CN114874996A - 一种沙门氏菌噬菌体组合物及其应用 - Google Patents

一种沙门氏菌噬菌体组合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种沙门氏菌噬菌体组合物及其应用，属于生物技术领域。本发明提供的沙门氏菌噬菌体组合物，包括噬菌体GSP162、噬菌体GSP193、噬菌体GSP001和噬菌体GSP032中的至少一种。本发明提供的沙门氏菌噬菌体组合物，分别针对沙门氏菌脂多糖(LPS)的O抗原、LPS的核心多糖、外膜蛋白BtuB和外膜蛋白TolC四种受体发挥作用。本发明筛选出的四种噬菌体，具有良好的温度耐受性和酸碱耐受性，均可裂解多种不同血清型的沙门氏菌，裂解谱广泛；体外裂解细菌实验表明，相比单一噬菌体的使用，噬菌体鸡尾酒，可有效延缓抗噬菌体菌株的出现，协同效果明显。小鼠肠道杀菌试验表明，本发明噬菌体组合物可有效降低盲肠内的沙门氏菌载菌量。

Description

一种沙门氏菌噬菌体组合物及其应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种沙门氏菌噬菌体组合物及其应用。
背景技术
沙门氏菌是革兰氏阴性菌，属于肠杆菌科，人兽共患病原菌之一，在我国被列为二类传染病，可对人类和畜牧业生产造成重大的威胁和经济负担。比如可导致动物的腹泻、败血症以及母畜流产等。人经常通过食用受沙门氏菌污染的鸡肉、猪肉、牛肉和乳制品导致被感染，所以，沙门氏菌严重危害食品安全和公共卫生。沙门氏菌对畜牧养殖业的危害是十分突出的，可垂直传播也可水平传播，严重影响畜禽的生产性能，造成巨大的经济损失。
抗生素是防治沙门氏菌和减少沙门氏菌污染的最有效方法。然而，多年来随着抗生素的大量使用，导致抗生素耐药菌株的流行，抗生素的残留也严重危害人体的健康。目前世界各国已意识到抗生素滥用所产生的问题，发达国家早已实行无抗养殖，瑞典早在1986年就全面禁止抗生素用作饲料添加剂，欧盟在2006年全面禁止在饲料中添加抗生素。我国近几年也陆续出台相关政策，并于2020年7月1日全面停止饲料中添加抗生素。抗生素在饲料添加剂中的禁止使用，急需抗生素替代品的出现。
噬菌体广泛存在于自然界，是一类能够感染细菌等微生物的病毒，被认为是导致细菌死亡的天然捕食者。与抗生素相比，噬菌体具有裂解效率高，特异性强，副作用少，不会破坏宿主的正常微生物群，生产成本低等优点。噬菌体可单一的使用也可多种不同的噬菌体组成噬菌体鸡尾酒共同使用，还可和抗生素联合使用。单一的噬菌体在与细菌相互作用的过程中，很容易产生噬菌体抗性菌株，因此，将多种针对宿主菌不同受体的噬菌体组合使用，可有效延缓或阻止抗性菌株的出现，并且可拓宽噬菌体的裂解谱。
但是，目前还没有一种能针对沙门氏菌不同受体的噬菌体组合物被开发应用，因此，进一步筛选获得能够针对沙门氏菌不同受体的噬菌体组合物具有十分重要的意义。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种裂解谱广泛、不易产生抗噬菌体菌株且裂解协同效果明显的沙门氏菌噬菌体组合物。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种沙门氏菌噬菌体组合物，所述噬菌体组合物包括噬菌体GSP162、噬菌体GSP193、噬菌体GSP001和噬菌体GSP032中的至少一种；所述噬菌体GSP162的保藏编号为：CCTCC NO：M 2022100，所述噬菌体GSP193的保藏编号为：CCTCC NO：M2022099，所述噬菌体GSP001的保藏编号为：CCTCC NO：M 2022098，所述噬菌体GSP032的保藏编号为：CCTCC NO：M 2022097。
优选的，所述噬菌体组合物中噬菌体的总含量为108PFU/ml-1010PFU/ml。
本发明还提供了一种上述噬菌体组合物在制备防治沙门氏菌感染产品中的应用。
优选的，所述产品包括药物、饲料添加剂、清洁剂和消毒剂。
优选的，所述噬菌体组合物中，噬菌体GSP162的感染复数为0.0001-0.000001；噬菌体GSP193的感染复数为0.001-1；噬菌体GSP001的感染复数为0.0001-1；噬菌体GSP032的感染复数为0.001-1。
