CN114774317A - 产生干燥的乳杆菌属细胞的方法 - Google Patents
产生干燥的乳杆菌属细胞的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114774317A CN114774317A CN202210403643.5A CN202210403643A CN114774317A CN 114774317 A CN114774317 A CN 114774317A CN 202210403643 A CN202210403643 A CN 202210403643A CN 114774317 A CN114774317 A CN 114774317A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lactobacillus
- cells
- plantarum
- heavy metal
- dried
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 title claims abstract description 874
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 title claims abstract description 873
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 73
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 60
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 53
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 52
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims description 163
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims description 162
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims description 162
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 48
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 41
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 32
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 21
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 18
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 17
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 13
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 12
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 claims description 11
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 11
- RVPVRDXYQKGNMQ-UHFFFAOYSA-N lead(2+) Chemical compound [Pb+2] RVPVRDXYQKGNMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 8
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 claims description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 6
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N ribitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N 0.000 claims description 6
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 claims description 5
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 claims description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 5
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 5
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 5
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-O (R)-carnitinium Chemical compound C[N+](C)(C)C[C@H](O)CC(O)=O PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-O 0.000 claims description 3
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 3
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 claims description 3
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 3
- 108010058643 Fungal Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 claims description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 3
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 claims description 3
- JVWLUVNSQYXYBE-UHFFFAOYSA-N Ribitol Natural products OCC(C)C(O)C(O)CO JVWLUVNSQYXYBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 3
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 claims description 3
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 3
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 claims description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 3
- 229960004203 carnitine Drugs 0.000 claims description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 229940001468 citrate Drugs 0.000 claims description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 claims description 3
- 229960001760 dimethyl sulfoxide Drugs 0.000 claims description 3
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 claims description 3
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 3
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 claims description 3
- VVIUBCNYACGLLV-UHFFFAOYSA-N hypotaurine Chemical compound [NH3+]CCS([O-])=O VVIUBCNYACGLLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 claims description 3
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 3
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 3
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 claims description 3
- 108010027322 single cell proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 claims description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 3
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 claims description 3
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 113
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 60
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 60
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 60
- 241000186673 Lactobacillus delbrueckii Species 0.000 description 41
- 240000001929 Lactobacillus brevis Species 0.000 description 23
- 235000013957 Lactobacillus brevis Nutrition 0.000 description 23
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 21
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 15
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 description 15
- 241000186713 Lactobacillus amylovorus Species 0.000 description 15
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 15
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 description 15
- 241001134659 Lactobacillus curvatus Species 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 239000009759 San-Chi Substances 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 11
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- ACTRVOBWPAIOHC-UHFFFAOYSA-N succimer Chemical compound OC(=O)C(S)C(S)C(O)=O ACTRVOBWPAIOHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 229940001882 lactobacillus reuteri Drugs 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 244000199885 Lactobacillus bulgaricus Species 0.000 description 7
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 description 7
- 235000021321 essential mineral Nutrition 0.000 description 7
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 7
- 230000036541 health Effects 0.000 description 7
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 7
- 229940004208 lactobacillus bulgaricus Drugs 0.000 description 7
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 7
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 7
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 6
- 241001468191 Lactobacillus kefiri Species 0.000 description 6
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 6
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 6
- 241000186606 Lactobacillus gasseri Species 0.000 description 5
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 5
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 5
- 241000186684 Lactobacillus pentosus Species 0.000 description 4
- 241000186868 Lactobacillus sanfranciscensis Species 0.000 description 4
- 235000013864 Lactobacillus sanfrancisco Nutrition 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 4
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 4
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 4
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 4
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 4
- 238000011056 performance test Methods 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 102000002029 Claudin Human genes 0.000 description 3
- 108050009302 Claudin Proteins 0.000 description 3
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 3
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 3
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 3
- 241001147746 Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis Species 0.000 description 3
- 240000002605 Lactobacillus helveticus Species 0.000 description 3
- 235000013967 Lactobacillus helveticus Nutrition 0.000 description 3
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 3
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 235000007882 dietary composition Nutrition 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 3
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 3
- 229940054346 lactobacillus helveticus Drugs 0.000 description 3
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 3
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000002417 nutraceutical Substances 0.000 description 3
- 235000021436 nutraceutical agent Nutrition 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 3
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 3
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 3
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 3
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- 241000206593 Carnobacterium divergens Species 0.000 description 2
- 102000004162 Claudin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108090000600 Claudin-1 Proteins 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010072063 Exposure to lead Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241000186716 Lactobacillus agilis Species 0.000 description 2
- 241000186715 Lactobacillus alimentarius Species 0.000 description 2
- 241001135786 Lactobacillus cerevisiae Species 0.000 description 2
- 241000509544 Lactobacillus gallinarum Species 0.000 description 2
- 241001468157 Lactobacillus johnsonii Species 0.000 description 2
- 241000186851 Lactobacillus mali Species 0.000 description 2
- 241000186612 Lactobacillus sakei Species 0.000 description 2
- 241000186783 Lactobacillus vaginalis Species 0.000 description 2
- 241000577554 Lactobacillus zeae Species 0.000 description 2
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 description 2
- 206010027439 Metal poisoning Diseases 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000000591 Tight Junction Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010002321 Tight Junction Proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 229910052785 arsenic Inorganic materials 0.000 description 2
- RQNWIZPPADIBDY-UHFFFAOYSA-N arsenic atom Chemical compound [As] RQNWIZPPADIBDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 2
- 229910052729 chemical element Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 2
- FYGDTMLNYKFZSV-MRCIVHHJSA-N dextrin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)OC1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-MRCIVHHJSA-N 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 2
- 238000011143 downstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 238000009616 inductively coupled plasma Methods 0.000 description 2
- 210000005027 intestinal barrier Anatomy 0.000 description 2
- 230000007358 intestinal barrier function Effects 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 2
- 229940046892 lead acetate Drugs 0.000 description 2
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 2
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 2
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 2
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000020772 multivitamin supplement Nutrition 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 2-(3-fluorophenyl)-1,3-oxazole-4-carbaldehyde Chemical compound FC1=CC=CC(C=2OC=C(C=O)N=2)=C1 BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VTCHZFWYUPZZKL-UHFFFAOYSA-N 4-azaniumylcyclopent-2-ene-1-carboxylate Chemical compound NC1CC(C(O)=O)C=C1 VTCHZFWYUPZZKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193836 Atopobium rimae Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 244000024675 Eruca sativa Species 0.000 description 1
- 235000014755 Eruca sativa Nutrition 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 241000195480 Fucus Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 241000205062 Halobacterium Species 0.000 description 1
- 241000950818 Halolactibacillus halophilus Species 0.000 description 1
- 102100025255 Haptoglobin Human genes 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241001468155 Lactobacillaceae Species 0.000 description 1
- 241001507052 Lactobacillus algidus Species 0.000 description 1
- 241000722545 Lactobacillus allii Species 0.000 description 1
- 241000091633 Lactobacillus caviae Species 0.000 description 1
- 241000218492 Lactobacillus crispatus Species 0.000 description 1
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 description 1
- 241000186685 Lactobacillus hilgardii Species 0.000 description 1
- 241000968140 Lactobacillus hominis Species 0.000 description 1
- 241001339775 Lactobacillus kunkeei Species 0.000 description 1
- 241001134654 Lactobacillus leichmannii Species 0.000 description 1
- 241001369797 Lactobacillus mellis Species 0.000 description 1
- 241000186871 Lactobacillus murinus Species 0.000 description 1
- 241001635183 Lactobacillus nagelii Species 0.000 description 1
- 241000468580 Lactobacillus namurensis Species 0.000 description 1
- 241000215049 Lactobacillus raoultii Species 0.000 description 1
- 241000191682 Lactobacillus rapi Species 0.000 description 1
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 description 1
- 241000673991 Lactobacillus rodentium Species 0.000 description 1
- 241000186869 Lactobacillus salivarius Species 0.000 description 1
- 241000364915 Lactobacillus shenzhenensis Species 0.000 description 1
- 241000894443 Lactobacillus silagei Species 0.000 description 1
- 241001004348 Lactobacillus similis Species 0.000 description 1
- 241000110060 Lactobacillus zymae Species 0.000 description 1
- 241000194041 Lactococcus lactis subsp. lactis Species 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000220225 Malus Species 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000961374 Sancus Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000014969 Streptococcus diacetilactis Nutrition 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- WLZRMCYVCSSEQC-UHFFFAOYSA-N cadmium(2+) Chemical compound [Cd+2] WLZRMCYVCSSEQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- KLOIYEQEVSIOOO-UHFFFAOYSA-N carbocromen Chemical compound CC1=C(CCN(CC)CC)C(=O)OC2=CC(OCC(=O)OCC)=CC=C21 KLOIYEQEVSIOOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012754 cardiac puncture Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000002655 chelation therapy Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008133 cognitive development Effects 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- JSKZWIGBDHYSGI-UCSXVCBISA-L disodium;(6r,7r)-7-[[(2e)-2-(2-amino-1,3-thiazol-4-yl)-2-[1-[2-(3,4-dihydroxybenzoyl)hydrazinyl]-2-methyl-1-oxopropan-2-yl]oxyiminoacetyl]amino]-3-[(2-carboxylato-5-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyrimidin-7-yl)sulfanylmethyl]-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2. Chemical compound [Na+].[Na+].N([C@H]1[C@@H]2N(C1=O)C(=C(CS2)CSC1=CC(=NC2=NC(=NN21)C([O-])=O)C)C([O-])=O)C(=O)C(\C=1N=C(N)SC=1)=N\OC(C)(C)C(=O)NNC(=O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 JSKZWIGBDHYSGI-UCSXVCBISA-L 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000005183 environmental health Effects 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 235000020774 essential nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 239000012520 frozen sample Substances 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 239000007792 gaseous phase Substances 0.000 description 1
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 1
- 230000008821 health effect Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 208000010501 heavy metal poisoning Diseases 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 229940068140 lactobacillus bifidus Drugs 0.000 description 1
- 229940035901 lactobacillus sp Drugs 0.000 description 1
- 229940066544 lactobacillus sporogenes Drugs 0.000 description 1
- 208000008127 lead poisoning Diseases 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013586 microbial product Substances 0.000 description 1
- 238000000120 microwave digestion Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 1
- 230000002887 neurotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000424 optical density measurement Methods 0.000 description 1
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000009528 severe injury Effects 0.000 description 1
- 239000004460 silage Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 229940087562 sodium acetate trihydrate Drugs 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001578 tight junction Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 235000019195 vitamin supplement Nutrition 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 108010027843 zonulin Proteins 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/25—Lactobacillus plantarum
Abstract
本披露提供了产生干燥的乳杆菌属细胞的方法。在一个方面，该方法导致乳杆菌属细胞的重金属结合能力增加。在一个方面，用于产生干燥的乳杆菌属细胞的方法包括在发酵培养基中发酵乳杆菌属细胞。将这些乳杆菌属细胞发酵后，得到包含这些乳杆菌属细胞的发酵产物。将该发酵产物调节至pH 8至11的pH范围。该发酵产物任选在调节至8至11的pH范围之前或之后浓缩。之后将经pH调节的发酵产物干燥。
Description
对保藏生物材料的引用
本申请含有对保藏生物材料的引用，该保藏通过引用并入本文。关于完整的信息，参见说明书的最后一段。
技术领域
本发明涉及产生干燥的乳杆菌属细胞的方法。本发明特别涉及用于产生去除重金属阳离子的干燥的乳杆菌属细胞的方法。
背景技术
铅、镉、砷等重金属随着在体内蓄积对人体健康有害。重金属几乎对人体的所有器官都有负面影响。尽管最近有所改善，但在一些发展中国家，重金属中毒是一种常 见的人类健康状况。
铅中毒，以及更普遍的铅暴露，会对儿童造成不可逆转的伤害。铅被称为环境污染物，对人体健康具有神经毒性作用。铅高暴露会对肾、肝、中枢神经和血液系统造 成严重损害。虽然铅对系统的影响似乎相对地与剂量相关，但美国疾病控制中心(CDC) 报告说，没有安全的铅暴露水平。即使在低剂量接触后，铅也会对健康产生负面影响。 血铅浓度是铅暴露最常用的量度，尽管它仅占全身铅负荷的1％左右，其余部分存在 于软组织和骨中。WHO建议血铅水平低于5μg/dL，但低于5μg/dL的铅水平也对儿 童的认知发展有害，进而影响儿童的智商(IQ)(世界卫生组织，WHO铅暴露临床管 理指南(WHO Guideline for theclinical management of exposure to lead)，2021；Lanphear, B.P.等人,Low-levelenvironmental lead exposure and children's intellectual function:aninternational pooled analysis[低水平环境铅暴露与儿童智力功能：国际汇总分析].Environ Health Perspect[环境健康展望],2005,113(7):第894-9页)。重金属在动植物体内积累，并且随着食物摄入后最终在人体中积累。在一些发展中国家，每天80％的 铅摄入量主要来自食物，约为12μg/天。
有许多微生物具有重金属结合特性。一些具有重金属结合特性的微生物用于去除人体中的重金属。标题为“Strain of Cadmium-removing Lactobacillus Plantarumbacterium[去镉植物乳杆菌细菌的菌株及其用途]”的WO 2014032375涉及一种可以 作为活性成分去除人体内积累的镉的菌株。
当作为治疗剂或益生菌食用时，具有重金属结合特性的微生物需要保持稳定。有多种方法来制备微生物的治疗剂或益生菌。标题为“METHOD FOR PRODUCING FREEZE-DRIEDLACTIC ACID BACTERIA CELLS[生产冷冻干燥乳酸菌细胞的方 法]”的JP2020022392 A2涉及一种通过将乳酸菌细胞分散到分散介质中并在调节分散 介质的pH后冷冻干燥来生产冷冻干燥的乳酸菌细胞的方法。但根据微生物的稳定性， 不同菌株的重金属结合能力可能会有所不同。此外，许多微生物在经过制造过程步骤 后可能无法保留重金属结合能力。需要在微生物的制造过程后保留或增加这类微生物 对重金属的结合能力。
发明内容
本发明提供了产生干燥的乳杆菌属细胞的方法。在一个方面，该方法导致乳杆菌属细胞的重金属结合能力增加。
在一个方面，用于产生干燥的乳杆菌属细胞的方法包括在发酵培养基中发酵乳杆菌属细胞。将这些乳杆菌属细胞发酵后，得到包含这些乳杆菌属细胞的发酵产物。将 该发酵产物调节至pH 8至11的pH范围。该发酵产物任选在调节至8至11的pH范 围之前或之后浓缩。之后将经pH调节的发酵产物干燥。
这些乳杆菌属细胞在体外和/或在体内与重金属阳离子结合。重金属阳离子与干燥的乳杆菌属细胞的体外结合可以通过将干燥的乳杆菌属细胞与含有重金属阳离子 的培养基一起孵育来检测。将孵育的乳杆菌属细胞离心以分离乳杆菌属细胞和重金属 阳离子。此后，收集上清液以测量上清液中的重金属阳离子浓度。通过测量血液和器 官中重金属阳离子的减少来检测重金属阳离子与干燥的乳杆菌属细胞的体内结合。
附图说明
当结合附图考虑时，可以通过参考详细描述和权利要求书来获得对本发明的更完整的理解。
图1分别显示了健康雄性C57BL/6小鼠(未受激发)、未处理的雄性C57BL/6小 鼠(用单次口服剂量的PbAc2激发)(疾病)、DSM 33464处理的雄性C57BL/6小鼠 (用单次口服剂量的PbAc2激发)和二巯基丁二酸(DMSA)处理的雄性C57BL/6 小鼠(用单次口服剂量的PbAc2激发)的血液、脑、肾和肝中的铅离子(Pb2+)。显 示了5只动物的中值。
图2显示了小肠中紧密连接蛋白的qPCR分析，测量为紧密连接蛋白咬合蛋白(occluding)、密封蛋白(claudin)-1、连蛋白(zonulin)-1(ZO-1)和连蛋白-2(ZO-2) 在用单次口服剂量的PbAc2激发的雄性C57BL/6小鼠中的表达水平。比较的是健康 小鼠(未受激发)、未处理的受激发小鼠(疾病)、DSM 33464处理的受激发小鼠和 DMSA处理的受激发小鼠。显示了5只动物的中值。
图3显示了来自三种不同发酵-(下游)过程的冻干乳杆菌属细胞的Pb2+吸附：HH10F39D02：冷冻干燥前未调节pH的冷冻干燥细胞(参考)，HH10F39D04：冷冻 干燥前将pH调节至pH 9的冷冻干燥细胞，以及HH10F39D05：冷冻干燥前将pH调 节至pH 10的冷冻干燥细胞。Pb2+吸附显示为相对百分比，其中HH10F39D02用作其 他细胞的参考并设置为100％。
图4显示了流式细胞术测定冻干乳杆菌属细胞的细胞活力的图，这些细胞衍生自三种不同的发酵-(下游)过程：HH10F39D02：冷冻干燥前未调节pH的冷冻干燥细 胞(参考)，HH10F39D04：冷冻干燥前将pH调节至pH 9的冷冻干燥细胞，以及 HH10F39D05：冷冻干燥前将pH调节至pH 10的冷冻干燥细胞。
图5显示了冻干乳杆菌属细胞的高分辨率显微镜检查，其中有和没有Pb2+。第一行：Pb2+和HH10F39D02(在冷冻干燥前未调节pH的冷冻干燥细胞)，第二行：Pb2+和HH10F39D04(在冷冻干燥前将pH调节至pH 9的冷冻干燥细胞)，第三行：冷冻 干燥的乳杆菌属细胞，未添加Pb2+。
定义
所披露的实施例涉及用于产生干燥的乳杆菌属细胞的方法。
除非另外定义，否则本文使用的所有术语(包括技术和科学术语)具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。将进一步理解的是，诸如通常使用 的字典中定义的那些术语应该被解释为具有与其在说明书和相关领域的背景中的含 义一致的含义，并且不应理解为理想化或过度正式意义，除非本文明确地如此定义。 为了简洁和/或清楚起见，可能不会详细描述众所周知的功能或结构。
如本文所使用的，单数形式“一个/一种(a/an)”和“该(the)”也旨在包括复数 形式，除非上下文另有明确指示。
贯穿本披露内容，除非上下文另有要求，否则词语“包含(comprise、comprises、和comprising)”应当理解为意指包括一个所陈述的步骤或要素或多个步骤或要素的 组，但不排除任何其他步骤或要素或多个步骤或要素的组。
术语“由……组成”意指包括并限于在短语“由……组成”中间的任何内容。因 此，短语“由……组成”是指列出的要素是必需的或强制性的，并且可能不存在其他 要素。术语“基本上由……组成”意指包括在该短语之间列出的任何要素，并且限于 不干扰或有助于本披露内容中针对所列要素指定的活性或作用的其他要素。因此，短 语“基本上由……组成”是指列出的要素是必需的或强制性的，但是其他要素是任选 的并且可能存在或可能不存在，这取决于它们是否实质上影响列出的要素的活性或作 用。
如本文所用，“重金属”是指具有相对高密度并且在低浓度下有毒或毒性的金属化学元素并且包括但不限于铅、镉、砷和汞。
如本文所用，“铅结合产品”是指例如在人体的胃肠道(GI)中与铅离子结合的 产品。胃肠道中的铅结合可以例如体内测量为与未食用铅结合产品的人的血液样品相 比，从同一人在食用该铅结合产品后获得的血液样品中铅含量的减少，或通过测量在 接受该铅结合产品之前和之后在人的粪便中排泄的铅离子。
如本文所用，“冷冻保护剂”是指保护免受低温或冷冻温度的有害影响(例如在 例如冷冻干燥或冷冻过程期间对细胞的损害)的物质。此外，在冷冻干燥或干燥的情 况下，冷冻保护剂赋予通过干燥过程的干燥元件一些稳定性。冷冻保护剂的作用将减 少制造过程中活性或活力的损失，因此它的作用会提高微生物在储存期间的活性/活 力。
如本文所用，“冷冻干燥”与升华干燥、冻干或深冷干燥可互换使用，并且以其 常规含义用作样品的冷却，导致可冷冻溶液转化为冰，可结晶溶质结晶以及形成包含 与未冷冻混合物相关联的非结晶溶质的无定形基质，随后从无定形基质蒸发(升华) 水。在这个过程中，物料中的冷冻水的蒸发(升华)通常是在降低周围压力的情况下 进行，以使物料中的冷冻水直接从固相升华到气相。冷冻干燥通常包括预处理、冷冻、 初次干燥和二次干燥的步骤。冷冻干燥的最大优点是稳定材料用于储存。
如本文所用，“喷雾干燥”是干燥方法，其中将含有微生物细胞的溶液或悬浮液 喷雾到热的干燥介质中，由此微生物细胞被干燥。待喷雾的混合物可以溶液、乳液、 悬浮液或分散液的形式存在。在喷嘴或喷雾轮的帮助下，混合物被雾化成数百万个单 独的液滴，大大增加了表面。水等溶剂立即被热空气蒸发并排出。此外，微生物细胞 单独喷雾干燥。喷雾干燥或雾化方法与其他干燥方法不同，因为需要使用喷嘴或类似 作用的装置，例如一元式件喷嘴、空心锥形喷嘴、压力喷嘴、外部混合二元式喷嘴、 气动喷嘴、内部混合二元式喷嘴、雾化盘或超声波雾化器。喷雾干燥方法在现有技术 中有所描述并且为本领域技术人员所熟悉(参见Gardiner等人、Teixeira等人(同上) 或EP74050和EP285682)。设备是已知的并且被相关地描述，例如Buechi Labortechnik AG公司(德国)的微型喷雾干燥器B-191或B-290或GEA Niro公司(丹麦)的SD-6.3-R。 还已知可以使用任意的助剂和添加剂。
如本文所用，“必需矿物质”是人体执行生命必需功能所需的作为必需营养素的化学元素，并且为本领域技术人员所知。“必需矿物质”的非限制性示例包括钠、钾、 磷、镁和钙。
尽管在下文中将参照其实施例描述本披露的某些方面，但本领域普通技术人员将理解的是，在不脱离如权利要求所定义的本发明的精神和范围的情况下，可以在其中 进行形式和细节上的各种改变。
具体实施方式
在一个方面，本发明涉及产生干燥的乳杆菌属细胞的方法。在另一方面，该方法导致乳杆菌属细胞的重金属结合能力增加。用于产生干燥的乳杆菌属细胞的方法包括 在发酵培养基中发酵乳杆菌属细胞。将这些乳杆菌属细胞发酵后，得到包含这些乳杆 菌属细胞的发酵产物。将该发酵产物调节至pH 8至11的pH范围。该发酵产物任选 在调节至8至11的pH范围之前或之后浓缩。之后将经pH调节的发酵产物干燥。
为了增加乳杆菌属细胞的重金属结合特性，对乳杆菌属细胞进行发酵，将发酵产物的pH范围调节到8-11之间。发明人惊奇地发现，将包含乳杆菌属细胞的发酵产物 调节至8至11范围内的pH，优选pH 9至10范围内的pH增加乳杆菌属细胞的重金 属结合能力。
在该方法的一个实施例中，使用干燥技术例如冷冻干燥、喷雾干燥或它们的组合来干燥经pH调节的发酵产物。
在该方法的优选实施例中，使用冷冻干燥技术干燥经pH调节的发酵产物。冷冻 干燥可以在-60℃至+50℃的温度范围内进行12小时至120小时的时间。在一个实施 例中，冷冻干燥可以在-45℃至+30℃的温度范围内进行24小时至96小时的时间。 在另一个实施例中，冷冻干燥在-30℃至+20℃的温度范围内进行约66小时。
在该方法的一个实施例中，使用喷雾干燥技术干燥经pH调节的发酵产物。使用 干燥微生物产品领域中已知的任何喷雾干燥器将经pH调节的发酵产物喷雾干燥。
在该方法的一个实施例中，重金属阳离子与干燥的乳杆菌属细胞的结合比重金属阳离子与在pH小于8或大于11时制备的干燥的乳杆菌属细胞的结合更高。
在该方法的一个实施例中，干燥的乳杆菌属细胞与必需矿物质的结合使得该结合不会导致体内必需矿物质的缺乏。在一个实施例中，必需矿物质不受与乳杆菌属细胞 结合的影响。
在该方法的优选实施例中，在调节至8至11之间的pH范围之前或之后，将发酵 产物离心以浓缩发酵产物。
在具体实施例中，发酵产物或浓缩的发酵产物包含一种或多种添加剂。在进一步的实施例中，一种或多种添加剂是冷冻保护剂和/或稳定剂。在一个实施例中，冷冻 保护剂是葡萄糖、乳糖、棉子糖、蔗糖、海藻糖、阿东醇、甘油、甘露醇、甲醇、聚 乙二醇、丙二醇、核糖醇、藻酸盐、牛血清白蛋白、肉碱、柠檬酸盐、半胱氨酸、葡 聚糖、二甲基亚砜、谷氨酸钠、甘氨酸甜菜碱、糖原、亚牛磺酸、蛋白胨、聚乙烯吡 咯烷酮或牛磺酸、哺乳动物乳寡糖、甲壳素、壳聚糖、酪蛋白、酵母、酵母提取物、 单细胞蛋白、真菌蛋白、其他二糖或多糖或其混合物。在优选的实施例中，冷冻保护 剂是糊精，例如Nutriose FM06。
乳杆菌属细胞
适用于本发明方法的乳杆菌属细胞结合重金属。
在该方法的一个实施例中，乳杆菌属细胞是植物乳杆菌细胞。植物乳杆菌也称为Lactiplantibacillus plantarum。在一个实施例中，植物乳杆菌是保藏在莱布尼兹研究所(Leibniz Institute)DSMZ-德国微生物保藏中心(German Collection of Microorganismand Cell Cultures)的保藏号为DSM 33464的植物乳杆菌。植物乳杆菌以保藏号DSM 33464保藏，以商标SmartguardTM出售。
数据显示，当在含铅培养基中体外培养时，植物乳杆菌DSM 33464具有良好的 铅(Pb)耐受性。数据表明，该菌株能够在生理相关的pH值和温度下在体外结合铅。 铅与该菌株的结合发生在被认为与GI通过时间相关的时间范围内，并且在一定程度 上结合(1011CFU结合25mg Pb)，其中有理由相信该菌株的109CFU的每日剂量将 结合并且从而体现了人体每日预期摄入的铅的很大一部分。此外，植物乳杆菌菌株 DSM 33464已经进行了胃和肠道存活试验，这些试验还与铅结合相关，以证明铅在整 个GI道通道中与该菌株的结合。在没有任何其他成分的情况下(“禁食”状态)，在 存在含有3.8％脂肪的1:1奶的情况下(“喂食”状态)，在存在盈康维(Yingkangwei Multivitamin)复合维生素补充剂的情况下(“禁食/维生素”状态)，以及在同时存在 盈康维复合维生素补充剂和奶3.8％脂肪的情况下(“喂食/维生素”状态)评估存活。 通过在时间T0、10分钟(口腔期)、120分钟(胃期)、240分钟(小肠期)在MRS 琼脂(37℃，48小时，厌氧孵育)上的平板计数来评估细胞的活力。参照T0计算存活百分比。结果表明，菌株在口腔和胃相中的活力得到了很好的维持，在所有测试条 件下共孵育120分钟后，最大降低了0.5log。在喂食状态下，共孵育240分钟后仍可 获得多达108-109CFU。在禁食状态下，测量到的细胞数量较少，特别是在补充维生 素补充剂的情况下，但在测定结束时仍达到105CFU/mL。结果表明，铅与乳杆菌属 细胞表面结合，并会阻止胃肠(GI)系统摄取、通过血流分布以及与相关蛋白质和细 胞组织的有害相互作用。该菌株的先导结合功效已在三种动物模型(未发表)中得到 证实。起初，植物乳杆菌菌株被应用于慢性暴露的小鼠模型中，在该模型中，小鼠被 给予非常高的铅剂量，并研究了使用该菌株的治疗与预防。作为比较剂，使用了代表 螯合疗法的二巯基丁二酸(DMSA)。在实例1中进一步描述的第三模型中，在急性 小鼠模型中进一步研究了血铅水平的降低，以研究在更相关的条件下(例如中等铅剂 量且不引起器官损伤)下的铅摄取。在所有小鼠模型中，补充这种菌株能够显著降低 血铅水平。在大多数模型中，与对照组相比，用该菌株可以显示小鼠脑、肝和肾组织 中的铅含量显著降低。该菌株的抗氧化和增强肠道屏障的特性进一步支持了通过GI 道阻断铅的摄取。
植物乳杆菌DSM 33464的主要有益特性总结在表1中。
表1：植物乳杆菌菌株DSM 33464的有益特性总结
在优选的实施例中，乳杆菌属细胞与重金属阳离子如铅离子(Pb2+)或镉离子(Cd2 +) 结合。
在另一个或进一步优选的实施例中，乳杆菌属细胞在体外结合重金属阳离子。使用本领域技术人员已知的铅结合测定检测重金属阳离子与干燥的乳杆菌属细胞的体 外结合。在一个实施例中，铅结合测定包括将干燥的乳杆菌属细胞与含有重金属阳离 子的培养基一起孵育。将孵育的乳杆菌属细胞离心以分离乳杆菌属细胞和重金属阳离 子。离心后，收集上清液，因为上清液含有重金属阳离子。测量上清液中的重金属阳 离子浓度。可以使用比色法测量重金属阳离子浓度，例如使用如实例1中所述的 Supelco试剂盒或本领域已知的任何其他测量技术。例如，可以使用电感耦合等离子 体(ICP)光谱法测量上清液中剩余的重铅阳离子浓度。
在另一个优选的实施方案中，乳杆菌属细胞在体内结合重金属阳离子。重金属阳离子与干燥的乳杆菌属细胞的体内结合通过测量血液以及不同器官(肾、脑、肝、骨) 中重金属的减少来检测。
乳杆菌属的非限制性示例包括：德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、耐酸乳 杆菌(Lactobacillus acetotolerans)、Lactobacillus achengensis、阿法尼乳杆菌(Lactobacillus acidifarinae)、酸鱼乳杆菌(Lactobacillus acidipiscis)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、活泼乳杆菌(Lactobacillus agilis)、低温乳杆菌(Lactobacillus algidus)、消化乳杆菌(Lactobacillus alimentarius)、阿里乳杆菌(Lactobacillus allii)、艾尔维乳杆菌(Lactobacillus alvi)、解淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylolyticus)、嗜淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylophilus)、喜淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylotrophicus)、食淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylovorus)、红莲乳杆菌(Lactobacillus angrenensis)、动物乳杆菌(Lactobacillus animalis)、安德里乳杆菌(Lactobacillus antri)、 芹菜乳杆菌(Lactobacillus apinorum)、蜂乳杆菌(Lactobacillus apis)、阿蒂尼乳杆菌 (Lactobacillus apodemi)、水生乳杆菌(Lactobacillus aquaticus)、银色乳杆菌 (Lactobacillus argentoratensis)、亚利桑那乳杆菌(Lactobacillus arizonensis)、德氏乳 杆菌(Lactobacillus aviarius)、贝可乳杆菌(Lactobacillus backii)、八泉乳杆菌 (Lactobacillus baiquanensis)、竹科乳杆菌(Lactobacillus bambusae)、宝琴乳杆菌 (Lactobacillus baoqingensis)、巴伐利亚乳杆菌(Lactobacillus bavaricus)、巴杨乳杆 菌(Lactobacillus bayanensis)、双发酵乳杆菌(Lactobacillus bifermentans)、宾氏乳杆 菌(Lactobacillus binensis)、巴博乳杆菌(Lactobacillus bobalius)、炸弹乳杆菌 (Lactobacillus bombi)、球拟乳杆菌(Lactobacillus bombicola)、炸弹肠乳杆菌 (Lactobacillus bombintestini)、布兰提乳杆菌(Lactobacillus brantae)、短乳杆菌 (Lactobacillus brevis)、布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、可可乳杆菌(Lactobacillus cacaonum)、山茶花乳杆菌 (Lactobacillus camelliae)、毛细乳杆菌(Lactobacillus capillatus)、卡尼乳杆菌 (Lactobacillus carnis)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、链状乳杆菌(Lactobacillus catenaformis)、高加索乳杆菌(Lactobacillus caucasicus)、豚鼠乳杆菌(Lactobacillus caviae)、纤维二糖乳杆菌(Lactobacillus cellobiosus)、酿酒乳杆菌(Lactobacillus cerevisiae)、西堤乳杆菌(Lactobacillus ceti)、嘉义乳杆菌(Lactobacillus chiayiensis)、 人阴道乳杆菌(Lactobacillus coleohominis)、卡利尼乳杆菌(Lactobacillus colini)、丘 状菌落乳杆菌(Lactobacillus collinoides)、复合乳杆菌(Lactobacillus composti)、凹 乳杆菌(Lactobacillus concavus)、混乱乳杆菌(Lactobacillus confusus)、棒状乳杆菌(Lactobacillus coryniformis)、卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)、面包乳杆菌(Lactobacillus crustorum)、居里乳杆菌(Lactobacillus curieae)、柯图斯乳杆菌(Lactobacillus curtus)、弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)、西普干酪乳杆菌(Lactobacillus cypricasei)、岛里乳杆菌(Lactobacillus daoliensis)、岛外乳杆菌(Lactobacillus daowaiensis)、大庆乳杆菌(Lactobacillus daqingensis)、糊精乳杆菌(Lactobacillus dextrinicus)、地里润斯乳杆菌(Lactobacillus diolivorans)、分歧乳杆菌 (Lactobacillus divergens)、东丽乳杆菌(Lactobacillus dongliensis)、榴莲乳杆菌 (Lactobacillus durianis)、恩施乳杆菌(Lactobacillus enshiensis)、马乳杆菌(Lactobacillus equi)、马蹄乳杆菌(Lactobacillus equicursoris)、马氏乳杆菌(Lactobacillus equigenerosi)、法比弗门坦乳杆菌(Lactobacillus fabifermentans)、粪 便乳杆菌(Lactobacillus faecis)、香肠乳杆菌(Lactobacillus farciminis)、法拉吉尼乳 杆菌(Lactobacillus farraginis)、铁酸乳杆菌(Lactobacillus ferintoshensis)、发酵乳杆 菌(Lactobacillus fermentum)、花乳杆菌(Lactobacillus floricola)、多花乳杆菌 (Lactobacillus florum)、福尔摩斯乳杆菌(Lactobacillus formosensis)、穹窿乳杆菌 (Lactobacillus fornicalis)、食果糖乳杆菌(Lactobacillus fructivorans)、果糖乳杆菌 (Lactobacillus fructosus)、弗氏乳杆菌(Lactobacillus frumenti)、福西斯乳杆菌 (Lactobacillus fuchuensis)、富士乳杆菌(Lactobacillus fujinensis)、糠酸乳杆菌 (Lactobacillus furfuricola)、福赛斯乳杆菌(Lactobacillus futsaii)、富源乳杆菌(Lactobacillus fuyuanensis)、母鸡乳杆菌(Lactobacillus gallinarum)、甘南乳杆菌(Lactobacillus gannanensis)、加里乳杆菌(Lactobacillus garii)、加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、胃乳杆菌(Lactobacillus gastricus)、加纳乳杆菌(Lactobacillus ghanensis)、菊苣乳杆菌(Lactobacillus gigeriorum)、基森乳杆菌(Lactobacillus ginsenosidimutans)、大猩猩乳杆菌(Lactobacillus gorillae)、匍匐乳酸菌(Lactobacillus graminis)、哈鲁杜兰乳杆菌(Lactobacillus halodurans)、耐卤乳杆菌(Lactobacillus halotolerans)、汉莫斯乳杆菌(Lactobacillus hammesii)、仓鼠乳杆菌(Lactobacillus hamsteri)、哈尔滨乳杆菌(Lactobacillus harbinensis)、哈亚吉特乳杆菌(Lactobacillus hayakitensis)、鹤岗乳杆菌(Lactobacillus hegangensis)、黑龙江乳杆菌(Lactobacillus heilongjiangensis)、赫尔辛堡乳杆菌(Lactobacillushelsingborgensis)、瑞士乳杆菌 (Lactobacillus helveticus)、草药乳杆菌(Lactobacillus herbarum)、异型腐酒乳杆菌 (Lactobacillus heterohiochii)、希氏乳杆菌(Lactobacillus hilgardii)、北海道乳杆菌 (Lactobacillus hokkaidonensis)、人乳杆菌(Lactobacillus hominis)、同型腐酒乳杆菌 (Lactobacillus homohiochii)、大麦乳杆菌(Lactobacillus hordei)、华川乳杆菌 (Lactobacillus huachuanensis)、华南乳杆菌(Lactobacillus huananensis)、呼兰乳杆菌 (Lactobacillus hulanensis)、湖林乳杆菌(Lactobacillus hulinensis)、惰性乳杆菌 (Lactobacillus iners)、茵氏乳杆菌(Lactobacillus ingluviei)、内西氏乳杆菌 (Lactobacillus insicii)、肠乳杆菌(Lactobacillus intestinalis)、红纤维乳杆菌 (Lactobacillus iwatensis)、易瑞乳杆菌(Lactobacillus ixorae)、詹氏乳杆菌 (Lactobacillus jensenii)、江阴乳杆菌(Lactobacillus jiayinensis)、冀东乳杆菌 (Lactobacillus jidongensis)、金沙乳杆菌(Lactobacillus jinshani)、蓟县乳杆菌 (Lactobacillus jixianensis)、约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)、开发乳杆菌 (Lactobacillus kaifaensis)、加利克斯乳杆菌(Lactobacillus kalixensis)、坎德勒乳杆 菌(Lactobacillus kandleri)、克东乳杆菌(Lactobacillus kedongensis)、开菲尔乳杆菌 (Lactobacillus kefir)、马乳酒样乳杆菌(Lactobacillus kefiranofaciens)、高加索酸奶 粒乳杆菌(Lactobacilluskefirgranum)、克山乳杆菌(Lactobacillus keshanensis)、金氏 乳杆菌(Lactobacilluskimbladii)、嗜泡菜乳杆菌(Lactobacillus kimchicus)、泡菜生乳 杆菌(Lactobacilluskimchiensis)、泡菜乳杆菌(Lactobacillus kimchii)、基森乳杆菌 (Lactobacilluskisonensis)、北通乳杆菌(Lactobacillus kitasatonis)、卡氏乳杆菌(Lactobacilluskoreensis)、苦苏乳杆菌(Lactobacillus kosoi)、库拉贝格乳杆菌 (Lactobacilluskullabergensis)、坤可乳杆菌(Lactobacillus kunkeei)、乳酸乳杆菌 (Lactobacilluslactis)、莱士曼氏乳杆菌(Lactobacillus leichmannii)、林甸乳杆菌 (Lactobacilluslindianensis)、林氏乳杆菌(Lactobacillus lindneri)、坏发酵乳杆菌 (Lactobacillusmalefermentans)、马里乳杆菌(Lactobacillus mali)、麦芽香乳杆菌 (Lactobacillusmaltaromicus)、食木薯乳杆菌(Lactobacillus manihotivorans)、蜜糖乳 杆菌(Lactobacillus mellifer)、梅利斯乳杆菌(Lactobacillus mellis)、梅氏乳杆菌(Lactobacillus melliventris)、异翅乳杆菌(Lactobacillus metriopterae)、米车乳杆菌 (Lactobacillus micheneri)、米德斯乳杆菌(Lactobacillus mindensis)、小乳杆菌(Lactobacillus minor)、微乳杆菌(Lactobacillus minutus)、米山乳杆菌(Lactobacillus mishanensis)、混合乳杆菌(Lactobacillus mixtipabuli)、莫氏乳杆菌(Lactobacillus modestisalitolerans)、粘膜乳杆菌(Lactobacillus mucosae)、牡丹江乳杆菌(Lactobacillus mudanjiangensis)、木兰乳杆菌(Lactobacillus mulanensis)、穆棱乳杆菌(Lactobacillus mulengensis)、穆里乳杆菌(Lactobacillus mulieris)、鼠乳杆菌(Lactobacillus murinus)、 缪斯乳杆菌(Lactobacillus musae)、内氏乳杆菌(Lactobacillus nagelii)、那慕斯乳杆 菌(Lactobacillus namurensis)、南岗乳杆菌(Lactobacillus nangangensis)、南特乳杆菌 (Lactobacillus nantensis)、那须乳杆菌(Lactobacillus nasuensis)、嫩江乳杆菌 (Lactobacillus nenjiangensis)、诺德斯乳杆菌(Lactobacillus nodensis)、黏乳杆菌 (Lactobacillus nuruki)、气味乳杆菌(Lactobacillus odoratitofui)、欧尼乳杆菌 (Lactobacillus oeni)、寡乳杆菌(Lactobacillus oligo)、口乳杆菌(Lactobacillus oris)、 米乳杆菌(Lactobacillusoryzae)、欧克斯乳杆菌(Lactobacillus otakiensis)、欧真斯乳 杆菌(Lactobacillusozensis)、潘尼斯乳杆菌(Lactobacillus panis)、番石榴乳杆菌 (Lactobacilluspanisapium)、潘斯乳杆菌(Lactobacillus pantheris)、副短乳杆菌 (Lactobacillusparabrevis)、副布氏乳杆菌(Lactobacillus parabuchneri)、副干酪乳杆 菌(Lactobacillus paracasei)、副胶原乳杆菌(Lactobacillus paracollinoides)、类谷糠乳 杆菌(Lactobacillus parafarraginis)、副食乳杆菌(Lactobacillus paragasseri)、副开菲 尔乳杆菌(Lactobacillus parakefiri)、副消化乳杆菌(Lactobacillusparalimentarius)、 副植物乳杆菌(Lactobacillus paraplantarum)、巴氏乳杆菌(Lactobacillus pasteurii)、 少食乳杆菌(Lactobacillus paucivorans)、嗜戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosiphilus)、 戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)、产气乳杆菌(Lactobacillus perolens)、平方乳杆 菌(Lactobacillus pingfangensis)、栖鱼乳杆菌(Lactobacillus piscicola)、扁形乳杆菌 (Lactobacillus plajomi)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、泼步乳杆菌 (Lactobacillus pobuzihii)、蓬蒂乳杆菌(Lactobacillus pontis)、猪乳杆菌(Lactobacillus porci)、猪科乳杆菌(Lactobacillusporcinae)、皮塔西乳杆菌(Lactobacillus psittaci)、 队列乳杆菌(Lactobacillusquenuiae)、拉乌尔乳杆菌(Lactobacillus raoultii)、整洁乳 杆菌(Lactobacillusrapi)、瑞尼尼乳杆菌(Lactobacillus rennini)、罗伊氏乳杆菌 (Lactobacillusreuteri)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、里禅乳杆菌 (Lactobacillusrimae)、啮齿动物乳杆菌(Lactobacillus rodentium)、罗氏乳杆菌 (Lactobacillusrogosae)、罗斯乳杆菌(Lactobacillus rossiae)、瘤乳杆菌(Lactobacillus ruminis)、塞纳斯乳杆菌(Lactobacillus saerimneri)、清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei)、 盐渍乳杆菌(Lactobacillus salitolerans)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、萨尔 乳杆菌(Lactobacillus salsicarnum)、旧金山乳杆菌(Lactobacillus sanfranciscensis)、三维瑞乳杆菌(Lactobacillus saniviri)、红条乳杆菌(Lactobacillus satsumensis)、嗜黑 麦乳杆菌(Lactobacillus secaliphilus)、雪兰莪乳杆菌(Lactobacillusselangorensis)、 什尼乳杆菌(Lactobacillus senioris)、森足克乳杆菌(Lactobacillussenmaizukei)、沙 氏乳杆菌(Lactobacillus sharpeae)、深圳乳杆菌(Lactobacillusshenzhenensis)、西瑟 乳杆菌(Lactobacillus sicerae)、青贮乳杆菌(Lactobacillussilagei)、西拉金科拉乳杆 菌(Lactobacillus silagincola)、白面粉乳杆菌(Lactobacillus siliginis)、斯密丽思乳杆 菌(Lactobacillus similis)、索布乳杆菌(Lactobacillus sobrius)、松北乳杆菌(Lactobacillus songbeiensis)、松花江乳杆菌(Lactobacillus songhuajiangensis)、香料乳杆菌 (Lactobacillus spicheri)、桑赛科拉乳杆菌(Lactobacillus suantsaicola)、苏丹赛伊乳 杆菌(Lactobacillussuantsaii)、栖苏丹赛伊乳杆菌(Lactobacillus suantsaiihabitans)、 烂乳杆菌(Lactobacillus sucicola)、斯瓦比乳杆菌(Lactobacillus suebicus)、绥滨乳杆 菌(Lactobacillus suibinensis)、新奇乳杆菌(Lactobacillus sunkii)、日光乳杆菌(Lactobacillus suntoryeus)、台湾乳杆菌(Lactobacillus taiwanensis)、唐源乳杆菌(Lactobacillus tangyuanensis)、特瑞乳杆菌(Lactobacillus terrae)、泰国乳杆菌(Lactobacillus thailandensis)、耐热乳杆菌(Lactobacillus thermotolerans)、木乳杆菌 (Lactobacillus timberlakei)、提蒙乳杆菌(Lactobacillus timonensis)、通江乳杆菌 (Lactobacillus tongjiangensis)、毛状乳杆菌(Lactobacillus trichodes)、图特提乳杆菌 (Lactobacillus tucceti)、乌里乳杆菌(Lactobacillus uli)、厄尔纳拉乳杆菌(Lactobacillus ultunensis)、葡萄乳杆菌(Lactobacillus uvarum)、牛粪乳杆菌(Lactobacillus vaccinostercus)、阴道乳杆菌(Lactobacillus vaginalis)、文德斯乳杆菌(Lactobacillus versmoldensis)、小泡乳杆菌(Lactobacillus vespulae)、维尼乳杆菌(Lactobacillus vini)、 偏绿乳杆菌(Lactobacillus viridescens)、小牛乳杆菌(Lactobacillus vitulinus)、沃森 斯乳杆菌(Lactobacillus wasatchensis)、武昌乳杆菌(Lactobacillus wuchangensis)、襄 樊乳杆菌(Lactobacillus xiangfangensis)、徐建国乳杆菌(Lactobacillus xujianguonis)、 木糖乳杆菌(Lactobacillus xylosus)、山梨乳杆菌(Lactobacillus yamanashiensis)、宜 春乳杆菌(Lactobacillus yichunensis)、宜兰乳杆菌(Lactobacillus yilanensis)、永银乳 杆菌(Lactobacillus yonginensis)、玉米乳杆菌(Lactobacillus zeae)、扎其里乳杆菌 (Lactobacillus zhachilii)、肇东乳杆菌(Lactobacillus zhaodongensis)、招远乳杆菌 (Lactobacillus zhaoyuanensis)、中巴乳杆菌(Lactobacillus zhongbaensis)、酶乳杆菌 (Lactobacillus zymae)、乳杆菌属物种(Lactobacillus sp)。
乳杆菌属的非限制性示例还包括乳杆菌属的任何提议的再分类：德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、副乳杆菌属(Paralactobacillus)、Holzapfelia、解淀粉乳 杆菌属(Amylolactobacillus)、炸弹乳杆菌属(Bombilactobacillus)、伴随乳杆菌属(Companilactobacillus)、拉匹乳杆菌属(Lapidilactobacillus)、艾格润乳杆菌属(Agrilactobacillus)、格林代里乳杆菌属(Schleiferilactobacillus)、洛伊戈乳杆菌属(Loigolactobacilus)、Lacticaseibacillus、Latilactobacillus、Dellaglioa、力克锐乳杆菌 属(Liquorilactobacillus)、力基乳杆菌属(Ligilactobacillus)、乳植物细菌(Lactiplantibacillus)、糠酸乳细菌(Furfurilactobacillus)、少食乳杆菌属(Paucilactobacillus)、里莫斯乳杆菌属(Limosilactobacillus)、果糖乳杆菌属(Fructilactobacillus)、乙酰乳杆菌属(Acetilactobacillus)、阿批乳杆菌属(Apilactobacillus)、乐维乳杆菌属(Levilactobacillus)、塞昆迪乳杆菌属(Secundilactobacillus)和扁豆乳杆菌属(Lentilactobacillus)，如以下中提出：“Ataxonomic note on the genus Lactobacillus:Description of 23novel genera,emended description of the genus Lactobacillus Beijerinck 1901,and union ofLactobacillaceae and Leuconostocaceae[乳杆菌属的分类注释：23个新属的描述，乳杆菌属Beijerinck 1901 的修订描述，以及乳杆菌科和明串珠菌科的联合]”-发表于国际系统与进化微生物学 杂志，第70卷，第4期。
用途
在该方法的优选实施例中，干燥的乳杆菌属细胞是铅结合产品。铅结合产品可从人体胃肠道(GI)中去除铅。铅结合产品可用作益生菌或治疗剂，以治疗或管理由于 人类铅暴露导致的负面健康结果。在进一步或替代性实施例中，铅结合产品用于降低 体内例如人体中的重金属水平。在又一个或替代性实施例中，铅结合产品用于消除体 内例如人体中的重金属。在另外的或替代性实施例中，铅结合产品有助于减少铅的吸 收。在另外的或替代性实施例中，铅结合产品用作营养食品或食品补充剂。在一个实 施例中，用作营养食品或食品补充剂的铅结合产品用于特定医学目的。在进一步的实 施例中，特定医学目的是体内铅摄取的饮食管理。
本发明进一步涉及药物、食品、功能性食品、营养食品、膳食食品、膳食补充剂、 医疗装置和/或治疗性组合物，其包含生理有效剂量的根据本发明的干燥的乳杆菌属 细胞和生理相容的载体。药物组合物是用于治疗目的和/或预防目的的组合物，除了 根据本发明的干燥的乳杆菌属细胞，其例如还包括药物组合物中常见的佐剂和/或赋 形剂。本发明含义内的膳食组合物是除了根据本发明的干燥的乳杆菌属细胞之外还包 含食物、食品和/或膳食补充剂的组合物。
本发明进一步涉及根据本发明的干燥的乳杆菌属细胞用于生产包含干燥的乳杆菌属细胞的药物或膳食组合物、或药物产品或膳食补充剂细胞或药物组合物或膳食组 合物，特别是用于管理与铅暴露相关的负面健康结果的用途或应用。
以下编号的段落描述了本披露的具体实施例：
1.一种用于产生干燥的乳杆菌属细胞的方法，该方法包括以下步骤：
a.在发酵培养基中发酵乳杆菌属细胞；
b.获得包含这些乳杆菌属细胞的发酵产物；
c.任选地浓缩该发酵产物；
d.将该发酵产物调节至pH 8至11的pH范围；
e.干燥经pH调节的发酵产物；
其中任选地在步骤c之前应用步骤d。
2.如段落1所述的方法，其中该干燥是冷冻干燥或喷雾干燥。
3.如前述段落中任一项所述的方法，其中该冷冻干燥在-60℃至+50℃的温度 范围内进行12小时至100小时的时间，优选在-45℃至+30℃的温度进行24小时至 96小时的时间，或-30℃至+20℃进行约66小时。
4.如前述段落中任一项所述的方法，其中这些乳杆菌属细胞是死的。
5.如前述段落中任一项所述的方法，其中这些乳杆菌属细胞是经热杀死的。
6.如前述段落中任一项所述的方法，其中这些乳杆菌属细胞是植物乳杆菌细胞。
7.如前述段落中任一项所述的方法，其中植物乳杆菌以DSM 33464保藏。
8.如前述段落中任一项所述的方法，其中这些乳杆菌属细胞在体外和/或体内 结合重金属阳离子。
9.如前述段落中任一项所述的方法，其中该重金属阳离子是铅(Pb2+)或镉 (Cd2 +)。
10.如前述段落中任一项所述的方法，其中这些干燥的乳杆菌属细胞是铅结合产品。
11.如前述段落中任一项所述的方法，其中这些干燥的乳杆菌属细胞从人体的胃肠道中去除铅。
12.如前述段落中任一项所述的方法，其中将该发酵产物调节至约pH 8至10、 约pH 8.5至10、约pH 9至10、约pH 9、约pH 9.5或约pH 10。
13.如前述段落中任一项所述的方法，其中将该发酵产物调节至约pH 9、约pH 9.5或约pH 10。
14.如前述段落中任一项所述的方法，其中这些重金属阳离子与干燥的乳杆菌属细胞的体外结合通过以下来检测：
a)将这些干燥的乳杆菌属细胞与含有重金属阳离子的培养基孵育，
b)将孵育的乳杆菌属细胞离心以分离这些乳杆菌属细胞和重金属阳离子，
c)收集上清液，以及
d)测量该上清液中的重金属阳离子浓度。
15.如前述段落中任一项所述的方法，其中通过测量血液和/或器官中这些重金属阳离子的减少来检测这些重金属阳离子与干燥的乳杆菌属细胞的体内结合。
16.如前述段落中任一项所述的方法，其中重金属阳离子与这些干燥的乳杆菌属细胞的结合比重金属阳离子与在pH小于8或大于11时制备的干燥的乳杆菌属细胞的 结合更高。
17.如前述段落中任一项所述的方法，其中这些干燥的乳杆菌属细胞与必需矿物质的结合使得该结合不会导致体内必需矿物质的缺乏。
18.如前述段落中任一项所述的方法，其中将这些乳杆菌属细胞在权利要求1的步骤c通过离心浓缩。
19.如前述段落中任一项所述的方法，其中该发酵产物或浓缩的发酵产物包含一种或多种添加剂。
20.如前述段落中任一项所述的方法，其中该一种或多种添加剂是冷冻保护剂和/或稳定剂。
21.如前述段落中任一项所述的方法，其中该冷冻保护剂是葡萄糖、乳糖、棉子糖、蔗糖、海藻糖、阿东醇、甘油、甘露醇、甲醇、聚乙二醇、丙二醇、核糖醇、藻 酸盐、牛血清白蛋白、肉碱、柠檬酸盐、半胱氨酸、葡聚糖、二甲基亚砜、谷氨酸钠、 甘氨酸甜菜碱、糖原、亚牛磺酸、蛋白胨、聚乙烯吡咯烷酮或牛磺酸、哺乳动物乳寡 糖、甲壳素、壳聚糖、酪蛋白、酵母、酵母提取物、单细胞蛋白、真菌蛋白、其他二 糖或多糖或其混合物。
22.如前述段落中任一项所述的方法，其中该冷冻保护剂是糊精。
23.从根据前述段落中任一项所述的方法获得的乳杆菌属细胞。
24.在根据段落1至22中任一项所述的方法中干燥的乳杆菌属细胞。
实例
下面的实例并非旨在成为可以实现本披露的所有不同方式的详细目录或者可以添加至本披露的所有特征的详细目录。本领域技术人员将会理解，可以在不脱离本披 露的情况下对各种实施例进行各种变化和添加。因此，以下描述旨在说明本发明的一 些特定实施例，而不是详尽地指定其全部置换、组合和变化。
除非另有说明，以下实例中列出的百分比是基于组合物总重量的重量百分比。
生物材料保藏
下述的生物材料已经依据布达佩斯条约的条款保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH,DSM),MascheroderWeg 1B,D-38124Braunschweig,Germany，并给予下述的登录号：
该菌株于下述条件下保藏：确保在本专利申请未决期间，通过该外国专利法律确定的授权的人能够获得该培养物。这些保藏物代表所保藏菌株的基本上纯的培养物。 需要按一些国家的国外专利法要求提供保藏物，在这些国家提交该主题申请的副本， 或其后续文本。然而应理解，保藏物的可用性不构成将本发明主题用于由政府行为批 准的专利权的实践的许可。
实例1-急性小鼠模型中血铅水平降低的研究
研究设计
该研究调查了口服植物乳杆菌DSM 33464减少口服PbAc2的胃肠道摄取，从而 在急性铅毒性激发期间降低小鼠血液中铅水平的能力。在这项研究中，C57BL/6雄性 小鼠(4-6周龄)接受了单次口服PbAc2剂量(100mg/kg体重/天)的激发，并用于 5-10只动物/研究的2项不同研究。使用的铅激发水平可以转化为通过受污染的食物 和水接触铅的人类可能摄入的铅水平。此外，该研究旨在通过分析小肠样品中四种紧 密连接蛋白的表达来证明对肠道屏障的影响。
在第-1天，用植物乳杆菌DSM 33464(1x109CFU/小鼠)或螯合剂二巯基丁二 酸(DMSA)(50mg/kg，溶解在保护剂溶液中)对小鼠进行预防性处理。疾病组和健 康对照组同时接受PBS剂量。然后在第0、1和2天，在100mg/kg的乙酸铅处理前 一小时，用PBS、植物乳杆菌DSM 33464或DMSA处理所有小鼠。健康对照接受盐 水而不是铅。
在第0天第一次铅强饲后收集小鼠的粪便样品并记录为0小时粪便样品，然后在12小时、24小时、36小时、48小时、52小时、56小时、60小时、66小时、72小 时进行收集。用乙醚麻醉小鼠，通过心脏穿刺收集血液。安乐死后，收集所有小鼠的 肝、肾、骨、小肠和脑组织。
每只小鼠分别采集血液0.2ml或0.2g肝、脑、肾、粪便，与5ml硝酸添加到溶 解槽中冷消化过夜。然后使用微波消化系统进行完全消化。然后将所得混合物用去离 子水稀释至10ml，并使用电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)测量铅含量。
肠道屏障在限制Pb吸收方面起着至关重要的作用，Pb暴露会破坏肠道中的紧密连接，导致肠道屏障破坏，进一步放大Pb的吸收和毒性。样品小肠中紧密连接蛋白 的qPCR分析。
结果
研究结果显示(图1)，植物乳杆菌DSM 33464显著降低了给予100ppm Pb的小 鼠中血液、骨、脑、肝、肾中的铅含量，并且这种效果与在用阳性药物对照(DMSA) 治疗的小鼠中观察到的效果相当。与对照组相比，使用植物乳杆菌DSM 33464或 DMSA的粪便中排泄铅量的趋势可能更高。
通过对样品小肠中的紧密连接蛋白进行qPCR分析，图2显示植物乳杆菌DSM 33464使紧密连接蛋白咬合蛋白、密封蛋白-1和ZO-2的表达水平正常化。SmartGuard 或DMSA没有提高ZO-1的表达水平。
总之，该研究证实植物乳杆菌DSM 33464可减少肠道对铅的吸收，从而降低血 液、脑、肝和肾中的铅含量，并改善小肠的屏障完整性。
实例2-衍生自不同发酵的冷冻干燥的乳杆菌属细胞的改进的Pb2+吸附
(下游)过程
样品：
准备了三种样品：
HH10F39D02：冷冻干燥前未调节pH(中性pH)
HH10F39D04：冷冻干燥过程前将pH调节至pH 9
HH10F39D05：冷冻干燥过程前将pH调节至pH 10
发酵：
菌株的储存，冷冻储存物
乳杆菌属菌株以冷冻状态作为冷冻储存物储存。将1ml在MRS培养基(55g/l， pH6.5；Difco，美国)中培养至稳定期(OD600/ml 4-8)的培养物与500μl的50％(v/v) 无菌甘油溶液混合，并且将混合物在-80℃冷冻。
预培养基
25g/L酵母提取物NuCel 582(Procelys)、2g/L柠檬酸氢二铵、5g/L乙酸钠、0,1 g/L硫酸镁七水合物、0,05g/L硫酸锰(II)一水合物、2g/L磷酸氢二钾、1/L tween 80、 20g/L葡萄糖。
主培养基
30g/L酵母提取物Nucel582、0,022g/L硫酸锰(II)一水合物、1g/L tween 80、40g/L 葡萄糖、40g/L果糖
预培养物1由接种了2％(v/v)菌株植物乳杆菌DSM 33464的冷冻储存物的预 培养基制备，并在37℃培养15-16小时。随后的预培养物2通过用2％的预培养物1 接种预培养基制备，并在37℃培养7.5-8小时。发酵罐与主培养基一起高压灭菌。高 压灭菌后，将葡萄糖和果糖溶液(60％)分别添加到主培养基中。将发酵罐冷却至5℃ 并接种3％(v/v)的预培养物2。对于主发酵，发酵罐被加热到37℃并运行12-16.5 小时。在收获之前，将发酵罐冷却至5℃30分钟。
发酵液中CFU/ml的确定
用1x PBS/NaCl-蛋白胨制备十倍稀释系列直到10-6。用螺旋铺板器将50μL的体 积铺板在MRS琼脂板上，每个稀释度一式两份(对数模式50μL、2、1/1)。孵育(24-48 小时，37℃，厌氧条件)后，通过菌落计数器确定菌落形成单位(CFU)。
发酵液的收获
离心每个样品的300mL体积(4.000x g，15分钟，4℃)并弃去上清液。在确定 细胞湿重(CWW)后，将沉淀重新悬浮在20％(w/w)Nutriose FM06(罗盖特公司 (Roquette))溶液中，该溶液以2:1的比例添加(基于干物质)。用25％NH3将每个 样品的pH值调节到各自的值。尚未调整的样品储存在5℃。
将经调整的样品转移到产物盘中并在-80℃冷冻24小时。将用于测量温度和干燥度的电极添加到一个样品中。
下游处理(DSP)和冷冻干燥
以下程序用于冷冻样品的冻干：
1.温热冷冻干燥机(贮存温度-40℃)
2.主干燥0,22mbar，-20℃，24小时
3.主干燥0,22mbar，1小时升温至0℃
4.主干燥0,22mbar，0℃34小时
5.最终干燥0.02mbar，1小时升温至20℃
6.最终干燥0,02mbar，20℃6小时
66小时后，将粉末均质化并储存在真空包装的铝袋中，用于流式细胞术分析和Pb2+结合测定。此外，还测量了每个样品的水分活度(aW)。
1.粉末中CFU的确定
为了确定冷冻干燥的粉末的CFU，将2x100mg冷冻干燥的粉末溶解在9.9mL PBS1x/NaCl-蛋白胨中，并在室温下孵育15分钟。将溶解的粉末进一步稀释至10-5 (总共等于10-7)并通过螺旋铺板器在MRS-琼脂上铺板。在厌氧条件下于37℃孵育 24-48小时后，通过菌落计数器确定CFU/g。
铅结合测定
试剂
-乙酸铅(II)三水合物，Pb(CH3CO2)2·3H2O，西格玛奥德里奇公司 (Sigma-Aldrich)#316512
-Supelco试剂盒1.09717.0001
-乙酸钠三水合物，西格玛奥德里奇公司#S8625
-超纯水
样品制备
-将100mg冷冻干燥的粉末重新悬浮在50mL Falcon管中的20mL超纯水中
-将管涡旋至少10秒
-涡旋后，将管以4000x g离心10分钟
-在不干扰沉淀的情况下去除上清液
-通过涡旋至少10秒，将沉淀物重新悬浮在20mL的50mM乙酸盐缓冲液中 (pH 5.6)以提供细胞制剂
孵育测定
-将细胞/Pb2+-乙酸盐混合物[150μL细胞悬浮液、750μL超纯水和100μL Pb2+-乙酸盐溶液(1450μM)]转移到24孔板
-板用粘性密封箔覆盖
-将细胞/Pb2+-乙酸盐混合物在37℃孵育1小时，同时在培养箱中以150rpm 的速度摇动
-将孵育的混合物以4500x g离心10分钟
-用移液器收集上清液
-将收集的上清液50μL转移至96孔圆底板，并且用超纯水1:6稀释
使用Supelco试剂盒1.09717.0001进行比色测定
-将10μL试剂Pb-1转移到平底板中
-此后，将10μL试剂Pb-2添加到平底板中并用移液器混合
-添加160μL样品并用移液器混合
-包括具有160μL纯水的空白
-包括乙酸铅的稀释系列0-1450μM用于计算校准曲线
-OD在525nm处测量
结果如图3所示，并且显示了来自不同发酵-(下游)过程的冻干乳杆菌属细胞 的Pb2+吸附。结果表明，乳杆菌属细胞吸附Pb2+，其中与未经任何pH调节(具有中 性pH)冷冻干燥的乳杆菌属细胞相比，在冷冻干燥过程前将pH值调节至pH 9或pH 10的乳杆菌属细胞具有更高水平的Pb2+吸附。
2.通过流式细胞术对乳杆菌属细胞的计数
初始化流式细胞仪
1.1制备0.5％次氯酸钠溶液(10％漂白剂)
·将1mL 12％-15％次氯酸钠溶液(储存在4℃冰箱中；黑壁50ml greiner管) 添加到50ml greiner管中的19ml dH2O中
·在分析的每一天，新鲜制备该溶液
1.2启动
·打开PC
·开启1。自动进样器，2。Attune NxT
·启动Attune NxT软件
·按快捷键：“性能测试(Performance Test)”
·按：启动(Startup)(启动需要大约2分钟)
1.3性能测试
·将3滴性能跟踪珠滴入流式细胞仪管中，添加2ml聚焦流体并且涡旋1秒
·将管放入样品管升降器中并升起
·按下“运行性能测试(Run Performance test)”(大约4分钟)
·性能测试通过后，性能测试报告上只出现绿色勾号；
·选择“主菜单(Main Menu)”
2.1实验设置
·在“主菜单(Main Menu)”中，按下快捷键“从模板新建实验(New Experimentfrom Template)”
·选择“计数微生物SYTO13+PI(Enumeration Microbes SYTO13+PI)”，然后 选择“下一步(Next)”和“完成(Finish)”
·在创建的板实验中，选择“实验资源管理器(Experiment Explorer)”
·重命名实验和板；日期和ELN-No用于命名实验
·选择“热图(Heat Map)”选项卡来定义板布局；定义孔位置，然后选择“新 样品(New Sample)”并将定义的孔添加到组中(每组代表样品稀释度(例如1E-2)
·“样品列表(Sample List)”选项卡用于命名样品
3.1开始流式细胞术分析
·检查聚焦流体和废液容器是否重新装满或清空
·完成染色程序后将板装入自动进样器，不加盖
·在“收集面板(Collection Panel)”窗口中选择“记录板(Record plate)”
4.1关闭Attune NxT
·分析完成后，通过将空的、干净的96孔圆底MTP装入自动进样器来关闭设 备
·使用1:3稀释的细胞流清洗液(在超纯水中稀释)进行原位消毒(Sanatize sip)
·将3ml 0.5％次氯酸钠溶液加入流式细胞仪管中
·将管放入样品管升降器中并升起
·在“仪器(Instrument)”选项卡中选择“关闭(Shutdown)”，然后选择“彻 底(Thorough)”
样品制备和染色程序
1.1样品制备(发酵样品)
·使用无菌过滤PBS(不含Ca和Mg)将96深孔板中的样品(900μl PBS+100 μl先前稀释)十倍稀释至1E-5
·根据布局将200μl/孔的细胞悬浮液转移至96孔圆底板
·分析稀释1E-2-1E-5
·此稀释范围适用于高达OD600＝30的发酵样品
1.2样品制备(稳定性样品)
·使用无菌过滤PBS(不含Ca和Mg)将96深孔板中的样品(900μl PBS+100 μl先前稀释)十倍稀释至1E-7或使用制备的稀释液(蛋白胨-NaCl溶液)用于CFU 计数
·根据布局将200μl/孔的细胞悬浮液转移至96孔圆底板
·分析稀释1E-4-1E-7的估计总细胞计数高达5E+11个细胞/mL
2.染色程序
·根据下表在1.5mL Eppendorf管中并通过涡旋制备SYTO13和PI工作溶液 的预混物
·添加10μl/孔PI工作溶液(不重新悬浮，仅将内容物注入孔中；每个孔都使 用新的移液器)
·每孔用绿色多道移液器(100μl)混合3次
·将管在黑暗中盖上盖子在室温孵育15分钟
·在45分钟内对管进行分析
使用流式细胞术确定衍生自不同发酵-(下游)过程的冷冻干燥的乳杆菌属细胞的细胞活力，并且显示在图4中。实验表明，与未经任何pH调节(具有中性pH)冷 冻干燥的乳杆菌属细胞相比，在冷冻干燥过程之前将pH调节至pH 9或pH 10的乳杆 菌属细胞具有提高的细胞活力。
实例3-乳杆菌属细胞吸附Pb2+的高分辨率显微镜检查
样品：
HH10F39D02：冷冻干燥前未调节pH的冷冻干燥细胞(中性pH)
HH10F39D04：冷冻干燥前将pH调节至pH 9的冷冻干燥细胞
乳杆菌属细胞对Pb2+的吸附使用高分辨率显微镜检查显示(图5)。当使用高分 辨率显微镜检查分析实例1中定义的样品(HH10F39D02和HH10F39D04)时，与未 经任何pH调节(具有中性pH)冷冻干燥的乳杆菌属细胞相比，在冷冻干燥过程前将 pH调节至9的乳杆菌属细胞具有提高的Pb2+吸附水平。
Claims (15)
1.一种用于产生干燥的乳杆菌属细胞的方法，该方法包括以下步骤：
a.在发酵培养基中发酵乳杆菌属细胞；
b.获得包含这些乳杆菌属细胞的发酵产物；
c.任选地浓缩该发酵产物；
d.将该发酵产物调节至pH 8至11的pH范围；
e.干燥经pH调节的发酵产物；
其中任选地在步骤c之前应用步骤d。
2.根据权利要求1所述的方法，其中该干燥是冷冻干燥或喷雾干燥。
3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该冷冻干燥在-60℃至-100℃的温度范围内进行20小时至30小时的时间，优选在-80℃的温度进行24小时。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该乳杆菌属细胞是植物乳杆菌细胞。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中植物乳杆菌以DSM 33464保藏。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中这些乳杆菌属细胞在体外和/或在体内与重金属阳离子结合。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该重金属阳离子是铅(Pb2+)或镉(Cd2+)。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将该发酵产物调节至约pH 8至10、约pH 8.5至10、约pH 9至10、约pH 9、约pH 9.5或约pH 10。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中这些重金属阳离子与干燥的乳杆菌属细胞的体外结合通过以下来检测：
a)将这些干燥的乳杆菌属细胞与含有重金属阳离子的培养基孵育，
b)将孵育的乳杆菌属细胞离心以分离这些乳杆菌属细胞和重金属阳离子，
c)收集上清液，以及
d)测量该上清液中的重金属阳离子浓度。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过测量血液和/或器官中这些重金属阳离子的减少来检测这些重金属阳离子与干燥的乳杆菌属细胞的体内结合。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中重金属阳离子与这些干燥的乳杆菌属细胞的结合比重金属阳离子与在pH小于8或大于11时制备的干燥的乳杆菌属细胞的结合更高。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将这些乳杆菌属细胞在权利要求1的步骤c通过离心浓缩。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该发酵产物或浓缩的发酵产物含有一种或多种添加剂，例如冷冻保护剂和/或稳定剂。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该冷冻保护剂是葡萄糖、乳糖、棉子糖、蔗糖、海藻糖、阿东醇、甘油、甘露醇、甲醇、聚乙二醇、丙二醇、核糖醇、藻酸盐、牛血清白蛋白、肉碱、柠檬酸盐、半胱氨酸、糊精、二甲基亚砜、谷氨酸钠、甘氨酸甜菜碱、糖原、亚牛磺酸、蛋白胨、聚乙烯吡咯烷酮或牛磺酸、哺乳动物乳寡糖、甲壳素、壳聚糖、酪蛋白、酵母、酵母提取物、单细胞蛋白、真菌蛋白、其他二糖或多糖或其混合物，优选糊精。
15.一种在根据前述权利要求中任一项所述的方法中干燥的乳杆菌属细胞。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/IB2021/062249 WO2022038588A2 (en) | 2021-12-23 | 2021-12-23 | Process for producing dried lactobacillus cells |
| IBPCT/IB2021/062249 | 2021-12-23 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114774317A true CN114774317A (zh) | 2022-07-22 |
Family
ID=79731089
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210403643.5A Pending CN114774317A (zh) | 2021-12-23 | 2022-04-18 | 产生干燥的乳杆菌属细胞的方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114774317A (zh) |
| CA (1) | CA3236587A1 (zh) |
| WO (2) | WO2022038588A2 (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114533768B (zh) * | 2022-01-20 | 2023-07-07 | 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 | 乳酸杆菌益生菌CGMCC No.1.13855在制备糖尿病治疗药物中的应用 |
| CN115737689B (zh) * | 2022-11-01 | 2023-05-05 | 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 | 乳酸杆菌在制备预防和治疗炎症性肠病的药物中的应用 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3135329A1 (de) | 1981-09-05 | 1983-03-24 | Basf Ag, 6700 Ludwigshafen | Verfahren zur herstellung von trockenpulvern oxidationsempfindlicher substanzen |
| ATE64527T1 (de) | 1987-04-06 | 1991-07-15 | Hoffmann La Roche | Verfahren zur herstellung von vitaminpraeparaten. |
| CN102827796B (zh) | 2012-09-03 | 2013-10-30 | 江南大学 | 一种具有排镉功能的植物乳杆菌及其用途 |
| CN105831771B (zh) * | 2016-03-23 | 2019-04-23 | 江南大学 | 一种具有缓解铅毒性功能的益生菌和微量元素的膳食补充剂 |
| CN107058166B (zh) * | 2017-01-13 | 2020-07-31 | 东南大学 | 一株产胞外多糖的植物乳杆菌 |
| JP7178203B2 (ja) | 2018-08-07 | 2022-11-25 | 株式会社ヤクルト本社 | 乳酸菌凍結乾燥菌体の製造方法 |
-
2021
- 2021-12-23 WO PCT/IB2021/062249 patent/WO2022038588A2/en unknown
-
2022
- 2022-04-18 CN CN202210403643.5A patent/CN114774317A/zh active Pending
- 2022-12-20 CA CA3236587A patent/CA3236587A1/en active Pending
- 2022-12-20 WO PCT/EP2022/086859 patent/WO2023118052A1/en active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2022038588A2 (en) | 2022-02-24 |
| WO2022038588A3 (en) | 2022-09-29 |
| CA3236587A1 (en) | 2023-06-29 |
| WO2023118052A1 (en) | 2023-06-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20200069749A1 (en) | Lactobacillus-based ecoli inhibition | |
| Yadav et al. | Oral administration of dahi containing probiotic Lactobacillus acidophilus and Lactobacillus casei delayed the progression of streptozotocin-induced diabetes in rats | |
| CN103648511B (zh) | 喷雾干燥的乳杆菌属菌株/细胞及其对抗幽门螺杆菌的用途 | |
| JP5409623B2 (ja) | 亜鉛強化バイオマス、その調製方法、および、それを含むプロバイオティック品、化粧品、ダイエタリー品および栄養補給品 | |
| CN103655637B (zh) | 胚芽乳酸杆菌cmu995菌株的制药用途 | |
| CN114774317A (zh) | 产生干燥的乳杆菌属细胞的方法 | |
| RU2629806C2 (ru) | Бактериальные штаммы, принадлежащие к роду BIFIDOBACTERIUM, для применения в лечении гиперхолестеринемии | |
| KR20040018319A (ko) | 락토바실러스 카제이 균주 κε01에서 유래된 정장제 화합물 | |
| CN101027387A (zh) | 代谢活性微生物及其生产方法 | |
| EP2852393B1 (fr) | Compositions à base de probiotiques et d'un complexe beepollen/argile, leur préparation et leurs utilisations en nutrition et thérapeutique | |
| CN115141775B (zh) | 一种提升益生菌的自身功效及富硒能力的培养方法及其应用 | |
| EP3808357A1 (en) | Composition and uses thereof | |
| CN108913638A (zh) | 一种嗜酸乳杆菌复合剂及其制备方法和应用 | |
| HOSONO | Hypocholesterolemic effect of Lactobacillus gasseri SBT0270 in rats fed a cholesterol-enriched diet | |
| WO2021079869A1 (ja) | 尿毒素軽減剤 | |
| CN112708581A (zh) | 一种青春双歧杆菌dh162及其发酵产物、应用和微生态制剂 | |
| WO2015140299A1 (en) | Oronasopharyngeal probiotics | |
| EP2532354A1 (de) | Sprühgetrocknete Lactobacillus Stämme / Zellen und deren Verwendung gegen Helicobacter Pylori | |
| CN114921383A (zh) | 一种具有清除胆固醇功能的益生菌制剂及其制备方法 | |
| KR20220109667A (ko) | 파골 세포(Osteoclast) 분화 억제 효과를 갖는 락토바실러스 플란타럼 및 이의 용도 | |
| JP2020150793A (ja) | 腸内有用菌の増殖及び有機酸産生増強剤 | |
| CN117802011B (zh) | 一种促进铁吸收的复合益生菌及其应用 | |
| CN117701445A (zh) | 一种具有重金属吸附及产短链脂肪酸作用的动物双歧杆菌乳亚种yys-j9及其应用 | |
| Starovoitova et al. | Probiotic strains with hypocholesterolemic activity as potential basis of functional food products for prevention and concomitant treatment of pathological conditions associated with high cholesterol levels | |
| CN117305171A (zh) | 一株短双歧杆菌及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |