu Ala Lys Asp Ile Cys Glu Glu Gln Val Asn Ser Leu Pro Gly Ser
1155 1160 1165
Ile Thr Lys Ala Gly Asp Phe Leu Glu Ala Asn Tyr Met Asn Leu Gln
1170 1175 1180
Arg Ser Tyr Thr Val Ala Ile Ala Gly Tyr Ala Leu Ala Gln Met Gly
1185 1190 1195 1200
Arg Leu Lys Gly Pro Leu Leu Asn Lys Phe Leu Thr Thr Ala Lys Asp
1205 1210 1215
Lys Asn Arg Trp Glu Asp Pro Gly Lys Gln Leu Tyr Asn Val Glu Ala
1220 1225 1230
Thr Ser Tyr Ala Leu Leu Ala Leu Leu Gln Leu Lys Asp Phe Asp Phe
1235 1240 1245
Val Pro Pro Val Val Arg Trp Leu Asn Glu Gln Arg Tyr Tyr Gly Gly
1250 1255 1260
Gly Tyr Gly Ser Thr Gln Ala Thr Phe Met Val Phe Gln Ala Leu Ala
1265 1270 1275 1280
Gln Tyr Gln Lys Asp Ala Pro Asp His Gln Glu Leu Asn Leu Asp Val
1285 1290 1295
Ser Leu Gln Leu Pro Ser Arg Ser Ser Lys Ile Thr His Arg Ile His
1300 1305 1310
Trp Glu Ser Ala Ser Leu Leu Arg Ser Glu Glu Thr Lys Glu Asn Glu
1315 1320 1325
Gly Phe Thr Val Thr Ala Glu Gly Lys Gly Gln Gly Thr Leu Ser Val
1330 1335 1340
Val Thr Met Tyr His Ala Lys Ala Lys Asp Gln Leu Thr Cys Asn Lys
1345 1350 1355 1360
Phe Asp Leu Lys Val Thr Ile Lys Pro Ala Pro Glu Thr Glu Lys Arg
1365 1370 1375
Pro Gln Asp Ala Lys Asn Thr Met Ile Leu Glu Ile Cys Thr Arg Tyr
1380 1385 1390
Arg Gly Asp Gln Asp Ala Thr Met Ser Ile Leu Asp Ile Ser Met Met
1395 1400 1405
Thr Gly Phe Ala Pro Asp Thr Asp Asp Leu Lys Gln Leu Ala Asn Gly
1410 1415 1420
Val Asp Arg Tyr Ile Ser Lys Tyr Glu Leu Asp Lys Ala Phe Ser Asp
1425 1430 1435 1440
Arg Asn Thr Leu Ile Ile Tyr Leu Asp Lys Val Ser His Ser Glu Asp
1445 1450 1455
Asp Cys Leu Ala Phe Lys Val His Gln Tyr Phe Asn Val Glu Leu Ile
1460 1465 1470
Gln Pro Gly Ala Val Lys Val Tyr Ala Tyr Tyr Asn Leu Glu Glu Ser
1475 1480 1485
Cys Thr Arg Phe Tyr His Pro Glu Lys Glu Asp Gly Lys Leu Asn Lys
1490 1495 1500
Leu Cys Arg Asp Glu Leu Cys Arg Cys Ala Glu Glu Asn Cys Phe Ile
1505 1510 1515 1520
Gln Lys Ser Asp Asp Lys Val Thr Leu Glu Glu Arg Leu Asp Lys Ala
1525 1530 1535
Cys Glu Pro Gly Val Asp Tyr Val Tyr Lys Thr Arg Leu Val Lys Val
1540 1545 1550
Gln Leu Ser Asn Asp Phe Asp Glu Tyr Ile Met Ala Ile Glu Gln Thr
1555 1560 1565
Ile Lys Ser Gly Ser Asp Glu Val Gln Val Gly Gln Gln Arg Thr Phe
1570 1575 1580
Ile Ser Pro Ile Lys Cys Arg Glu Ala Leu Lys Leu Glu Glu Lys Lys
1585 1590 1595 1600
His Tyr Leu Met Trp Gly Leu Ser Ser Asp Phe Trp Gly Glu Lys Pro
1605 1610 1615
Asn Leu Ser Tyr Ile Ile Gly Lys Asp Thr Trp Val Glu His Trp Pro
1620 1625 1630
Glu Glu Asp Glu Cys Gln Asp Glu Glu Asn Gln Lys Gln Cys Gln Asp
1635 1640 1645
Leu Gly Ala Phe Thr Glu Ser Met Val Val Phe Gly Cys Pro Asn
1650 1655 1660
<210> 2
<211> 1744
