CN108913638A - 一种嗜酸乳杆菌复合剂及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及微生物复合制剂领域，提供一种嗜酸乳杆菌复合剂，制备原料包括嗜酸乳杆菌85～90份和蛋白酶解多肽1.2～8.1份；嗜酸乳杆菌复合剂中所含活菌数在1010cfu/g以上；所述蛋白酶解多肽中多肽的质量含量在75％以上、所述蛋白酶解多肽中相对分子量1000Da以下的多肽的质量占比不低于80％，所述蛋白酶解多肽中天冬氨酸的质量百分数在1％以上，谷氨酸质量分数在5％以上。本发明研究表明，嗜酸乳杆菌和蛋白酶解多肽复配后，能够显著提高嗜酸乳杆菌的发挥调节肠道菌群、增强免疫力或降血脂作用。在制备过程中，蛋白酶解多肽还能够起到促进嗜酸乳杆菌增殖以缩短发酵时间的作用以及冻干保护作用。

Description

一种嗜酸乳杆菌复合剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及微生物复合制剂领域，具体涉及一种嗜酸乳杆菌复合剂及其制备方法和应用。
背景技术
嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属，革兰氏阳性杆菌，杆的末端呈圆形，主要存在小肠中，释放乳酸，乙酸和一些对有害菌起作用的抗菌素，但是益菌作用发挥较慢。嗜酸乳杆菌在胃中存活率一般能达到80％，但是若不经包埋处理，口服嗜酸乳杆菌后，它们的活力仍是会受到影响的；而如果将它们全部包埋，又无法发挥其在胃中的有益作用。
嗜酸乳杆菌是机体肠道内的重要益生菌之一，与宿主健康息息相关，具有诸多功效，如调节肠道菌群，抑制病原菌，增强免疫力，降低血脂等。研究证实，益生菌的生理活性与活菌数量有着密切关系。然而嗜酸乳杆菌只有在活菌数足够高的条件下才能有效发挥以上所述益生作用，如何得到生产成本低、活菌数高、品质稳定且保存期长的嗜酸乳杆菌菌粉成为一大难题。
发明内容
本发明为了解决现有技术中嗜酸乳杆菌制剂活菌数不够高、稳定性不足以及增强免疫等益生效果不显著的问题，提供了一种嗜酸乳杆菌复合剂，其中的嗜酸乳杆菌与蛋白酶解多肽存在协同作用，能够显著提高嗜酸乳杆菌的益生效果。
为了解决上述问题，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种嗜酸乳杆菌复合剂，制备原料包括以下重量份的组分：嗜酸乳杆菌85～90份和蛋白酶解多肽1.2～8.1份；所述蛋白酶解多肽的重量以干重计；
所述嗜酸乳杆菌复合剂中所含活菌数在1010cfu/g以上；
所述蛋白酶解多肽中多肽的质量含量在75％以上、所述蛋白酶解多肽中相对分子量1000Da以下的多肽的质量占比不低于80％，所述蛋白酶解多肽中天冬氨酸的质量百分数在1％以上，谷氨酸质量分数在5％以上。
优选的，所述蛋白酶解多肽选自蛋白酶解液或蛋白酶解多肽干粉。
优选的，所述蛋白酶解多肽选自碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶中一种或多种酶解蛋白的产物。
优选的，所述用于制备蛋白酶解多肽的蛋白选自豌豆、鸡蛋清、小麦谷朊、大豆和核桃粕中的一种或多种。
本发明还提供了一种上述技术方案所述嗜酸乳杆菌复合剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将嗜酸乳杆菌接种至种子培养基中活化，得到一级种子液；
(2)将所述一级种子液接种至种子培养基中厌氧培养12～24h，得到二级种子液；
(3)将所述二级种子液接入含有蛋白酶解多肽的发酵培养基中进行高密度发酵，离心取沉淀，得到菌泥；
(4)将所述菌泥与冻干保护剂混合后进行乳化包埋，得到乳化液；
按质量百分比计，所述冻干保护剂包括8～15％脱脂乳粉、2～8％海藻酸钠、1.5～6％蛋白酶解多肽、1～6％甘油、0.1～0.6％明胶以及余量的水；
(5)将得到的乳化液冷冻干燥，粉碎，得到嗜酸乳杆菌复合剂。
优选的，所述步骤(1)和(2)中，所述种子培养基独立包括以下质量百分含量的组分：1～3％葡萄糖、1～3％蛋白胨、0.5～3％酵母浸膏、0.5～3％牛肉浸膏、0.2～1％无水乙酸钠、0.02～0.08％硫酸镁、0.02～0.08％硫酸锰、0.05～0.1％吐温80和余量的水，pH值独立为6.2～6.8。
优选的，步骤(3)所述含有蛋白酶解多肽的发酵培养基，按质量百分数计，包括1.5～6％蛋白酶解多肽、1～3％葡萄糖、1～3％蛋白胨、0.5～3％酵母浸膏、0.5～3％牛肉浸膏、0.2～1％无水乙酸钠、0.02～0.08％硫酸镁、0.02～0.08％硫酸锰、0.05～0.1％吐温80和余量的水，pH值为6.2～7.0。
优选的，步骤(4)中，所述菌泥与冻干保护剂中的蛋白酶解多肽的质量比为1:0.01～0.10；所述乳化包埋时间为20～70min。
