CN114875096A - 一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法 - Google Patents

一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114875096A
CN114875096A CN202210666851.4A CN202210666851A CN114875096A CN 114875096 A CN114875096 A CN 114875096A CN 202210666851 A CN202210666851 A CN 202210666851A CN 114875096 A CN114875096 A CN 114875096A
Authority
CN
China
Prior art keywords
coprinus comatus
polysaccharide
solution
liquid
mycelium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202210666851.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114875096B (zh
Inventor
李娜
任翔萍
郭素萍
牛丹
毕霖
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanxi Provincial Drug Evaluation Center Shanxi Academy Of Medicine And Life Sciences
Original Assignee
Shanxi Provincial Drug Evaluation Center Shanxi Academy Of Medicine And Life Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanxi Provincial Drug Evaluation Center Shanxi Academy Of Medicine And Life Sciences filed Critical Shanxi Provincial Drug Evaluation Center Shanxi Academy Of Medicine And Life Sciences
Priority to CN202210666851.4A priority Critical patent/CN114875096B/zh
Publication of CN114875096A publication Critical patent/CN114875096A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114875096B publication Critical patent/CN114875096B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Abstract

本发明提供了一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法，该方法为：制备液体培养基，将液体培养基分装到三角瓶中，将鸡腿菇固体菌种接种至三角瓶中进行发酵培养，培养结束后进行离心过滤，得到菌丝体；在菌丝体中加入石油醚洗涤、过滤、烘干，得到脱脂后的鸡腿菇干菌丝体；脱脂后的鸡腿菇干菌丝体粉碎后，用无水乙醇浸泡、过滤、烘干，得到鸡腿菇菌丝体干品；将鸡腿菇菌丝体干品用蒸馏水浸泡，回流提取，过滤后得到提取液，将滤渣再次回流提取，将两次提取液合并浓缩，加入无水乙醇后，静置、过滤、蒸馏水溶解，得到粗多糖提取液，将粗多糖提取液通过聚酰胺树脂柱和AB‑8树脂柱，用乙醇洗脱，蒸馏后得到高纯多糖提取液。本发明方法多糖的收率为78％～85％。

Description

一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法
技术领域
