CN114636818A - 一种包被液及含有该包被液的红细胞膜包被液及其应用 - Google Patents

一种包被液及含有该包被液的红细胞膜包被液及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于免疫检测技术领域，具体地说，涉及一种包被液及含有该包被液的红细胞膜包被液及其应用。本发明所述的包被液包括如下组分：0.001M的PB、0.005%‑0.01%的海藻糖、0.09%‑0.15%的SDS、0.01%‑0.05%的甲醇、0.03%‑0.09%的蔗糖和0.01%‑0.015%的PC300。本发明包被液对红细胞膜具有较好的溶解性，制备方法简单，易于操作。采用本发明的红细胞膜包被液固化的NC膜具有较好的稳定性，制备得到的试剂盒更易保存，使用方便，固化效果好，应用试剂盒检测灵敏度高，采用胶体金标记，检测准确度高、速度快。

Description

一种包被液及含有该包被液的红细胞膜包被液及其应用
技术领域
本发明属于免疫检测技术领域，具体地说，涉及一种包被液及含有该包被液的红细胞膜包被液及其应用。
背景技术
血型是指血液成分（包括红细胞、白细胞、血小板及血浆蛋白）表面的抗原类型，通常所说的血型是指红细胞膜上特异性抗原类型，而与临床关系最密切的是红细胞ABO血型系统及Rh血型系统，血凝试验、微柱凝胶试验已广泛应用于临床血型鉴定及输血科交叉配血等。近年主要有流式细胞技术、酶联免疫吸附试验、胶体金凝集技术，其中血凝试验是指抗体和红细胞在液体介质中发生肉眼可见的凝集反应，主要分为玻片法、试管法、全自动微板法。但目前的几种技术均属于反定性产品，检测结果需要进行反向推断才能判定结果，且操作较为繁琐，检测过程干扰因素较多。流式细胞术、酶联免疫检测需要有专业人员进行操作，且需要特殊设备进行判读。此外，传统的检测方法使用对血液样品要求较高，样本不能出现溶血，因溶血样本会干扰检测结果，导致错误判读。
传统的血型检测试剂盒都包括绘有T线（检测线）和C线（质控线）的硝酸纤维素膜（NC膜），由于红细胞溶血或保存不当会引起红细胞血型抗原性降低、导致新鲜红细胞保存期短，因此NC膜一般采用红细胞膜包被液进行包被、固定。红细胞膜包被液通常由红细胞膜和包被液组成，常规的包被液组分为：0.01M的PB、质量体积百分浓度为0.01%-0.05%的蔗糖以及质量体积百分浓度为0.01%-0.015%的PC300，pH值为7.5。
然而，在使用中发现，采用上述常规包被液制得的红细胞膜包被液包被、固定的NC膜稳定性不好，检测灵敏度不高。因此，开发一种能使包被、固定的NC膜具有更好稳定性和检测灵敏度的包被液具有重要的临床意义。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的是为了解决上述问题，提供一种能使包被、固定的血型检测试剂盒上的NC膜具有更好稳定性和检测灵敏度的包被液。
为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
一种包被液，其中，所述的包被液包括如下组分：0.001M的PB、0.005%-0.01%的海藻糖、0.09%-0.15%的SDS、0.01%-0.05%的甲醇、0.03%-0.09%的蔗糖和0.01%-0.015%的PC300。
本发明所提供的包被液对红细胞膜具有较好的溶解性，且与红细胞膜制得的红细胞膜包被液对NC膜的固化效果好，同时，固化的NC膜具有较好的稳定性，在37℃条件下加速3个月仍表现出较好的稳定性，检测灵敏度高。
本发明中，百分比为质量体积百分浓度，如0.005%-0.01%的海藻糖是指100ml包被液中含有0.005-0.01g海藻糖。
进一步地，所述的包被液的pH值为7.0-7.5。
本发明还提供上述包被液的制备方法，其中，所述的制备方法为：先按所述组分进行配制，再调节pH值至7.0-7.5，即得所述的包被液。
本发明的包被液制备过程简单，只需按所述组分进行配制再调节pH值即可得到。
调节pH值时用本领域常用的pH调节剂即可，如可用6M的NaOH溶液和盐酸进行调节。
本发明还提供一种红细胞膜包被液，其中，所述的红细胞膜包被液包括上述的包被液。
进一步地，所述的红细胞膜包被液还包括红细胞膜，所述的红细胞膜为红细胞膜碎片。
