CN113186118B - 一种用于提高母猪生产性能的复合益生菌制剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本申请公开一种用于提高母猪生产性能的复合益生菌制剂及其制备方法和应用，所述复合益生菌制剂包括植物乳杆菌P‑8、植物乳杆菌KT‑Lp9、乳酸片球菌PA‑19及三者的代谢产物，其中，所述植物乳杆菌P‑8的微生物保藏号为CGMCC No.6312，所述植物乳杆菌KT‑Lp9的微生物保藏号为CGMCC No.12950；乳酸片球菌PA‑19的微生物保藏号为CGMCCNo.19881，所述复合益生菌制剂采用分别发酵后混合的方法制备，所述复合益生菌制剂能够广泛应用于不同类型、不同生长阶段的猪，并且，在高温制粒后仍具有理想效果。

Description

一种用于提高母猪生产性能的复合益生菌制剂及其制备方法
技术领域
本申请属于益生菌制剂领域，特别涉及一种用于提高母猪生产性能的复合益生菌制剂及其制备方法。
背景技术
抗生素曾在畜牧养殖业中对防治动物疾病、促进动物生长、提高饲料利用率、提高养殖户经济效益、加快畜牧业发展发挥巨大作用。然而，长期使用抗生素而导致的动物免疫力下降、病原菌耐药性产生、畜产品药物残留、环境污染、人类健康和生存环境受到严重危害等负面影响越来越突。在饲料中禁止添加抗生素后，生猪养殖行业面临重大养殖问题。因此，找到能够有效预防和治疗母猪发病，避免其生产性能下降的方法迫在眉睫。
大量研究表明乳酸菌对动物肠道微生态系统具有极其重要的作用，它们通过定植在肠道中成为肠道生理屏障的重要组成部分，维持肠道微生态系统的菌群平衡，并且，这些乳酸菌能够刺激巨噬细胞、诱导产生干扰素、促进细胞分裂、产生抗体，调节机体细胞免疫、体液免疫和肠黏膜局部免疫等，最终提高机体免疫能力。因此，由乳酸菌制备的微生物制剂是抗生素的理想替代品。
现有技术中，存在针对单一类型猪类提高其生产性能或提高其消化吸收率的复合饲料，例如，中国专利CN202010028157.0，公开了“一种用于提高仔猪生产性能的复合饲料添加剂及其制备方法和应用”，其制作方法包括以下步骤：A1，采用黄芪25份，山楂25份，炒白术18份，陈皮12份，厚朴20份，瞿麦18份，炙甘草12份中药超微粉；A2，采用乳酸杆菌或枯草芽孢杆菌或两者混合进行发酵，发酵温度为37℃～39℃，发酵时间为48～72小时；A3，发酵物低温烘干，粉碎后得到复合饲料添加剂。
但是，现有技术多为发酵中药饲料添加剂或者包含益生菌的预混料等，不仅适用对象的类型单一，生长阶段也单一，而且，乳酸菌不耐高温，在高温制粒过程会使其丧失活性，效果达不到预期。
发明内容
为解决上述问题，本申请提供一种能够广泛应用于不同类型、不同生长阶段的猪，并且，在高温制粒后仍具有理想效果的猪用饲料添加剂。
本发明目的是提供一种用于提高母猪生产性能的复合益生菌制剂，所述复合益生菌制剂包括植物乳杆菌P-8、植物乳杆菌KT-Lp9、乳酸片球菌PA-19及三者的代谢产物。
在本申请中，所述植物乳杆菌P-8，已于2012年6月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为CGMCC No.6312，保藏地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，分类命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。该菌株是2003年从内蒙古自治区牧民家庭中的自然发酵酸牛奶中分离并筛选。研究采用体外实验、动物模型和人体试验对菌株的益生功能进行了系统评价，并利用基因组学的手段对菌株的益生机制进行了深入剖析。目前已经证实该菌株具有优异的抗胃肠道消化液耐受能力，能够在人和动物肠道中定植并繁殖，改善肠道菌群，调节血脂代谢，对肝脏具有保护修复作用，提高机体免疫能力，其代谢产物中富含苯乳酸、4-羟基苯乳酸及肽类物质。
所述植物乳杆菌KT-Lp9已于2016年9月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为CGMCC No.12950，保藏地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所，邮编：100101，分类命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，该菌株分离自传统自然发酵酸牛奶乳，具备优良的益生特性，研究表明该菌株具有良好的耐酸性、人工胃液、人工消化液耐受性、胆盐耐受性、在肠道有凝集作用，包括自凝集作用和它凝集作用，以及抑制常见肠道致病菌生长特性，能够在人和动物肠道中定植并繁殖，可改善机体内的微生态环境。
所述乳酸片球菌PA-19已于2020年5月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为CGMCC No.19881，保藏地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，分类命名为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)，该菌株分离自奶酪，具备优良的益生特性，研究表明该菌株具有良好的耐酸性、人工胃液、人工消化液耐受性、胆盐耐受性、在肠道有凝集作用，包括自凝集作用和它凝集作用，其代谢产物可抑制常见肠道致病菌生长特性。
在本申请中，所用三株菌和相应的菌剂、菌粉均具有良好的耐酸性、人工胃液、人工消化液耐受性和胆盐耐受性，在肠道均有凝集作用，所述凝集作用包括自凝集作用和它凝集作用，所述三株菌及相应的菌剂还能够抑制常见肠道致病菌生长特性，能够在人和动物肠道中定植并繁殖，改善机体内的微生态环境。
本申请提供的复合益生菌制剂能够提高母猪生产性能，特别地，能够通过降低妊娠期母猪的便秘状况，提高生产性能，主要表现为：母猪妊娠期便秘情况显著下降，早产及晚产率降低，木乃伊猪及弱仔率下降；仔猪初生窝重增加，免疫力提高，腹泻程度下降，腹泻治疗效果提升。
本申请人认为，本申请提供的复合益生菌制剂中的活菌、死菌菌体以及活菌代谢产物协同作用，促进活菌定植于肠道内，并且在其生长繁殖过程中产生乳酸等代谢产物，再结合所述复合益生菌制剂中本身包含的代谢产物，降低肠道pH值，阻止致病菌在肠道生长和繁殖，并且，所述复合益生菌制剂中的活菌在肠道内还可代谢产生天然抗菌物质，这些天然抗菌物质对肠道致病菌具有明显的抑制和杀灭作用。
进一步地，本申请提供的复合菌剂不仅对致病菌有拮抗作用，而且能粘附于肠道上皮细胞上，起到占位性保护作用。同时，所述复合益生菌制剂还能够产生非特异性免疫调节因子，刺激肠道局部免疫反应，提高非特异性免疫功能，增强巨噬细胞的活力，提高自然杀伤细胞的活力。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种用于提高母猪生产性能的复合益生菌制剂，所述复合益生菌制剂包括由植物乳杆菌P-8、植物乳杆菌KT-Lp9和乳酸片球菌PA-19，其中，所述植物乳杆菌P-8的微生物保藏号为CGMCC No.6312，所述植物乳杆菌KT-Lp9的微生物保藏号为CGMCC No.12950；乳酸片球菌PA-19的微生物保藏号为CGMCC No.19881。
可选地，所述复合益生菌制剂还包括所述植物乳杆菌P-8的代谢产物、植物乳杆菌KT-Lp9的代谢产物和乳酸片球菌PA-19的代谢产物。
在一种可实现的方式中，基于所述复合益生菌制剂的总重量，所述复合益生菌制剂中三株菌的活菌数量总和≥1.0×107CFU/g。
在一种可实现的方式中，所述复合益生菌制剂包括植物乳杆菌P-8菌粉、植物乳杆菌KT-Lp9菌粉和乳酸片球菌PA-19菌粉。
在本申请中，所述菌粉由菌剂经干燥制备而得，可选地，所述菌粉还可以包括用于干燥的辅料。
在本申请中，所述菌剂包括活菌菌体、死菌菌体以及活菌的代谢产物，可选地，所述菌剂还可以包括用于发酵的辅料。
进一步地，所述植物乳杆菌P-8菌粉、植物乳杆菌KT-Lp9菌粉与乳酸片球菌PA-19菌粉的重量比分别为(1～3):(1～3):(1～3)。
优选地，所述植物乳杆菌P-8菌粉、植物乳杆菌KT-Lp9菌粉、乳酸片球菌PA-19菌粉的重量比为2:2:1。
在一种可实现的方式中，所述复合益生菌制剂中还包括稀释载体，所述稀释载体包括麦芽糊精。
可选地，基于所述复合益生菌制剂的总重量，所述稀释载体的重量比为5wt％。
本申请提供的复合益生菌制剂在有效提高母猪生产性能的同时，能够有效提高抵抗力，降低妊娠期便秘或者腹泻发病率，增强母猪的体质，从而提高仔猪的体重的体质。
本发明的另一目的在于提供上述复合益生菌制剂的制备方法，所述方法包括如下步骤：
步骤1，分别制备植物乳杆菌P-8菌粉、植物乳杆菌KT-Lp9菌粉和乳酸片球菌PA-19菌粉；
步骤2，将步骤1制备所得三种菌粉进行复配。
在一种可实现的方式中，步骤1具体包括：
步骤1-1，分别将所述3株益生菌单独进行高密度发酵，具体可以包括：
步骤1-1-1，分别取一环活化后的植物乳杆菌P-8的斜面菌体、植物乳杆菌KT-Lp9的斜面菌体和乳酸片球菌PA-19的斜面菌体，分别接种至MRS培养基中，在第一预设温度下，以第一预设转速条件下培养第一预设时间，分别得到各益生菌的一级种子液。
可选地，所述第一预设温度为33～37℃，所述第一预设转速为50～100rpm，所述第一预设时间为18～24h。
优选地，培养各益生菌的温度相同，和/或，转速相同，和/或，培养时间相同。
步骤1-1-2，将步骤1-1-1培养好的一级种子液按接种量3％～10％(v/v)转接入MRS培养基进行二次活化，活化第二预设时间后得二级种子液。
可选地，所述第二预设时间为18～24h。
优选地，活化各益生菌所用时间相同。
步骤1-1-3，将步骤1-1-2获得的三种二级种子液分别按照相同接种量3％～10％(v/v)各自接入到相应的发酵罐培养基中，在第三预设温度下，以第三预设转速和第三通风量下培养第三预设时间，发酵全程调节发酵液保持为预设pH值，分别得到植物乳杆菌P-8最终发酵液、植物乳杆菌KT-Lp9最终发酵液、乳酸片球菌PA-19最终发酵液，其中，基于所述发酵罐培养基的总体积，所述发酵罐培养基包括以下配比的组分：蔗糖50～80g/L，酵母粉20～40g/L，大豆蛋白胨8～20g/L，MgSO4·7H2O 1.5～2.0g/L，MnSO4·5H2O 0.08～0.12g/L，吐温-80 0.8～1.0g/L，余量为水，pH＝7.0。
可选地，所述第三预设温度为33～37℃，所述第三预设转速为50～100rpm，所述第三预设通风量为0.3～1L/min，所述第三预设时间为8～12小时，所述预设pH值为5.6～6.2。
优选地，本步骤中，发酵各益生菌的温度相同，和/或，转速相同，通风量相同，发酵时间相同，体系pH值相同。
步骤1-1-4，将步骤1-1-3所得各菌的最终发酵液分别第四预设转速离心第四预设时间，收集各益生菌菌剂，所述益生菌菌剂包括活菌菌体、死菌菌体及其代谢产物。
可选的，所述第四预设转速为5000～12000rpm，所述第四预设时间为5～15min。
优选地，分离各益生菌所用的转速相同，和/或，分离时间相同。
步骤1-2，向经离心后的植物乳杆菌P-8菌剂、植物乳杆菌KT-Lp9菌剂、乳酸片球菌PA-19菌剂中分别添加保护剂，所述菌剂与保护剂的重量比为菌剂的重量:保护剂的重量＝1：(5～10)，混匀获得菌悬液，将所述菌悬液经喷雾干燥，分别得到植物乳杆菌P-8菌粉、植物乳杆菌KT-Lp9菌粉、乳酸片球菌PA-19菌粉。
在一种可实现的方式中，所述植物乳杆菌P-8最终发酵液、植物乳杆菌KT-Lp9最终发酵液、乳酸片球菌PA-19菌剂最终发酵液中的活菌数各自均达到1010CFU/ml以上。
进一步地，所述保护剂包括以下配比的组分：
Figure BDA0002996344580000041
在一种可实现的方式中，步骤2包括：将所述植物乳杆菌P-8菌粉、植物乳杆菌KT-Lp9菌粉、乳酸片球菌PA-19菌粉按比例进行混合，制备活菌总数为1×107CFU/g三种规格的复合益生菌制剂。
可选地，在步骤2后还可以包括：经粉末包装机充氮气填充将所述复合益生菌制剂进行分装，1kg/袋。
本申请还提供所述复合益生菌制剂用于制备猪饲料添加剂的用途。
本申请还提供所述复合益生菌制剂用于制备提高母猪生产性能、降低便秘发病率药物的用途。
在一种可实现的方式中，基于每头猪基础日粮的总重量，所述复合益生菌制剂的添加量为3～5kg/吨，优选为5kg/吨。
在另一种可实现的方式中，所述复合益生菌制剂还可以作用制备其它猪饲料添加剂的原料。
与现有技术相比，本申请提供的复合益生菌制剂富含有苯乳酸、四羟基苯乳酸等广谱天然抗菌物质，可有效抑制甚至杀死肠道致病菌，在提高猪免疫力、改善肠道菌群，从而降低母猪便秘发病率，提高生产性能，主要表现为：母猪便秘发病率显著下降，早产及晚产率降低，木乃伊猪及弱仔率下降；仔猪初生窝重增加，免疫力提高，腹泻程度下降，腹泻治疗效果提升。特别地，在便秘改善方面，经实验验证，实验组母猪排便顺畅程度显著大于对照组，其大便呈自然柔软型，色泽正常，湿润度高，证明便秘程度显著缓解。
附图说明
图1a示出实验前妊娠期母猪的粪便状态；
图1b示出与图1a相同母猪实验后的粪便状态；
图1c示出实验前另一妊娠期母猪的粪便状态；
图1d示出与图1c相同母猪实验后的粪便状态；
图2示出母猪预产期与分娩日期一致情况；
图3a示出母猪产木乃伊率；
图3b示出母猪产弱仔率；
图4a示出母猪产前15天平均背膘；
图4b示出母猪产前2天平均背膘；
图4c示出仔猪断奶时母猪平均背膘；
图5a示出2日龄仔猪平均初生重；
图5b示出2日龄仔猪中弱仔平均重；
图6示出实验组和对照组断奶仔猪平均窝重结果；
图7示出试验前后仔猪腹泻平均治疗窝数；
图8a示出母猪断奶后再发情率；
图8b示出母猪断奶后无法发情，或其它原因导致母猪淘汰率。
具体实施方式
这里将详细地对示例性实施例进行说明，其示例表示在附图中。下面的描述涉及附图时，除非另有表示，不同附图中的相同数字表示相同或相似的要素。以下示例性实施例中所描述的实施方式并不代表与本发明相一致的所有实施方式。相反，它们仅是与如所附权利要求书中所详述的、本发明的一些方面相一致方法的例子。
下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。
以下通过具体的实施例对本申请提供的用于提高母猪生产性能的复合益生菌制剂及其制备方法进行详细阐述。
本发明公开了一种用于提高母猪生产性能的复合益生菌及其代谢产物，属于复合益生菌剂领域，所述复合益生菌剂由植物乳杆菌P-8、植物乳杆菌KT-Lp9、乳酸片球菌PA-19及其代谢产物组成。使用该益生菌及其代谢产物对围产母猪进行试验，能够降低母猪妊娠期便秘，提高生产性能，主要表现为：母猪妊娠期便秘情况显著下降，早产及晚产率降低，木乃伊率及弱仔猪率下降；仔猪初生窝重增加，腹泻程度下降，腹泻治疗效果提升。
实施例
实施例1乳酸片球菌PA-19耐酸、耐胆盐特性及其抑菌特性实验
将冷冻保存的乳酸片球菌PA-19接种于MRS液体培养基中，在温度37℃下静态培养18h，如此传代培养2次得到活化发酵液；
所述MRS液体培养基组成如下：10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氢二钾、5g乙酸钠、2g柠檬酸三钠、1mL吐温80、0.2g硫酸镁、0.05g硫酸锰加入1000mL蒸馏水，调节pH至6.5，121℃灭菌15min。
(1)耐酸、耐胆盐特性检测
在pH2.5(用1mol/L HCl调整)灭菌PBS缓冲液中，加入3.5g/L胃蛋白酶，用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌，制成模拟胃液；将活化好的菌株离心收集菌体，加入与培养基等量的pH2.5模拟胃液，37℃培养3h，于0h、3h用MRS琼脂培养基倾注法测定其活菌数。
在pH8.0(用0.1mol/L NaOH调整)灭菌PBS中，加入0.1％胰蛋白酶和1.8％牛胆盐用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌，制成模拟肠液；将模拟胃液中处理3h后的菌液，离心洗菌两次收集菌体后，加入与之前模拟胃液等量的模拟肠液继续37℃培养，于4h、8h用MRS琼脂培养基倾注法测活菌数，试验结果见表1：
在本实例中，存活率可根据下式I进行计算：
存活率＝[N1/N0]×100％ 式I
其中，N0表示0h活菌数；N1表示经模拟肠、胃液消化后的活菌数。
表1 PA-19人工模拟胃液和肠液的存活率
Figure BDA0002996344580000061
(2)抑菌特性
用琼脂孔扩散法(Well-diffusion Agar Assay)测定乳酸片球菌PA-19发酵液的抑菌效果：将灭菌后冷却至50℃左右的MRS琼脂培养基(20ml)与200μL肠道致病菌液(106CFU/ml)一起倒入平板混匀。待加有肠道致病菌的MRS琼脂培养基冷却凝固结实后，使用打孔器在平板上打出直径8mm左右的孔。
每孔加入100μL乳酸片球菌PA-19发酵液，于4℃冰箱中扩散12h后37℃培养恒温48h，观测抑菌圈的大小。抑菌圈直径大小使用游标卡尺进行测量(保留两位有效数字)，实验结果见表2：
表2乳酸片球菌PA-19的抑菌特性
Figure BDA0002996344580000062
注：打孔器直径为8mm
由表1、表2试验结果可知，PA-19菌株具有较好的耐酸以及耐胆盐特性，同时具有广谱抑制致病菌的优良特性。
实施例2用于提高母猪生产性能的复合益生菌制剂的制备
植物乳杆菌P-8菌剂、植物乳杆菌KT-Lp9菌剂、乳酸片球菌PA-19菌剂的制备：
分别将3株发酵菌种单独进行高密度发酵：分别取一环活化后的植物乳杆菌P-8、植物乳杆菌KT-Lp9、乳酸片球菌PA-19的斜面菌体，各自分别接种至MRS培养基中，均在温度为37℃，均在85rpm的转速条件下培养24h，分别得到一级种子液；将培养好的一级种子液按接种量7％(v/v)再次分别转接入MRS培养基进行二次活化，活化24h后得二级种子液；将二级种子液分别按照相同接种量7％(v/v)分别各自接入到不同的发酵罐培养基中，温度均为37℃，转速均为85rpm，通风量均为0.5L/min，发酵全程调节发酵液相同pH值为6条件下培养12小时，分别得到植物乳杆菌P-8最终发酵液、植物乳杆菌KT-Lp9最终发酵液和乳酸片球菌PA-19最终发酵液，将所得各最终发酵液分别在12000rpm，10min条件下离心收集各益生菌菌剂，包括活菌菌体、死菌菌体及其代谢产物；其中，所述发酵罐培养基包括以如下组分(g/L)：蔗糖80，酵母粉40，大豆蛋白胨20，MgSO4.7H2O 2.0，MnSO4.5H2O 0.12，吐温-80 0.8，余量为水，pH7.0。
其中，植物乳杆菌P-8最终发酵液、植物乳杆菌KT-Lp9最终发酵液和乳酸片球菌PA-19最终发酵液的各自活菌数均达到1010CFU/ml以上。
向经离心后的植物乳杆菌P-8菌剂、植物乳杆菌KT-Lp9菌剂以及乳酸片球菌PA-19菌剂中添加保护剂溶液，所述各菌剂与保护剂的重量比为1：10，其中，所述保护剂包括如下配比的组分(g/L)：脱脂乳粉35，脱盐乳清粉20，工业海藻糖20，维生素C 4，卵磷脂0.08，余量为蒸馏水。
将三种益生菌菌剂保护剂体系分别混匀，分别获得相应菌悬液，将所得菌悬液分别喷雾干燥，分别得到植物乳杆菌P-8菌粉、植物乳杆菌KT-Lp9菌粉和乳酸片球菌PA-19菌粉，再将植物乳杆菌P-8菌粉、植物乳杆菌KT-Lp9菌粉和乳酸片球菌PA-19菌粉混合均匀，获得复合益生菌制剂，所述复合益生菌制剂中植物乳杆菌P-8菌粉的重量:植物乳杆菌KT-Lp9菌粉的重量:乳酸片球菌PA-19菌粉的重量＝2:2:1。
特别地，所述复合益生菌制剂经粉末包装机充氮气填充将复合益生菌剂进行分装，1kg/袋。
实施例3复合益生菌制剂效果实验例
在猪生产基地中，在基础日粮中添加实施例2制备的复合益生菌制剂，添加量为5kg/吨日粮。
生产基地为：内蒙古正大食品有限公司正缘5000种猪场；
试验组母猪数量：129头；
试验组各母猪的妊娠阶段为产前15天；
对照组母猪数量：128头；
对照组各母猪的妊娠阶段为产前15天。
1.实验方法：
(1)试验猪样品添加：将实施例2制得的复合益生菌制剂按照5kg/吨料的比例添加到实验组母猪饲料中。
(2)妊娠期母猪便秘统计：使用前、试用期间和分娩前所有试验猪便秘情况进行统计记录。
(3)试验猪背膘变化统计：在使用前、分娩前及断奶后3个时间段检测母猪背膘。
(4)试验猪生产性能统计：母猪分娩后，按照母猪分娩卡，记录母猪分娩时间、仔猪出生数、健仔猪数、木乃伊数、弱仔数。
(5)仔猪初生窝重统计：仔猪初生后，于2日龄对其进行称重，并记录数据。
(6)仔猪断奶重统计：仔猪断奶日龄为23日，由售猪平台地泵进行称重。
(7)腹泻率统计：从分娩单元中的第一窝腹泻仔猪开始统计，记录试验单元在试验期间的全部腹泻及治疗记录，并统计分析。
(8)试验猪发情率统计：仔猪断奶后，母猪统一驱赶至断奶发情舍，记录其3-7天内的发情率。
2.试验结果：
(1)妊娠期母猪便秘情况
图1a示出实验前母猪粪便呈坚硬颗粒状，图1b示出试验后母猪粪便呈柔软状态，图1c示出实验前母猪粪便呈坚硬颗粒状，图1d示出试验后母猪粪便呈柔软状态，如图1a至图1d所示，在试验过程中，试验7天后，实验组全部母猪便秘发病程度降低，50％母猪粪便达到正常水平。试验12天后，95％母猪粪便完全恢复正常，个别母猪粪便较干燥，但排便顺畅，粪便柔软。对照组在试验过程中便秘程度稍有缓解，但仍保持颗粒状，便秘严重。
(2)分娩准确率
图2示出母猪预产期与分娩日期一致情况，如图2所示，在试验过程中，实验组母猪早产率为19.63％，对照组为23.96％，实验组略低于对照组；在顺产率中，实验组母猪按照预产期分娩的准确率为45.79％，而对照组为40.63％，实验组比对照组高5％；在晚产率中，实验组有34.58％的母猪生产日期晚于预产期，而对照组为35.42％，实验组低于对照组。
(3)生产性能
结果如图3a和图3b所示，其中，图3a示出母猪产木乃伊率，图3b示出母猪产弱仔率，在试验过程中，实验组木乃伊率为2.96％，对照组为4.10％，实验组低于对照组；实验组弱仔率4.39％，对照组为5.66％，实验组低于对照组。
(4)背膘检测
结果如图4a至图4c所示，其中，图4a示出母猪产前15天平均背膘，图4b示出母猪产前2天平均背膘，图4c示出仔猪断奶时母猪平均背膘，在实验组中，产前2天母猪平均背膘为15.96mm，断奶背膘为13.15mm，相比于产前，母猪产后掉膘2.81mm；在对照组中，产前2天母猪平均背膘为15.75mm，断奶背膘为12.79mm，母猪产后掉膘2.96mm。实验组比对照组多恢复膘情0.15mm，证明试验产品可缓解母猪掉膘情况，有助于母猪恢复膘情。
(5)仔猪初生体重
结果如图5a和图5b所示，其中，图5a示出2日龄仔猪平均初生重，图5b示出2日龄仔猪中弱仔平均重，仔猪出生2日龄时，实验组仔猪平均窝重为1.58kg/头，对照组仔猪平均窝重为1.54kg/头，实验组比对照组平均每头重40g。
对参试母猪的弱仔单独分析，其中实验组弱仔40头，平均体重0.94kg；对照组弱仔54头，平均体重0.77kg，可见，母猪食用益生菌及其代谢产物可增加仔猪出生重，减少弱仔数，并增加弱仔体重，即可以促进不同健康程度的仔猪生长。
(6)仔猪断奶重
实验组和对照组均为23日龄断奶，图6示出实验组和对照组断奶仔猪平均窝重结果，如图6所示，实验组仔猪断奶平均窝重为6.6kg/头；对照组仔猪断奶平均窝重6.3kg/头，实验组显著高于对照组(P＜0.05)。
(7)仔猪腹泻
图7示出试验前后仔猪腹泻平均治疗窝数，如图7所示，喂食母猪益生菌及其代谢产物的实验组仔猪平均治疗天数为9天，平均治疗窝数9窝/天；对照组治疗天数为19天，平均治疗窝数12窝/天，实验组小于对照组。试验过程中，参试仔猪粪便中均检测出轮状病毒。轮状病毒是导致上述仔猪腹泻的主要病原体之一。由该结果可知，母猪采食益生菌及其代谢产物后，其仔猪抵抗力较强，由轮状病毒引起的仔猪腹泻程度相对较低，即可提升药物对仔猪病症的治疗效价。
(8)母猪发情及淘汰统计
结果如图8a和图8b所示，其中，图8a示出母猪断奶后再发情率，图8b示出母猪断奶后无法发情，或其它原因导致母猪淘汰率，在发情率中，实验组母猪发情率(淘汰母猪不计入发情率统计)为94％，对照组为93％，实验组高于对照组，证明试验产品有助于母猪产后集中发情；在淘汰率中，实验组母猪淘汰率为0，对照组母猪为4％，实验组低于对照组。母猪淘汰有多种原因，例如残疾、体重低、生产性能差等，但主要原因是母猪不发情，该结果证明益生菌及其代谢产物有助于母猪恢复健康状态，减少淘汰率。
本申请提供的用于提高母猪生产性能的复合益生菌及其代谢产物的技术效果是协同产生的结果，主要依靠3株菌及其代谢产物相互协作实现其效果。
以上结合具体实施方式和范例性实例对本申请进行了详细说明，不过这些说明并不能理解为对本申请的限制。本领域技术人员理解，在不偏离本申请精神和范围的情况下，可以对本申请技术方案及其实施方式进行多种等价替换、修饰或改进，这些均落入本申请的范围内。本申请的保护范围以所附权利要求为准。

Claims (8)

1.一种用于提高妊娠期母猪生产性能的复合益生菌制剂，其特征在于，所述复合益生菌制剂由植物乳杆菌P-8菌粉、植物乳杆菌KT-Lp9菌粉与乳酸片球菌PA-19菌粉组成，其中，所述植物乳杆菌P-8的微生物保藏号为CGMCC No.6312，所述植物乳杆菌KT-Lp9的微生物保藏号为CGMCC No.12950；乳酸片球菌PA-19的微生物保藏号为CGMCC No.19881；其中，所述植物乳杆菌P-8菌粉、植物乳杆菌KT-Lp9菌粉与所述乳酸片球菌PA-19菌粉的重量比为植物乳杆菌P-8菌粉的重量:植物乳杆菌KT-Lp9菌粉的重量:所述乳酸片球菌PA-19菌粉的重量=（1~3）:（1~3）:（1~3）。
2.根据权利要求1所述的复合益生菌制剂，其特征在于，所述植物乳杆菌P-8菌粉、植物乳杆菌KT-Lp9菌粉与所述乳酸片球菌PA-19菌粉的重量比为植物乳杆菌P-8菌粉的重量:植物乳杆菌KT-Lp9菌粉的重量:所述乳酸片球菌PA-19菌粉的重量=2:2:1。
3.根据权利要求1所述的复合益生菌制剂，其特征在于，基于所述复合益生菌制剂的总重量，所述复合益生菌制剂中三株菌的活菌数量总和≥1.0×107CFU/g。
4.一种制备权利要求1至2任一项所述的复合益生菌制剂的方法，其特征在于，所述方法包括：
步骤1，分别制备植物乳杆菌P-8菌粉、植物乳杆菌KT-Lp9菌粉和乳酸片球菌PA-19菌粉；
步骤2，将步骤1制备所得三种菌粉进行复配。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤1包括：
步骤1-1，分别将所述3株益生菌单独进行高密度发酵；
步骤1-2，向经离心后的植物乳杆菌P-8菌剂、植物乳杆菌KT-Lp9菌剂、乳酸片球菌PA-19菌剂中分别添加保护剂，混匀获得菌悬液，将所述菌悬液经喷雾干燥，分别得到植物乳杆菌P-8菌粉、植物乳杆菌KT-Lp9菌粉、乳酸片球菌PA-19菌粉。
6.权利要求1至3任一项所述复合益生菌制剂用于制备妊娠期母猪饲料添加剂的用途。
7.权利要求1至3任一项所述复合益生菌制剂用于制备提高妊娠期母猪生产性能、降低妊娠期母猪便秘发病率药物的用途。
8.根据权利要求6或7所述的用途，其特征在于，基于每头猪基础日粮的总重量，所述复合益生菌制剂的添加量为3~5kg/吨。
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