本发明属于鸡腿菇技术领域，具体涉及一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法。
背景技术
鸡腿菇(Copyinds comatus)，学名毛头鬼伞，别名鸡腿蘑，属担子菌纲，伞菌目，鬼伞科，鬼伞属，是近年来人工开发的具有商业潜力的珍稀菌品。鸡腿菇含有20种氨基酸，具备人体必需的8种氨基酸，占总量的34.83％；其他氨基酸12种，占总量的65.17％。鸡腿菇性平，味甘滑，具有清神益智、益脾胃、助消化、增加食欲等功效。
由于鸡腿菇生长周期短，生物转化率较高，易于栽培，特别适合我国农村种植。近年来种植规模迅速扩大，已成为我国大宗栽培的食用菌之一。在食用菌产业化、规模化生产中液体菌种已成为替代固体菌种的必然趋势，液体菌种生产工艺简便、周期短，是以后菌种研发的必然方向。且鸡腿菇在多糖提取方面的研究较少，且多糖的收率也不高；因此，提供一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法尤为重要。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法，该方法能够将多糖高度提取，多糖的收率为78％～85％。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法，该方法包括以下步骤：
S1、先制备液体培养基，将所述液体培养基分装至三角瓶中，将鸡腿菇固体菌种接种至所述三角瓶中进行液体发酵培养，所述液体发酵培养的温度为24℃～26℃，摇瓶转速为180r/min，培养结束后，进行离心、过滤，得到菌丝体，将所述菌丝体烘干，得到鸡腿菇干菌丝体；
S2、在S2中得到的鸡腿菇干菌丝体中加入石油醚进行洗涤脱脂，然后过滤、烘干，得到脱脂后的鸡腿菇干菌丝体；
S3、将S3中得到的脱脂后的鸡腿菇干菌丝体粉碎，然后加入无水乙醇浸泡6h，过滤后烘干，进行超微粉碎后过120目筛，得到鸡腿菇菌丝体干品；
S4、在S4中得到的鸡腿菇菌丝体干品中加入蒸馏水，浸泡2h，然后放入温度为95℃的水浴锅中回流提取3h，再进行过滤，得到滤渣和滤液，所述滤液为第一次提取液；在所述滤渣中再加入蒸馏水，放入温度为95℃的水浴锅中回流提取3h，过滤收集滤液，得到第二次提取液；将所述第一次提取液和第二次提取液混合，然后进行减压浓缩，得到多糖二次浓缩液，在所述多糖二次浓缩液中加入无水乙醇，得到混合溶液，将所述混合溶液静置24h后进行过滤，回收乙醇溶液，得到沉淀物，将所述沉淀物加入蒸馏水溶解，得到粗多糖溶液；
S5、将S5中得到的粗多糖溶液放入聚酰胺树脂柱中，用质量分数为5％的乙醇水溶液以2BV/h的流速进行洗脱，洗脱至通过聚酰胺树脂柱内的溶液为无色时停止，然后再通入AB-8树脂柱中，再用质量分数为30％的乙醇水溶液以0.5BV/h的流速洗脱后，收集多糖纯化液；将所述多糖纯化液在温度为15℃～30℃的条件下减压蒸馏1h～2h后，得到高纯多糖纯化液。
优选地，S1中所述液体培养基包括以下的质量组分：玉米粉4.0％、麸皮2.5％、蔗糖2.0％、蛋白胨0.5％、KH2PO40.15％、MgSO40.05％、FeSO40.01％。
优选地，S1中所述三角瓶的体积为250ml，每瓶分装所述液体培养基的体积为120ml。
优选地，S1中所述液体发酵培养的时间为7～9d；所述离心的转速为4000rpm。
优选地，S2中所述鸡腿菇干菌丝体和石油醚的用量为1:2。
优选地，S3中所述脱脂后的鸡腿菇干菌丝体粉碎至120目。
优选地，S1、S2和S3中所述烘干的温度均为50℃～60℃，烘干后的含水量均为6％～8％。
优选地，S4中所述鸡腿菇菌丝体干品和蒸馏水的用量比为1:(6～8)，所述滤渣和蒸馏水的用量比为1:6。
优选地，S4中所述混合溶液中乙醇的浓度为75％。
优选地，S5中所述AB-8树脂柱采用湿法装柱。
本发明S1中使用的鸡腿菇固体菌种的基因库编号为Fjtg1805，所述鸡腿菇固体菌种经中科院微生物所鉴定为鸡腿菇，并在中科院微生物研究所保藏。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明将粉碎的鸡腿菇干菌丝体用无水乙醇浸泡，是为了进一步去除一些脂溶性的杂质及脂溶性色素，便于后续的纯化，提高多糖含量。