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Met Arg Leu Leu Trp Gly Leu Ile Trp Ala Ser Ser Phe Phe Thr Leu
1 5 10 15
Ser Leu Gln Lys Pro Arg Leu Leu Leu Phe Ser Pro Ser Val Val His
20 25 30
Leu Gly Val Pro Leu Ser Val Gly Val Gln Leu Gln Asp Val Pro Arg
35 40 45
Gly Gln Val Val Lys Gly Ser Val Phe Leu Arg Asn Pro Ser Arg Asn
50 55 60
Asn Val Pro Cys Ser Pro Lys Val Asp Phe Thr Leu Ser Ser Glu Arg
65 70 75 80
Asp Phe Ala Leu Leu Ser Leu Gln Val Pro Leu Lys Asp Ala Lys Ser
85 90 95
Cys Gly Leu His Gln Leu Leu Arg Gly Pro Glu Val Gln Leu Val Ala
100 105 110
His Ser Pro Trp Leu Lys Asp Ser Leu Ser Arg Thr Thr Asn Ile Gln
115 120 125
Gly Ile Asn Leu Leu Phe Ser Ser Arg Arg Gly His Leu Phe Leu Gln
130 135 140
Thr Asp Gln Pro Ile Tyr Asn Pro Gly Gln Arg Val Arg Tyr Arg Val
145 150 155 160
Phe Ala Leu Asp Gln Lys Met Arg Pro Ser Thr Asp Thr Ile Thr Val
165 170 175
Met Val Glu Asn Ser His Gly Leu Arg Val Arg Lys Lys Glu Val Tyr
180 185 190
Met Pro Ser Ser Ile Phe Gln Asp Asp Phe Val Ile Pro Asp Ile Ser
195 200 205
Glu Pro Gly Thr Trp Lys Ile Ser Ala Arg Phe Ser Asp Gly Leu Glu
210 215 220
Ser Asn Ser Ser Thr Gln Phe Glu Val Lys Lys Tyr Val Leu Pro Asn
225 230 235 240
Phe Glu Val Lys Ile Thr Pro Gly Lys Pro Tyr Ile Leu Thr Val Pro
245 250 255
Gly His Leu Asp Glu Met Gln Leu Asp Ile Gln Ala Arg Tyr Ile Tyr
260 265 270
Gly Lys Pro Val Gln Gly Val Ala Tyr Val Arg Phe Gly Leu Leu Asp
275 280 285
Glu Asp Gly Lys Lys Thr Phe Phe Arg Gly Leu Glu Ser Gln Thr Lys
290 295 300
Leu Val Asn Gly Gln Ser His Ile Ser Leu Ser Lys Ala Glu Phe Gln
305 310 315 320
Asp Ala Leu Glu Lys Leu Asn Met Gly Ile Thr Asp Leu Gln Gly Leu
325 330 335
Arg Leu Tyr Val Ala Ala Ala Ile Ile Glu Ser Pro Gly Gly Glu Met
340 345 350
Glu Glu Ala Glu Leu Thr Ser Trp Tyr Phe Val Ser Ser Pro Phe Ser
355 360 365
Leu Asp Leu Ser Lys Thr Lys Arg His Leu Val Pro Gly Ala Pro Phe
370 375 380
Leu Leu Gln Ala Leu Val Arg Glu Met Ser Gly Ser Pro Ala Ser Gly
385 390 395 400
Ile Pro Val Lys Val Ser Ala Thr Val Ser Ser Pro Gly Ser Val Pro
405 410 415
Glu Val Gln Asp Ile Gln Gln Asn Thr Asp Gly Ser Gly Gln Val Ser
420 425 430
Ile Pro Ile Ile Ile Pro Gln Thr Ile Ser Glu Leu Gln Leu Ser Val
435 440 445
Ser Ala Gly Ser Pro His Pro Ala Ile Ala Arg Leu Thr Val Ala Ala
450 455 460
Pro Pro Ser Gly Gly Pro Gly Phe Leu Ser Ile Glu Arg Pro Asp Ser
465 470 475 480
Arg Pro Pro Arg Val Gly Asp Thr Leu Asn Leu Asn Leu Arg Ala Val
485 490 495
Gly Ser Gly Ala Thr Phe Ser His Tyr Tyr Tyr Met Ile Leu Ser Arg
500 505 510
Gly Gln Ile Val Phe Met Asn Arg Glu Pro Lys Arg Thr Leu Thr Ser
515 520 525