优选的，所述噬菌体组合物中，噬菌体GSP162的潜伏期为20min，持续增加80min达到平稳期；噬菌体GSP193的潜伏期为10min，持续增加70min达到平稳期；噬菌体GSP001的潜伏期为30min，持续增加50min达到平稳期；噬菌体GSP032的潜伏期为20min，持续增加30min达到平稳期。
优选的，所述噬菌体组合物中，噬菌体GSP162活性稳定的pH值为3-12；噬菌体GSP193、噬菌体GSP001和噬菌体GSP032活性稳定的pH值均为3-11。
优选的，所述噬菌体组合物中，噬菌体GSP162活性稳定的温度不高于60℃；噬菌体GSP193活性稳定的温度不高于70℃；噬菌体GSP001活性稳定的温度不高于50℃；噬菌体GSP032活性稳定的温度不高于50℃。
本发明还提供了一种防治沙门氏菌感染的药物，所述药物包括上述沙门氏菌噬菌体组合物。
优选的，所述药物的制剂形式包括经胃肠道给药剂型和非经胃肠道给药剂型。
本发明的有益效果：
本发明分离并筛选了四种针对沙门氏菌不同受体的烈性噬菌体GSP162、GSP193、GSP001、GSP032，组合成噬菌体鸡尾酒可有效阻止或延缓噬菌体耐受菌株的出现，协同效果明显。
本发明分离获得的四种噬菌体均为广谱噬菌体，可裂解多种不同血清型的沙门氏菌；具有高效的裂解活性，在不同的感染复数(MOI)下均具有很好的裂解效果；具有良好的温度耐受性和酸碱耐受性，在生产实际应用中具有较宽的适用范围。
本发明分离获得的四种噬菌体可以单独使用或组合成噬菌体鸡尾酒，也可与其他物质复配使用，可用于预防或治疗沙门氏菌所引起的感染，也可净化环境中的沙门氏菌所导致的污染。
保藏说明
本发明噬菌体(phage)GSP162保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2022年1月20日，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，武汉大学保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2022100；
本发明噬菌体(phage)GSP193保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2022年1月20日，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，武汉大学保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2022099；
本发明噬菌体(phage)GSP001保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2022年1月20日，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，武汉大学保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2022098；
本发明噬菌体(phage)GSP032保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2022年1月20日，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，武汉大学保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2022097。
附图说明
图1为噬菌体的电镜照片；
图2为噬菌体的噬菌斑图；
图3为噬菌体的最佳MOI；
图4为噬菌体的一步生长曲线；
图5为噬菌体的酸碱稳定性；
图6为噬菌体的热稳定性；
图7为噬菌体体外裂解曲线；
图8为噬菌体肠道杀菌活性和盲肠内的噬菌体滴度。
具体实施方式
本发明提供了一种沙门氏菌噬菌体组合物，所述噬菌体组合物包括噬菌体GSP162、噬菌体GSP193、噬菌体GSP001和噬菌体GSP032中的至少一种；所述噬菌体GSP162的保藏编号为：CCTCC NO：M 2022100，所述噬菌体GSP193的保藏编号为：CCTCC NO：M2022099，所述噬菌体GSP001的保藏编号为：CCTCC NO：M 2022098，所述噬菌体GSP032的保藏编号为：CCTCC NO：M 2022097。
在本发明中，噬菌体GSP162和噬菌体GSP193均分离自广西某猪场粪便污水混合物，噬菌体GSP001分离自福建某猪场粪便污水混合物，噬菌体GSP032分离自河北某猪场粪便污水混合物。上述噬菌体均于2022年01月20日保藏于中国典型培养物保藏中心。本发明所述筛选获得的四种噬菌体分别针对沙门氏菌不同的受体，具体的，噬菌体GSP162针对宿主菌的脂多糖(LPS)的O抗原，噬菌体GSP193针对宿主菌的LPS的核心多糖，噬菌体GSP001针对宿主菌的外膜蛋白BtuB，噬菌体GSP032同时针对宿主菌的外膜蛋白TolC受体和LPS的核心多糖部分。本发明提供的沙门氏菌噬菌体组合物可有效阻止或延缓噬菌体耐受菌株的出现，协同效果明显。本发明对于上述各种噬菌体的用量比例关系没有特殊限定，采用任意的比例关系均可，优选为等比例。在本发明中，所述噬菌体组合物中噬菌体的总含量优选为108PFU/ml-1010PFU/ml，更优选为109PFU/ml。本发明所述组合物可以通过各种形式使用，如液体制剂，口服固体制剂或冻干粉制剂，还可作为有效成分的药物、饲料添加剂、清洁剂或消毒剂使用。在本发明中，所述沙门氏菌噬菌体组合物优选的为噬菌体GSP162、噬菌体GSP193、噬菌体GSP001和噬菌体GSP032中的两种任意组合，更优选的为噬菌体GSP162、噬菌体GSP193、噬菌体GSP001和噬菌体GSP032中的三种任意组合，进一步优选的为噬菌体GSP162、噬菌体GSP193、噬菌体GSP001和噬菌体GSP032四种组合使用。
本发明还提供了一种上述噬菌体组合物在制备防治沙门氏菌感染产品中的应用。
在本发明中，所述产品优选的包括药物、饲料添加剂、清洁剂和消毒剂。本发明所述噬菌体组合物裂解谱广泛，可裂解多种不同血清型的沙门氏菌，比如包括肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、科瓦利斯沙门氏菌、德比沙门氏菌、罗森沙门氏菌、伦敦沙门氏菌、韦太夫雷登沙门氏菌、巴拿马沙门氏菌、赛罗沙门氏菌、哈瓦那沙门氏菌、肯塔基沙门氏菌、姆班达卡沙门氏菌、黄金海岸沙门氏菌、火鸡沙门氏菌、阿贡纳沙门氏菌、印第安纳沙门氏菌、圣保罗沙门氏菌。
在本发明所述噬菌体组合物中，噬菌体GSP162的感染复数优选为0.000001-0.0001，更优选为0.00001；噬菌体GSP193的感染复数优选为0.001-1，更优选为0.1；噬菌体GSP001的感染复数优选为0.0001-1，更优选为0.1；噬菌体GSP032的感染复数优选为0.001-1，更优选为0.1。
在本发明所述噬菌体组合物中，噬菌体GSP162的潜伏期为20min，持续增加80min达到平稳期；噬菌体GSP193的潜伏期为10min，持续增加70min达到平稳期；噬菌体GSP001的潜伏期为30min，持续增加50min达到平稳期；噬菌体GSP032的潜伏期为20min，持续增加30min达到平稳期。
在本发明所述噬菌体组合物中，噬菌体GSP162活性稳定的pH值优选为3-12；噬菌体GSP193、噬菌体GSP001和噬菌体GSP032活性稳定的pH值均优选为3-11。在本发明所述噬菌体组合物中，噬菌体GSP162活性稳定的温度优选为不高于60℃；噬菌体GSP193活性稳定的温度优选为不高于70℃；噬菌体GSP001活性稳定的温度优选为不高于50℃；噬菌体GSP032活性稳定的温度优选为不高于50℃。
本发明还提供了一种防治沙门氏菌感染的药物，所述药物包括上述沙门氏菌噬菌体组合物。
在本发明中，所述药物优选的还包括药学上可接受的载体，本发明对于药学上可接受的载体种类没有特殊限定，采用本领域常规药学上可接受的载体均可。在本发明所述药物中，上述沙门氏菌噬菌体组合物的效价优选为108PFU/ml-1010PFU/ml，更优选为109PFU/ml。
在本发明中，所述药物的制剂形式优选的包括经胃肠道给药剂型和非经胃肠道给药剂型，所述非经胃肠道给药剂型优选的包括注射给药剂型和呼吸道给药剂型。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
(1)噬菌体的分离：
从全国各地不同地区的养殖场采集粪便和污水样品，分离噬菌体的宿主菌为肠炎沙门氏菌SE006，肠炎沙门氏菌SE006由本实验室分离自禽肝脏并保存，于2022年01月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保存编号为CCTCC NO：M 2022101。