2、本发明采用聚酰胺树脂柱中洗脱粗多糖溶液中的色素，去除弱极性色素，利于后续AB-8大孔树脂分离纯化，提高多糖含量，增加树脂重复利用次数。
3、本发明采用AB-8树脂吸附纯化操作的优势是：可以观察不同分子量和多糖的分离纯化，分子量越小的越后出来，可以分步收集，达到分离的效果。
4、本发明中鸡腿菇固体菌种在液体发酵培养过程中，因培养基中包含玉米粉、蛋白胨等容易起泡的培养材料，若在培养后期有大量泡沫产生时，影响发酵培养的正常进行，加入一定比例的消泡剂(豆油)消泡可以保证发酵生产的正常进行；除豆油外，在液体发酵培养的过程中会产生的油性物质不利于后期的分离，在后续多糖提取过程中含有一定量的脂溶性物质，不利于多糖的提取与纯化，因此需要提前脱脂。
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。
具体实施方式
实施例1
本实施例鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法，包括以下步骤：
通过常规的方法制备鸡腿菇固体菌种：先制备固体斜面培养基，将200g马铃薯去皮、切碎，加入到1000ml的水中煮沸30min，然后过滤收集滤液，在所述滤液中加入葡萄糖、蛋白胨、琼脂，加水至1000ml，然后分装至200mmx20mm的试管中，装量为试管的1/3，然后进行包装、灭菌、摆斜面备用，将鸡腿菇菌种接种于灭菌后的试管内进行培养，得到鸡腿菇固体菌种；
试管进行包装：试管装入所述固体培养基后，管口盖上胶皮筛子(能透气灭菌)，每5～7支试管用牛皮纸包在一起；所述灭菌的温度为121℃，时间为30min；所述葡萄糖的用量是所述滤液质量的2％，蛋白胨的用量是所述滤液质量的0.5％、琼脂的用量是所述滤液质量的1.8％；
S1、先制备液体培养基，将所述液体培养基分装至250ml的三角瓶中，每瓶分装120ml，将鸡腿菇固体菌种接种至三角瓶中进行液体发酵培养，所述液体发酵培养的温度为24℃，摇瓶转速为180r/min，培养结束后，放入离心机进行离心后过滤，得到菌丝体，将所述菌丝体在温度为50℃的条件下烘干至含水量为6％，得到鸡腿菇干菌丝体；
所述液体发酵培养的时间为8d，待菌丝生长相对浓度达35％以上，培养结束；所述液体培养基包括以下的质量组分：玉米粉4.0％、麸皮2.5％、蔗糖2.0％、蛋白胨0.5％、KH2PO40.15％、MgSO40.05％、FeSO40.01％；离心的转速为4000rpm；在液体发酵培养后期如有大量泡沫产生，加入用量为0.5％的豆油用于消泡，保证发酵的正常进行；
S2、在S1中得到的鸡腿菇干菌丝体中加入石油醚进行洗涤脱脂，然后过滤，在温度为烘干50℃的条件下烘干至含水量为6％后，得到脱脂后的鸡腿菇干菌丝体；所述鸡腿菇干菌丝体和石油醚的用量为1:2；
S3、将S2中得到脱脂后的鸡腿菇干菌丝体粉碎至120目，然后加入无水乙醇浸泡6h，过滤后，将浸泡后的鸡腿菇菌丝体在温度为50℃的条件下烘干至水分含量为6％，进行超微粉碎后过120目筛，得到鸡腿菇菌丝体干品；
S4、在S3中得到的鸡腿菇菌丝体干品中加入蒸馏水中浸泡2h，然后放入温度为95℃的水浴锅中回流提取3h，再进行过滤，得到滤渣和滤液，所述滤液为第一次提取液；在所述滤渣中加入蒸馏水，再放入温度为95℃的水浴锅中回流提取3h，过滤收集滤液，得到第二次提取液；将所述第一次提取液和第二次提取液混合，然后在温度为15℃的旋转薄膜蒸发器上进行减压浓缩2h，得到多糖二次浓缩液，在所述多糖二次浓缩液中加入无水乙醇，得到混合溶液，将所述混合溶液静置24h后进行过滤，回收乙醇溶液，得到沉淀物，将所述沉淀物加入蒸馏水溶解，得到粗多糖溶液；
所述鸡腿菇干菌丝体和蒸馏水的用量比为1:6，所述滤渣和蒸馏水的用量比为1:6；所述混合溶液中乙醇的浓度为75％；
S5、将S4中得到的粗多糖溶液放入聚酰胺树脂柱中，用质量分数为5％的乙醇水溶液以2BV/h的流速进行洗脱，洗脱至通过聚酰胺树脂柱的溶液为透明无色时停止，再用质量分数为30％的乙醇水溶液以0.5BV/h的流速洗脱后，收集多糖纯化液；将所述多糖纯化液在温度为15℃的条件下减压蒸馏2h后，得到高纯多糖纯化液。
经检测：本实施例中多糖的收率为82％。
实施例2