Val Ser Val Phe Val Asp His His Leu Ala Pro Ser Phe Tyr Phe Val
530 535 540
Ala Phe Tyr Tyr His Gly Asp His Pro Val Ala Asn Ser Leu Arg Val
545 550 555 560
Asp Val Gln Ala Gly Ala Cys Glu Gly Lys Leu Glu Leu Ser Val Asp
565 570 575
Gly Ala Lys Gln Tyr Arg Asn Gly Glu Ser Val Lys Leu His Leu Glu
580 585 590
Thr Asp Ser Leu Ala Leu Val Ala Leu Gly Ala Leu Asp Thr Ala Leu
595 600 605
Tyr Ala Ala Gly Ser Lys Ser His Lys Pro Leu Asn Met Gly Lys Val
610 615 620
Phe Glu Ala Met Asn Ser Tyr Asp Leu Gly Cys Gly Pro Gly Gly Gly
625 630 635 640
Asp Ser Ala Leu Gln Val Phe Gln Ala Ala Gly Leu Ala Phe Ser Asp
645 650 655
Gly Asp Gln Trp Thr Leu Ser Arg Lys Arg Leu Ser Cys Pro Lys Glu
660 665 670
Lys Thr Thr Arg Lys Lys Arg Asn Val Asn Phe Gln Lys Ala Ile Asn
675 680 685
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690 695 700
Asp Gly Val Thr Arg Leu Pro Met Met Arg Ser Cys Glu Gln Arg Ala
705 710 715 720
Ala Arg Val Gln Gln Pro Asp Cys Arg Glu Pro Phe Leu Ser Cys Cys
725 730 735
Gln Phe Ala Glu Ser Leu Arg Lys Lys Ser Arg Asp Lys Gly Gln Ala
740 745 750
Gly Leu Gln Arg Ala Leu Glu Ile Leu Gln Glu Glu Asp Leu Ile Asp
755 760 765
Glu Asp Asp Ile Pro Val Arg Ser Phe Phe Pro Glu Asn Trp Leu Trp
770 775 780
Arg Val Glu Thr Val Asp Arg Phe Gln Ile Leu Thr Leu Trp Leu Pro
785 790 795 800
Asp Ser Leu Thr Thr Trp Glu Ile His Gly Leu Ser Leu Ser Lys Thr
805 810 815
Lys Gly Leu Cys Val Ala Thr Pro Val Gln Leu Arg Val Phe Arg Glu
820 825 830
Phe His Leu His Leu Arg Leu Pro Met Ser Val Arg Arg Phe Glu Gln
835 840 845
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850 855 860
Val Ser Val His Val Ser Pro Val Glu Gly Leu Cys Leu Ala Gly Gly
865 870 875 880
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885 890 895
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900 905 910
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915 920 925
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930 935 940
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945 950 955 960
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965 970 975
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980 985 990
Gly Ala Leu Ser Pro Gly Gly Val Ala Ser Leu Leu Arg Leu Pro Arg
995 1000 1005
Gly Cys Gly Glu Gln Thr Met Ile Tyr Leu Ala Pro Thr Leu Ala Ala
1010 1015 1020
Ser Arg Tyr Leu Asp Lys Thr Glu Gln Trp Ser Thr Leu Pro Pro Glu
1025 1030 1035 1040
Thr Lys Asp His Ala Val Asp Leu Ile Gln Lys Gly Tyr Met Arg Ile
1045 1050 1055
Gln Gln Phe Arg Lys Ala Asp Gly Ser Tyr Ala Ala Trp Leu Ser Arg
1060 1065 1070
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1075 1080 1085