本发明还提供了一种食品、药品、保健品或发酵剂，包括前述技术方案所述嗜酸乳杆菌复合剂和辅料。
优选的，所述食品、药品或保健品的形式包括片剂、粉剂、胶囊剂、颗粒剂、包衣剂、饮料、糕点、饼干、糖果、巧克力或果冻。
与现有技术相比，本发明提供的技术方案具有以下优点：
本发明提供了一种嗜酸乳杆菌复合剂，制备原料包括以下重量份的组分：嗜酸乳杆菌85～90份和蛋白酶解多肽1.2～8.1份；所述蛋白酶解多肽的重量以干重计；所述嗜酸乳杆菌复合剂中所含活菌数在1010cfu/g以上；所述蛋白酶解多肽中多肽的质量含量在75％以上、所述蛋白酶解多肽中相对分子量1000Da以下的多肽的质量占比不低于80％，所述蛋白酶解多肽中天冬氨酸的质量百分数在1％以上，谷氨酸质量分数在5％以上。本发明研究表明，嗜酸乳杆菌和蛋白酶解多肽复配后，能够显著提高嗜酸乳杆菌在提高调节肠道菌群、增强免疫力或降血脂方面存在协同增效作用。
本发明研究表明，当蛋白酶解多肽中的多肽的质量含量在75％以上、所述蛋白酶解多肽中相对分子量1000Da以下的多肽的质量占比不低于80％，并且蛋白酶解多肽中天冬氨酸的质量百分数在1％以上，谷氨酸质量分数在5％以上时，才具有与嗜酸乳杆菌复配增效的作用，蛋白酶解多肽中不含有天冬氨酸、谷氨酸或者多肽含量不足、分布不足的不具备这一作用。
本发明还提供了一种嗜酸乳杆菌复合剂的制备方法，嗜酸乳杆菌经过两级种子培养基培养后得到二级培养液，将二级培养液接入含有蛋白酶解多肽的发酵培养基中进行高密度发酵培养，将高密度发酵培养得到的发酵液离心取沉淀得到菌泥，将菌泥与含有蛋白酶解多肽的冻干保护剂混合后乳化包埋、冷冻干燥，粉碎，即得嗜酸乳杆菌复合剂。本发明通过离心的方式去除了发酵培养液，离心沉淀得到的菌泥主要含有嗜酸乳杆菌。
在本发明中，发酵培养基中的蛋白酶解多肽起到刺激嗜酸乳杆菌生长，进而缩短发酵时间；冻干保护剂中的蛋白酶解多肽还能够对嗜酸乳杆菌起到保护作用，提高冷冻干燥后得到的活菌数、提高嗜酸乳杆菌复合剂的稳定性。即，本发明采用乳化包埋以及冷冻干燥的方式能够有效提高嗜酸乳杆菌复合剂的活菌数、提高保存时间。
本发明还提供了一种包括前述技术方案所述嗜酸乳杆菌复合剂的食品、药品、保健品或发酵剂，所述的食品、药品或保健品具有调节肠道菌群、增强免疫力或降血脂的作用；所述发酵剂可以有效缩短发酵时间。试验表明，与单独施用嗜酸乳杆菌或蛋白酶解多肽相比，本发明所述的嗜酸乳杆菌复合剂在发挥调节肠道菌群、增强免疫力或降血脂等活性方面存在协同增效作用。
附图说明
图1为实施例7中嗜酸乳杆菌在不同培养基中的生长情况；
图2为实施例8中嗜酸乳杆菌在不同培养基中的生长情况。
具体实施方式
本发明提供了一种嗜酸乳杆菌复合剂，制备原料包括以下重量份的组分：嗜酸乳杆菌85～90份和蛋白酶解多肽1.2～8.1份；所述蛋白酶解多肽的重量以干重计；
所述嗜酸乳杆菌复合剂中所含活菌数在1010cfu/g以上；
所述蛋白酶解多肽中多肽的质量含量在75％以上、所述蛋白酶解多肽中相对分子量1000Da以下的多肽的质量占比不低于80％，所述蛋白酶解多肽中天冬氨酸的质量百分数在1％以上，谷氨酸质量分数在5％以上。
本发明对所述嗜酸乳杆菌的来源无特殊限定，采用本领域已知的嗜酸乳杆菌即可，比如市售或自行分离均可。
在本发明中，所述蛋白酶解多肽中所含的天冬氨酸的质量百分数在1％以上、谷氨酸质量分数在5％，则蛋白酶解多肽才具有与嗜酸乳杆菌复配协同增效的作用。同时还需要满足多肽含量以及相对分子量分布的条件，具体的，本发明所述蛋白酶解多肽中的多肽含量在75～95％，更优选为80～90％；本发明所述蛋白酶解多肽在相对分子量1000Da以下的分布比例不低于80％，更优选为85～99％。
本发明所述的蛋白酶解多肽具有抗氧化、降低三高、抑制有害菌生长的作用，本发明所述蛋白酶解多肽与嗜酸乳杆菌复配后能够提高嗜酸乳杆菌的益生活性，在调节肠道菌群、降低血脂以及提高免疫力等方面具有显著的协同增效作用。
在本发明中，所述蛋白酶解多肽优选的选自碱性蛋白酶、中性蛋白酶或胰蛋白酶中一种或多种酶解的产物。本发明对于所述蛋白酶解的具体条件无特殊限定，只要能够获得符合本发明所述条件的蛋白酶解多肽即可。
在本发明中，所述蛋白酶解多肽的酶解原料优选的选自豌豆、鸡蛋清、小麦谷朊、大豆和核桃粕中的一种或多种；进一步优选的，本发明所述蛋白酶解多肽选自碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶中的一种或多种酶，蛋白酶解多肽是指以上述任意一种或多种蛋白酶酶解豌豆、鸡蛋清、小麦谷朊、大豆和核桃粕中一种或多种后得到的酶解产物，具体的可以为符合所述蛋白酶解多肽条件的豌豆肽、蛋清肽、小麦肽、大豆肽以及核桃肽等。