本实施例鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法，包括以下步骤：
通过常规的方法制备鸡腿菇固体菌种：先制备固体斜面培养基，将200g马铃薯去皮、切碎，加入到1000ml的水中煮沸30min，然后过滤收集滤液，在所述滤液中加入葡萄糖、蛋白胨、琼脂，加水至1000ml，然后分装至200mmx20mm的试管中，装量为试管的1/3，然后进行包装、灭菌备用，将鸡腿菇菌种接种于灭菌后的试管内进行培养，得到鸡腿菇固体菌种；
试管进行包装：试管装入所述固体培养基后，管口盖上胶皮筛子(能透气灭菌)，每5～7支试管用牛皮纸包在一起；所述灭菌的温度为121℃，时间为30min；所述葡萄糖的用量是所述滤液质量的2％，蛋白胨的用量是所述滤液质量的0.5％、琼脂的的用量是所述滤液质量的1.8％；
S1、先制备液体培养基，将所述液体培养基分装至250ml的三角瓶中，每瓶分装120ml，将鸡腿菇固体菌种接种至三角瓶中进行发酵培养，所述发酵培养的温度为26℃，摇瓶转速为180r/min，培养结束后，放入离心机进行离心后过滤，得到菌丝体，将所述菌丝体在温度为60℃的条件下烘干至含水量为8％，得到鸡腿菇干菌丝体；
液体发酵培养时间为7d，待菌丝生长相对浓度达35％以上，培养结束；所述液体培养基包括以下的质量组分：玉米粉4.0％、麸皮2.5％、蔗糖2.0％、蛋白胨0.5％、KH2PO40.15％、MgSO40.05％、FeSO40.01％；离心的转速为4000rpm；在液体发酵培养后期如有大量泡沫产生，加入用量为0.5％的豆油用于消泡，保证发酵的正常进行；
S2、在S1中得到的鸡腿菇干菌丝体中加入石油醚进行洗涤脱脂，然后过滤，在温度为60℃的条件下烘干至含水量为8％后，得到脱脂后的鸡腿菇干菌丝体；所述鸡腿菇干菌丝体和石油醚的用量为1:2；
S3、将S2中得到脱脂后的鸡腿菇干菌丝体粉碎至120目，然后加入无水乙醇浸泡6h，过滤后，将浸泡后的鸡腿菇菌丝体在温度为60℃的条件下减压烘干至水分含量为8％，进行超微粉碎后过120目筛，得到鸡腿菇菌丝体干品；
S4、将S3中得到的鸡腿菇菌丝体干品放入蒸馏水中浸泡2h，然后放入温度为95℃的水浴锅中回流提取3h，再进行过滤，得到滤渣和滤液，所述滤液为第一次提取液；将所述滤渣再加入蒸馏水，再放入温度为95℃的水浴锅中回流提取3h，过滤收集滤液，得到第二次提取液；将所述第一次提取液和第二次提取液混合，然后在温度为30℃的旋转薄膜蒸发器上进行减压浓缩1h，得到多糖二次浓缩液，在所述多糖二次浓缩液中加入无水乙醇，得到混合溶液，将所述混合溶液静置24h后进行过滤，回收乙醇溶液，得到沉淀物，将所述沉淀物加入蒸馏水溶解，得到粗多糖溶液；
所述鸡腿菇干菌丝体和蒸馏水的用量比为1:8，所述滤渣和蒸馏水的用量比为1:6；所述混合溶液中乙醇的浓度为75％；
S5、将S4中得到的粗多糖溶液通入聚酰胺树脂柱中，用质量分数为5％的乙醇水溶液以2BV/h的流速进行洗脱，洗脱至透过聚酰胺树脂柱的溶液为透明无色时止，然后再放入湿法装柱的AB-8树脂柱中，再用质量分数为30％的乙醇水溶液以0.5BV/h的流速洗脱后，收集多糖纯化液；将所述多糖纯化液在温度为30℃的条件下减压蒸馏1h后，得到高纯多糖纯化液。
经检测：本实施例中多糖的收率为78％。
实施例3
本实施例鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法，包括以下步骤：
通过常规的方法制备鸡腿菇固体菌种：先制备固体斜面培养基，将200g马铃薯去皮、切碎，加入到1000ml的水中煮沸30min，然后过滤收集滤液，在所述滤液中加入葡萄糖、蛋白胨、琼脂，加水至1000ml，然后至200mmx20mm的试管中，装量为试管的1/3，然后进行包装、灭菌备用，将鸡腿菇菌种接种于灭菌后的试管内进行培养，得到鸡腿菇固体菌种；
试管进行包装：试管装入所述固体培养基后，管口盖上胶皮筛子(能透气灭菌)，每5～7支试管用牛皮纸包在一起；所述灭菌的温度为121℃，时间为30min；所述葡萄糖的用量是所述滤液质量的2％，蛋白胨的用量是所述滤液质量的0.5％、琼脂的的用量是所述滤液质量的1.8％；