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1090 1095 1100
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Ser Pro Val Ile His Arg Ser Met Gln Gly Gly Leu Val Gly Asn Asp
1125 1130 1135
Glu Thr Val Ala Leu Thr Ala Phe Val Thr Ile Ala Leu His His Gly
1140 1145 1150
Leu Ala Val Phe Gln Asp Glu Gly Ala Glu Pro Leu Lys Gln Arg Val
1155 1160 1165
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1170 1175 1180
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1185 1190 1195 1200
Thr Leu Thr Lys Ala Pro Ala Asp Leu Arg Gly Val Ala His Asn Asn
1205 1210 1215
Leu Met Ala Met Ala Gln Glu Thr Gly Asp Asn Leu Tyr Trp Gly Ser
1220 1225 1230
Val Thr Gly Ser Gln Ser Asn Ala Val Ser Pro Thr Pro Ala Pro Arg
1235 1240 1245
Asn Pro Ser Asp Pro Met Pro Gln Ala Pro Ala Leu Trp Ile Glu Thr
1250 1255 1260
Thr Ala Tyr Ala Leu Leu His Leu Leu Leu His Glu Gly Lys Ala Glu
1265 1270 1275 1280
Met Ala Asp Gln Ala Ala Ala Trp Leu Thr Arg Gln Gly Ser Phe Gln
1285 1290 1295
Gly Gly Phe Arg Ser Thr Gln Asp Thr Val Ile Ala Leu Asp Ala Leu
1300 1305 1310
Ser Ala Tyr Trp Ile Ala Ser His Thr Thr Glu Glu Arg Gly Leu Asn
1315 1320 1325
Val Thr Leu Ser Ser Thr Gly Arg Asn Gly Phe Lys Ser His Ala Leu
1330 1335 1340
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<223> 重链突变体
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caagtgcagc tgcagcagcc gggtgcagaa ctcgtgaagc caggggcctc agtgaagatg 60
tcctgcaaag ccagcggcta caccttcacc tcctacaaca tgcactgggt caagcaaact 120
cctggacgcg gacttgagtg gattggtgct atctaccccg gaaacggcga caccagctac 180
aatcagaagt ttaaggggaa ggccactctg actgccgaca agtcgtcctc gacggcgtac 240
atgcagctga gctcgctgac ctccgaggac tccgccgtgt attactgtgc tcggtccacc 300
tactacggcg gcgattggta cttcaacgtc tggggagccg gaaccactgt gaccgtgtca 360
gccgcatcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccca gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 1080
gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tatagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctcccggg aaa 1353
<210> 40
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链突变体
<400> 40
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val Trp Gly
100 105 110
Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Gln Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 41
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 肽
<222> (0)...(0)
<223> CDRH1
<400> 41
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asn
1 5
<210> 42
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 结构域
<222> (0)...(0)
<223> CDRH2
<400> 42
Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr
1 5
<210> 43
<211> 14