将采集的污水初步用滤纸过滤，去除大的固体杂质，取出滤后的污水样30ml，装入50ml离心管中，10000g离心10min，上清液用0.22um孔径的无菌滤器过滤作为噬菌体增殖的母液，储存于4℃备用。
将沙门氏菌SE006接种于LB培养基中，37℃振荡培养至对数生长期，取5ml过滤后的上清液，2.5ml宿主菌和10ml LB培养基混合，在37℃下振荡培养12h，使粪水滤液中的噬菌体充分增殖。将培养后的样品10000g离心10min，取上清，用0.22um的无菌滤器过滤，此滤液即为噬菌体原液。通过斑点分析证实上清液中是否存在噬菌体，取融化后的半固体培养基5ml，加入宿主菌100μl混合均匀，倒入普通LB固体培养皿中，等其凝固，取10μl噬菌体原液滴加在已倒好的双层平板上，待其凝固放入37℃恒温培养箱，观察是否出现噬菌斑。将有噬菌斑的滤液进行适当的梯度稀释，取稀释后的液体100μl、宿主菌100μl加入到5ml半固体培养基中，倒入LB固体培养基上，铺平，凝固后37℃倒置培养6-12h。
(2)噬菌体的纯化
用小枪头挑取噬菌斑，加入到1ml SM缓冲液中，摇床振荡15min，进行适当的梯度稀释，取100μl稀释后的噬菌体液与100μl宿主菌混合后加入到融化后半固体培养基中，倒在LB固体培养基上，37℃培养6-12h，观察单个噬菌斑的出现。重复操作至少3次，进行噬菌体的纯化工作。
所述LB液体培养基：称取蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，溶于1L蒸馏水中，121℃高压灭菌20min，于4℃冷藏备用。
所述LB固体培养基：在1L的LB液体培养基中加入15g琼脂粉，121℃高压灭菌20min，冷却至45℃左右，倒入无菌平皿，于4℃冷藏备用。
所述半固体培养基：在1L的LB液体培养基中加入7.5g琼脂粉，121℃高压灭菌20min，分装后4℃储存，使用时微波炉融化完全。
所述SM缓冲液：SM缓冲液：称取5.8g NaCl，2g MgSO4·7H2O，0.1g明胶，和50mlTris-HCl混合溶解，于1L容量瓶定容，高温灭菌待用。
(3)噬菌体的液体增殖
为了提高单位体积内噬菌体的数量，采用液体扩增的方法。将新鲜培养的菌液培养至OD600约为0.3时，用小枪头将纯化到最后一代的噬菌体单斑放入其中，放入37℃振荡培养箱继续培养6h，观察菌液是否变澄清。10000g离心10min，上清液用0.22um孔径的无菌滤器过滤，将此上清噬菌体悬液按最适生长比，再次将其加入到OD约为0.3的宿主菌中，放入37℃振荡培养箱继续培养6h，观察菌液是否变澄清，离心过滤收集上清液，10倍梯度稀释后采用双层平板法进行噬菌体效价的测定。可根据不同噬菌体的生长情况，先将噬菌体上清液倍比稀释至不同的浓度梯度进行预实验，根据噬菌体效价计算出噬菌体的最适生长比，储存于4℃备用。噬菌体经纯化扩增后，四种噬菌体的滴度均可达到109-1010PFU/ml。
噬菌体形态电镜观察
采用磷钨酸负染法，取一滴纯化后的高效价噬菌体液滴于铜网上吸收10min，吸干残余悬液，用2％的磷钨酸(PTA，2％w/v)染色2min，用红外灯将铜网烘干，透射电镜观察，结果如图1所示。该噬菌体经透射电镜观察，四种噬菌体形态学分类属于有尾噬菌体目(Caudovirales)，GSP162、GSP001、GSP032噬菌体属于长尾噬菌体科(Siphoviridae)，GSP193噬菌体属于肌尾噬菌体科(Myoviridae)。
实施例2
为了鉴定实施例1所分离的噬菌体侵染沙门氏菌所吸附的宿主受体，构建沙门氏菌SE006的突变体库，采用双层平板点斑的方法，取10μl噬菌体液点斑于每种细菌突变体的双层平板上，37℃温箱放置12h，观察有无噬菌斑，判断其受体。结果如表1所示，GSP162噬菌体的受体为LPS的O抗原、GSP193噬菌体的受体为LPS核心多糖，GSP001噬菌体的受体为外膜蛋白BtuB、GSP032的受体同时为外膜蛋白TolC和LPS的核心多糖部分。
表1噬菌体的受体鉴定
Figure BDA0003562042520000081
注：+表示可侵染；-表示不可侵染。
实施例3
将实施例1100μl过夜培养的菌液与半固体培养基混合倒入LB固体培养基，制成双层平板，将噬菌体10倍梯度稀释成不同的浓度，将不同浓度的噬菌体取10μl点滴到双层平板上，干燥后37℃培养箱倒置培养6-12h，观察平板上梯度稀释的空斑形成。结果如图2所示，所选择的4株沙门氏菌噬菌体在双层平板上生长良好，清晰透明，随着梯度稀释，最后可观察到噬菌体的单斑。
