CN114689745A - 郁金或莪术的指纹图谱构建方法及其鉴别方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种郁金或莪术的指纹图谱构建方法，包括如下步骤：取莪术烯醇对照品，制备对照品溶液；取郁金与莪术药材粉末，分别制备郁金供试品溶液或莪术供试品溶液；将郁金或莪术供试品溶液，以及对照品溶液分别进行超高效液相色谱分析；超高效液相色谱分析的条件包括：流动相A为乙腈与甲醇的混合溶液，流动相B为磷酸水溶液；采用梯度洗脱方式；梯度洗脱方式为：0min～16min，流动相A的体积百分数为15％；16min～46min，流动相A的体积百分数由15％变化至30％；46min～75min，流动相A的体积百分数由30％变化至73％；75min～80min，流动相A的体积百分数由73％变化至100％。

Description

郁金或莪术的指纹图谱构建方法及其鉴别方法

技术领域

本发明涉及化学药与中药成分研究技术领域，特别是涉及一种郁金或莪术的指纹图谱构建方法及其鉴别方法。

背景技术

郁金与莪术均来源于姜科植物，为同一植物的不同药用部位，前者药用部位为块根，后者药用部位为根茎，均主产于广西、云南、四川、广东、福建、浙江等地，为常用中药，在临床上应用广泛。

中国药典2020年版记载郁金为姜科植物温郁金Curcuma wenyujin Y.H.Chen etC.Ling、姜黄Curcuma longa L.、广西莪术Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang或蓬莪术Curcuma phaeocaulis Val.的干燥块根。其始载于唐《药性论》，列为中品。郁金的原植物在明末清初之前均为姜黄C.longa L.的根茎，之后其药用部位转变为块根。郁金味辛、苦，性寒。归肝、心、肺经，有活血止痛、行气解郁、清心凉血、利胆退黄之功，用于胸胁刺痛、胸痹心痛、经闭痛经、乳房胀痛、热病神昏、癫痫发狂、血热吐衄、黄疸尿赤。

莪术为姜科植物蓬莪术Curcuma phaeocaulis Val.、广西莪术Curcumakwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang或温郁金Curcuma wenyujin Y.H.Chen et C.Ling的干燥根茎。莪术首载于《雷公炮炙论》，原名蓬莪茂，《新修本草》称“莲药”，侯宁极《药谱》名为蓬莪术，至《医学人门·本草》始称“莪术”。莪术味辛、苦，性温，归肝、脾经，有行气破血、消积止痛之功，用于癥瘕痞块、瘀血经闭、胸痹心痛、食积胀痛。

郁金和莪术在药典中分属两个品种，郁金含有丰富的化学物质，主要包括挥发油、姜黄素类成分；莪术主要含挥发油和二苯基庚烷类成分。传统的对二者的指纹图谱研究主要针对其挥发油成分，通过GC-MS建立挥发油指纹图谱，但依然是同一品种不同基原之间的对比与鉴别。中国药典2020年版一部对郁金和莪术的鉴别仅局限于性状或显微观察，其主观性强，容易误判。

发明内容

基于此，本发明提供了一种郁金或莪术的指纹图谱构建方法，其具有操作简单、图谱信息丰富、特征性强并且重现性好的优势，能够为鉴别同科属植物不同品种的郁金与莪术提供依据。

本发明通过如下技术方案实现。

一种郁金或莪术的指纹图谱构建方法，包括如下步骤：

取莪术烯醇对照品，制备对照品溶液；

取郁金药材粉末或莪术药材粉末，分别制备郁金供试品溶液或莪术供试品溶液；

将所述郁金供试品溶液或所述莪术供试品溶液，以及所述对照品溶液分别进行超高效液相色谱分析；

超高效液相色谱分析的条件包括：流动相A为乙腈与甲醇的混合溶液，流动相B为磷酸水溶液；采用梯度洗脱方式；所述梯度洗脱方式为：0min～16min，流动相A的体积百分数为15％；16min～46min，流动相A的体积百分数由15％变化至30％；46min～75min，流动相A的体积百分数由30％变化至73％；75min～80min，流动相A的体积百分数由73％变化至100％。