S1、先制备液体培养基，将所述液体培养基分装至250ml的三角瓶中，每瓶分装120ml，将鸡腿菇固体菌种接种至三角瓶中进行发酵培养，所述发酵培养的温度为25℃，摇瓶转速为180r/min，培养结束后，放入离心机进行离心后过滤，得到菌丝体，将所述菌丝体在温度为55℃的条件下烘干至含水量为7％，得到鸡腿菇干菌丝体；
所述液体发酵培养时间为9d，待菌丝生长相对浓度达35％以上，培养结束；所述液体培养基包括以下的质量组分：玉米粉4.0％、麸皮2.5％、蔗糖2.0％、蛋白胨0.5％、KH2PO40.15％、MgSO40.05％、FeSO40.01％；离心的转速为4000rpm；在液体发酵培养后期如有大量泡沫产生，加入用量为0.5％的豆油用于消泡，保证发酵的正常进行；
S2、在S1中得到的鸡腿菇干菌丝体中加入石油醚进行洗涤脱脂，然后过滤，在温度为55℃的条件下烘干至含水量为7％后，得到脱脂后的鸡腿菇干菌丝体；所述鸡腿菇干菌丝体和石油醚的用量为1:2；
S3、将S2中得到脱脂后的鸡腿菇干菌丝体粉碎至120目，然后加入无水乙醇浸泡6h，过滤后，将浸泡后的鸡腿菇菌丝体在温度为55℃的条件下减压烘干至水分含量为7％，进行超微粉碎后过120目筛，得到鸡腿菇菌丝体干品；
S4、将S3中得到的鸡腿菇菌丝体干品放入蒸馏水中浸泡2h，然后放入温度为95℃的水浴锅中回流提取3h，再进行过滤，得到滤渣和滤液，所述滤液为第一次提取液；将所述滤渣再放入蒸馏水中，再放入温度为95℃的水浴锅中回流提取3h，过滤收集滤液，得到第二次提取液；将所述第一次提取液和第二次提取液混合，然后在温度为20℃的旋转薄膜蒸发器上进行减压浓缩1.5h，得到多糖二次浓缩液，在所述多糖二次浓缩液中加入无水乙醇，得到混合溶液，将所述混合溶液静置24h后进行过滤，回收乙醇溶液，得到沉淀物，将所述沉淀物加入蒸馏水溶解，得到粗多糖溶液；
所述鸡腿菇干菌丝体和蒸馏水的用量比为1:7，所述滤渣和蒸馏水的用量比为1:6；所述混合溶液中乙醇的浓度为75％；
S5、将S4中得到的粗多糖溶液通入聚酰胺树脂柱中，用质量分数为5％的乙醇水溶液以2BV/h的流速进行洗脱，洗脱至透过聚酰胺树脂柱的溶液为透明无色时停止，然后再放入湿法装柱的AB-8树脂柱中，再用质量分数为30％的乙醇水溶液以0.5BV/h的流速洗脱后，收集多糖纯化液；将所述多糖纯化液在温度为20℃的条件下减压蒸馏1.5h后，得到高纯多糖纯化液。
经检测：本实施例中多糖的收率为85％。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制。凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。

Claims (10)

1.一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
S1、先制备液体培养基，将所述液体培养基分装至三角瓶中，将鸡腿菇固体菌种接种至所述三角瓶中进行液体发酵培养，所述液体发酵培养的温度为24℃～26℃，摇瓶转速为180r/min，培养结束后，进行离心、过滤，得到菌丝体，将所述菌丝体烘干，得到鸡腿菇干菌丝体；
S2、在S2中得到的鸡腿菇干菌丝体中加入石油醚进行洗涤脱脂，然后过滤、烘干，得到脱脂后的鸡腿菇干菌丝体；
S3、将S3中得到的脱脂后的鸡腿菇干菌丝体粉碎，然后加入无水乙醇浸泡6h，过滤后烘干，进行超微粉碎后过120目筛，得到鸡腿菇菌丝体干品；
S4、在S4中得到的鸡腿菇菌丝体干品中加入蒸馏水，浸泡2h，然后放入温度为95℃的水浴锅中回流提取3h，再进行过滤，得到滤渣和滤液，所述滤液为第一次提取液；在所述滤渣中再加入蒸馏水，放入温度为95℃的水浴锅中回流提取3h，过滤收集滤液，得到第二次提取液；将所述第一次提取液和第二次提取液混合，然后进行减压浓缩，得到多糖二次浓缩液，在所述多糖二次浓缩液中加入无水乙醇，得到混合溶液，将所述混合溶液静置24h后进行过滤，回收乙醇溶液，得到沉淀物，将所述沉淀物加入蒸馏水溶解，得到粗多糖溶液；
S5、将S5中得到的粗多糖溶液放入聚酰胺树脂柱中，用质量分数为5％的乙醇水溶液以2BV/h的流速进行洗脱，洗脱至通过聚酰胺树脂柱内的溶液为无色时停止，洗脱后再通入AB-8树脂柱中，再用质量分数为30％的乙醇水溶液以0.5BV/h的流速洗脱，然后收集多糖纯化液；将所述多糖纯化液在温度为15℃～30℃的条件下减压蒸馏1h～2h后，得到高纯多糖纯化液。