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 结构域
<222> (0)...(0)
<223> CDRH3
<400> 43
Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val
1 5 10
<210> 44
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 结构域
<222> (0)...(0)
<223> CDRL1
<400> 44
Ser Ser Ser Val Ser Tyr
1 5
<210> 45
<211> 3
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 结构域
<222> (0)...(0)
<223> CDRL2
<400> 45
Ala Thr Ser
1
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 结构域
<222> (0)...(0)
<223> CDRL3
<400> 46
Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr
1 5
<210> 47
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 利妥昔单抗重链野生型
<400> 47
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val Trp Gly
100 105 110
Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 48
<211> 19
<212> DNA
<213> 智人
<400> 48
cgccgtgtat tactgtgct 19
<210> 49
<211> 19
<212> DNA
<213> 智人
<400> 49
ggtgggcatg tgtgagttt 19
<210> 50
<211> 1353
<212> DNA
<213> 智人
<400> 50
caagtgcagc tgcagcagcc gggtgcagaa ctcgtgaagc caggggcctc agtgaagatg 60
tcctgcaaag ccagcggcta caccttcacc tcctacaaca tgcactgggt caagcaaact 120
cctggacgcg gacttgagtg gattggtgct atctaccccg gaaacggcga caccagctac 180
aatcagaagt ttaaggggaa ggccactctg actgccgaca agtcgtcctc gacggcgtac 240
atgcagctga gctcgctgac ctccgaggac tccgccgtgt attactgtgc tcggtccacc 300
tactacggcg gcgattggta cttcaacgtc tggggagccg gaaccactgt gaccgtgtca 360
gccgcatcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 1080
gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tatagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctcccggg aaa 1353

Claims (37)

1.一种免疫抑制抗性蛋白质或多肽，所述免疫抑制抗性蛋白质或多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸残基序列，其中所述序列中的一个、两个或三个氨基酸残基被与SEQ ID NO:3所示不同的氨基酸残基置换，其中所述一个、两个或三个置换的氨基酸残基相对于不含所述一个、两个或三个氨基酸置换的免疫抑制抗性蛋白质或多肽降低或消除所述免疫抑制抗性蛋白质或多肽与免疫抑制蛋白质的结合。
2.根据权利要求1所述的免疫抑制抗性蛋白质或多肽，其为全长抗体。
3.根据权利要求1所述的免疫抑制抗性蛋白质或多肽，其为双特异性抗体。
4.根据权利要求1所述的免疫抑制抗性蛋白质或多肽，其中所述免疫抑制蛋白质是CA125/MUC16。
5.根据权利要求1所述的免疫抑制抗性蛋白质或多肽，选自由以下项组成的组：
a.含有根据SEQ ID NO:6的轻链和包含SEQ ID:5的重链的抗体；
b.含有根据SEQ ID NO:6的轻链和包含SEQ ID:8的重链的抗体；
c.含有根据SEQ ID NO:6的轻链和包含SEQ ID:10的重链的抗体；
d.含有根据SEQ ID NO:6的轻链和包含SEQ ID:12的重链的抗体；
e.含有根据SEQ ID NO:6的轻链和包含SEQ ID:14的重链的抗体；
f.包含含有根据SEQ ID NO:6的轻链和包含SEQ ID:16的重链的抗体；
g.含有根据SEQ ID NO:6的轻链和包含SEQ ID:18的重链的抗体；
h.含有根据SEQ ID NO:6的轻链和包含SEQ ID:20的重链的抗体；
i.含有根据SEQ ID NO:6的轻链和包含SEQ ID:22的重链的抗体；
j.含有根据SEQ ID NO:6的轻链和包含SEQ ID:24的重链的抗体；
k.含有根据SEQ ID NO:6的轻链和包含SEQ ID:26的重链的抗体；
l.含有根据SEQ ID NO:6的轻链和包含SEQ ID:28的重链的抗体；
m.含有根据SEQ ID NO:6的轻链和包含SEQ ID:30的重链的抗体；
n.含有根据SEQ ID NO:6的轻链和包含SEQ ID:32的重链的抗体；
o.含有根据SEQ ID NO:6的轻链和包含SEQ ID:34的重链的抗体；
p.含有根据SEQ ID NO:6的轻链和包含SEQ ID:36的重链的抗体；
q.含有根据SEQ ID NO:6的轻链和包含SEQ ID:38的重链的抗体；和
r.含有根据SEQ ID NO:6的轻链和包含SEQ ID:40的重链的抗体。
6.根据权利要求1所述的免疫抑制抗性蛋白质或多肽，其是由IgG同种型抗体的免疫球蛋白轻链和免疫球蛋白重链组成的蛋白质。
7.根据权利要求1所述的免疫抑制抗性蛋白质或多肽，其是全长IgG同种型抗体。
8.根据权利要求1所述的免疫抑制抗性蛋白质或多肽，其是IgG同种型抗体的抗原结合片段或Fab结构域。
9.根据权利要求1所述的免疫抑制抗性蛋白质或多肽，其中所述氨基酸残基选自如SEQID NO:47所示的利妥昔单抗IgG1重链的以下位置：102、103、107、108、109、122、130、131、134、136、151、161、167、169、189、196、201和214。
10.根据权利要求1所述的免疫抑制抗性蛋白质或多肽，其以>1nM或<400nM的亲和力/Kd结合CD20。
11.根据权利要求1所述的免疫抑制抗性蛋白质或多肽，其以>10nM或<50nM的亲和力/Kd结合CD20。
12.根据权利要求1所述的免疫抑制抗性蛋白质或多肽，其以包含SEQ ID NO:3的氨基酸残基序列的免疫抑制抗性蛋白质或多肽对CD20的亲和力/Kd的±50％结合CD20。
13.根据权利要求1所述的免疫抑制抗性蛋白质或多肽，其中所述氨基酸残基选自如SEQ ID NO:47所示的利妥昔单抗重链的CDR3区中的位置。
14.根据权利要求1所述的免疫抑制抗性蛋白质或多肽，其中所述氨基酸残基选自如SEQ ID NO:47所示的利妥昔单抗的框架区4中的位置。
15.一种核酸载体，所述核酸载体编码根据权利要求1所述的免疫抑制抗性蛋白质或多肽。
16.一种多核苷酸，所述多核苷酸编码根据权利要求1所述的免疫抑制抗性蛋白质或多肽。
17.一种稳定细胞系，所述稳定细胞系包含根据权利要求15所述的核酸载体并且表达所述免疫抑制抗性蛋白质或多肽。
18.一种治疗患有与健康人群相比表达升高的CA125水平的疾病的患者的方法，所述方法包括：
向所述患者施用根据权利要求1所述的免疫抑制抗性蛋白质或多肽。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述疾病是癌症。
20.根据权利要求18所述的方法，其中所述疾病是炎症性疾病。
21.根据权利要求19所述的方法，其中所述癌症选自由以下项组成的组：霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病和多发性骨髓瘤。
22.一种治疗癌症患者或患有炎症性疾病的患者的方法，所述方法包括：
向所述癌症患者或所述患有炎症性疾病的患者施用选自由以下项组成的组的多肽：
(a)全长人补体蛋白质原C3B或C4B，
(b)能够结合IgG的人补体蛋白质原C3B或C4B的天然存在的蛋白质水解片段，或
(c)能够结合IgG的人补体蛋白质原C3B或C4B的一部分。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述多肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
24.根据权利要求22所述的方法，其中所述癌症患者或所述患有炎症性疾病的患者与对照正常人群相比表达升高的CA125水平。
25.根据权利要求22所述的方法，其中所述多肽与抗CD20抗体组合施用。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述抗-CD20抗体是利妥昔单抗。
27.根据权利要求22所述的方法，其中所述患者是癌症患者，并且进一步包括：
向所述癌症患者施用靶向肿瘤的抗体，其中在不存在所述多肽的情况下由所述抗体介导的体液免疫应答被CA125抑制。
28.根据权利要求22所述的方法，其中所述患者是癌症患者并且所述患者患有选自由以下项组成的组的癌症：霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病和多发性骨髓瘤。
29.一种组合，所述组合包含(a)抗CD20抗体和(b)全长补体蛋白质原C3B或C4B、能够结合IgG的补体蛋白质原C3B或C4B的天然存在的蛋白质水解片段或能够结合IgG的补体蛋白质原C3B或C4B的一部分。
30.根据权利要求29所述的组合，其中所述抗CD20抗体是利妥昔单抗。
31.根据权利要求29所述的组合，其包含补体原蛋白C3B或C4B的天然存在的蛋白质水解片段，其中所述补体原蛋白C3B或C4B的天然存在的蛋白质水解片段选自由以下项组成的组：C3B残基23-1663、C3B残基23-667、C3B残基569-667、C3B残基672-1663、C3B残基672-748、C3B残基672-747、C3B残基749-1663、C3B残基749-954、C3B残基955-1303、C3B残基955-1001、C3B残基1002-1303、C3B残基1304-1320、C3B残基1321-1663、C4B残基20-675、C4B残基676-679、C4B残基680-1446、C4B残基680-756、C4B残基757-1446、C4B残基957-1336、C4B残基1447-1453和C4B残基1454-1744。
32.一种人癌细胞系，所述人癌细胞系表达人蛋白质CA125和CD20。
33.根据权利要求32所述的人癌细胞系是人卵巢癌细胞系。
34.根据权利要求33所述的人癌细胞系，其通过用编码CD20的表达载体转导细胞系OVCAR3的细胞制备。
35.一种筛选结合CD20结合的候选抗体的方法，所述方法包括：
a.使候选抗体与根据权利要求36所述的人癌细胞系接触；以及
b.确定由所述候选抗体引发的所述人癌细胞系的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)或补体依赖性细胞毒性(CDC)。