本发明所述蛋白酶解多肽的重量以其干重计算，所述干重是指含水量在10％以下时的质量。本发明优选的，所述蛋白酶解多肽选自蛋白酶解液或蛋白酶解多肽干粉。所述蛋白酶解多肽干粉可以由蛋白酶解液干燥得到，本发明对具体干燥方法无特殊限定。
在本发明中，所述嗜酸乳杆菌与蛋白酶解多肽的质量比优选为85～90:2～6，更优选为85～90:3～5。在本发明中，所述嗜酸乳杆菌与蛋白酶解多肽复配时，嗜酸乳杆菌的质量是指其菌体质量，所述嗜酸乳杆菌中活菌数至少为1010cfu/g。
在本发明中，所述嗜酸乳杆菌复合剂的有效活菌数更优选为2×1011cfu/g以上，更进一步优选为3×1011cfu/g～5×1011cfu/g。
本发明提供的嗜酸乳杆菌复合剂中的有效活菌数高，嗜酸乳杆菌的益生活性强，具有显著的调节肠道菌群结构、降血脂以及提高免疫力的作用。本发明提供的嗜酸乳杆菌复合剂可以在-18℃的条件下保存24个月，有效活菌数不会发生显著改变，稳定性好，保质期更长。
本发明还提供了一种上述技术方案所述嗜酸乳杆菌复合剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将嗜酸乳杆菌接种至种子培养基中活化，得到一级种子液；
(2)将所述一级种子液接种至种子培养基中厌氧培养12～24h，得到二级种子液；
(3)将所述二级种子液接入含有蛋白酶解多肽的发酵培养基中进行高密度发酵，离心取沉淀，得到菌泥；
(4)将所述菌泥与冻干保护剂混合后进行乳化包埋，得到乳化液；
按质量百分比计，所述冻干保护剂包括8～15％脱脂乳粉、2～8％海藻酸钠、1.5～6％蛋白酶解多肽、1～6％甘油、0.1～0.6％明胶以及余量的水；
(5)将得到的乳化液冷冻干燥，粉碎，得到嗜酸乳杆菌复合剂。
本发明将嗜酸乳杆菌菌种接种于种子培养基中活化，得到一级种子液；本发明对所述嗜酸乳杆菌菌种的接种量无特殊限定，蘸取菌种接种至种子培养基即可。本发明制备一级种子液的目的主要是为了活化菌种。
本发明所述的种子培养基作用为培养、活化菌种，促进嗜酸乳杆菌增殖，本发明对于所述种子培养基的组成没有特殊限定，优选的可以选择如下种子培养基：
按照质量分数计，本发明所述种子培养基优选的包括1～3％葡萄糖、1～3％蛋白胨、0.5～3％酵母浸膏、0.5～3％牛肉浸膏、0.2～1％无水乙酸钠、0.02～0.08％硫酸镁、0.02～0.08％硫酸锰、0.05～0.1％吐温80和余量的水，pH值6.2～6.8；优选的包括：1.5～2.5％葡萄糖、1.5～2.5％蛋白胨、1～2％酵母浸膏、0.4～0.6％无水乙酸钠、0.04～0.06％硫酸镁、0.04～0.06％硫酸锰、0.06～0.08％吐温80和余量的水。
在本发明中，所述活化时间优选为14～20h，更优选为16h；所述活化温度优选为30～40℃，更优选为37℃。在本发明中，所述活化时为厌氧条件。
得到一级种子液后，本发明将一级种子液接种至种子培养基中在厌氧条件下活化12～24h，得到二级种子液。本发明采用的种子培养基与制备一级种子液时的相同，在此不再赘述。
在本发明中，所述一级种子液接种至种子培养基的接种量优选为2～8％(体积百分数)，更优选为4～6％(体积百分数)。在本发明中，所述厌氧培养温度优选为28～40℃，更优选为32～37℃。在本发明中，所述厌氧培养时间优选为14～20h，更优选为15～18h。本发明将二级种子液进行厌氧发酵是为了进一步扩大嗜酸乳杆菌的活菌数，为下一步高密度发酵做好准备。
得到二级种子液后，本发明将二级种子液接入含有蛋白酶解多肽的发酵培养基中进行高密度发酵，所得发酵液离心取沉淀，得到菌泥。本发明采用高密度发酵方式能够显著提高菌体密度，同时降低生产设备的成本，满足提高比生产率、降低生产成本、加快产品商品化进程的竞争需求。
在本发明所述的发酵培养基中添加蛋白酶解多肽，能够显著促进嗜酸乳杆菌的增殖，试验表明，添加了蛋白酶解多肽的发酵液在相同培养时间内嗜酸乳杆菌活菌数为不添加蛋白酶解多肽的发酵液中嗜酸乳杆菌活菌数的5～50倍。即，本发明所述蛋白酶解多肽在发酵培养基中起到促进嗜酸乳杆菌增殖、缩短发酵培养时间的作用。
按照质量分数计，本发明所述发酵培养基优选的包括1.5～6％蛋白酶解多肽、1～3％葡萄糖、1～3％蛋白胨、0.5～3％酵母浸膏、0.5～3％牛肉浸膏、0.2～1％无水乙酸钠、0.02～0.08％硫酸镁、0.02～0.08％硫酸锰、0.05～0.1％吐温80和余量的水，pH值为6.2～7.0；优选的包括2～4.5％蛋白酶解多肽、1.5～2.5％葡萄糖、1.5～2.5％蛋白胨、1～2％酵母浸膏、0.4～0.6％无水乙酸钠、0.04～0.06％硫酸镁、0.04～0.06％硫酸锰、0.06～0.08％吐温80和余量的水。本发明提供的发酵培养基可适宜大规模工业化生产，满足高密度发酵时的微生物营养需求。
在本发明中，当发酵培养基中加入蛋白酶解多肽后，相对分子质量小的蛋白酶解多肽具有较高的溶解性和易消化吸收性能，这是蛋白酶解多肽发挥活性的前提条件，也是其优于普通蛋白质以及氨基酸的特性之一。蛋白酶解多肽在发酵培养基中能够为嗜酸乳杆菌提供生长所必须的氨基酸，还能够作为氮源为微生物提供能源；蛋白酶解多肽可被嗜酸乳杆菌直接利用，无需经过胞外蛋白酶酶解，能够直接有效地加快其生长进程；而且蛋白酶解多肽还能够提高益生菌的酸性环境下的耐受力，也能够促进嗜酸乳杆菌的增殖，提高其活菌数。
在本发明中，所述高密度发酵至发酵液中的活菌数达到109cfu/mL以上时，即可停止发酵。本发明所述高密度发酵的发酵时间仅需5～10h，相对于一般的嗜酸乳杆菌发酵时间有明显缩短。
本发明中所述发酵培养基中加入蛋白酶解多肽，能够有效加快嗜酸乳杆菌的生长周期，提高嗜酸乳杆菌的活菌数，节省达到目标活菌数的时间，从而节约发酵成本。
在本发明中，所述二级种子液接入发酵培养基的接种量优选为1～5％(体积百分比)，更优选为2～3％(体积百分比)。
在本发明中，所述高密度发酵的发酵温度优选为30～40℃，更优选为37℃。在本发明中，所述高密度发酵时优选的伴随搅拌，所述搅拌速率优选为80～200r/min，更优选为100～120r/min。
在本发明中，对高密度发酵得到的发酵液进行离心是为了获得较为纯净的菌体。在本发明中，所述离心转速优选为6000～10000r/min，更优选为8000r/min。在本发明中，所述离心时间优选为10～30min，更优选为15min。
得到菌泥后，本发明将菌泥与冻干保护剂混合后进行乳化包埋，得到乳化液。本发明将菌泥进行乳化包埋的目的在于保护嗜酸乳杆菌的活性，降低后续的冷冻干燥步骤对嗜酸乳杆菌活菌数和活性的影响。
按质量百分比计，本发明所述冻干保护剂包括包括8～15％脱脂乳粉、2～8％海藻酸钠、1.5～6％蛋白酶解多肽、1～6％甘油、0.1～0.6％明胶以及余量的水；更优选的包括10～12％脱脂乳粉、4～6％海藻酸钠、2～4％蛋白酶解多肽、2～4％甘油、0.2～0.5％明胶以及余量的水。
在本发明中，冻干保护剂中的脱脂乳粉、海藻酸钠、甘油和明胶起到乳化包埋作用；蛋白酶解多肽则一方面属于嗜酸乳杆菌复合剂的有效成分，另一方面蛋白酶解多肽还能够起到冻干保护剂的作用，防止冷冻干燥对嗜酸乳杆菌的损伤。
在本发明中，所述菌泥与冻干保护剂中的蛋白酶解多肽的质量比优选为1:0.01～0.10，更优选为1:0.012～0.09，进一步优选为1:0.02～0.06。在本发明提供的质量比下，冻干保护剂中的蛋白酶解多肽可有效发挥冻干保护作用。
在本发明中，所述乳化包埋的温度优选为18～25℃，更优选为19～22℃。本发明对所述乳化方式无特殊限定，采用本领域已知的乳化方式即可，比如搅拌乳化。
本发明优选的，所述乳化时间优选为20～70min，更优选为40～60min。本发明乳化包埋是将嗜酸乳杆菌和蛋白酶解多肽包埋在脱脂乳等乳化包埋材料中，以增强其稳定性，也有利于保证最终产品的粒径均一。
得到乳化液后，本发明将乳化液冷冻干燥，再粉碎，得到嗜酸乳杆菌复合剂。本发明进行冷冻干燥的目的是为了去除产品的多余水分，提高成品稳定性；同时，将蛋白酶解多肽与嗜酸乳杆菌一同进行冷冻干燥有利于保持嗜酸乳杆菌的活性，使成品所含有效活菌数更高，还能够提高蛋白酶解多肽的活性。
在本发明中，所述冷冻干燥优选为真空冷冻干燥。在本发明中，所述冷冻干燥还包括预冷冻。所述预冷冻的温度优选为-35～-5℃，更优选为-20℃；预冷冻时间优选为0.5～3h，更优选为1～2h。在本发明中，所述冷冻干燥时间优选为25～40h，更优选为30h。
在本发明中，所述冷冻干燥后的粉碎是为了分散产品，使成品的粒度均一、混合均匀。本发明优选的，所述粉碎粒径为5～20目。
本发明还提供了一种食品、药品、保健品或发酵剂，包括前述技术方案所述嗜酸乳杆菌复合剂和辅料。
在本发明中，所述包括嗜酸乳杆菌复合剂的食品、药品或保抗氧化衰老、降血糖、降血脂、提高免疫力的作用，其中嗜酸乳杆菌复合剂作为活性成分，能够提供抗氧化衰老、降血糖、降血脂、提高免疫力的作用。
在本发明中，所述包括嗜酸乳杆菌复合剂的发酵剂具有缩短发酵时间的作用，发酵效率更高，并能够为发酵物提供抗氧化衰老、降血糖、降血脂、提高免疫力功效。
本发明优选的，所述嗜酸乳杆菌复合剂在所述食品、药品、保健品或发酵剂中的含量为1～99％；更优选为30～50％。
在本发明中，所述药品的形式包括但不限于片剂、粉剂、胶囊剂、颗粒剂或包衣剂。食品或保健品的形式包括但不限于片剂、粉剂、胶囊剂、颗粒剂、包衣剂、饮料、糕点、饼干、糖果、巧克力或果冻。本发明优选的，将包括所述嗜酸乳杆菌复合剂的食品制成休闲零食的各种形式。
本发明对于如何将嗜酸乳杆菌复合剂制成相应食品、药品、保健品或发酵剂无特殊限定，采用本领域已知的制剂制备方法即可。本发明对所述食品、药品、保健品或发酵剂中的辅料无特殊限定，采用本领域熟知的食品辅料、药品辅料以及保健品辅料即可。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
按质量百分比计，种子培养基：2％葡萄糖、1％蛋白胨、0.8％酵母浸膏、0.6％牛肉浸膏、0.6％无水乙酸钠、0.02％硫酸镁、0.02％硫酸锰、0.1％吐温80和余量的水，pH值6.2；
按质量百分比计，发酵培养基：1％鸡蛋清蛋白酶解液(以干重计，0.3％鸡蛋清蛋白酶解多肽)、2％葡萄糖、1％胰蛋白胨、0.5％牛肉浸膏、0.6％无水乙酸钠、0.02％硫酸镁、0.02％硫酸锰、0.1％吐温80和余量的水，pH值为6.5；
经检测，鸡蛋清蛋白酶解多肽中多肽含量为82％，相对分子量1000Da以下的分布比例为87％，天冬氨酸质量百分比为1.8％，谷氨酸的质量分数为9.3％。
按质量百分比计，冻干保护剂：10％的脱脂乳，6％的海藻糖，10％鸡蛋清蛋白酶解液(以干重计，3％鸡蛋清蛋白酶解多肽)，3％的甘油，0.3％的明胶和余量的水。
将市售的嗜酸乳杆菌种到装有种子培养基的试管中活化，得到一级种子液，再将一级种子液按照3％的接种量转接至种子培养基中得到二级种子液，培养条件为30～35℃，厌氧培养18h；将二级种子液接入发酵培养基中进行高密度发酵，二级种子液接至发酵培养基中的接种量为3％，培养条件为38℃，厌氧培养10h，待发酵液中菌体密度达到109cfu/mL，收集发酵液，离心获得菌体。按照菌体与冻干保护剂中的苦瓜籽蛋白酶解多肽干粉的质量比1:0.03混合，进行乳化包埋，乳化时间40min；将乳化液在-35℃下预冷冻2h，将预冷冻后的乳化液进行真空冷冻干燥，真空度为0.15mbar；真空冷冻干燥后将其粉碎至10目，得到嗜酸乳杆菌复合剂，所得嗜酸乳杆菌复合剂的活菌数为1.58×1011cfu/g。
实施例2
按质量百分比计，种子培养基：2％葡萄糖、1％蛋白胨、0.8％酵母浸膏、0.6％牛肉浸膏、0.6％无水乙酸钠、0.02％硫酸镁、0.02％硫酸锰、0.1％吐温80和余量的水，pH值6.5；
按质量百分比计，发酵培养基：3％豌豆蛋白酶解液(以干重计，0.9％豌豆蛋白酶解多肽)、2％葡萄糖、1％胰蛋白胨、0.5％牛肉浸膏、0.6％无水乙酸钠、0.02％硫酸镁、0.02％硫酸锰、0.1％吐温80和余量的水，pH值为6.8；
经检测，豌豆蛋白酶解液中多肽含量为87％，相对相对分子量1000Da以下的分布比例为92％，天冬氨酸质量百分比为2.6％，谷氨酸质量分数为11.7％。
按质量百分比计，冻干保护剂：10％的脱脂乳，6％的海藻糖，10％豌豆酶解液(以干重计，3％豌豆蛋白酶解多肽)，3％的甘油，0.3％的明胶和余量的水。
将嗜酸乳杆菌接种到装有种子培养基的试管中活化，得到一级种子液，再将一级种子液按照4％的接种量转接至种子培养基中得到二级种子液，培养条件为35～38℃，厌氧培养15h；将二级种子液接入发酵培养基中进行高密度发酵，二级种子液接至发酵培养基中的接种量为5％，培养条件为37℃，厌氧培养6h，待发酵液中菌体密度达到109cfu/mL，收集发酵液，离心获得菌体。按照菌体与冻干保护剂中的苦瓜籽蛋白酶解多肽干粉的质量比1:0.025混合，乳化包埋，乳化时间30min；将乳化液在-20℃下预冷冻2h，将预冷冻后的乳化液进行真空冷冻干燥，真空度为0.2mbar，；真空冷冻干燥后将其粉碎至20目，得到嗜酸乳杆菌复合剂，所得嗜酸乳杆菌复合剂的活菌数为3.95×1011cfu/g。
实施例3
按质量百分比计，将实施例2制备的嗜酸乳杆菌复合剂3％、低聚果糖10％、赤藓糖醇40％、抗性糊精42.5％、豌豆蛋白酶解多肽4.5％进行混合，得到具有辅助治疗腹泻的复合益生菌制剂，有效活菌数为1.2×1010cfu/g。
其中，采用的豌豆蛋白酶解多肽与实施例2相同。
实施例4
本次试验为了验证嗜酸乳杆菌与蛋白酶解多肽之间在调节肠道菌群方面的协同增效作用
1.试验材料
试验动物：SD健康雄性大鼠50只，体重180～220g
试验对象：以活菌数为1×1010cfu/g的市售嗜酸乳杆菌菌粉和豌豆蛋白酶解多肽为样品，其中豌豆蛋白酶解多肽与实施例2相同。
基础饲料：购于斯贝福(北京)生物科技有限公司，商品名大小鼠维持饲料。
2.试验方法
抗生素模型组的建立：连续灌胃盐酸林可霉素(60mg/10g BW)3d，大鼠开始不同程度腹泻，表明抗生素模型组建立成功。
A组：对照组，灌胃正常大鼠生理盐水1mL/d；
B组：抗生素模型组，生理盐水1mL/d灌胃抗生素模型大鼠；
C组：自然恢复组，生理盐水1mL/d灌胃抗生素模型大鼠；
D组：取0.2g市售嗜酸乳杆菌(1×1010cfu/g)溶于2ml生理盐水，取1mL灌胃抗生素模型大鼠；
E组：取1g豌豆蛋白酶解多肽(以干重计)溶于2ml生理盐水中，取1mL灌胃抗生素模型大鼠；
F组：取0.1g市售嗜酸乳杆菌(1×1010cfu/g)和0.5g豌豆蛋白酶解多肽溶于1ml生理盐水中，灌胃抗生素模型大鼠。
3.检测方法
(1)分别按照上述各组的方式灌胃3d后，取各组大鼠新鲜粪便1.0g，分别检测新鲜粪便中的肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌和乳杆菌的活菌数。其中，肠杆菌、肠球菌选择性培养基，置于37℃需氧培养18-24h；MRS肉汤和TPY(双歧杆菌)培养基37℃厌氧培养48h，并分别以菌落形态、革兰氏染色进行鉴定。
(2)灌胃开始后观察各组大鼠腹泻次数以及腹泻恢复所需时间。
3.结果与分析
表1不同处理对大鼠肠道菌群的影响
*与正常对照组相比，P<0.05；**与正常对照组相比，P<0.01
表2不同处理对大鼠腹泻的影响
如表1所示，灌胃3天后D组和E组腹泻情况缓解，F组(嗜酸乳杆菌+5％豌豆肽)腹泻情况基本恢复正常，除双歧杆菌与正常对照组有显著差异(P<0.05)，其他肠道菌群与正常组差异不显著(P>0.05)，基本恢复正常。
如表2所示，D、E和F组灌胃后，大鼠腹泻时间和腹泻次数与自然恢复组(C组)相比较，明显减少，其中F组效果较好，表明嗜酸乳杆菌和豌豆肽联合使用有辅助治疗腹泻的功能。
结果表明，嗜酸乳杆菌和豌豆蛋白酶解多肽之间存在协同增效作用，可有效增强嗜酸乳杆菌的肠道菌群结构，使其恢复正常，有效缓解因肠道菌群结构失调所导致的腹泻等症状。
实施例5
本次试验为了验证嗜酸乳杆菌与蛋白酶解多肽在增强免疫力方面的协同作用。
1、试验材料：
实验动物：BALB/c雄性小鼠40只，18～22g；
试验对象：以嗜酸乳杆菌和鸡蛋清蛋白酶解多肽为样品，其中鸡蛋清蛋白酶解多肽与实施例1采用的相同。
2试验方法
2.1动物分组：按体重分为4组，分别为：
A组：灌胃生理盐水0.2mL/d；
B组：鸡蛋清蛋白肽组，0.5g鸡蛋清蛋白酶解多肽溶于2mL生理盐水，取0.2mL进行灌胃；
C组：嗜酸乳杆菌组，取1g市售嗜酸乳杆菌(1×1010cfu/g)溶于2ml生理盐水，取0.2mL进行灌胃；
D组：嗜酸乳杆菌+鸡蛋清蛋白肽组，取1g市售嗜酸乳杆菌(1×1010cfu/g)和0.5g鸡蛋清蛋白酶解多肽溶于2ml生理盐水中，取0.2mL进行灌胃。
2.2指标测定：
灌胃4周后，称重，摘眼球取血处死小鼠，收集小鼠血液和摘取胸腺和脾脏，测定小鼠免疫脏器指数和血清中相关抗体含量。
3.实验结果：
表2不同处理下的小鼠免疫脏器指数
注：*表示与对照组相比P<0.05；**表示与对照组相比P<0.01
表3不同处理下的小鼠血清中相关细胞因子和IgG测定
IgG(mg/mL) IgM(mg/mL) IFN-γ(mg/mL) IL-4(mg/mL)
A 9.66±0.23 1.55±0.12 2.16±0.24 6.03±0.12
B 11.23±0.31* 1.63±0.34 2.58±0.13* 6.63±0.22
C 11.42±0.27* 1.98±0.20* 2.36±0.17 7.02±0.25*
D 12.51±0.31** 2.11±0.18* 2.74±0.21* 8.08±0.19*
注：*表示与空白对照组相比P<0.05；**表示与空白对照组相比P<0.01
由表2～3可以看出，B、C和D组的免疫脏器指数和血清抗体含量均高于A组，即空白对照组，表明嗜酸乳杆菌和鸡蛋清蛋白酶解多肽均具有增强免疫力的作用。同时，与B、C组相比，D组在免疫脏器指数和血清抗体含量方面均有显著提高，表明嗜酸乳杆菌与鸡蛋清蛋白酶解多肽在提高机体免疫力方面存在显著的协同增效作用。本发明将嗜酸乳杆菌与蛋白酶解多肽复配后能够获得显著的提高免疫力作用。
实施例6
本次试验为了验证嗜酸乳杆菌与蛋白酶解多肽之间在降血脂方面的协同增效作用。
1.试验材料：
试验动物：SD健康大鼠50只，体重180～220g，雄性。
试验对象：以活菌数为1×1010cfu/g的市售嗜酸乳杆菌菌粉和大豆蛋白酶解多肽为样品。
所述大豆蛋白酶解多肽中：多肽含量为92％，相对分子量1000Da的分布比例为90％，天冬氨酸的质量百分数为2.2％，谷氨酸质量分数为15.3％。
基础饲料：购于斯贝福(北京)生物科技有限公司，商品名大小鼠维持饲料；
高脂饲料(％)：普通饲料80，猪油16，胆固醇2，猪胆盐2。
2.试验方法
2.1动物分组：
50只SD雄性大鼠，按体重分为5组，分别为：
A组：空白对照组，给予普通饲料自由进食，灌胃1ml生理盐水。
B组：高脂模型组，给予高脂饲料自由进食，灌胃1ml生理盐水。
C组：嗜酸乳杆菌组，取0.1g市售嗜酸乳杆菌(1×1010cfu/g)溶于1ml生理盐水，进行灌胃；
D组：大豆肽组，0.5g大豆蛋白酶解多肽溶于1mL生理盐水，进行灌胃；
E组：大豆肽+嗜酸乳杆菌组，取0.1g市售嗜酸乳杆菌(1×1010cfu/g)和0.5g大豆蛋白酶解多肽溶于1ml生理盐水中，进行灌胃。
2.2指标测定：
大鼠在饲养40天后，禁食12h，大鼠股动脉采血，离心，取血清，测定大鼠血清中TC、TG和HDL-C的含量。
3.实验结果：
表4不同处理对大鼠血脂的影响
*与模型组相比，P<0.05；**与模型组组相比，P<0.01
试验结果如表4所示，嗜酸乳杆菌和大豆蛋白酶解多肽显著降低高脂大鼠的血清总胆固醇TC、甘油三脂TG和低密度脂蛋白LDL-C的含量，显著提高高密度脂蛋白HDL-C；嗜酸乳杆菌与大豆蛋白酶解多肽联合使用，与嗜酸乳杆菌组以及大豆肽组相比较，效果更好，说明嗜酸乳杆菌与大豆蛋白酶解多肽联合使用有协同增效作用。本发明提供的嗜酸乳杆菌和蛋白酶解多肽复配后具有显著的降血脂作用。
综合实施例4～6可以看出，嗜酸乳杆菌与蛋白酶解多肽复配后，在调节肠道菌群、增强免疫力以及降血脂方面存在显著的协同作用。
实施例7
本次试验为了验证蛋白酶解多肽具有促进嗜酸乳杆菌增殖，缩短发酵时间的作用。
1.试验材料
种子培养基：2％葡萄糖、1％蛋白胨、0.8％酵母浸膏、0.6％牛肉浸膏、0.6％无水乙酸钠、0.02％硫酸镁、0.02％硫酸锰、0.1％吐温80和余量的水，pH值6.5～6.8；
MRS肉汤：购于北京陆桥技术股份有限公司。
2.试验方法
将嗜酸乳杆菌接种到装有种子培养基的试管中活化，得到一级种子液，将一级种子液按照3％的接种量分别接入MRS液体培养基(培养基A)和添加了质量分数0.5％豌豆蛋白酶解多肽的MRS液体培养基(培养基B)中，在37℃条件下恒温培养，分别于0h、4h、8h、12h、16h、20h、24h进行活菌计数，绘制生长曲线。
其中，采用的豌豆蛋白酶解多肽与实施例2相同。
3.试验结果
如图1，添加0.5％豌豆蛋白酶解多肽的MRS肉汤，嗜酸乳杆菌活菌数显著高于MRS肉汤组(P<0.05)，同时缩短发酵至稳定期所需时间，说明豌豆肽能促进嗜酸乳杆菌增殖，缩短发酵周期。
实施例8
本次试验为了验证蛋白酶解多肽能促进嗜酸乳杆菌增殖，缩短发酵时间。
1.试验材料
种子培养基：2％葡萄糖、1％蛋白胨、0.8％酵母浸膏、0.6％牛肉浸膏、0.6％无水乙酸钠、0.02％硫酸镁、0.02％硫酸锰、0.1％吐温80和余量的水，pH值6.5-6.8
MRS肉汤：购于北京陆桥技术股份有限公司
2.试验方法
将嗜酸乳杆菌接种到装有种子培养基的试管中活化，得到一级种子液，将一级种子液按照3％的接种量分别接入MRS液体培养基(培养基A)和添加了质量分数0.5％鸡蛋清蛋白酶解多肽的MRS液体培养基(培养基B)中，在37℃条件下恒温培养，分别于0h、4h、8h、12h、16h、20h、24h进行活菌计数，绘制生长曲线。
其中，采用的鸡蛋清蛋白酶解多肽与实施例1相同。
3.试验结果
如图2，添加0.5％鸡蛋清蛋白酶解多肽的MRS肉汤，嗜酸乳杆菌活菌数显著高于MRS肉汤组(P<0.05)，同时缩短发酵至稳定期所需时间，说明鸡蛋清蛋白酶解多肽能促进嗜酸乳杆菌增殖，缩短发酵周期。
实施例9
本次试验对添加了本发明所述嗜酸乳杆菌复合剂的益生菌制剂功效进行验证。
将实施例2所得的嗜酸乳杆菌复合剂以3％(体积百分比)的接种量分别接种于MRS肉汤培养基和含100μg/mL胆固醇的MRS-CHOL培养基(即MRS肉汤培养基中添加胆固醇)中，置于37℃下培养12h后，于4℃6000r/min的调节下离心15min，测上清液胆固醇含量，计算胆固醇降低率为52.17％。则表明该嗜酸乳杆菌复合剂有较强的体外降胆固醇活性。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种嗜酸乳杆菌复合剂，制备原料包括以下重量份的组分：嗜酸乳杆菌85～90份和蛋白酶解多肽1.2～8.1份；所述蛋白酶解多肽的重量以干重计；
所述嗜酸乳杆菌复合剂中所含活菌数在1010cfu/g以上；
所述蛋白酶解多肽中多肽的质量含量在75％以上、所述蛋白酶解多肽中相对分子量1000Da以下的多肽的质量占比不低于80％，所述蛋白酶解多肽中天冬氨酸的质量百分数在1％以上，谷氨酸质量分数在5％以上。
2.根据权利要求1所述的嗜酸乳杆菌复合剂，其特征在于，所述蛋白酶解多肽选自蛋白酶解液或蛋白酶解多肽干粉。
3.根据权利要求1或2所述的嗜酸乳杆菌复合剂，其特征在于，所述蛋白酶解多肽选自碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶中一种或多种酶解蛋白的产物。
4.根据权利要求3所述的嗜酸乳杆菌复合剂，其特征在于，所述用于制备蛋白酶解多肽的蛋白选自豌豆、鸡蛋清、小麦谷朊、大豆和核桃粕中的一种或多种。
5.权利要求1～4任意一项所述嗜酸乳杆菌复合剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将嗜酸乳杆菌接种至种子培养基中活化，得到一级种子液；
(2)将所述一级种子液接种至种子培养基中厌氧培养12～24h，得到二级种子液；
(3)将所述二级种子液接入含有蛋白酶解多肽的发酵培养基中进行高密度发酵，离心取沉淀，得到菌泥；
(4)将所述菌泥与冻干保护剂混合后进行乳化包埋，得到乳化液；
按质量百分比计，所述冻干保护剂包括8～15％脱脂乳粉、2～8％海藻酸钠、1.5～6％蛋白酶解多肽、1～6％甘油、0.1～0.6％明胶以及余量的水；
(5)将得到的乳化液冷冻干燥，粉碎，得到嗜酸乳杆菌复合剂。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)和(2)中，所述种子培养基独立包括以下质量百分含量的组分：1～3％葡萄糖、1～3％蛋白胨、0.5～3％酵母浸膏、0.5～3％牛肉浸膏、0.2～1％无水乙酸钠、0.02～0.08％硫酸镁、0.02～0.08％硫酸锰、0.05～0.1％吐温80和余量的水，pH值独立为6.2～6.8。
7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述含有蛋白酶解多肽的发酵培养基，按质量百分数计，包括1.5～6％蛋白酶解多肽、1～3％葡萄糖、1～3％蛋白胨、0.5～3％酵母浸膏、0.5～3％牛肉浸膏、0.2～1％无水乙酸钠、0.02～0.08％硫酸镁、0.02～0.08％硫酸锰、0.05～0.1％吐温80和余量的水，pH值为6.2～7.0。
8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述菌泥与冻干保护剂中的蛋白酶解多肽的质量比为1:0.01～0.10；所述乳化包埋时间为20～70min。
9.一种食品、药品、保健品或发酵剂，其特征在于，包括权利要求1～4任意一项所述嗜酸乳杆菌复合剂和辅料。
10.根据权利要求9所述的食品、药品、保健品或发酵剂，其特征在于，所述食品、药品或保健品的形式包括片剂、粉剂、胶囊剂、颗粒剂、包衣剂、饮料、糕点、饼干、糖果、巧克力或果冻。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109662228A (zh) * 2018-12-04 2019-04-23 广州金叶健康科技有限公司 一种具有保健功能的益生菌固体饮料及其制备方法
CN110463824A (zh) * 2019-08-19 2019-11-19 四川农业大学 奥氏乳杆菌菌株bslo 1801及其在蛋鸡产蛋中的应用
CN110484459A (zh) * 2019-02-18 2019-11-22 诺佰克（武汉）生物科技有限公司 一株植物乳杆菌及其应用
CN113475663A (zh) * 2021-07-21 2021-10-08 吉林大学 一种含肽益生菌组合物、含肽益生菌固体饮料及其制备方法
CN114431485A (zh) * 2021-10-29 2022-05-06 刘如石 一种预防结直肠癌的微生态制剂及其应用
CN115137758A (zh) * 2022-06-08 2022-10-04 诺佰克（武汉）生物科技有限公司 一种有利于女性生殖道健康的益生菌的制备及其应用

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109662228A (zh) * 2018-12-04 2019-04-23 广州金叶健康科技有限公司 一种具有保健功能的益生菌固体饮料及其制备方法
CN110484459A (zh) * 2019-02-18 2019-11-22 诺佰克（武汉）生物科技有限公司 一株植物乳杆菌及其应用
CN110484459B (zh) * 2019-02-18 2021-06-04 诺佰克（武汉）生物科技有限公司 一株植物乳杆菌及其应用
CN110463824A (zh) * 2019-08-19 2019-11-19 四川农业大学 奥氏乳杆菌菌株bslo 1801及其在蛋鸡产蛋中的应用
CN113475663A (zh) * 2021-07-21 2021-10-08 吉林大学 一种含肽益生菌组合物、含肽益生菌固体饮料及其制备方法
CN114431485A (zh) * 2021-10-29 2022-05-06 刘如石 一种预防结直肠癌的微生态制剂及其应用
CN115137758A (zh) * 2022-06-08 2022-10-04 诺佰克（武汉）生物科技有限公司 一种有利于女性生殖道健康的益生菌的制备及其应用
CN115137758B (zh) * 2022-06-08 2024-01-19 诺佰克（武汉）生物科技有限公司 一种有利于女性生殖道健康的益生菌的制备及其应用

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