CN1146458A - 心血管活性多肽以及它们的合成和在医学中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及通式(1)和通式(2)的多肽，AA-Arg-Pro-Ala-Lys-OH (1)AA-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-AA，-OH (2)，其中AA和AA′为L构型的氨基酸，涉及它们的合成和在医学方面的应用，例如作为扩血管，降血压和抗血栓药物使用，涉及以这类多肽作为活性成分的药物组合物。离体和整体动物实验表明，本发明的这类多肽具有靶向作用，因而具有作用强，选择性高，毒副作用小等优点，是优秀的抗血栓剂。

Description

心血管活性多肽以及它们的合成和在医学中的应用
本发明涉及一系列具有靶向作用的心血管活性多肽以及它们的化学合成和在医学方面的应用。
心血管疾病对人类健康有重要影响。在心血管疾病中有许多严重病症与血管栓塞有关。例如，众所周知的中风，脑卒中，心肌梗死，半身不遂等都源于血管栓塞。八十年代治疗血栓性疾病的手段都存在不同程度的不足，例如血管成型术、激光再通术，以及以尿激酶、tPA、链激酶为代表的药物溶栓等手段除再栓塞倾向大和费用高之外，外源性药物(例如tPA)还可以引起免疫源性反应。寻找新型的多肽抗血栓药物具有重要价值。
P6A是纤维蛋白降解产物，在电刺激造成的狗冠脉血栓模型上可以恢复冠脉血流(Metha et al.，J.Cadiovasc，Pharmacol.，1991，18，231)，申请者采用化学方法合成的P6A(赵明，彭师奇等，化学通报，1990，12，31)的生物学检测表明，P6A是一种有前途的抗血栓药物(唐朝枢，赵明，彭师奇等，北京医科大学学报，1990，22，416)。
血小板活化在血栓形成中有重要作用，当纤维蛋白与血小板表面GPIIb/IIIa受体结合时，纤维蛋白中的RGD序列是GPIIb/IIIa受体识别的关键序列。含RGD多肽具有明显的抗血小板聚集和抗血栓作用(Andrieax A et al.，J，Biol.Chem.，1988，264，9258；Parker R.I.，Blood.，1989，74，1226)。申请者采用化学方法合成的RGDS的生物学检测表明，RGDS不仅具有明确的抗血小板聚集作用(赵明，彭师奇等，J.Chines Pharm.，1993，2，18)还具有明确的靶向作用(唐朝枢，赵明，彭师奇，北京医科大学学报，1994，26，174)。
本发明的根本目标是把P6A及类似物与含RGD四肽缀合，提供一系列具有靶向作用的心血管活性多肽，它们将显示作用强，选择性高，毒副作用小等特征。
申请者以P6A为先导化合物，对P6A的N端氨基酸进行替换，实施结构修饰，合成了一系列通式(1)的多肽
AA-Arg-Pro-Ala-Lys-OH    (1)其中AA为L构型的氨基酸，例如为Ala，Gln，Glu，Gly，Asp，Arg，Asn，Lys以及Tyr-Ala。本发明的这类多肽显示很强的舒血管活性，其中有些化合物优于P6A，例如Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的舒血管活性明显比P6A强。
本发明这类多肽显示很强的降血压和抗血栓活性，其中有些化合物优于P6A，例如Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的降压作用和抗血栓作用明显强于P6A。
本发明在RGDS的基础上进一步合成了RGDV和RGDF，比较了RGDS，RGDV和RGDF的抗血小板聚集，舒血管和抗血栓活性。
申请者根据脂质体包裹尿激酶用RGDS修饰之后具有向血栓形成部位选择性分布的特点，提出含RGD四肽具有靶向作用。
本发明根据P6A及类似物的抗血栓作用及含RGD四肽的靶向特点，设计并合成了一系列通式(2)的杂交肽：
AA-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-AA′    (2)其中AA为L构型的氨基酸，例如为Ala，Gln；AA′为L构型的氨基酸，例如为Ser，Val，Phe。
本发明的这类杂交肽显示明确的抗血小板聚集活性，舒血管活性以及抗血栓活性。离体和整体动物实验表明，本发明的化合物具有作用强，选择性高，毒副作用小等优点，是优秀的抗血栓剂。
通式(1)和通式(2)的多肽可以具体化为：
Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH    (3)
Lys-Arg-Pre-Ala-Lys-OH    (4)
Arg-Arg-Pro-Ala-Lys-OH    (5)
Asp-Arg-Pro-Ala-Lys-OH    (6)
Asn-Arg-Pro-Ala-Lys-OH    (7)
Gla-Arg-Pro-Ala-Lys-OH    (8)
Gla-Arg-Pro-Ala-Lys-OH    (9)
Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-OH    (10)
Tyr-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH(11)
Arg-Gly-Asp-Ser-OH         (12)
Arg-Gly-Asp-Val-OH                        (13)
Arg-Gly-Asp-Phe-OH                        (14)
Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Ser-OH    (15)
Gla-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Ser-OH   (16)
Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Val-OH    (17)
Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Val-OH    (18)
Ala-Arg-Pro-Ala-Lya-Arg-Gly-Asp-Phe-OH    (19)
Gla-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Phe-OH    (20)
上述多肽是以化合物3和12，13，14为先导化合物制备的一系列类似物。这类多肽的特点是具有靶向作用，因而作用强，选择性高，毒副作用小，与临床应用的尿激酶或tPA相比，这类心血管活性多肽结构简单，易于化学合成，便于纯化，价格低康，无免疫源性反应，具有良好的应用前景。
为了全面解释本发明，下面给出一系列实施例，这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。制备实施例1，Boc-Ala-Lys(ClZ)·OCH3：
47mg(0.25mmol)Boc-Ala-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入31mg(0.27mmol)N-羟基丁二酰亚胺和56mg(0.27mmol)DCC，反应混合物在冰箱中放置24小时，滤除DCU，滤液在室温下减压浓缩，残留物用石油醚析晶，得对应的活泼酯。
91mg(0.25mmol)HCl·Lys(ClZ)·OCH3，27mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面得到的活泼酯中间体，室温反应24小时，TLC显示原料点消失。37℃下减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液，饱和氯化钠水溶液，饱和柠檬酸水溶液，饱和氯化钠水溶液洗涤，分出有机层，并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液37℃下减压浓缩(上述操作在下文中统称常规处理)，得标题化合物120mg(96％)，mp78-79℃，[α]D 20-6(c0.2，CHCl3)，FAB-MS(m/e)501[M＋H]+。制备实施例2，HCl·Ala-Lys(ClZ)·OCH3：
125mg(0.25mmol)Boc-Ala-Lya(ClZ)·OCH3与适量6N无水氯化氢-乙酸乙酯溶解，室温搅拌4小时，TLC显示原料点消失。反应混合物在室温下减压浓缩，残留物用乙酸乙酯溶解并室温下浓缩，如此反复数次，直至除净游离的氯化氢(上述操作在下文中统称常规处理)。残留物用无水乙醚析晶，得标题化合物，直接用于下步反应。制备实施例3，Boc-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3：
22mg(0.25mmol)Boc-Pro-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入31mg(0.27mmol)N-羟基丁二酰亚胺和56mg(0.27mmol)DCC，反应混合物置在冰箱中放置24小时，滤除DCU，滤液在室温下减压浓缩，残留物用石油醚析晶，得对应的活泼酯。
109mg(0.25mmol)HCl·Ala-Lys(ClZ)·OCH3，27mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面所得到的活泼酯中间体，室温反应26小时，TLC显示原料点消失。按常规处理，得标题化合物135mg(90％)，mp89-91℃，[α]D 20-8(c0.2，CHCl3)，FAB-MS(m/e)：598 [M+H]+。制备实施例4，HCl·Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3：
150mg(0.25mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3与适量6N无水氯化氢-乙酸乙酯混溶，室温搅拌4.5小时，TLC显示原料点消失。反应混合物按常规方法处理，残留物用无水乙醚析晶，直接用于下步反应。制备实施例5，Boc-Arg(Tos)-Pre-Ala-Lys(ClZ)·OCH3：
107mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入31mg(0.27mmol)N-羟基丁二酰亚胺和27mg(0.27mmol)DCC，反应混合物置冰箱中放置24小时，滤除DCU，滤液在室温下减压浓缩，残留物用石油醚析晶，得对应的活泼酯。
134mg(0.25mmol)HCl·Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，27mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面所得到的活泼酯中间体，室温反应30小时，TLC显示原料点消失。按常规处理，得标题化合物198mg(87％)，mp96-99℃，[α]D 20-7(c0.2，CHCl3)，FAB-MS (m/e)908[M+H]+。制备实施例6，HCl·Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3：
227mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3与适量6N无水氯化氢-乙酸乙酯混合，室温搅拌6小时，TLC显示原料点消失。反应混合物按常规处理，残留物用无水乙醚析晶，得标题化合物，直接用于下步反应。制备实施例7，Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，Boc-Lys(ClZ)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ).OCH3，Boc-Asp(OcHex)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，Boc-Asa-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，Boc-Glu(Ochex)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，Boc-Tyr(Cl2Z)-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3的制备：
47mg(0.25mmol)Boc-Ala-OH，104mg(0.25mmol)Boc-Lys(ClZ)·OH，62mg(0.25mmol)Boc-Gln-OH，107mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-OH，79mg(0.25mmol)Boc-Asp(OcHex)-OH，82mg(0.25mmol)Boc-Gln(OcHex)-OH，58mg(0.25mmol)Boc-Asn-OH及44mg(0.25mmol)Boc-Gly-OH按活泼酯制备通法，制成对应的活泼酯。
210mg(0.25mmol)HCl·Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3分别与上述制备的活泼酯按常规接肽法反应48小时，得对应的产物，203mg(83％)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，mp70-72℃；[α]D 20-0.25(c1，CH3OH)，FAB-MS(m/e)979[M+H]+；241mg(80％)Boc-Lys(ClZ)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，mp90-92℃，[α]D 20-0.18(c 1，CH3OH)，FAB-MS(m/e)1204[M+H]+；234mg(77％)Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，mp99-102℃，[α]D 20-0.09(c1，CH3OH)，FAB-MS(m/e)1218[M+H]+；224mg(81％)Boc-Asp(ocHex)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH 3 ，mp67-69℃，[α]D 20-0.17(c 1 CH3OH)，FAB-MS(m/e)1105[M+H]+；204mg(80％)Boc-Asn-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，mp85-88℃，[α]D 20-0.21(c 1，CH3OH)，FAB-MS(m/e)1022[M+H]+；221mg(79％)Boc-Glu(OcHex)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，mp62-65℃，[α]D 20-0.19(c 1，CH3OH)，FAB-MS(m/e)1119[M＋H]+；194mg(75％)Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，mp66-69℃，[α]D 20-0.22(c1，CH3OH)，FAB-MS(m/e) 1036[M+H]+；及193mg(80％)Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，mp78-81℃，[α]D 20-0.18(c 1，CH3OH)，FAB-MS(m/e)965[M+H]+。制备实施例8，HCl·Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3：
245mg(0.25mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3与适量6N无水氯化氢-乙酸乙酯混溶，室温搅拌4.5小时，TLC显示原料点消失。反应混合物按常规方法处理，残留物用无水乙醚析晶，直接用于下步反应。制备实施例9，Boc-Tyr(Cl3Bzl)-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3：
106mg(0.25mmol) Boc-Tyr(Cl2Bzl)-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入31mg(0.27mmol)N-羟基丁二酰亚胺和56mg(0.27mmol)DCC，反应混合物置冰箱中放置24小时，滤除DCU，滤液在室温下减压浓缩，残留物用石油醚析晶，得对应的活泼酯。
229mg(0.25mmol)HCl·Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，27mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面所得到的活泼酯中间体，室温反应30小时，TLC显示原料点消失。按常规进行后处理，得标题化合物284mg(87％)。电喷雾质谱(m/e)1300[M]+。mp85-86℃，[α]D 20-20(c 1，CH3OH)。制备实施例10，Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Lys-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Arg-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Asp-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Asn-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Tyr-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH的制备：
147mg(0.15mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，181mg(0.15mmol)Boc-Lys(ClZ)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，183mg(0.15mmol)Boc-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，166mg(0.15mmol)Boc-Asp(OcHex)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OCH3，153mg(0.15mmol)Boc-Asn-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，168mg(0.15mmol)Boc-Glu(OcHex)-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，155mg(0.15mmol)Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)-OCH3，145mg(0.15mmol)Boc-Gly-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，195mg(0.15mmol)Boc-Tyr(Cl2Z)-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(ClZ)·OCH3，分别溶于适量1N氢氧化钠/甲酯溶液，冰浴下搅拌2小时，TLC显示原料点消失。2N盐酸中和，使pH为7，室温下减压浓缩蒸去甲醇，残留
                            表6化合物3-11的物理常数
化合物     收率     [α]D 20 熔点℃ FAB-MS[M+H]+
    34567891011  69mg(85％)    -4080mg(89％)    -1581mg(86％)    -13.373mg(83％)    -36.775mg(86％)    -3881mg(90％)    -1074mg(82％)    -3567mg(84％)    -2096mg(88％)    -40 (c 0.1，6N HCl)(c 0.4，6N HCl)(c 0.3，6N HCl)(c 0.6，6N HCl)(c 0.4，6N HCl)(c 0.2，6N HCl)(c 0.4，6N HCl)(c 0.2，6N HCl)(c 1，6N HCl)  126-129144-147140-144141-144175-178178-182143-146114-116141-144     542599627586585600599528727*
物再用2N盐酸酸化至pH2，残留物减压浓缩至干。皂化产物加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚以及5mlCF2SO3H-CF3COOH(1∶4)，0℃反应2小时，停止反应，减压除去溶剂，残留物用无水乙醚固化。固体物用Sephadex G10纯化，得Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Lys-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Arg-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Asp-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Asn-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-OH，Gly-Arg-Pro-Ala-Lyn-OH，Tyr-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-OH。制备实施例11，Boc-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl：
79mg(0.25mmol)Boc-Asp(OcHex)-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羟基苯骈三氮唑和56mg(0.27mmol)DCC，反应混合物在0℃放置24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应。
80mg(0.25mmol)HCl·Ser(Bzl)-OBzl，27mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面得到的滤液，室温反应24小时，TLC显示原料点消失。室温下减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液，饱和氯化钠水溶液，饱和柠檬酸水溶液，饱和氯化钠水溶液洗涤，分出有机层并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液37℃下减压浓缩，得标题化合物131mg(90％)。mp112-113℃，[α]20 D-25(c 0.2 CHCl3)。制备实施例12，HCl·Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl：
146mg(0.25mmol)Boc-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl用适量6N无水氯化氢-乙酸乙酯溶液溶解，室温搅拌4小时，TLC显示原料点消失。反应混合物在室温下减压浓缩，残留物再用乙酸乙酯溶解，并室温下浓缩，如此反复数次，直至除净游离的氯化氢。残留物用无水乙醚析晶，得标题化合物，直接用于下步反应。制备实施例13，Boc-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl：
44mg(0.25mmol)Boc-Gly-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羟基苯骈三氮唑和56mg(0.27mmol)DCC，反应混合物在0℃放置24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应。
130mg(0.25mmol)HCl·Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl，27mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面得到的滤液，室温反应24小时，TLC显示原料点消失。按常规处理，得标题化合物143mg(89％)。mp96-97℃，[α]20 D-32(c 0.3，CHCl3)。制备实施例14，HCl·Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl：
144mg(0.25mmol)Boc-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl用适量6N无水氯化氢-乙酸乙酯溶液溶解，室温搅拌4.5小时，TLC显示原料点消失。反应混合物按常规处理，残留物用无水乙醚析晶，得标题化合物，直接用于下步反应。制备实施例15，Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl：
115mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羟基苯骈三氯唑和56mg(0.27mmol)DCC，反应混合物在0℃放置24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应。
144mg(0.25mmol)HCl·Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl，27mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面得到的滤液，室温反应30小时，TLC显示原料点消失。按常规处理，得标题化合物197mg(83％)。FAB-MS(m/e)：950[M+H]+。mp101-102℃，[α]20 D-34(c 0.4，CHCl3)。制备实施例16，H-Arg-Gly-Asp-Ser-OH的制备：
142mg(0.15mmol)的Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl中加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚和5ml CF3COOH-CF3SO2H(4∶1)的混合溶液，0℃反应1小时。减压去除溶剂，残留物用无水乙醚固化。固体物用SephadexG10纯化，得到55mg(85％)的RGDS。PAB-MS(m/e)：434[M+H]+。mp110-111℃，[α]20 D-20(c0.2，6N HCl)。制备实施例17，Boc-Asp(OcHex)-Val-OBzl：
79mg(0.25mmol)Boc-Asp(OcHex)-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol，N-羟基苯骈三氮唑和56mg(0.27mmol)DCC，反应混合物在0℃放置24小时，滤除DCD，滤液直接用于下步反应。
61mg(0.25mmol)HCl·Val-OBzl，27mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面得到的滤液，室温反应24小时，TLC显示原料点消失。室温下减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液，饱和氯化钠水溶液，饱和柠檬酸水溶液，饱和氯化钠水溶液洗，分出有机层并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液37℃下减压浓缩，得标置化合物121mg(96％)。mp107-108℃，[α]20 D-26(c0.3，CHCl3)。制备实施例18，HCl·Asp(OcHex)-Val-OBzl：
126mg(0.25mmol)Boc-Asp(OcHex)-Val-OBzl用适量6N无水氯化氢-乙酸乙酯溶液溶解，室温搅拌4小时，TLC显示原料点消失。反应混合物按常规方法处理，残留物用无水乙醚析晶，得标题化合物，直接用于下步反应。制备实施例19，Boc-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl：
44mg(0.25mmol)Boc-Gly-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羟基苯骈三氮唑和56mg(0.27mmol)DCC，反应混合物在0℃放置24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应。
110mg(0.25mmol)HCl·Asp(OcHex)-Val-OBzl，27mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面得到的滤液，室温反应24小时，TLC显示原料点消失。按常规处理，得标题化合物129mg(92％)。mp109-110℃，[α]20 D-19(c0.2，CHCl3)。制备实施例20，HCl·Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl：
124mg(0.25mmol)Boc-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl用适量6N无水氯化氢-乙酸乙酯溶液溶解，室温搅拌4.5小时，TLC显示原料点消失。反应混合物按常规方法处理，残留物用无水乙醚析晶，得标题化合物，直接用于下步反应。制备实施例21，Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBxl：
107mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-OH溶于适量无水THF，在冰浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羟基苯骈三氮唑和56mg(0.27mmol)DCC，反应混合物在0℃放置24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应。
124mg(0.25mmol)HCl·Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl，27mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面得到的滤液，室温反应30小时，TLC显示原料点消失。按常规处理，得标题化合物187mg(86％)。FAB-MS(m/e)869[M-2H]+。mp97-98℃，[α]20 D-24(c 0.4，CHCl3)。制备实施例22，H-Arg-Gly-Asp-Val-OH的制备：
131mg(0.15mmol)的Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl中加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚和5mlCF3COOH-CF3SO2H(1∶4)混合溶液，0℃反应1小时。减压去除溶剂，残留物用无水乙醚固化。固体物用Sephadex G10纯化，得到58mg(87％)RGDV。电喷雾质谱(m/e)446[M＋H]+。mp120-121℃，[α]20 D-20 (c0.3，6NHCl)。制备实施例23，Boc-Asp(OcHex)-Phe-OBzl：
79mg(0.25mmol)Boc-Asp(OcHex)-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羟基苯骈三氮唑和56mg(0.27mmol)DCC，反应混合物在0℃放置24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应。
73mg(0.25mmol)HCl·Phe-OBzl，27mg(0.27mmol) N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面得到的滤液，室温反应24小时，TLC显示原料点消失。室温下减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液，饱和氯化钠水溶液，饱和柠檬酸水溶液，饱和氯化钠水溶液洗，分出有机层并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液37℃下减压浓缩得标题化合物130mg(94％)。mp114-115℃，[α]20 D-22(c0.3，CHCl3)。制备实施例24，HCl·Asp(OcHex)-Phe-OBzl：
138mg(0.25mmol)Boc-Asp(OcHex)-Phe-OBzl用适量6N无水氯化氢-乙酸乙酯溶液溶解，室温搅拌4小时，TLC显示原料点消失。反应混合物按常规方法处理，残留物用无水乙醚析晶，得标题化合物，直接用于下步反应。制备实施例25，Boc-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl：
44mg(0.25mmol)Boc-Gly-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羟基苯骈三氮唑和56mg(0.27mmol)DCC，反应混合物在0℃放置24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应。
122mg(0.25mmol)HCl·Asp(OcHex)-Phe-OBzl，27mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面得到的滤液，室温反应24小时，TLC显示原料点消失。按常规后处理，得标题化合物139mg(91％)。mp108-111℃，[α]20 D-22(c0.3，CHCl3)。制备实施例26，HCl·Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl：
152mg(0.25mmol)Boc-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl用适量6N无水氯化氢-乙酸乙酯溶液溶解，室温搅拌4.5小时，TLC显示原料点消失。反应混合物按常规处理，残留物用无水乙醚析晶，得标题化合物，直接用于下步反应。制备实施例27，Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl：
107mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol) N-羟基苯骈三氯唑和56mg(0.27mmol)DCC，反应混合物在0℃放置24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应。
136mg(0.25mmol)HCl·Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl，27mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面得到的滤液，室温反应30小时，TLC显示原料点消失。按常规处理，得标题化合物200mg(87％)。电喷雾质谱(m/e)：942[M+Na]+。mp98-99℃，[α]20 D-25(c0.4，CHCl3)。制备实施例28，H-Arg-Gly-Asp-Phe-OH的制备：
138mg(0.15mmol)的Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl中加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚和5mlCF3COOH-CF3SO3H混合溶液(4∶1)，0℃反应1小时。减压去除溶剂，残留物用无水乙醚固化。固体物用Sephadex G10纯化得62mg(83％)RGDF。电喷雾质谱(m/e)494[M+H]+。mp125-126℃，[α]20 D-40(c0.2，6N HCl)。制备实施例29，Boc-Ala-Lys(Z)-OBzl：
47.3mg(0.25mmol) Boc-Ala-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羟基苯骈三氯唑和55.6mg(0.27mmol)DCC，反应混合物置于冰箱中24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应。
101.3mg(0.25mmol)HCl·Lys(Z)-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面得到的滤液，室温反应24小时，TLC显示原料点消失。37℃下减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液，饱和氯化钠水溶液，饱和柠檬酸水溶液，饱和氯化钠水溶液洗涤，分出有机层，并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液37℃下减压浓缩(上述操作在下文中统称常规处理)，得标题化合物130mg(96％)。制备实施例30，HCl·Ala-Lys(Z)-OBzl：
135mg(0.25mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-OBzl用适量6N无水氯化氢-乙酸乙酯溶解，室温下搅拌4小时，TLC显示原料点消失。反应混合物在室温下减压浓缩，残留物再用乙酸乙酯溶解并室温下浓缩，如此反复数次，直至除净游离的氯化氢(上述操作在下文中统称常规处理)。残留物用无水乙醚析晶，得标题化合物，直接用于下步反应。制备实施例31，Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl：
54mg(0.25mmol)Boc-Pro-OH溶于适量无水THF，冰水浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羟基苯骈三氮唑和55.6mg(0.27mmol)DCC，反应混合物置冰箱中放置24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应。
119mg(0.25mmol)HCl·Ala-Lys(Z)-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面得到的中间体，室温反应26小时，TLC显示原料点消失。按常规处理，得标题化合物144mg(90％)。制备实施例32，HCl·Pro-Ala-Lys(Z )-OBzl：
160mg(0.25mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl与适量6N无水氯化氢-乙酸乙酯混溶，室温搅拌4.5小时，TLC显示原料点消失。反应混合物按常规处理，残留物用无水乙醚析晶，直接用于下步反应。制备实施例33，Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl：
107mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol N-羟基苯骈三氮唑和55.6mg(0.27mmol)DCC，反应混合物置冰箱中放置24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应。
144mg(0.25mmol)HCl·Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面所得到的滤液，室温反应30小时，TLC显示原料点消失。按常规进行后处理，得标题化合物207mg(87％)，FAB-MS(m/e)：950[M＋H]+。制备实施例34，HCl·Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl：
237mg(0.25mmol) Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl用适量6N无水氯化氢-乙酸乙酯混合，室温搅拌6小时，TLC显示原料点消失。反应混合物按常规处理，残留物用无水乙醚析晶，得标题化合物，直接用于下步反应。制备实施例35，Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl：
47.3mg(0.25mmol)Boc-Ala-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol) N-羟基苯骈三氯唑和55.6mg(0.27mmol)DCC，反应混合物置冰箱中放置24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应。
212mg(0.25mmol)HCl·Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面所得到的滤液，室温反应30小时，TLC显示原料点消失。按常规处理，得标题化合物217mg(85％)，mp86-89℃，[α]20 D-13(c0.2，CHCl3)，FAB-MS(m/e)1020[M＋H]+。制备实施例36，HCl·Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl：
237mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl与适量6N无水氯化氢-乙酸乙酯混合，室温搅拌6小时，TLC显示原料点消失。反应混合物按常规处理，残留物用无水乙醚析晶，得标题化合物，直接用于下步反应。制备实施例37，Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl：
62mg(0.25mmol)Boc-Gln-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入36.5mg(0.27mmol)N-羟基苯骈三氮唑和556mg(0.27mmol)DCC，反应混合物在冰箱中放置24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应
212mg(0.25mmol)HCl·Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面所得到的滤液，室温反应30小时，TLC显示原料点消失。按常规处理，得标题化合物235mg(87％)，mp83-85℃，[α]20 D-9(c0.3，CHCl3)，FAB-MS(m/e)1077[M+H]+。制备实施例38，HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl：
238mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl用适量6N无水氯化氢-乙酸乙酯溶解，室温搅拌4.5小时，TLC显示原料点消失。反应混合物按常规处理，残留物用无水乙醚析晶，得标题化合物，直接用于下步反应。制备实施例38a，HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl：
218mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl用适量6N无水氯化氢-乙酸乙酯溶解，室温搅拌4.5小时，TLC显示原料点消失。反应混合物按常规处理，残留物用无水乙醚析晶，得标题化合物，直接用于下步反应。制备实施例39，HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl：
230mg(0.25mmol)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl用适量6N无水氯化氢-乙酸乙酯溶解，室温搅拌4.5小时，TLC显示原料点消失。反应混合物按常规处理，残留物用无水乙醚析晶，得标题化合物，直接用于下步反应。制备实施例40，Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH：
153mg(0.15mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl，溶于适量1N氢氧化钠/甲醇溶液，冰浴下搅拌2小时，TLC显示原料点消失。2N盐酸中和，使PH为7，室温下减压浓缩除去甲醇，残留物再用2N盐酸酸化至pH2，残留物减压浓缩至干，直接用于下步反应。制备实施例41，Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH：
161mg(0.15mmol)Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl，溶于适量1N氢氧化钠/甲醇溶液，冰浴下搅拌2小时，TLC显示原料点消失。2N盐酸中和，使pH为7，室温下减压浓缩蒸去甲醇，残留物再用2N盐酸酸化至pH2，残留物减压浓缩至干，直接用于下步反应。制备实施例42，Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl：
232mg(0.25mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入365mg(0.27mmol) N-羟基苯骈三氮唑和556mg(0.27mmol)mmol)DCC，反应混合物在冰箱中放置24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应。
223mg(0.25mmol)HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面得到的滤液，室温反应30小时，TLC显示原料点消失。按常规处理得标题化合物443mg(95％)，[α]20 D-60(c0.3，CHCl3)，mp98-101℃，电喷雾质谱(m/e)1783[M＋Na]+。制备实施例43，Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl：
247mg(0.25mmol)Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入365mg(0.27mmol)N-羟基苯骈三氮唑和556mg(0.27mmol)DCC，反应混合物在冰箱中放置24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应。
223mg(0.25mmol)HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面得到的滤液，室温反应30小时，TLC显示原料点消失。按常规处理，得标题化合物447mg(93％)，[α]20 D-25(c0.2，CHCl3)，mp93-95℃，电喷雾质谱(m/e)1818[M+H]+。制备实施例44，Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl：
232mg(0.25mmol) Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入365mg(0.27mmol)N-羟基苯骈三氮唑和556mg(0.27mmol)DCC，反应混合物在冰箱中放置24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应。
203mg(0.25mmol)HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面所得到的滤液，室温反应30小时，TLC显示原料点消失。按常规处理，得标题化合物416mg(93％)，[α]20 D-29(c0.5，CHCl3)，mp106-108℃，电喷雾质谱(m/e)：1706[M＋H＋Na]+。制备实施例45，Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl：
247mg(0.25mmol) Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入365mg(0.27mmol) N-羟基苯骈三氯唑和556mg(0.27mmol)DCC，反应混合物在冰箱中放置24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应
203mg(0.25mmol)HCl-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面所得到的滤液，室温反应30小时，TLC显示原料点消失。按常规处理，得标题化合物434mg(94％)，[α]20 D-30(c0.3，CHCl3)，mp118-120℃，电喷雾质谱(m/e)1763[M+H+Na]+。制备实施例46，Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl：
232mg(0.25mmol)Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶于适量无水THF，365mg(0.27mmol)N-羟基苯骈三氮唑和556mg(0.27mmol)DCC，反应混合物在冰箱中放置24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应。
215mg (0.25mmol)HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面所得到的滤液，室温反应30小时，TLC显示原料点消失。按常规处理，得标题化合物436mg(95％)，[α]20 D-32(c0.5，CHCl3)，mp108-110℃，电喷雾质谱(m/e)1754[M+H+Na]+。制备实施例47，Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl：
247mg(0.25mmol)Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH溶于适量无水THF，冰浴下加入365mg(0.27mmol)N-羟基苯骈三氯唑和556mg(0.27mmol)DCC，反应混合物在冰箱中放置24小时，滤除DCU，滤液直接用于下步反应。
215mg(0.25mmol)HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl，273mg(0.27mmol)N-甲基吗啉与适量无水THF混溶，加入上面所得到的滤液，室温反应30小时，TLC显示原料点消失。按常规处理，得标题化合物440mg(93％)，[α]20 D-6.7(c0.3，CHCl3)，mp87-90℃，电喷雾质谱(m/e)1810[M＋Na]+。制备实施例48，Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Ser-OH：264mg(0.15mmol)的Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl中加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚以及5mlCF3SO3H-CF3COOH(1∶4)混合液，0℃反应4小时。减压去除溶剂，残留物用无水乙醚固化。固体物用Sephadex G15纯化得目标化合物125mg(87％)，mp140-141℃，[α]20 D-50(c0.3，6NHCl)。电喷雾质谱(m/e)956[M]+。制备实施例49，Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Ser-OH：
261mg(0.15mmol)的Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl中加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚以及5mlCF3SO3H-CF3COOH(1∶4)混合液，0℃反应4小时。减压去除溶剂，残留物用无水乙醚固化。固体物用Sephadex G15纯化，得目标化合物131mg(86％)，mp137-139℃，[α]20 D-38(c0.2，6N HCl)，电喷雾质谱(m/e)1015[M+2H]+。制备实施例50，Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Val-OH：
273mg(0.15mmol)的Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl中加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚和5mlCF3SO3H-CF3COOH(1∶4)混合液，0℃反应4小时。减压去除溶剂，残留物用无水乙醚固化。固体物用Sephadex G15纯化，得目标化合物124mg(85％)，[α]20 D-40(c0.2，6N HCl)，mp147-149℃，电喷雾质谱(m/e)969[M+H]+。制备实施例51，Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Val-OH：
260mg(0.15mmol)的Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl中加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚和5mlCF3SO3H-CF3COOH(1∶4)混合液，0℃反应4小时。减压去除溶剂，残留物用无水乙醚固化。固体物用Sephadex G15纯化，得目标化合物135mg(88％)，[α]20 D-53.3(c0.3，6N HCl)，mp131-134℃，电喷雾质谱(m/e)1050[M+2H+Na]+。制备实施例52，Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Phe-OH：
252mg(0.15mmol)的Boc-Ala-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl中加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚和5mlCF3SO3H-CF3COOH(1∶4)混合液，0℃反应4小时。减压去除溶剂，残留物用无水乙醚固化。固体物用Sephadex G15纯化，得目标化合物127mg(83％)，[α]20 D-70(c0.2，6N HCl)，mp150-153℃，电喷雾质谱(m/e)1017[M+H]+。制备实施例53，Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-Phe-OH：
268mg(0.15mmol)的Boc-Gln-Arg(Tos)-Pro-Ala-Lys(Z)-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl中加入1ml二甲硫醚，1ml苯甲醚和5mlCF3SO3H--CF3COOH(1∶4)混合液，0℃反应4小时。减压去除溶剂，残留物用无水乙醚固化。固体物用Sephadex G15纯化，得目标化合物145mg(90％)，mp142-145℃，[α]20 D-39(c0.2，6N HCl)，电喷雾质谱(m/e)1074 [M+H]+。生物活性实施例1，P6A及类似物的舒血管活性：
取分离好的大鼠胸主动脉肌条约3mm，挂于5ml灌流槽内，连接换能器，用含95％O2-5％CO2混合气平衡的KH液灌流。15分钟后加入NE(终浓度1×10-9mol/L)，待主动脉肌条收缩达到峰值后冲洗掉，再稳定30分钟。灌流槽内换液后，加入NE(1×10-9mol/L)，待主动脉肌条收缩达峰值时，注入待测药物，观察舒血管效应。结果见于表2.生物活性实施例2，P6A及类似物的血压及心率效应：
在离体动物实验的基础上，选择舒血管作用比较好的Gln-Arg-Pro-Ala-Lys与P6A分别使用0.020mmol/kg和0.022mmol/kg的剂量，观察其对大鼠平均动脉血压(MAP)的影响。体重200～250g雄性Wistar大鼠，以20％乌拉坦腹腔麻醉(5ml/kg)，颈动脉插管，连接四导生理记录仪，描记MAP和心率(HR)。颈外静脉插管给药，注射肝素抗凝(1000U/kg)，术后稳定30分钟。随机分组(n＝5)，分别静脉注射待测药物。结果见于表3，4。
                      表2.化合物3-11对NE收缩的鼠动脉肌条的舒张效应
化合物     不同剂量下的舒血管效应( X±S％)
    1×10-5M     1×10-5M
    45678910(1×10-4)#11#3  4.37±5.100.00±0.00-3.20±5.99***5.96±6.95-2.40±5.14**29.70±4.16***3.2215.285.72±2.14     6.70±6.96**1.31±5.29***-6.87±3.04***16.00±3.843.60±9.7733.10±6.5918.0622.57±8.35
n＝6，NE(10-9M)收缩的幅度为100％；负值为缩血管效应
与化合物3相比较，**P＜0.05，***P＜0.01；#n＝2
            表3化合物9和P6A对大鼠平均动脉血压的影响n＝4剂量，P6A：0.022mmol/kg；化合物9：0.020mmol/kg
                    表4化合物9和P6A对大鼠心率的影响
Figure A9510634000251
生物活性实施例3，P6A及类似物的抗血栓作用：
在上述实验的基础上，本文还观察了P6A和Gla-Arg-Pro-Ala-Lys在整体动物上的抗血栓作用。将200-250g雄性Wister大鼠在麻醉下分离出两侧颈总动脉，于静脉缓缓注射药物或溶媒(生理盐水)，然后，立即用经25％FeCl3浸泡过的纱布条(宽0.5cm)包裹动脉10min，取调纱布剪下0.5cm动脉段，剥离出血栓，室温放置24小时后称重。结果见表5。
              表5 P6A及化合物9的抗血栓作用
化合物 剂量(μmol/kg)     血栓重量(mg)
生理盐水P6A9     -52.5     0.67±0.120.34±0.22**0.44±0.08**
与生理盐水组比较，**P＜0.01生物活性实施例4，RGDS，RGDV，RGDF的抗血小板聚集作用：
大鼠麻醉下腹主动脉取血(用0.38％枸橼酸钠抗凝)，离心制备富血小板血浆，血小板数调至5×108个血小板/ml，血小板聚集在37℃下，在双道血小板聚集仪中采用标准比浊技术进行血小板聚集研究。使用的激动剂为PAF(终浓度，5μl)进行PAF诱导的抗血小板聚集研究。RGDV或RGDF溶于生理盐水，并加入100μl富血小板的血浆中，37℃搅拌。用生理盐水作对照。有关数据列入表6。
      表6 RGDS，RGDV，RGDF对PAF诱导的血小板聚集的抑制作用
化合物     抑制率(％)
 4.8×10-7 9.6×10-7   1×10-6 5×10-5
    对照RGDSRGDVRGDF     012--     -87--       --19.1±6.717.2±6.2     --2821
生物活性实施例5，RGDS，RGDV，RGDF的舒血管作用：
将断头大鼠的主动脉条立即放入装有5ml用95％O2-5％CO2饱和的KH溶液(pH7.4)中。主动脉条连接到张力转换器上，记录舒张-收缩曲线。主动脉条使用1×10-9mol/L的NE收缩。收缩值达峰值后洗净主动脉条，并稳定30分钟。更换溶液后，加入NE(1×10-9mol/L)。当主动脉条的收缩达峰值时，施用RGDV，RGDF以便观察血管舒张效应。有关数据列入表7。生物活性实施例6，RGDS，RGDV，RGDF的抗血栓作用：
将200-250g Wister雄性大鼠麻醉，分离出两侧颈总动脉，静脉缓缓注射药物或生理盐水，然后立即用经25％FeCl3浸泡过的纱条(宽0.5cm)包裹动脉10min，取掉纱布，剪下0.5cm动脉段，剥离出血栓室温放置24h后称重，有关数据列入表8。
      表7 RGDS，RGDV，RGDF对NE收缩的血管的舒张效应
化合物     血管舒张效应( x±s％)
   1×10-6     1×10-5     5×10-5 1×10-4
 对照RGDSRGDVRGDF       --22.228.82     -8.08±5.029.6214.71         --21.7±7.1-  3.0±3.49.65±1.532.2±1.4-
      表8 RGDS，RGDV，RGDF的抗血栓作用
    化合物(μmol/kg)     血栓重量(mg)
    对照RGDS(5.0)RGDV(5.0)RGDF(2.5)     0.69±0.130.61±0.230.59±0.160.41±0.26*
与对照组比较，*P＜0.05生物活性实施例7，杂交肽的抗血栓作用：
将200-250g Wister雄性大鼠麻醉，分离出两侧颈总动脉，静脉缓缓注射药物或生理盐水，然后立即用经25％FeCl3浸泡过的纱条(宽0.5cm)包裹动脉10min，取掉纱布，剪下0.5cm动脉段，剥离出血栓室温放置24h后称重，有关数据列入表9。
                  表9杂交肽的抗血栓作用
化合物 剂量(μmol/kg)     血栓重量(mg)
生理盐水P6A9RGDSRGDVRGDF15161717181920      -5.02.55.05.02.52.52.55.02.52.52.52.5     0.67±0.120.34±0.22**0.44±0.08**0.61±0.230.59±0.160.41±0.26**0.45±0.28*0.48±0.10*#0.26±0.12***#0.45±0.15*#0.41±0.11**#0.71±0.170.44±0.37
与生理盐水组比较，*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001
与RGDS及RGDV组比较，#P＜0.05生物活性实施例8，杂交肽的舒血管活性的测定：
取分离好的大鼠胸主动脉约3mm，悬挂于5ml灌流槽内，连接换能器，用含95％O2-5％CO2混合气平衡的KH液灌流。15分钟后加入NE(终浓度为1×10-9/L)，待主动脉收缩达到峰值后冲洗掉，再稳定30分钟。灌流槽内换液后，加入NE (终浓度为1×10-9/L)，待主动脉收缩达到峰值时，注入待侧药物，观察舒血管效应。结果见表10(重复观察两次)。
        表10化合物15-20对NE收缩的血管的舒张效应
    化合物     不同剂量下对NE收缩的血管的舒张效应(％)
    1×10-6     1×10-5
    151617181920     010.0010.67022.6928.60     6.1116.6714.6710.8630.2335.70

Claims (12)

1.本发明涉及对P6A进行结构修饰，合成了一系列通式(1)的多肽，其特点在于这类多肽具有明确的舒血管，降血压和抗血栓作用，其中有的化合物明显地比P6A优秀，在医学方面有重要的应用前景；本权利要求涉及通式(1)的多肽
AA-Arg-Pro-Ala-Lys-OH    (1)其中AA为L构型氨基酸，例如Ala，Arg，Gly，Gln，Glu，Asp，Asn，Lys或Tyr-Ala，涉及它们的化学合成以及在医学方面的应用。
2.权利要求1的通式(1)多肽，其中AA为L构型氨基酸，例如为Ala，Arg，Gly，Gln，Glu，Asp，Asn，Lys或Tyr-Ala，的化学合成用。
3.权利要求1的通式(1)多肽，其中AA为L构型氨基酸，例如为Ala，Arg，Gly，Gln，Gln，Asp，Asn，Lys或Tyr-Ala，在医学方面的应用。
4.权利要求1的通式(1)多肽，其中AA为L构型氨基酸，例如为Ala，Arg，Gly，Gln，Glu，Asp，Asn，Lys或Tyr-Ala，作为扩血管药物使用。
5.权利要求1的通式(1)多肽，其中AA为L构型氨基酸，例如为Ala，Arg，Gly，Gln，Gla，Asp，Asn，Lys或Tyr-Ala，作为降血压药物使用。
6.权利要求1的通式(1)多肽，其中AA为L构型氨基酸，例如为Ala，Arg，Gly，Gln，Glu，Asp，Asn，Lys或Tyr-Ala，作为抗血栓药物使用。
7.本发明涉及将P6A及类似物与含RGD四肽缀合，合成了一系列通式为(2)的杂交肽，其特点在于这类杂交肽具有明确的舒血管，降血压和抗血栓作用，由于它们具有靶向作用，因而作用强，选择性高，毒副作用小，在医学方面有重要的应用前景；本权利要求涉及通式(2)的多肽
AA-Arg-Pro-Ala-Lys-Arg-Gly-Asp-AA′-OH    (2)
其中AA为L构型氨基酸，例如为Ala或Gln；AA′为L构型的氨基酸，例如为Ser，Val，Phe，涉及它们的化学合成以及在医学方面的应用。
8.权利要求7的通式(2)的多肽，其中AA为L构型氨基酸，例如为Ala或Gln；AA′为L构型的氨基酸，例如为Ser，Val，Phe，的化学合成。
9.权利要求7的通式(2)的多肽，其中AA为L构型氨基酸，例如为Ala或Gln；AA′为L构型的氨基酸，例如为Ser，Val，Phe，在医学方面的应用。
10.权利要求7的通式(2)的多肽，其中AA为L构型氨基酸，例如为Ala或Gln；AA′为L构型的氨基酸，例如为Ser，Val，Phe，作为扩血管药物使用。
11.权利要求7的通式(2)的多肽，其中AA为L构型氨基酸，例如为Ala或Gln；AA′为L构型的氨基酸，例如为Ser，Val，Phe，作为降血压药物使用。
12.权利要求7的通式(2)的多肽，其中AA为L构型氨基酸，例如为Ala或Gln；AA′为L构型的氨基酸，例如为Ser，Val，Phe，作为抗血栓药物使用。
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