本发明提供的包被液可进一步与红细胞膜得到红细胞膜包被液。所述的红细胞膜可为本领域常用的红细胞膜，如A型血的红细胞膜、B型血的红细胞膜。作为一种优选方式，本发明所述的红细胞膜为红细胞膜碎片，如A型血的红细胞膜碎片、B型血的红细胞膜碎片。采用红细胞膜碎片与本发明的包被液得到的红细胞膜包被液对NC膜的固化效果好，同时，固化的NC膜具有较好的稳定性，在37℃条件下加速3个月仍表现出较好的稳定性，检测灵敏度高。
本发明中，所述的红细胞膜碎片采用本领域已知的方法制备得到，如可按照CN113016775A中实施例1的方法制备得到。
进一步地，所述的红细胞膜碎片与包被液的质量体积比为10：1mg/ml。
本发明还提供一种所述的红细胞膜包被液的制备方法，其中，所述的制备方法包括如下步骤：
S1、复融：将红细胞膜碎片加至包被液中，复融，得到复融的红细胞膜包被液；
S2、超声破碎处理：将复融的红细胞膜包被液进行超声破碎处理，得到超声破碎处理后的红细胞膜包被液；
S3、定容：将超声破碎处理后的红细胞膜包被液定容，即得所述的红细胞膜包被液。
进一步地，步骤S2中，超声破碎处理时，超声功率为200W，每超声5S停5S，超声破碎总时间为30min。
进一步地，步骤S1中，加入的红细胞膜碎片的质量与包被液的体积比为10：1mg/ml。
进一步地，步骤S3中，所述的定容为定容至2mg/ml。
本发明还提供一种血型检测试剂盒，包括绘有T线和C线的NC膜，其中，T线位置包被了本发明所述的红细胞膜包被液。
本发明所提供的血型检测试剂盒中，其NC膜的T线位置包被了本发明的红细胞膜包被液，该红细胞膜包被液对NC膜的固化效果好，同时，固化的NC膜具有较好的稳定性，在37℃条件下加速3个月仍表现出较好的稳定性，检测灵敏度高。
进一步地，C线位置包被了0.5-1mg/ml的羊抗鼠IgM。
本发明中，T线与C线的距离为5mm。
本发明所提供的血型检测试剂盒可参照本领域常规的方法制备得到。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
（1）本发明的包被液对红细胞膜碎片具有较好的溶解性，且固化效果好；
（2）采用本发明得到的红细胞膜包被液固化的NC膜具有较好的稳定性，在37℃条件下加速3个月仍表现出较好的稳定性，解决了由于红细胞溶血或保存不当引起的红细胞血型抗原性降低，导致新鲜红细胞保存期短的问题，试剂盒更易保存，使用方便；
（3）采用本发明制备得到的红细胞膜包被液固化的红细胞膜，检测灵敏度高，采用胶体金标记，检测准确度高、速度快。
附图说明
图1为抗体A检测包被液1A膜组、包被液2A膜组、包被液1B膜组和包被液2B膜组血型检测试剂盒的结果图；
图2为抗体B检测包被液1B膜组、包被液2B膜组、包被液1A膜组和包被液2A膜组血型检测试剂盒的结果图；
图3为抗体A检测37℃下加速1个月、2个月、3个月的包被液2A膜组和包被液1A膜组的结果图；
图4为抗体B检测37℃下加速1个月、2个月、3个月的包被液2B膜组和包被液1B膜组的结果图；
图5为抗体A检测包被液1不超声A膜、包被液2不超声A膜、包被液1超声A膜和包被液2超声A膜的结果图；
图6为抗体B检测包被液1不超声B膜、包被液2不超声B膜、包被液1超声B膜和包被液2超声B膜的结果图；
图7为抗体A分别检测实施例2至实施例6的包被液的结果图；
图8为抗体B分别检测实施例2至实施例6的包被液的结果图；
图9为抗体A和抗体B分别检测37℃下加速1个月、2个月、3个月的实施例2的包被液的结果图；
图10为抗体A和抗体B分别检测37℃下加速1个月、2个月、3个月的实施例3的包被液的结果图；
图11为抗体A和抗体B分别检测37℃下加速1个月、2个月、3个月的实施例4的包被液的结果图；
图12为抗体A和抗体B分别检测37℃下加速1个月、2个月、3个月的实施例5的包被液的结果图；
图13为抗体A和抗体B分别检测37℃下加速1个月、2个月、3个月的实施例6的包被液的结果图。
具体实施方式
以下为本发明的具体实施方式，所述的实施例是为了进一步描述本发明，而不是限制本发明。
以下实施例中，所采用的0.001M的PB和0.01M的PB采用如下方法配制而成：
称取1.56gNaH2PO4·2H2O和3.58gNa2HPO4·12H2O，分别溶于1000mL蒸馏水，各自配制成0.01M母液。取19mL0.01M NaH2PO4母液和81mL0.01M Na2HPO4母液，混合置于容量瓶中，加蒸馏水定容至1000mL，配制成0.001M的PB缓冲液。
称取15.6gNaH2PO4·2H2O和35.8gNa2HPO4·12H2O，分别溶于1000mL蒸馏水，各自配制成0.1M母液。取19mL0.1M NaH2PO4母液和81mL0.1M Na2HPO4母液，混合置于容量瓶中，加蒸馏水定容至1000mL，配制成0.01M的PB缓冲液。
以下实施例中，所采用的红细胞膜碎片采用如下方法制备得到：
1）取3mL抗凝混合全血（取自6-10个A型或B型血样），加入装有10mL0.01mol/L的PBS（pH7.2）的15m L离心管中，以3000r/min离心5min，弃上清和上清下的白细胞、血小板层，获得约1.5mL压积红细胞；
2）用相当于压积红细胞3倍体积的4℃预冷0.01mol/L的PBS（pH7.2）洗涤2次，每次在4℃下以5000r/min离心15min；
3）以V:V=40：1的比例加4℃预冷的0.01mol/L的PBS（pH7.2）与沉淀物混合，4℃放置2h，再以9000r/min离心20min，弃上清；
4）再重复步骤3）4次，直至无肉眼可见的红细胞，所获得的约800μL沉淀物即为携带膜抗原的A红细胞膜碎片或B红细胞膜碎片。
以此方式进行多次制备，获得的红细胞膜碎片立即使用（用于膜抗原检测），或者直接分装后分别在4℃或-20℃下保存。
实施例1至实施例6为本发明包被液的实施例。各实施例的包被液组分见表1所示：
表1、包被液各实施例组分
组分 实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 实施例5 实施例6
PB 0.001M 0.001M 0.001M 0.001M 0.001M 0.001M
海藻糖 0.008% 0.005% 0.01% 0.006% 0.007% 0.009%
SDS 0.12% 0.09% 0.15% 0.10% 0.13% 0.14%
甲醇 0.03% 0.01% 0.05% 0.04% 0.02% 0.04%
蔗糖 0.05% 0.03% 0.09% 0.06% 0.04% 0.08%
PC300 0.012% 0.01% 0.015% 0.013% 0.011% 0.014%
注：%为质量体积百分浓度
各实施例的包被液的制备方法为：先按所述组分进行配制，再用6M的NaOH溶液和盐酸调节pH值至7.0-7.5，即得。
实施例7至实施例12为本发明红细胞膜包被液的实施例。各实施例的红细胞膜包被液的组分见表2所示：
表2、红细胞膜包被液各实施例组分
组分 实施例7 实施例8 实施例9 实施例10 实施例11 实施例12
红细胞膜碎片 A B A B A B
包被液 实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 实施例5 实施例6
注：A、B分别为A红细胞膜碎片、B红细胞膜碎片
各实施例的红细胞膜包被液的制备方法包括如下步骤：
S1、复融：将红细胞膜碎片按10mg/ml的量加至包被液中，复融，得到复融的红细胞膜包被液；
S2、超声破碎处理：将复融的红细胞膜包被液进行超声破碎处理，超声功率为200W，每超声5S停5S，超声破碎总时间为30min，得到超声破碎处理后的红细胞膜包被液；
S3、定容：将超声破碎处理后的红细胞膜包被液定容至2mg/ml，即得。
实施例13
该实施例提供一种血型检测试剂盒，包括绘有T线和C线的NC膜，其中，T线位置分别包被了实施例7至实施例12所制得的红细胞膜包被液。
该血型检测试剂盒的制备方法包括如下步骤：
（1）金标抗体：用0.1M的K2CO3溶液调节胶体金溶液的pH，按每毫升胶体金加入36μL的量进行加入，混匀后加入10μg的佰抗IgM二抗-AB0046-1，标记10min，加入20%BSA20μL封闭10min，高速离心取沉淀，将沉淀用胶体金重悬液定容至原体积的80%，不同标记体系按照同比例扩增；
（2）金标垫的制备：用移液枪取800μL胶体金重悬液均匀铺在5mm×300mm玻璃纤维素膜（金标垫）上，置于电热鼓风干燥箱中烘干，电热鼓风干燥箱的温度控制在36-38℃范围内，箱体中湿度小于30%；
（3）包被膜的制备：检测线分别为实施例7至实施例12所制得的红细胞膜包被液（2mg/mL），质控线为羊抗鼠IgM（0.8mg/mL），用三维划膜喷金仪将质控线和检测线划在硝酸纤维素膜（NC膜）上，1μL/cm，质控线与检测线相距5mm，置于电热鼓风干燥箱中烘干，电热鼓风干燥箱中的温度控制在36-38℃范围内，湿度小于30%。
（4）得到血型检测试剂盒。
质控线羊抗鼠IgM的浓度为其他浓度也可以，只要在0.5-1mg/ml范围内即可。
对比例1、常规包被液
组分：0.01M的PB、质量体积百分浓度为0.05%的蔗糖和质量体积百分浓度为0.012%的PC-300。
制备方法：先按所述组分进行配制，再用6M的NaOH溶液和盐酸调节pH值至7.0-7.5，即得。
对比例2、未超声破碎处理
该对比例提供一种未超声破碎处理的红细胞膜包被液的制备方法，具体包括如下步骤：
S1、复融：将红细胞膜碎片按10mg/ml的量加至包被液中，复融，得到复融的红细胞膜包被液；
S2、定容：将复融的红细胞膜包被液定容至2mg/ml，即得。
试验例1
该试验例对不同组成的包被液灵敏度进行了考察。
试验分为以下四组：
包被液1A膜组、包被液2A膜组、包被液1B膜组和包被液2B膜组。
其中：
包被液1：对比例1的常规包被液；
包被液2：实施例1的本发明包被液；
A膜和B膜分别为A红细胞膜碎片和B红细胞膜碎片。
将包被液1、包被液2分别与A红细胞膜碎片、B红细胞膜碎片按照实施例7至实施例12中描述的制备方法制得红细胞膜包被液，再分别以制得的红细胞膜包被液为检测线按照实施例13的方法制备血型检测试剂盒，分别得到包被液1A膜组、包被液2A膜组、包被液1B膜组和包被液2B膜组四组血型检测试剂盒。
将上述四组血型检测试剂盒分别用标准抗体A和标准抗体B进行检测，以考察灵敏度。
检测方法：将1μl标准抗体A（TMF1-806，密理博）、1μl标准抗体B（JMC2-102，密理博）分别加入到四组血型检测试剂盒上对应NC膜的加样孔中，样本将在NC膜上由上至下层析，经过NC膜的C线、T线，然后在稀释液孔中加入样品稀释液，稀释液将溶解胶体金，在NC膜上由下至上层析，推动样本回流，并在NC膜上形成免疫反应。在15分钟内根据C、T线的出现情况判定检测结果。
检测结果如图1和图2所示，其中：
抗体A检测四组血型检测试剂盒的结果如图1所示，图1中抗体A检测包被液1B膜组和抗体A检测包被液2B膜组的结果作为阴性对照。由图1可知，在相同的抗体A下，采用常规包被液1固化的NC膜的检测线（T线）颜色较浅，而采用本发明包被液2固化的NC膜上的检测线（T线）颜色深。这表明：与常规包被液相比，本发明的包被液的血型检测试剂盒的灵敏度较好。
抗体B检测四组血型检测试剂盒的结果如图2所示，图2中抗体B检测包被液1A膜组和抗体B检测包被液2A膜组的结果作为阴性对照。由图2可知，在相同的抗体B下，采用常规包被液1固化的NC膜的检测线（T线）颜色较浅，而采用本发明包被液2固化的NC膜上的检测线（T线）颜色明显深。这表明：与常规包被液相比，本发明的包被液的血型检测试剂盒的灵敏度较好。
试验例2
该试验例对不同组成的包被液稳定性进行了考察。
四组血型检测试剂盒同试验例1。将各组血型检测试剂盒分别于37℃下加速1个月、2个月和3个月，并分别于第1、2和3个月时采用标准抗体A和标准抗体B进行检测，抗体A检测两组A膜组，抗体B检测两组B膜组，以考察各组血型检测试剂盒的稳定性。检测方法同试验例1。
检测结果如图3和图4所示，其中：
图3为抗体A检测包被液2A膜组和包被液1A膜组的结果图。由图3可知，采用本发明包被液2固化的NC膜上的检测线（T线）颜色深，且加速1个月、加速2个月和加速3个月时检测线（T线）颜色无明显变化，表明其稳定性较好。
图4为抗体B检测包被液2B膜组和包被液1B膜组的结果图。由图4可知，采用本发明包被液2固化的NC膜上的检测线（T线）颜色深，且加速1个月、加速2个月和加速3个月时检测线（T线）颜色无明显变化，表明其稳定性较好。
试验例3
该试验例考察了制备过程中是否超声破碎处理对制得的红细胞包被液的灵敏度的影响。
试验用血型检测试剂盒的检测线所采用的红细胞膜包被液分别如下：
包被液1、包被液2不超声A膜、B膜：将包被液1（对比例1的常规包被液）、包被液2（实施例1的本发明包被液）分别与A红细胞膜碎片、B红细胞膜碎片按照对比例2的方法进行红细胞膜包被液的制备，分别得到包被液1不超声A膜、包被液2不超声A膜、包被液1不超声B膜和包被液2不超声B膜；
包被液1、包被液2超声A膜、B膜：将包被液1（对比例1的常规包被液）、包被液2（实施例1的本发明包被液）分别与A红细胞膜碎片、B红细胞膜碎片按照实施例7至实施例12的制备方法进行红细胞膜包被液的制备，分别得到包被液1超声A膜、包被液2超声A膜、包被液1超声B膜和包被液2超声B膜。
以上述不同红细胞膜包被液为检测线按照实施例13的方法制备血型检测试剂盒，分别用标准抗体A和标准抗体B对其进行检测，以考察制备过程中是否超声破碎处理对灵敏度的影响。检测方法同试验例1。
检测结果见图5和图6，其中：
图5为抗体A检测包被液1不超声A膜、包被液2不超声A膜、包被液1超声A膜和包被液2超声A膜的结果图。从图5可知，在不经过超声破碎处理的情况下，采用本发明包被液2固化的NC膜上能看到较浅的检测线（T线）；对于包被液1而言，制备过程中是否超声破碎处理对NC膜上的检测线（T线）影响不大，都看不出检测线（T线）；而对于包被液2而言，制备过程中经超声破碎处理后，NC膜上的检测线（T线）颜色明显加深。表明，与常规包被液1相比，采用本发明的包被液2不经过超声破碎处理时能看到较浅的检测线（T线），而在制备过程中经超声破碎处理后，检测线（T线）颜色明显加深，血型检测试剂盒的检测灵敏度显著增强。
图6为抗体B检测包被液1不超声B膜、包被液2不超声B膜、包被液1超声B膜和包被液2超声B膜的结果图。从图6可知，在不经过超声破碎处理的情况下，采用本发明包被液2固化的NC膜上能看到较浅的检测线（T线）；对于包被液1而言，制备过程中是否超声破碎处理对NC膜上的检测线（T线）影响不大；而对于包被液2而言，制备过程中经超声破碎处理后，NC膜上的检测线（T线）颜色明显加深。表明，与常规包被液1相比，采用本发明的包被液2不经过超声破碎处理时能看到较浅的检测线（T线），而在制备过程中经超声破碎处理后，检测线（T线）颜色明显加深，血型检测试剂盒的检测灵敏度显著增强。
试验例4
该试验例对本发明实施例2至实施例6的包被液的灵敏度进行了考察。
试验方法：将实施例2至实施例6的本发明包被液分别记为包被液2-2、包被液2-3、包被液2-4、包被液2-5和包被液2-6，各包被液分别与A红细胞膜碎片、B红细胞膜碎片按照实施例7至实施例12中描述的制备方法制得红细胞膜包被液，再分别以制得的红细胞膜包被液为检测线按照实施例13的方法制备血型检测试剂盒，将各血型检测试剂盒分别用标准抗体A和标准抗体B进行检测，以考察灵敏度。检测方法同试验例1。
检测结果如图7和图8所示。从图7和图8的结果可以看出，本发明实施例2至实施例6的包被液的血型检测试剂盒的灵敏度较好。
试验例5
该试验例对本发明实施例2至实施例6的包被液稳定性进行了考察。
试验方法：将实施例2至实施例6的本发明包被液分别记为包被液2-2、包被液2-3、包被液2-4、包被液2-5和包被液2-6，各包被液分别与A红细胞膜碎片、B红细胞膜碎片按照实施例7至实施例12中描述的制备方法制得红细胞膜包被液，再分别以制得的红细胞膜包被液为检测线按照实施例13的方法制备血型检测试剂盒。将各血型检测试剂盒分别于37℃下加速1个月、2个月和3个月，并分别于第1、2和3个月时采用标准抗体A和标准抗体B进行检测，以考察各组血型检测试剂盒的稳定性。检测方法同试验例1。
检测结果如图9-图13所示。从图9至图13的结果可以看出，本发明实施例2至实施例6的包被液的血型检测试剂盒的稳定性较好。

Claims (10)

1.一种包被液，其特征在于，所述的包被液包括如下组分：0.001M的PB、0.005%-0.01%的海藻糖、0.09%-0.15%的SDS、0.01%-0.05%的甲醇、0.03%-0.09%的蔗糖和0.01%-0.015%的PC300。
2.根据权利要求1所述的包被液，其特征在于，所述的包被液的pH值为7-7.5。
3.一种权利要求1或2所述的包被液的制备方法，其特征在于，所述的制备方法为：先按所述组分进行配制，再调节pH值至7-7.5，即得所述的包被液。
4.一种红细胞膜包被液，其特征在于，所述的红细胞膜包被液包括权利要求1或2所述的包被液。
5.根据权利要求4所述的红细胞膜包被液，其特征在于，所述的红细胞膜包被液还包括红细胞膜，所述的红细胞膜为红细胞膜碎片。
6.根据权利要求5所述的红细胞膜包被液，其特征在于，所述的红细胞膜碎片与包被液的质量体积比为10：1mg/ml。
7.一种权利要求5或6所述的红细胞膜包被液的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：
S1、复融：将红细胞膜碎片加至包被液中，复融，得到复融的红细胞膜包被液；
S2、超声破碎处理：将复融的红细胞膜包被液进行超声破碎处理，得到超声破碎处理后的红细胞膜包被液；
S3、定容：将超声破碎处理后的红细胞膜包被液定容，即得所述的红细胞膜包被液。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中，超声破碎处理时，超声功率为200W，每超声5S停5S，超声破碎总时间为30min。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中，加入的红细胞膜碎片的质量与包被液的体积比为10：1mg/ml。
10.一种血型检测试剂盒，包括绘有T线和C线的NC膜，其特征在于，T线位置包被了权利要求4-6任意一项所述的红细胞膜包被液。
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Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1986003840A1 (en) * 1984-12-17 1986-07-03 Rijksuniversiteit Te Groningen Solid phase immunoassay using immunoreagents immobilized on inert synthetic resin surfaces
WO2002048674A2 (en) * 2000-11-20 2002-06-20 20/20 Genesystems, Inc. Methods, devices, arrays and kits for detecting and analyzing biomolecules
CN102323428A (zh) * 2011-08-17 2012-01-18 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 鸭疫里默氏杆菌抗体间接elisa方法检测试剂盒及其应用
CN102866251A (zh) * 2012-06-19 2013-01-09 深圳市艾瑞生物科技有限公司 基于磷光发光技术的免疫荧光试纸条及其制备方法和应用
CN103630690A (zh) * 2013-12-17 2014-03-12 山东莱博生物科技有限公司 丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂盒及其检测方法
CN104422764A (zh) * 2013-09-04 2015-03-18 深圳市艾瑞生物科技有限公司 糖蛋白类肿瘤标志物免疫层析试纸条及其制备方法与应用
US20150111765A1 (en) * 2011-08-26 2015-04-23 Aviana Molecular Technologies, Llc. Biocoated piezoelectric biosensor platform for point-of-care diagnostic use
CN107525923A (zh) * 2017-04-01 2017-12-29 北京康华源科技发展有限公司 一种离心分离免疫层析检测方法及装置
CN107596349A (zh) * 2017-10-26 2018-01-19 刘冬连 一种稳定的红细胞生成素制剂配方
CN109813893A (zh) * 2019-01-28 2019-05-28 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 Cea检测试纸条及其制备方法、cea检测装置
CN111157721A (zh) * 2020-01-15 2020-05-15 珠海丽珠试剂股份有限公司 用于提高肺炎衣原体抗原/支原体抗原在免疫层析试剂中稳定性的包被液及其制备方法
CN113016775A (zh) * 2021-05-25 2021-06-25 天津德祥生物技术有限公司 红细胞膜碎片冻干保护液和冻干方法及应用
EP3845258A1 (en) * 2020-01-03 2021-07-07 Fenwal, Inc. System and method to lyse and remove red blood cells from a cell product
CN113648288A (zh) * 2021-08-19 2021-11-16 中国药科大学 一种红细胞膜包被功能性分子的纳米复合物、制法及应用

Patent Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1986003840A1 (en) * 1984-12-17 1986-07-03 Rijksuniversiteit Te Groningen Solid phase immunoassay using immunoreagents immobilized on inert synthetic resin surfaces
WO2002048674A2 (en) * 2000-11-20 2002-06-20 20/20 Genesystems, Inc. Methods, devices, arrays and kits for detecting and analyzing biomolecules
CN102323428A (zh) * 2011-08-17 2012-01-18 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 鸭疫里默氏杆菌抗体间接elisa方法检测试剂盒及其应用
US20150111765A1 (en) * 2011-08-26 2015-04-23 Aviana Molecular Technologies, Llc. Biocoated piezoelectric biosensor platform for point-of-care diagnostic use
CN102866251A (zh) * 2012-06-19 2013-01-09 深圳市艾瑞生物科技有限公司 基于磷光发光技术的免疫荧光试纸条及其制备方法和应用
CN104422764A (zh) * 2013-09-04 2015-03-18 深圳市艾瑞生物科技有限公司 糖蛋白类肿瘤标志物免疫层析试纸条及其制备方法与应用
CN103630690A (zh) * 2013-12-17 2014-03-12 山东莱博生物科技有限公司 丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂盒及其检测方法
CN107525923A (zh) * 2017-04-01 2017-12-29 北京康华源科技发展有限公司 一种离心分离免疫层析检测方法及装置
CN107596349A (zh) * 2017-10-26 2018-01-19 刘冬连 一种稳定的红细胞生成素制剂配方
CN109813893A (zh) * 2019-01-28 2019-05-28 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 Cea检测试纸条及其制备方法、cea检测装置
EP3845258A1 (en) * 2020-01-03 2021-07-07 Fenwal, Inc. System and method to lyse and remove red blood cells from a cell product
CN111157721A (zh) * 2020-01-15 2020-05-15 珠海丽珠试剂股份有限公司 用于提高肺炎衣原体抗原/支原体抗原在免疫层析试剂中稳定性的包被液及其制备方法
CN113016775A (zh) * 2021-05-25 2021-06-25 天津德祥生物技术有限公司 红细胞膜碎片冻干保护液和冻干方法及应用
CN113648288A (zh) * 2021-08-19 2021-11-16 中国药科大学 一种红细胞膜包被功能性分子的纳米复合物、制法及应用

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