在其中一个实施例中，所述磷酸水溶液中，磷酸的体积分数为0.05％～0.20％。

在其中一个实施例中，所述流动相A中，乙腈与甲醇的体积比为(1.5～2.5):1。

在其中一个实施例中，超高效液相色谱分析的条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；柱温为25℃～35℃；流速为0.30mL/min～0.34mL/min；波长为262nm。

在其中一个实施例中，制备对照品溶液包括如下步骤：

将所述莪术烯醇对照品与甲醇混合。

在其中一个实施例中，分别制备郁金供试品溶液或莪术供试品溶液包括如下步骤：

将郁金药材粉末过筛，与70％甲醇混合，加热回流提取，然后过滤，取滤液；或

将莪术药材粉末过筛，与70％甲醇混合，超声提取，然后过滤，取滤液。

在其中一个实施例中，加热回流提取的条件包括：温度为70℃～100℃；时间为15min～45min。

在其中一个实施例中，超声提取的条件包括：功率为200W～250W；时间为15min～45min。

在其中一个实施例中，所述郁金的药材来源包括蓬莪术、姜黄、温郁金与广西莪术中的一种或多种；

所述莪术的药材来源包括蓬莪术、温郁金与广西莪术中的一种或多种。

本发明还提供一种不同基原的郁金和莪术的鉴别方法，包括如下步骤：

取待测物，进行超高效液相色谱分析，将获得的所述待测物的图谱与如上所述的郁金或莪术的指纹图谱构建方法所获得的图谱进行比较；

超高效液相色谱分析的条件包括：流动相A为乙腈与甲醇的混合溶液，流动相B为磷酸水溶液；采用梯度洗脱方式；所述梯度洗脱方式为：0min～16min，流动相A的体积百分数为15％；16min～46min，流动相A的体积百分数由15％变化至30％；46min～75min，流动相A的体积百分数由30％变化至73％；75min～80min，流动相A的体积百分数由73％变化至100％；色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；柱温为25℃～35℃；流速为0.30mL/min～0.34mL/min；波长为262nm。

在其中一个实施例中，所述待测物为郁金或莪术；

其中，所述郁金的药材来源为蓬莪术、姜黄、温郁金或广西莪术；

所述莪术的药材来源为蓬莪术、温郁金或广西莪术。

与现有技术相比较，本发明所述的郁金或莪术的指纹图谱构建方法具有如下有益效果：

本发明通过采用UPLC建立郁金或莪术的指纹图谱，并限定流动相梯度洗脱程序，从而达到指纹图谱信息丰富、特征性强的目的，同时可用于鉴别同科属不同品种的郁金和莪术，为郁金和莪术的质量标准评价提供依据。

进一步地，本发明所述的郁金或莪术的指纹图谱构建方法操作简单并且重现性好。

附图说明

图1为本发明提供的郁金(广西莪术)不同提取溶剂获得的指纹图谱；

图2为本发明提供的郁金(广西莪术)不同提取方式获得的指纹图谱；

图3为本发明提供的郁金(广西莪术)不同提取时间获得的指纹图谱；

图4为本发明提供的郁金(广西莪术)指纹图谱共有模式图；

图5为本发明提供的郁金(广西莪术)指纹图谱；其中，8代表莪术烯醇；

图6为本发明提供的郁金(温郁金)指纹图谱共有模式图；

图7为本发明提供的郁金(温郁金)指纹图谱；其中，7代表莪术烯醇；

图8为本发明提供的郁金(蓬莪术)指纹图谱；其中，9代表莪术烯醇；

图9为本发明提供的郁金(姜黄)指纹图谱；

图10为本发明提供的莪术(广西莪术)指纹图谱共有模式图；

图11为本发明提供的莪术(广西莪术)指纹图谱；其中，11代表莪术烯醇；

图12为本发明提供的莪术(温郁金)指纹图谱共有模式图；

图13为本发明提供的莪术(温郁金)指纹图谱；其中，9代表莪术烯醇；

图14为本发明提供的莪术(蓬莪术)指纹图谱共有模式图；

图15为本发明提供的莪术(蓬莪术)指纹图谱；其中，9代表莪术烯醇；

图16为本发明提供的不同基原郁金指纹图谱对比图；其中，A代表广西莪术，B代表温郁金，C代表蓬莪术，D代表姜黄，E代表莪术烯醇对照品；

图17为本发明提供的不同基原莪术指纹图谱对比图；其中，A代表广西莪术，B代表蓬莪术，C代表温郁金，D代表莪术烯醇对照品；

图18为本发明提供的郁金(广西莪术)与莪术(广西莪术)指纹图谱对比图；其中，A代表郁金(广西莪术)，B代表莪术(广西莪术)；

图19为本发明提供的郁金(温郁金)与莪术(温郁金)指纹图谱对比图；其中，A代表郁金(温郁金)，B代表莪术(温郁金)；

图20为本发明提供的郁金(蓬莪术)与莪术(蓬莪术)指纹图谱对比图；其中，A代表郁金(蓬莪术)，B代表莪术(蓬莪术)；

图21为本发明提供的优化梯度1下的郁金(广西莪术)指纹图谱；

图22为本发明提供的优化梯度2下的郁金(广西莪术)指纹图谱；

图23为本发明提供的优化梯度3下的郁金(广西莪术)指纹图谱；

图24为本发明提供的优化梯度4下的郁金(广西莪术)指纹图谱；

图25为本发明提供的优化梯度5下的郁金(广西莪术)指纹图谱；

图26为本发明提供的优化梯度6下的郁金(广西莪术)指纹图谱；

图27为本发明提供的不同流速下的郁金(广西莪术)指纹图谱。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施方式。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本发明提供了一种郁金或莪术的指纹图谱构建方法，包括如下步骤：

取莪术烯醇对照品，制备对照品溶液；

取郁金药材粉末或莪术药材粉末，分别制备郁金供试品溶液或莪术供试品溶液；

将郁金供试品溶液或莪术供试品溶液，以及对照品溶液分别进行超高效液相色谱分析；

超高效液相色谱分析的条件包括：流动相A为乙腈与甲醇的混合溶液，流动相B为磷酸水溶液；采用梯度洗脱方式；所述梯度洗脱方式为：0min～16min，流动相A的体积百分数为15％；16min～46min，流动相A的体积百分数由15％变化至30％；46min～75min，流动相A的体积百分数由30％变化至73％；75min～80min，流动相A的体积百分数由73％变化至100％。

在一个具体的示例中，磷酸水溶液中，磷酸的体积分数为0.05％～0.20％。

可以理解地，在本发明中，磷酸水溶液中，磷酸的体积分数包括但不限于0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.10％、0.11％、0.12％、0.13％、0.14％、0.15％、0.16％、0.17％、0.18％、0.19％、0.20％。

在一个具体的示例中，流动相A中，乙腈与甲醇的体积比为(1.5～2.5):1。

可以理解地，在本发明中，流动相A中，乙腈与甲醇的体积比包括但不限于1.5:1、1.6:1、1.7:1、1.8:1、1.9:1、2.0:1、2.1:1、2.2:1、2.3:1、2.4:1、2.5:1。

在一个具体的示例中，超高效液相色谱分析的条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；柱温为25℃～35℃；流速为0.30mL/min～0.34mL/min；波长为262nm。

可以理解地，在本发明中，柱温包括但不限于25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃。

可以理解地，在本发明中，流速包括但不限于0.30mL/min、0.31mL/min、0.32mL/min、0.33mL/min与0.34mL/min。

在一个具体的示例中，制备对照品溶液包括如下步骤：

将莪术烯醇对照品与甲醇混合。

在一个具体的示例中，分别制备郁金供试品溶液或莪术供试品溶液包括如下步骤：

将郁金药材粉末过筛，与70％甲醇混合，加热回流提取，然后过滤，取滤液；或

将莪术药材粉末过筛，与70％甲醇混合，超声提取，然后过滤，取滤液。

在一个具体的示例中，加热回流提取的条件包括：温度为70℃～100℃；时间为15min～45min。

在一个具体的示例中，超声提取的条件包括：功率为200W～250W；时间为15min～45min。

可以理解地，在发明中，加热回流提取与超声提取的时间包括但不限于15min、20min、25min、26min、27min、28min、29min、30min、31min、32min、33min、34min、35min、40min、45min。

在一个具体的示例中，郁金的药材来源包括蓬莪术、姜黄、温郁金与广西莪术中的一种或多种；

莪术的药材来源包括蓬莪术、温郁金与广西莪术中的一种或多种。

本发明还提供一种不同基原的郁金和莪术的鉴别方法，包括如下步骤：

取待测物，进行超高效液相色谱分析，将获得的待测物的图谱与上述郁金或莪术的指纹图谱构建方法所获得的图谱进行比较；

超高效液相色谱分析的条件包括：流动相A为乙腈与甲醇的混合溶液，流动相B为磷酸水溶液；采用梯度洗脱方式；所述梯度洗脱方式为：0min～16min，流动相A的体积百分数为15％；16min～46min，流动相A的体积百分数由15％变化至30％；46min～75min，流动相A的体积百分数由30％变化至73％；75min～80min，流动相A的体积百分数由73％变化至100％；色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；柱温为25℃～35℃；流速为0.30mL/min～0.34mL/min；波长为262nm。

可以理解地，在本发明中，柱温包括但不限于25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃。

可以理解地，在本发明中，流速包括但不限于0.30mL/min、0.31mL/min、0.32mL/min、0.33mL/min与0.34mL/min。

在一个具体的示例中，待测物为郁金或莪术；

其中，郁金的药材来源为蓬莪术、姜黄、温郁金或广西莪术；

莪术的药材来源为蓬莪术、温郁金或广西莪术。

以下结合具体实施例对本发明的郁金或莪术的指纹图谱构建方法与鉴别方法做进一步详细的说明。以下实施例中所用的原料，如无特别说明，均为市售产品。

实施例1

本实施例提供一种郁金与莪术的指纹图谱构建方法，具体如下：

一、仪器与试剂

1.1仪器

Thermo超高效液相色谱仪(Vanquish，赛默飞世尔科技(中国)有限公司)，WatersACQUITY HSS T3 C18色谱柱(2.1mm×150mm，1.8μm)，万分之一天平(ME204E，梅特勒-托利多公司)，百万分之一天平(XP26，梅特勒-托利多公司)，电热恒温水浴锅(HWS-28，上海一恒科技有限公司)，数控超声波清洗器(KQ-500DE，昆山市超声仪器有限公司)；超纯水系统(Milli-Q Direct，默克股份有限公司)。

1.2试剂

甲醇(西陇科学股份有限公司)为分析纯；磷酸(天津市科密欧化学试剂有限公司)、乙腈(默克股份有限公司)、甲醇(默克股份有限公司)为色谱级，水为超纯水(实验室自制)。

1.3试药

莪术烯醇(批号：wqk18061202，含量99.86％，四川维克奇生物科技有限公司)。

中国药典2020年版一部规定郁金为姜科植物温郁金Curcuma wenyujinY.H.Chenet C.Ling、姜黄Curcuma longa L.、广西莪术Curcuma kwangsiensis S.G.Lee etC.F.Liang或蓬莪术Curcuma phaeocaulis Val.的干燥块根。本次研究所用药材均经广东一方制药有限公司质量中心鉴定。具体信息如表1所示。

表1郁金药材产地信息表

中国药典2020年版一部规定莪术为姜科植物蓬莪术Curcuma phaeocaulis Val.、广西莪术Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang或温郁金Curcuma wenyujinY.H.Chen et C.Ling的干燥根茎。本次研究所用药材均经广东一方制药有限公司质量中心鉴定。具体信息如表2所示。

表2莪术药材产地信息表

二、实验过程

1、参照物溶液的制备

精密称取莪术烯醇对照品2.062mg，置25ml量瓶中，加甲醇制成每1ml含莪术烯醇41.1823μg的溶液，作为对照品参照物溶液。

2、色谱条件

以Waters ACQUITY HSS T3(150mm×2.1mm，1.8μm)为色谱柱；以乙腈-甲醇(2:1)为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，按表3中的规定进行梯度洗脱，流速为每分钟0.32ml；柱温为30℃；检测波长为262nm；进样量为1μl。

表3梯度洗脱表

3、供试品溶液的制备

(1)提取溶剂考察

本次实验考察了不同提取溶剂对郁金(广西莪术)药材指纹图谱的影响，选取乙醇、70％乙醇、稀乙醇、甲醇、70％甲醇、50％甲醇作为提取溶剂，通过观察初步选定的10个特征峰的峰型和分离度，并计算10个特征峰的“总峰面积/称样量”值来比较不同提取溶剂对郁金(广西莪术)药材指纹图谱的影响。

取郁金(广西莪术)药材粉末(过四号筛，批号：YJ6189)适量，取约2.0g，平行6组，每组2份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入乙醇、70％乙醇、稀乙醇、甲醇、70％甲醇、50％甲醇各25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用相应溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。郁金(广西莪术)药材指纹图谱不同提取溶剂考察结果见表4与图1：通过对比6种不同提取溶剂的指纹图谱可发现，除甲醇、乙醇外，其余溶剂提取效率差异较小，其中70％甲醇作为提取溶剂时“总峰面积/称样量”最大，故选取70％甲醇作为提取溶剂。

表4郁金(广西莪术)药材指纹图谱不同提取溶剂考察结果表

(2)提取方式考察

本次实验考察了不同提取方式对郁金(广西莪术)药材指纹图谱的影响，选取超声处理、加热回流作为提取方式，通过观察初步选定的10个特征峰的峰型和分离度，并计算10个特征峰的“总峰面积/称样量”来比较不同提取方式对郁金(广西莪术)药材指纹图谱的影响。

取郁金(广西莪术)药材粉末(过四号筛，批号：YJ6189)适量，取约2.0g，平行2组，每组2份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，分别超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟、加热回流(加热温度为90℃)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。郁金(广西莪术)药材指纹图谱不同提取方式考察结果见表5与图2：通过对比超声处理和加热回流2种不同提取方式的指纹图谱可发现，加热回流提取效率比超声处理提取高，因此选择加热回流作为提取方式。

表5郁金(广西莪术)药材指纹图谱不同提取方式考察结果表

(3)提取时间考察

本次实验考察了不同提取时间对郁金(广西莪术)药材指纹图谱的影响，考察15分钟、30分钟和45分钟三个不同加热回流提取时间，通过观察初步选定的10个特征峰的峰型和分离度，并计算10个特征峰的“总峰面积/称样量”来比较不同的提取时间对郁金(广西莪术)药材指纹图谱的影响。

取郁金(广西莪术)药材粉末(过四号筛，批号：YJ6189)适量，取约2.0g，平行3组，每组2份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，分别加热回流15分钟、30分钟、45分钟，取出，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。郁金(广西莪术)药材指纹图谱不同提取时间考察结果见表6与图3：通过对比不同加热回流提取时间对郁金(广西莪术)药材指纹图谱影响发现，不同的加热回流提取时间对郁金(广西莪术)药材指纹图谱影响并不大，选择加热回流时间为30分钟。

表6郁金(广西莪术)药材指纹图谱不同提取时间考察结果表

(4)供试品溶液的制备方法的确定

根据上述实验考察结果，郁金与莪术药材指纹图谱样品前处理方法可确定为：

取郁金药材粉末(过四号筛)约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，取出，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

取莪术药材粉末(过四号筛)约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

4、指纹图谱测定

取郁金药材和莪术药材，按上述供试品制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，得到郁金指纹图谱和莪术指纹图谱，使用《中药色谱指纹图谱相似度评价软件》，按平均数法(或中位数法)生成对照图谱，建立郁金指纹图谱和莪术指纹图谱，如图4～图15，并进行共有峰标识。

5、色谱条件优化

取郁金(广西莪术)药材粉末(过四号筛，批号：YJ6189)适量，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，取出，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

选择Waters ACQUITY HSS T3 C18色谱柱(2.1mm×150mm，1.8μm)，以乙腈-甲醇(2:1)为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，流速为0.3ml/min，依次按下表7中洗脱梯度进样测定，进样量为1μl；检测波长为262nm，所获得的指纹图谱色谱图见图20～图26。

表7郁金(广西莪术)药材指纹图谱梯度洗脱表

实验结果显示：比较6个不同的梯度条件发现，梯度6所得色谱图分布较均匀，各色谱峰峰形良好，基线平稳，选择为郁金(广西莪术)指纹图谱的分析条件。

图27为不同流速对各色谱峰的影响，由图可知，使用流速为0.32ml/min时，各色谱峰分离度较好，且在±0.02ml/min分离度和峰型均较好，表明在0.32ml/min流速条件下耐用性较好。因此流速选择为0.32ml/min。

实施例2

本实施例提供一种不同基原的郁金与莪术的鉴别方法，具体如下：

(1)不同基原郁金对比：由图16可知，a区中的特征峰为郁金(蓬莪术)指纹图谱中的特征峰(图8中峰6，以莪术烯醇峰为参照峰相对保留时间为0.75)，而在其他基原样品中没有检出该特征峰，因此可以通过该特征峰来区别郁金(蓬莪术)与其他基原样品；b区中的特征峰为莪术烯醇峰，在郁金(姜黄)中没有检出该特征峰，可通过该特征峰来区别郁金(姜黄)与其他特征峰；在c区中的特征峰为郁金(蓬莪术)与郁金(温郁金)的共有特征峰(见图8，该峰在蓬莪术指纹图谱中为峰12；见图6，该峰在温郁金指纹图谱中为峰8；以莪术烯醇峰为参照峰相对保留时间为1.10)，若在该区域出现特征峰且在以莪术烯醇峰为参照峰相对保留时间为0.75(即a区)没有检出色谱峰，则该基原为郁金(温郁金)；若在以莪术烯醇峰为参照峰相对保留时间为0.75(即a区)和1.10(即c区)没有检出色谱峰，则该基原为郁金(广西莪术)。

(2)不同基原莪术对比：结合图17中a区与图12可知，莪术(温郁金)指纹图谱中与莪术烯醇色谱峰相对应的峰较前一个特征峰(相对保留时间为0.98)响应值较少，而基原为广西莪术和蓬莪术指纹图谱中与莪术烯醇色谱峰相应的峰较前一个特征峰(相对保留时间为0.98)响应值大，即相对峰面积均大于1.00；因此，可以判断以莪术烯醇为参照峰，相对保留时间为0.98的色谱峰的相对峰面积小于1.00为郁金(温郁金)。由图17中b区可知，广西莪术指纹图谱色谱峰在该区域响应值较低，而蓬莪术指纹图谱色谱峰在该区域响应值较高，该区域色谱峰以莪术烯醇色谱峰为参照峰的相对保留时间为1.09，因此可以通过该区域进行判断，结合该特征峰的相对峰面积(见表8)，广西莪术在相对保留时间为1.09处色谱峰相对峰面积均小于0.10，而蓬莪术则均大于0.10，因此，若以莪术烯醇色谱峰为参照峰的相对保留时间为1.09的色谱峰相对峰面积小于0.10，则为广西莪术，反之则为蓬莪术。

表8莪术相对保留时间为1.09广西莪术与蓬莪术各批次的相对峰面积

(3)郁金与莪术基原为广西莪术对比：由图18中a、b区可知，郁金(广西莪术)与莪术(广西莪术)存在明显区别，在a区中，莪术(广西莪术)检出3个特征峰(见图11)，而郁金(广西莪术)则检出1个特征峰(见图5)；在b区中，莪术(广西莪术)能检出特征峰，而郁金(广西莪术)则没有检出特征峰，因此，可以同个这2个区域区别郁金(广西莪术)与莪术(广西莪术)。

(4)郁金与莪术基原为温郁金对比：由图19中a、b区可知，郁金(温郁金)与莪术(温郁金)存在明显区别，在a、b区中，郁金(温郁金)明显检出特征峰，且响应值较大(见图7)，而莪术(温郁金)则未检出特征峰(见图13)；因此，可以同个这2个区域区别郁金(温郁金)与莪术(温郁金)。

(5)郁金与莪术基原为蓬莪术对比：由图20中a、b区可知，郁金(蓬莪术)与莪术(蓬莪术)存在明显区别，在a、b区中，郁金(蓬莪术)明显检出特征峰，且响应值较大(见图8)，而莪术(温郁金)则未检出特征峰(见图15)；因此，可以同个这2个区域区别郁金(蓬莪术)与莪术(蓬莪术)。

注：相对保留时间允许偏差为±5％。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。

Claims (11)

1.一种郁金或莪术的指纹图谱构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

取莪术烯醇对照品，制备对照品溶液；

取郁金药材粉末或莪术药材粉末，分别制备郁金供试品溶液或莪术供试品溶液；

将所述郁金供试品溶液或所述莪术供试品溶液，以及所述对照品溶液分别进行超高效液相色谱分析；

超高效液相色谱分析的条件包括：流动相A为乙腈与甲醇的混合溶液，流动相B为磷酸水溶液；采用梯度洗脱方式；所述梯度洗脱方式为：0min～16min，流动相A的体积百分数为15％；16min～46min，流动相A的体积百分数由15％变化至30％；46min～75min，流动相A的体积百分数由30％变化至73％；75min～80min，流动相A的体积百分数由73％变化至100％。

2.根据权利要求1所述的郁金或莪术的指纹图谱构建方法，其特征在于，所述磷酸水溶液中，磷酸的体积分数为0.05％～0.20％。

3.根据权利要求1所述的郁金或莪术的指纹图谱构建方法，其特征在于，所述流动相A中，乙腈与甲醇的体积比为(1.5～2.5):1。

4.根据权利要求1所述的郁金或莪术的指纹图谱构建方法，其特征在于，超高效液相色谱分析的条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；柱温为25℃～35℃；流速为0.30mL/min～0.34mL/min；波长为262nm。

5.根据权利要求1所述的郁金或莪术的指纹图谱构建方法，其特征在于，制备对照品溶液包括如下步骤：

将所述莪术烯醇对照品与甲醇混合。

6.根据权利要求1所述的郁金或莪术的指纹图谱构建方法，其特征在于，分别制备郁金供试品溶液或莪术供试品溶液包括如下步骤：

将郁金药材粉末过筛，与70％甲醇混合，加热回流提取，然后过滤，取滤液；或

将莪术药材粉末过筛，与70％甲醇混合，超声提取，然后过滤，取滤液。

7.根据权利要求6所述的郁金或莪术的指纹图谱构建方法，其特征在于，加热回流提取的条件包括：温度为70℃～100℃；时间为15min～45min。

8.根据权利要求6所述的郁金或莪术的指纹图谱构建方法，其特征在于，超声提取的条件包括：功率为200W～250W；时间为15min～45min。

9.根据权利要求1～8任一项所述的郁金或莪术的指纹图谱构建方法，其特征在于，所述郁金的药材来源包括蓬莪术、姜黄、温郁金与广西莪术中的一种或多种；

所述莪术的药材来源包括蓬莪术、温郁金与广西莪术中的一种或多种。

10.一种不同基原的郁金和莪术的鉴别方法，其特征在于，包括如下步骤：

取待测物，进行超高效液相色谱分析，将获得的所述待测物的图谱与权利要求1～9任一项所述的郁金或莪术的指纹图谱构建方法所获得的图谱进行比较；

超高效液相色谱分析的条件包括：流动相A为乙腈与甲醇的混合溶液，流动相B为磷酸水溶液；采用梯度洗脱方式；所述梯度洗脱方式为：0min～16min，流动相A的体积百分数为15％；16min～46min，流动相A的体积百分数由15％变化至30％；46min～75min，流动相A的体积百分数由30％变化至73％；75min～80min，流动相A的体积百分数由73％变化至100％；色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；柱温为25℃～35℃；流速为0.30mL/min～0.34mL/min；波长为262nm。

11.根据权利要求10所述的不同基原的郁金和莪术的鉴别方法，其特征在于，所述待测物为郁金或莪术；

其中，所述郁金的药材来源为蓬莪术、姜黄、温郁金或广西莪术；

所述莪术的药材来源为蓬莪术、温郁金或广西莪术。

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