36.一种用于检测和治疗患者中表达CA125的肿瘤的方法，所述方法包括：
使(a)从所述患者中分离的体液样本与；
(b)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的抗体接触；以及使(a)与(c)包含SEQ ID NO:3的氨基酸残基序列的免疫抑制抗性蛋白质或多肽接触，其中所述序列中的一个、两个或三个氨基酸残基被与SEQ ID NO:3中所示不同的氨基酸残基置换，其中相对于所述不含一个、两个或三个氨基酸置换的免疫抑制抗性蛋白质或多肽，所述一个、两个或三个置换的氨基酸残基降低或消除所述免疫抑制抗性蛋白质或多肽与免疫抑制性蛋白质的结合；以及
确定所述体液样本中的CA125与(b)结合但不与(c)结合，并用(c)治疗所述患者；或者
确定所述体液样本中的CA125与(b)和/或(c)结合并用全长补体蛋白质原C3B或C4B、能够结合IgG的补体蛋白质原C3B或C4B的天然存在的蛋白质水解片段或能够结合IgG的补体蛋白质原C3B或C4B的一部分治疗所述患者。
37.根据权利要求22或36的方法，其中施用所述补体蛋白质原C3B或C4B的天然存在的蛋白质水解片段，其中所述补体蛋白质C3B或C4B的天然存在的蛋白质水解片段选自由以下项组成的组：C3B残基23-1663、C3B残基23-667、C3B残基569-667、C3B残基672-1663、C3B残基672-748、C3B残基672-747、C3B残基749-1663、C3B残基749-954、C3B残基955-1303、C3B残基955-1001、C3B残基1002-1303、C3B残基1304-1320、C3B残基1321-1663、C4B残基20-675、C4B残基676-679、C4B残基680-1446、C4B残基680-756、C4B残基757-1446、C4B残基957-1336、C4B残基1447-1453、C4B残基1454-1744。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024040024A1 (en) * 2022-08-15 2024-02-22 Navrogen, Inc. Fc-ENGINEERED MONOCLONAL ANTIBODIES REFRACTORY TO TUMOR IMMUNOSUPPRESSIVE ICAM-1/CD54

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101583626A (zh) * 2006-10-10 2009-11-18 瓦西尼斯公司 抗cd20抗体和使用方法
CN104204217A (zh) * 2012-01-19 2014-12-10 医用蛋白国际有限责任公司 抗cd20抗体利妥昔单抗的稳定化
US20150141620A1 (en) * 2012-06-01 2015-05-21 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods related to rituximab
CN107880136A (zh) * 2010-09-21 2018-04-06 阿尔托生物科学有限公司 多聚体il‑15可溶性融合分子与其制造与使用方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140004037A1 (en) 2012-01-19 2014-01-02 Therapeutic Proteins, Inc. Stabilization of the anti-cd20 antibody rituximab
CN105753986B (zh) 2016-04-24 2019-12-10 赵磊 一类抗cd20靶向抗体及用途

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101583626A (zh) * 2006-10-10 2009-11-18 瓦西尼斯公司 抗cd20抗体和使用方法
CN107880136A (zh) * 2010-09-21 2018-04-06 阿尔托生物科学有限公司 多聚体il‑15可溶性融合分子与其制造与使用方法
CN104204217A (zh) * 2012-01-19 2014-12-10 医用蛋白国际有限责任公司 抗cd20抗体利妥昔单抗的稳定化
US20150141620A1 (en) * 2012-06-01 2015-05-21 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods related to rituximab

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
J. BRADFORD KLINE等: "Tumor-shed antigen CA125 blocks complement-mediated killing via suppression of C1q-antibody binding", EUR. J. IMMUNOL, vol. 48, pages 1872 - 1882, XP055826316, DOI: 10.1002/eji.201847707 *
JAMES BRADFORD KLINE等: "Tumor antigen CA125 suppresses antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) via direct antibody binding and suppressed Fc-γ receptor engagement", ONCOTARGET, vol. 8, no. 32, pages 52045 - 52060 *

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