2.根据权利要求1所述的一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法，其特征在于，S1中所述液体培养基包括以下的质量组分：玉米粉4.0％、麸皮2.5％、蔗糖2.0％、蛋白胨0.5％、KH2PO40.15％、MgSO40.05％、FeSO40.01％。
3.根据权利要求2所述的一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法，其特征在于，S1中所述三角瓶的体积为250ml，每瓶分装所述液体培养基的体积为120ml。
4.根据权利要求1所述的一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法，其特征在于，S1中所述液体发酵培养的时间为7～9d；所述离心的转速为4000rpm。
5.根据权利要求1所述的一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法，其特征在于，S2中所述鸡腿菇干菌丝体和石油醚的用量为1:2。
6.根据权利要求1所述的一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法，其特征在于，S3中所述脱脂后的鸡腿菇干菌丝体粉碎至120目。
7.根据权利要求1所述的一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法，其特征在于，S1、S2和S3中所述烘干的温度均为50℃～60℃，烘干后的含水量均为6％～8％。
8.根据权利要求1所述的一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法，其特征在于，S4中所述鸡腿菇菌丝体干品和蒸馏水的用量比为1:(6～8)，所述滤渣和蒸馏水的用量比为1:6。
9.根据权利要求1所述的一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法，其特征在于，S4中所述混合溶液中乙醇的浓度为75％。
10.根据权利要求1所述的一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法，其特征在于，S5中所述AB-8树脂柱采用湿法装柱。
CN202210666851.4A 2022-06-13 2022-06-13 一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法 Active CN114875096B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210666851.4A CN114875096B (zh) 2022-06-13 2022-06-13 一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210666851.4A CN114875096B (zh) 2022-06-13 2022-06-13 一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114875096A true CN114875096A (zh) 2022-08-09
CN114875096B CN114875096B (zh) 2023-09-19

Family

ID=82680852

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210666851.4A Active CN114875096B (zh) 2022-06-13 2022-06-13 一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114875096B (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102860494A (zh) * 2012-09-25 2013-01-09 上海市农业科学院 一种鸡腿菇子实体多糖与呈味物质及其制备方法