实施例4
噬菌体的宿主谱通过点滴法来测定，将要检测的不同菌株培养至对数生长期，取100μl过夜培养的菌液加入到半固体培养基中，混合均匀后倒入LB固体培养基，等待其凝固，将噬菌体10倍梯度稀释成不同的浓度，将不同浓度的噬菌取10μl点滴到双层平板上，干燥后37℃培养箱倒置培养6-12h，观察噬菌体对受试菌株的裂解情况，计算噬菌体的成斑率(EOP)。结果如表2所示，GSP193和GSP001噬菌体裂解谱广泛，可侵染不同血清型的沙门氏菌并且侵染效率高；而GSP162和GSP032噬菌体的裂解谱相对较窄。
表2噬菌体裂解谱
Figure BDA0003562042520000101
Figure BDA0003562042520000111
实施例5
噬菌体的宿主谱将宿主菌SE006培养至对数生长期(OD600＝0.6)，用新鲜的LB液体培养基将菌液的浓度调整至1×108CFU/ml左右。然后分别按照不同的MOI(噬菌体/细菌)＝10、0.1、0.001、0.0001、0.00001、0.000001、0.0000001、0.00000001、0.0000000001的比例加入不同浓度的噬菌体，放置于37℃摇床振荡培养4h。将培养液12000g离心1min后在SMBuffer中连续倍比稀释，用双层平板法测定不同MOI所对应的噬菌体滴度。该实验重复进行三次，产生最高滴度的噬菌体/细菌比例即为最佳MOI。结果如图3所示，当GSP162、GSP193、GSP001、GSP032噬菌体的最佳MOI分别为0.00001、0.1、0.1、0.1时，每种噬菌体的效价达到最高，故此值为每种噬菌体的最佳MOI。
实施例6
将宿主菌SE006培养至对数生长期(OD600＝0.6)，用新鲜的LB液体培养基将菌液的浓度调整至1×108CFU/ml左右。将噬菌体与宿主菌按照最佳MOI混合，置于37℃摇床振荡培养10min，使噬菌体充分吸附到宿主菌上。将混合液10000g离心10min后弃掉上清，将沉淀用相同体积的LB重悬，再次离心弃上清，重复洗涤沉淀2次。最后将重悬液置于37℃摇床振荡培养，每间隔10min取样品500μl，取到120min。将滤后的噬菌体液在SM Buffer中连续倍比稀释，用双层平板法测定不同时间所对应的噬菌体滴度。该实验重复进行三次。以感染时间为横坐标，噬菌体滴度为纵坐标，绘制噬菌体感染宿主菌的一步生长曲线。结果如图4所示，GSP162噬菌体的潜伏期约为20min，持续增加约80min达到平稳期；GSP193噬菌体的潜伏期约为10min，持续增加约70min达到平稳期；GSP001噬菌体的潜伏期约为30min，持续增加约50min达到平稳期；GSP032噬菌体的潜伏期约为20min，持续增加约30min达到平稳期。
实施例7
取100μl(1×109PFU/mL)噬菌体于1.5mL无菌EP管中，并分别加入900μl不同pH值(2～13)的SM缓冲溶液，37℃水浴1h，采用双层平板法测定其滴度。试验重复3次。结果如图5所示，GSP162噬菌体在pH 3-12中相对稳定；GSP193噬菌体在pH 3-11时相对稳定；GSP001和GSP032噬菌体在pH 3-11时相对稳定，pH 12时下降明显。
取噬菌体悬浮液(109PFU/mL)并将其置于试管中，每个温度取4管，每管500μl，将这些试管分别在25℃、37℃、50℃、60℃、70℃和80℃的水浴锅中静置20min、40min、60min、80min，每个时间点取一管，吸100μl样品进行连续梯度稀释并立即使用双层琼脂平板法测定不同温度对噬菌体滴度的影响。结果如图6所示，GSP162噬菌体在温度达到60℃时活性依旧很稳定，当达到70℃时活性略有降低，在80℃时随着时间的增加活性下降明显，但依然有活性；GSP193噬菌体在温度70℃时活性稳定，在80℃水浴80min时失活；GSP001噬菌体在温度达到50℃时活性稳定，在60℃和70℃时活性下降明显，在80℃水浴20min时失活；GSP032噬菌体在温度达到50℃时活性稳定，在温度60℃时略有降低，在70℃时降低明显，在80℃水浴20min时失活。
实施例8
将宿主菌SE006过夜培养，将活化过夜的菌液接种到100孔聚乙烯平板中，在37℃振荡(200rpm)直到指数早期(OD600＝0.3-0.4)，此时，将单一四种噬菌体以及不同组合组的噬菌体加入到每个孔中，MOI为1。继续振荡培养68h，检测单个噬菌体和噬菌体不同的组合组在体外裂解宿主菌的变化趋势。从裂解曲线(图7)可以观察到，单噬菌体组在杀菌8h后逐渐恢复生长，不同的噬菌体组合的生长曲线也有所不同，四种噬菌体的组合抑制细菌的生长时间以及恢复后的状态更明显优于其他组合，协同效果显著。
实施例9
将42只6周龄左右的小鼠随机分为7组，每组6只，将培养至对数生长期的细菌分别稀释成1010CFU/mL，经口腔灌注方式接种0.1ml，灌注前12h禁食水，每只阳性对照组每只接种0.1mL无菌PBS，感染后6h口服给予噬菌体治疗，立即提供饮水，2h后提供粮食。在细菌感染24h后，对小鼠进行安乐死，取盲肠组织，检测盲肠的细菌载菌量和噬菌体的滴度。
细菌PBS组：小鼠在感染后6h时，口服PBS，作为阳性对照组；
细菌噬菌体组又分为单噬菌体组和噬菌体鸡尾酒组：单噬菌体组：小鼠在感染后6h时，分别口服4种单一噬菌体100μl；噬菌体鸡尾酒组：小鼠在感染后6h时，口服4种噬菌体组合的噬菌体鸡尾酒100μl。
健康小鼠的PBS对照组，攻毒和治疗时全部口服PBS作为对照。
结果如图8所示，单噬菌体组和噬菌体鸡尾酒组均可降低肠道的载菌量，其中GSP162噬菌体组和噬菌体鸡尾酒组降低肠道载菌量更明显；盲肠中的噬菌体滴度同样是GSP162噬菌体和鸡尾酒噬菌体组滴度最高。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种沙门氏菌噬菌体组合物，其特征在于，所述噬菌体组合物包括噬菌体GSP162、噬菌体GSP193、噬菌体GSP001和噬菌体GSP032中的至少一种；所述噬菌体GSP162的保藏编号为：CCTCC NO：M 2022100，所述噬菌体GSP193的保藏编号为：CCTCC NO：M 2022099，所述噬菌体GSP001的保藏编号为：CCTCC NO：M 2022098，所述噬菌体GSP032的保藏编号为：CCTCCNO：M 2022097。
2.根据权利要求1所述的噬菌体组合物，其特征在于，所述噬菌体组合物中噬菌体的总含量为108PFU/ml-1010PFU/ml。
3.权利要求1或2所述噬菌体组合物在制备防治沙门氏菌感染产品中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品包括药物、饲料添加剂、清洁剂和消毒剂。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述噬菌体组合物中，噬菌体GSP162的感染复数为0.0001-0.000001；噬菌体GSP193的感染复数为0.001-1；噬菌体GSP001的感染复数为0.0001-1；噬菌体GSP032的感染复数为0.001-1。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述噬菌体组合物中，噬菌体GSP162的潜伏期为20min，持续增加80min达到平稳期；噬菌体GSP193的潜伏期为10min，持续增加70min达到平稳期；噬菌体GSP001的潜伏期为30min，持续增加50min达到平稳期；噬菌体GSP032的潜伏期为20min，持续增加30min达到平稳期。
7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述噬菌体组合物中，噬菌体GSP162活性稳定的pH值为3-12；噬菌体GSP193、噬菌体GSP001和噬菌体GSP032活性稳定的pH值均为3-11。
8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述噬菌体组合物中，噬菌体GSP162活性稳定的温度不高于60℃；噬菌体GSP193活性稳定的温度不高于70℃；噬菌体GSP001活性稳定的温度不高于50℃；噬菌体GSP032活性稳定的温度不高于50℃。
9.一种防治沙门氏菌感染的药物，其特征在于，所述药物包括权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体组合物。
10.根据权利要求9所述的药物，其特征在于，所述药物的制剂形式包括经胃肠道给药剂型和非经胃肠道给药剂型。
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