WO2013155866A1 (zh) * 2012-04-16 2013-10-24 山东七河生物科技股份有限公司 一种利用扩张蛋白提高虫草多糖产量的液体发酵方法
CN112521523A (zh) * 2020-12-15 2021-03-19 山西康欣药业有限公司 一种桦褐孔菌多糖的提取和纯化方法
CN113651898A (zh) * 2021-08-31 2021-11-16 青岛科技大学 一种鸡腿菇菌丝体多糖及其制备方法和应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013155866A1 (zh) * 2012-04-16 2013-10-24 山东七河生物科技股份有限公司 一种利用扩张蛋白提高虫草多糖产量的液体发酵方法
CN102860494A (zh) * 2012-09-25 2013-01-09 上海市农业科学院 一种鸡腿菇子实体多糖与呈味物质及其制备方法
CN112521523A (zh) * 2020-12-15 2021-03-19 山西康欣药业有限公司 一种桦褐孔菌多糖的提取和纯化方法
CN113651898A (zh) * 2021-08-31 2021-11-16 青岛科技大学 一种鸡腿菇菌丝体多糖及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
曹向宇等: "超声波联合酶法提取鸡腿菇菌丝体多糖及纯化", 食品科学, vol. 34, no. 16, pages 6 - 10 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114875096B (zh) 2023-09-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106367208B (zh) 一种大蒜精油的分离纯化方法
CN102876539B (zh) 一种提高杨梅酒花青素含量的方法
WO2023020501A1 (zh) 一种从伯克霍尔德菌发酵液提取fr901464的方法
CN102628002A (zh) 一种青刺果油脂的制备工艺
CN101659917B (zh) 块菌酒生产工艺
CN104387488B (zh) 一种微生物发酵提取仙草多糖的方法
CN114409660B (zh) 一种cpa型吲哚生物碱类化合物及其制备方法与用途
CN114940934A (zh) 一种藤椒酒的制作方法及生产工艺
CN104450822B (zh) 一种以茶多酚生产废水为原料生产茶黄素的方法
JP2015202065A (ja) 発酵処理物並びにノビレチン及びタンゲレチン高含有率物の製造方法
CN108640956A (zh) 一种从油茶籽中制备黄酮苷的方法
CN110551636B (zh) 一种紫红曲霉my-21菌株及其应用
CN114875096B (zh) 一种鸡腿菇液体优化培养及多糖提取的方法
CN115029385B (zh) 一种利用微生物发酵提取茶粕中茶皂素的方法
CN105294395A (zh) 一种同步提取-组合柱层析-结晶纯化制备虫草酸、虫草素的方法
CN107988280B (zh) 从十字花科蔬菜种子中提制异硫氰酸酯高纯品的方法
CN109295120A (zh) 一种利用青霉菌生物转化玉米须获得黄酮的方法
CN112707881B (zh) 一种蓝莓花青素的制备方法
CN108276467A (zh) 一种茶皂素及其提取工艺和应用
CN108913499A (zh) 一种苦荞提取物及其制备方法、应用与保健酒
CN110878259B (zh) 冬虫夏草菌丝的发酵方法
CN112898444A (zh) 一种利用灵芝孢子粉萃余物制备胞壁多糖的方法及其产品与应用
CN102719485B (zh) 一种利用罗汉果块根中淀粉转化乙醇的方法
CN113416687B (zh) 裂褶菌产裂叶多糖的发酵培养方法
CN109593795B (zh) 一种阿魏酸及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant