CN114634554B - 一种抗皱环六肽化合物及其制备方法 - Google Patents

一种抗皱环六肽化合物及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种抗皱环六肽化合物及其制备方法，属于美容肽技术领域，上述抗皱环六肽化合物为如式I所示化合物，其制备方法包括，将全保护多肽H‑AA1‑AA2‑AA3‑AA4‑AA5‑AA6‑OH环化，获得Cyclo(AA1‑AA2‑AA3‑AA4‑AA5‑AA6)；切割，获得Cyclo(BB1‑BB2‑BB3‑BB4‑BB5‑BB6)，即抗皱环六肽化合物。本发明抗皱环六肽化合物具有良好的生物相容性、透皮渗透性和抗皱功效，且皮肤刺激性小，可用于制备具有抗皱功效的护肤品。

Description

一种抗皱环六肽化合物及其制备方法
技术领域
本发明属于美容肽技术领域，具体涉及一种抗皱环六肽化合物及其制备方法。
背景技术
六肽-1是含有组氨酸、丙氨酸、亮氨酸、精氨酸、苯丙氨酸和色氨酸的六肽组合，其中乙酰基六肽-1是六肽-1中的一种。乙酰基六肽-1是一种新型乙酰基六肽，其主要通过同时作用于突触前膜和突触后膜来减少神经递质的传递，减少肌肉的皱缩，从而达到抚平表情纹的目的，并且，乙酰基六肽-1添加到化妆品中不会导致化妆品性质失稳。因此，乙酰基六肽-1成为抗皱活性肽的新宠，是化妆品常用的活性肽之一。但乙酰基六肽-1同样具有一定的弊端，如皮肤渗透性不高等。
对现有文献及专利检索发现，申请公布号为CN 114044803 A的中国发明专利申请公开了一种乙酰基六肽-1衍生物及其应用，乙酰基六肽-1衍生物的油溶性增强，将其添加到化妆品中，具有较强的皮肤渗透能力，并增强了乙酰基六肽-1的抗皱效果，减少肌肉的皱缩，达到抚平皱纹的效果，此外还增加了乙酰基六肽-1抗菌消炎作用，对痤疮丙酸杆菌等具有明显的杀灭作用，能减少痤疮的生成；所得化妆品还具有补水保湿、淡化皱纹，维持肌肤代谢平衡的功效，不刺激皮肤，适合长期使用。申请公布号为CN 112979749 A的中国发明专利申请公开了一种活性环肽、活性环肽组合物及其在制备具有抗氧化作用或抗衰老作用的产品中的应用，上述的活性环肽，具有式Ⅰ或式Ⅱ所示的结构，式Ⅰ所示结构的活性环肽和式Ⅱ所示结构的活性环肽具有优异的抗氧化作用或抗衰老作用；尤其是具有优异的抗环境污染物苯并芘导致的氧化损伤或衰老作用。申请公布号为CN 111670027 A的中国发明专利申请公开了环肽在美容中的用途，环肽由至少五个氨基酸组成，包括至少一个脯氨酸(Pro)和至少一个两个苯丙氨酸(Phe)，其他氨基酸选自包含亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、缬氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、甲硫氨酸(Met)和色氨酸(Trp)的组，甲硫氨酸(Met)(如果存在)可以是未氧化的或氧化的。上述的环肽对于紧致皮肤特别有效并更特别地与旱芹种子的提取物组合对毛孔有效以使皮肤表现为光滑和滑腻。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有良好的生物相容性、透皮渗透性和抗皱功效，且皮肤刺激性小的抗皱环六肽化合物及其制备方法。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案的结构式为：
一种抗皱环六肽化合物，其为如式I所示化合物，
Figure GDA0003796808100000021
式I中，R1选自咪唑或取代咪唑；R2选自吲哚或取代吲哚；R3选自芳香环或取代芳香环；R4选自胍基或取代胍基；R5、R6各自独立地选自脂肪烃或取代脂肪烃；R7、R8各自独立地选自H、脂肪烃或取代脂肪烃；n为1-10的整数。
本发明抗皱环六肽化合物具有良好的生物相容性、透皮渗透性和抗皱功效，且皮肤刺激性小。
可选的，R4选自胍基或取代胍基，R7为H，R8为H；R5为异丁基；R6为甲基；n为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
可选的，抗皱环六肽化合物选自式I-1、式I-2、式I-3、式I-4、式I-5、式I-6、式I-7、式I-8、式I-9、式I-10、式I-11、式I-12、式I-13、式I-14、式I-15、式I-16、式I-17、式I-18、式I-19或式I-20所示化合物；
Figure GDA0003796808100000022
Figure GDA0003796808100000031
Figure GDA0003796808100000041
本发明还提供了一种上述的抗皱环六肽化合物的制备方法，包括，
步骤S1：将CTC树脂和与经Fmoc基团保护的氨基酸类试剂反应，获得H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-CTC-树脂的肽树脂；
步骤S2：将肽树脂除去树脂，获得全保护多肽H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-OH；
步骤S3：将全保护多肽H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-OH环化，获得Cyclo(AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6)；
步骤S4：将Cyclo(AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6)切割，获得粗肽粉末Cyclo(BB1-BB2-BB3-BB4-BB5-BB6)；
步骤S5：将粗肽粉末Cyclo(BB1-BB2-BB3-BB4-BB5-BB6)纯化，冻干，获得Cyclo(BB1-BB2-BB3-BB4-BB5-BB6)，即抗皱环六肽化合物；
其中，AA1为Arg(Pbf)、HomoArg(Pbf)、Orn(Boc)或Lys(Boc)；AA2为Phe或Phe(4-Me)；AA3为Trp(Boc)、Trp(1-Me)或Trp(5-F)；AA4为His(Trt)或His(1-Me)；AA5为Ala，AA6为Leu；
BB1为Arg、HomoArg、Orn或Lys；BB2为Phe或Phe(4-Me)；BB3为Trp、Trp(1-Me)或Trp(5-F)；BB4为His或His(1-Me)；BB5为Ala；BB6为Leu。
可选的，步骤S1用Fmoc基团保护的氨基酸类试剂包括Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-HomoArg(Pbf)-OH、Fmoc-Orn(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Phe(4-Me)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Trp(1-Me)-OH、Fmoc-Trp(5-F)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-His(1-Me)-OH、Fmoc-Ala-OH或Fmoc-Leu-OH。
可选的，步骤S1中氨基酸类试剂依次连接的顺序为Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-His(Trt)-OH或Fmoc-His(1-Me)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH或Fmoc-Trp(1-Me)-OH或Fmoc-Trp(5-F)-OH、Fmoc-Phe-OH或Fmoc-Phe(4-Me)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH或Fmoc-HomoArg(Pbf)-OH或Fmoc-Orn(Boc)-OH或Fmoc-Lys(Boc)-OH。
可选的，步骤S3中环化在DIC、HOBt和DIEA存在下进行；环化温度为20-40℃，时间为6-24h。
可选的，步骤S4中切割在TFA和TIS存在下进行；切割时间为1-5h。
本发明还提供了一种上述的抗皱环六肽化合物在制备护肤品中的用途。
可选的，抗皱环六肽化合物在制备具有抗皱功效的护肤品中的用途。
本发明还提供了一种护肤品，包括，上述的抗皱环六肽化合物。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：本发明抗皱环六肽化合物能够促进人角质形成细胞(HaCaT cell)的生长，增值率大于10％，具有良好的生物相容性；本发明抗皱环六肽化合物具有较佳的透皮渗透性，在12h的透皮浓度大于100μg/cm2，易于被肌肤吸收利用；本发明抗皱环六肽化合物能够促进collalb基因的表达，斑马鱼collalb基因的相对表达量大于1.30，具有抗皱功效；本发明抗皱环六肽化合物；本发明抗皱环六肽化合物对皮肤的刺激性小，皮肤均无出现红斑、疱疹、水肿等不良反应，使用安全。
附图说明
图1为实验组1-24对人角质形成细胞的作用结果；
图2为实验组1-24在12h的透皮浓度；
图3为对比组1-24在12h的透皮浓度；
图4为实验组1-24斑马鱼collalb基因的相对表达量；
图5为对比组1-24斑马鱼collalb基因的相对表达量。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
于一实施方式中，步骤S1具体包括：
步骤S11：将CTC树脂置于固相合成反应器中，加入氨基酸Fmoc-Leu-OH、二氯甲烷和DIEA，20-40℃条件下反应1-5h，加入甲醇，反应2-10min，过滤，依次用二氯甲烷、甲醇、DMF，脱保护，洗涤，抽干待用；
步骤S12：将Fmoc-Ala-OH、HOBt、DIC加入DMF溶液中，在2-10℃反应10-30min获得反应溶液，将反应溶液加入到步骤S11得到的固相合成反应器中，20-40℃条件下反应1-5h，树脂用DMF溶液洗涤，脱保护，洗涤，抽干待用；
步骤S13：将Fmoc-His(Trt)-OH或Fmoc-His(1-Me)-OH、HOBt、DIC加入DMF溶液中，在2-10℃反应10-30min获得反应溶液，将反应溶液加入到步骤S12得到的固相合成反应器中，20-40℃条件下反应1-5h，树脂用DMF溶液洗涤，脱保护，洗涤，抽干待用；
步骤S14：将Fmoc-Trp(Boc)-OH或Fmoc-Trp(1-Me)-OH或Fmoc-Trp(5-F)-OH、HOBt、DIC加入DMF溶液中，在2-10℃反应10-30min获得反应溶液，将反应溶液加入到步骤S13得到的固相合成反应器中，20-40℃条件下反应1-5h，树脂用DMF溶液洗涤，脱保护，抽干待用；
步骤S15：将Fmoc-Phe-OH或Fmoc-Phe(4-Me)-OH、HOBt、DIC加入DMF溶液中，在2-10℃反应10-30min获得反应溶液，将反应溶液加入到步骤S14得到的固相合成反应器中，20-40℃条件下反应1-5h，树脂用DMF溶液洗涤，脱保护，洗涤，抽干待用；
步骤S16：将Fmoc-Arg(Pbf)-OH或Fmoc-HomoArg(Pbf)-OH或Fmoc-Orn(Boc)-OH或Fmoc-Lys(Boc)-OH、HOBt、DIC加入DMF溶液中，在2-10℃反应10-30min获得反应溶液，将反应溶液加入到步骤S14得到的固相合成反应器中，20-40℃条件下反应1-5h，树脂用DMF溶液洗涤，脱保护，洗涤，真空干燥，得到H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-CTC-树脂的肽树脂；其中，AA1为Arg(Pbf)、HomoArg(Pbf)、Orn(Boc)或Lys(Boc)；AA2为Phe或Phe(4-Me)；AA3为Trp(Boc)、Trp(1-Me)或Trp(5-F)；AA4为His(Trt)或His(1-Me)；AA5为Ala，AA6为Leu。
于一实施方式中，步骤S2具体包括：
将H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-CTC-树脂的肽树脂用加入TFA/DCM溶液中，20-40℃条件下反应10-60min，过滤，除去树脂，得到滤液，滤液拉干得到全保护多肽H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-OH；其中，AA1为Arg(Pbf)、HomoArg(Pbf)、Orn(Boc)或Lys(Boc)；AA2为Phe或Phe(4-Me)；AA3为Trp(Boc)、Trp(1-Me)或Trp(5-F)；AA4为His(Trt)或His(1-Me)；AA5为Ala，AA6为Leu。
于一实施方式中，步骤S3具体包括：
将全保护多肽H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-OH、DIC、HOBt、DIEA在20-40℃条件下搅拌环化反应6-24h，形成Cyclo(AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6)；其中，AA1为Arg(Pbf)、HomoArg(Pbf)、Orn(Boc)或Lys(Boc)；AA2为Phe或Phe(4-Me)；AA3为Trp(Boc)、Trp(1-Me)或Trp(5-F)；AA4为His(Trt)或His(1-Me)；AA5为Ala，AA6为Leu。
于一实施方式中，步骤S4具体包括：
将Cyclo(AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6)用TFA/TIS/H2O切割1-5h，再将切割液加入到叔2-10℃的丁基甲醚溶液中，析出固体，离心，干燥得到粗肽粉末Cyclo(BB1-BB2-BB3-BB4-BB5-BB6)；其中，BB1为Arg、HomoArg、Orn或Lys；BB2为Phe或Phe(4-Me)；BB3为Trp、Trp(1-Me)或Trp(5-F)；BB4为His或His(1-Me)；BB5为Ala；BB6为Leu。
于一实施方式中，步骤S5具体包括：
将粗肽粉末Cyclo(BB1-BB2-BB3-BB4-BB5-BB6)经过反相C18色谱纯化，冻干后得到精品Cyclo(BB1-BB2-BB3-BB4-BB5-BB6)，即抗皱环六肽化合物；其中，BB1为Arg、HomoArg、Orn或Lys；BB2为Phe或Phe(4-Me)；BB3为Trp、Trp(1-Me)或Trp(5-F)；BB4为His或His(1-Me)；BB5为Ala；BB6为Leu。
下述实施例中，实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1：
一种抗皱环六肽化合物1的制备方法，包括，
步骤S11：将CTC树脂(6.3g，6.25mmol)置于125mL的固相合成反应器中，加入氨基酸Fmoc-Leu-OH(4.42g，12.5mmol)，加入二氯甲烷(DCM)60mL，再加入DIEA(4.35mL)，25℃条件下反应3h，加入甲醇6.25mL，反应5min，过滤，将树脂用二氯甲烷(DCM)60mL洗涤2次，甲醇60mL洗涤2次，DMF 60mL洗涤2次；然后固相合成反应器中加入20％Pip/DMF溶液65mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液65mL洗涤6次，抽干待用。
步骤S12：取Fmoc-Ala-OH(4.67g，15mmol)，HOBt(2.03g，15mmol)于100mL烧杯中，降温至2-8℃，加入DMF溶液25mL，DIC(2.3mL，15mmol)静置反应10-20min，并将100mL烧杯中溶液加入到125mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成，树脂用DMF溶液洗涤三次，每次65mL，洗涤完成后加入20％Pip/DMF溶液65mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液65mL洗涤6次，抽干待用。
步骤S13：取Fmoc-His(Trt)-OH(9.30g，15mmol)，HOBt(2.03g，15mmol)于100mL烧杯中，降温至2-8℃，加入DMF溶液25mL，DIC(2.3mL，15mmol)静置反应10-20分钟，并将100mL烧杯中溶液加入到125mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5小时，反应完成，树脂用DMF溶液洗涤三次，每次65mL，洗涤完成后加入20％Pip/DMF溶液65mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液65mL洗涤6次，抽干待用。
步骤S14：取Fmoc-Trp(Boc)-OH(7.90g，15mmol)，HOBt(2.03g，15mmol)于100mL烧杯中，降温至2-8℃，加入DMF溶液25mL，DIC(2.3mL，15mmol)静置反应10-20分钟，并将100mL烧杯中溶液加入到125mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5小时，反应完成，树脂用DMF溶液洗涤三次，每次65mL，洗涤完成后加入20％Pip/DMF溶液65mL，搅拌反应30min，抽滤，除去托保护液，然后用DMF溶液65mL洗涤6次，抽干待用。
步骤S15：取Fmoc-Phe-OH(5.81g，15mmol)，HOBt(2.03g，15mmol)于100mL烧杯中，降温至2-8℃，加入DMF溶液25mL，DIC(2.3mL，15mmol)静置反应10-20分钟，并将100mL烧杯中溶液加入到125mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5小时，反应完成，树脂用DMF溶液洗涤三次，每次65mL，洗涤完成后加入20％Pip/DMF溶液65mL，搅拌反应30min，抽滤，除去托保护液，然后用DMF溶液65mL洗涤6次，抽干待用。
步骤S16：取Fmoc-Arg(Pbf)-OH(9.73g，15mmol)，HOBt(2.03g，15mmol)于100mL烧杯中，降温至2-8℃，加入DMF溶液25mL，DIC(2.3mL，15mmol)静置反应10-20分钟，并将100mL烧杯中溶液加入到125mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5小时，反应完成，树脂用DMF溶液洗涤三次，每次65mL，洗涤完成后加入20％Pip/DMF溶液65mL，搅拌反应30min，抽滤，除去托保护液，然后用DMF溶液65mL洗涤6次，甲醇65mL洗涤2次，DCM溶液65mL洗涤2次，甲醇65mL洗涤2次。真空干燥，得到H-Arg(Pbf)-Phe-Trp(Boc)-His(Trt)-Ala-Leu-CTC-树脂的肽树脂。
步骤S2：将H-Arg(Pbf)-Phe-Trp(Boc)-His(Trt)-Ala-Leu-CTC-树脂的肽树脂加入1％的TFA/DCM溶液200mL，30℃条件下搅拌反应30分钟，过滤，除去树脂，得到滤液。滤液拉干得到全保护多肽H-Arg(Pbf)-Phe-Trp(Boc)-His(Trt)-Ala-Leu-OH。
步骤S3：将全保护多肽H-Arg(Pbf)-Phe-Trp(Boc)-His(Trt)-Ala-Leu-OH用二氯甲烷(DCM)1.4L溶解，加入DIC(1.54mL,10mmol)，HOBt(1.35g，10mmol)，DIEA(1.74mL，10mmol)，在30℃条件下搅拌反应12-16小时，形成Cyclo(Arg(Pbf)-Phe-Trp(Boc)-His(Trt)-Ala-Leu)。
步骤S4：将Cyclo(Arg(Pbf)-Phe-Trp(Boc)-His(Trt)-Ala-Leu)固体用TFA/TIS/H2O＝90/5/5(70mL)切割2.5小时，将切割液加入到700mL叔丁基甲醚(2-8℃)溶液中，析出白色固体，离心，得到白色固体粗肽，将白色固体粗肽在真空干燥下干燥得到粗肽粉末Cyclo(Arg-Phe-Trp-His-Ala-Leu)。
步骤S5：粗肽粉末Cyclo(Arg-Phe-Trp-His-Ala-Leu)经过反相C18制备色谱纯化，冻干后得到制得抗皱环六肽化合物1：Cyclo(Arg-Phe-Trp-His-Ala-Leu)，即式I-1所示抗皱环六肽化合物1。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:13.06(s,1H),10.11(s,1H),8.59(s,2H),8.50(s,1H),8.43(d,1H),8.29(s,1H),8.20(d,1H),8.13(t,3H),7.94(d,1H),7.71(d,1H),7.55(m,2H),7.36(s,1H),7.30(d,1H),7.24(d,2H),7.19(m,1H),7.12(d,1H),7.03(m,2H),4.92(m,3H),4.71(m,1H),4.58(m,2H),3.44-2.65(m,8H),2.14(s,1H),1.77-1.72(m,4H),1.51(m,2H),1.44(t,1H),1.38(d,3H),0.98(d,6H).C41H54N12O6,[M+H]+811.43.
Figure GDA0003796808100000091
实施例2：
一种抗皱环六肽化合物2的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S16用Fmoc-Arg(Pbf)-OH替换为Fmoc-HomoArg(Pbf)-OH，制得式I-2所示抗皱环六肽化合物2：Cyclo(HomoArg-Phe-Trp-His-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:13.00(s,1H),10.14(s,1H),8.66(s,2H),8.56(d,1H),8.47(s,1H),8.29(s,1H),8.20(d,1H),8.11(t,3H),7.94(d,1H),7.68(d,1H),7.49(m,2H),7.40(s,1H),7.32(d,1H),7.26(d,2H),7.20(m,1H),7.14(d,1H),7.06(m,2H),4.91(m,3H),4.68(m,1H),4.56(m,2H),3.50-2.96(m,8H),2.18(s,1H),1.86-1.81(m,4H),1.64(m,2H),1.53(t,1H),1.47(d,3H),1.33(m,2H),1.03(d,6H).C42H56N12O6,[M+H]+825.44.
Figure GDA0003796808100000092
实施例3：
一种抗皱环六肽化合物3的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S16用Fmoc-Arg(Pbf)-OH替换为Fmoc-Lys(Boc)-OH，制得式I-3所示抗皱环六肽化合物3：Cyclo(Lys-Phe-Trp-His-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:13.08(s,1H),10.11(s,1H),8.57(d,1H),8.45(s,1H),8.26(d,1H),8.13(t,3H),7.96(d,1H),7.63(d,1H),7.51(m,2H),7.40(s,1H),7.34(d,1H),7.28(d,2H),7.24(m,1H),7.16(d,1H),7.11(m,2H),5.21(s,2H),4.95(m,3H),4.71(m,1H),4.55(m,2H),3.44-2.68(m,8H),1.77-1.74(m,4H),1.65(m,4H),1.52(t,1H),1.46(d,3H),1.28(m,2H),0.91(d,6H).C41H54N10O6,[M+H]+783.42.
Figure GDA0003796808100000101
实施例4：
一种抗皱环六肽化合物4的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S16用Fmoc-Arg(Pbf)-OH替换为Fmoc-Orn(Boc)-OH，制得式I-4所示抗皱环六肽化合物4：Cyclo(Orn-Phe-Trp-His-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:13.05(s,1H),10.04(s,1H),8.56(d,1H),8.43(s,1H),8.24(d,1H),8.16(t,3H),8.03(d,1H),7.66(d,1H),7.49(m,2H),7.37(s,1H),7.33(d,1H),7.29(d,2H),7.26(m,1H),7.18(d,1H),7.12(m,2H),5.15(s,2H),4.96(m,3H),4.68(m,1H),4.52(m,2H),3.40-2.62(m,8H),1.76-1.71(m,4H),1.54(m,2H),1.47(t,1H),1.40(d,3H),0.99(d,6H).C40H52N10O6,[M+H]+769.41.
Figure GDA0003796808100000102
实施例5：
一种抗皱环六肽化合物5的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S14用Fmoc-Trp(Boc)-OH替换为Fmoc-Trp(1-Me)-OH，制得式I-5所示抗皱环六肽化合物5：Cyclo(Arg-Phe-Trp(1-Me)-His-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:12.88(s,1H),8.75(s,2H),8.61(s,1H),8.50(d,1H),8.43(s,1H),8.30(d,1H),8.19(t,3H),7.95(d,1H),7.73(d,1H),7.52(m,1H),7.40(m,2H),7.45(d,1H),7.37(s,1H),7.29(d,2H),7.23(m,1H),7.02(m,1H),6.39(s,1H),4.92(m,3H),4.70(m,1H),4.52(m,2H),3.80(d,3H),3.44-2.60(m,8H),2.16(s,1H),1.87-1.81(m,4H),1.65(m,2H),1.56(t,1H),1.48(d,3H),1.21(d,6H).C42H56N12O6,[M+H]+825.44.
Figure GDA0003796808100000111
实施例6：
一种抗皱环六肽化合物6的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S14用Fmoc-Trp(Boc)-OH替换为Fmoc-Trp(5-F)-OH，制得式I-6所示抗皱环六肽化合物6：Cyclo(Arg-Phe-Trp(5-F)-His-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:12.90(s,1H),10.14(s,1H),8.61(s,2H),8.48(s,1H),8.54(d,1H),8.31(s,1H),8.26(d,1H),8.18(t,3H),7.99(d,1H),7.63(m,2H),7.50(s,1H),7.41(d,1H),7.36(d,2H),7.30(m,1H),7.18(d,1H),6.95(d,1H),6.89(s,1H),4.92(m,3H),4.76(m,1H),4.50(m,2H),3.62-2.85(m,8H),1.98(s,1H),1.84-1.79(m,4H),1.58(m,2H),1.49(t,1H),1.43(d,3H),0.82(d,6H).C41H53FN12O6,[M+H]+829.42.
Figure GDA0003796808100000112
实施例7：
一种抗皱环六肽化合物7的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S14用Fmoc-Trp(Boc)-OH替换为Fmoc-Trp(1-Me)-OH，将步骤S16用Fmoc-Arg(Pbf)-OH替换为Fmoc-HomoArg(Pbf)-OH，制得式I-7所示抗皱环六肽化合物7：Cyclo(HomoArg-Phe-Trp(1-Me)-His-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:12.86(s,1H),8.79(s,2H),8.62(s,1H),8.55(d,1H),8.44(s,1H),8.27(d,1H),8.13(t,3H),7.95(d,1H),7.70(d,1H),7.55(m,1H),7.43(m,2H),7.38(d,1H),7.32(s,1H),7.26(d,2H),7.21(m,1H),7.00(m,1H),6.41(s,1H),4.98(m,3H),4.72(m,1H),4.57(m,2H),3.76(d,3H),3.45-2.90(m,8H),2.13(s,1H),1.84-1.80(m,4H),1.62(m,2H),1.54(t,1H),1.47(d,3H),1.25(m,2H),0.85(d,6H).C43H58N12O6,[M+H]+839.46.
Figure GDA0003796808100000121
实施例8：
一种抗皱环六肽化合物8的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S14用Fmoc-Trp(Boc)-OH替换为Fmoc-Trp(1-Me)-OH，将步骤S16用Fmoc-Arg(Pbf)-OH替换为Fmoc-Lys(Boc)-OH，制得式I-8所示抗皱环六肽化合物8：Cyclo(Lys-Phe-Trp(1-Me)-His-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:13.08(s,1H),8.61(s,1H),8.51(d,1H),8.32(d,1H),8.19(t,3H),7.95(d,1H),7.55(d,1H),7.52(m,1H),7.40(m,2H),7.37(d,1H),7.33(s,1H),7.29(d,2H),7.20(m,1H),7.02(m,1H),6.50(s,1H),5.21(s,2H),5.05(m,3H),4.81(m,1H),4.63(m,2H),3.78(d,3H),3.38-2.55(m,8H),1.80(m,4H),1.64(m,2H),1.55(t,1H),1.46(d,3H),1.25(m,2H),1.02(d,6H).C42H56N10O6,[M+H]+797.44.
Figure GDA0003796808100000131
实施例9：
一种抗皱环六肽化合物9的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S14用Fmoc-Trp(Boc)-OH替换为Fmoc-Trp(1-Me)-OH，将步骤S16用Fmoc-Arg(Pbf)-OH替换为Fmoc-Orn(Boc)-OH，制得式I-9所示抗皱环六肽化合物9：Cyclo(Orn-Phe-Trp(1-Me)-His-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:13.10(s,1H),8.63(s,1H),8.56(d,1H),8.36(d,1H),8.17(t,3H),7.95(d,1H),7.66(d,1H),7.55(m,1H),7.42(m,2H),7.35(d,1H),7.30(s,1H),7.22(d,2H),7.15(m,1H),7.06(m,1H),6.44(s,1H),5.19(s,2H),4.98(m,3H),4.77(m,1H),4.56(m,2H),3.73(d,3H),3.40-2.55(m,8H),1.78-1.74(m,4H),1.61(m,2H),1.52(t,1H),1.44(d,3H),1.06(d,6H).C41H54N10O6,[M+H]+783.43.
Figure GDA0003796808100000132
实施例10：
一种抗皱环六肽化合物10的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S14用Fmoc-Trp(Boc)-OH替换为Fmoc-Trp(5-F)-OH，将步骤S16用Fmoc-Arg(Pbf)-OH替换为Fmoc-HomoArg(Pbf)-OH，制得式I-10所示抗皱环六肽化合物10：Cyclo(HomoArg-Phe-Trp(5-F)-His-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:13.13(s,1H),10.26(s,1H),8.77(s,2H),8.59(d,1H),8.48(s,1H),8.37(d,1H),8.28(s,1H),8.16(t,3H),7.90(d,1H),7.52(m,2H),7.41(s,1H),7.36(d,1H),7.29(d,2H),7.26(m,1H),7.18(d,1H),6.92(d,1H),6.83(s,1H),5.06(m,3H),4.77(m,1H),4.53(m,2H),3.48-2.89(m,8H),2.19(s,1H),1.81(m,4H),1.69(m,2H),1.57(t,1H),1.49(d,3H),1.30(m,2H),1.15(d,6H).C42H55FN12O6,[M+H]+843.44.
Figure GDA0003796808100000141
实施例11：
一种抗皱环六肽化合物11的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S16用Fmoc-Arg(Pbf)-OH替换为Fmoc-Lys(Boc)-OH，将步骤S14用Fmoc-Trp(Boc)-OH替换为Fmoc-Trp(5-F)-OH制得式I-11所示抗皱环六肽化合物11：Cyclo(Lys-Phe-Trp(5-F)-His-Ala-Leu)。1HNMR(400MHz,DMSO),δppm:13.00(s,1H),10.16(s,1H),8.57(s,1H),8.50(d,1H),8.30(d,1H),8.28(t,3H),8.15(d,1H),7.52(m,2H),7.43(s,1H),7.38(d,1H),7.30(d,2H),7.24(m,1H),7.18(d,1H),6.96(d,1H),6.89(s,1H),5.11(s,2H),4.92(m,3H),4.76(m,1H),4.60(m,2H),3.52-2.72(m,8H),1.75(m,4H),1.65(m,2H),1.50(t,1H),1.45(d,3H),1.31(m,2H),1.11(d,6H).C41H53FN10O6,[M+H]+801.41.
Figure GDA0003796808100000142
实施例12：
一种抗皱环六肽化合物12的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S14用Fmoc-Trp(Boc)-OH替换为Fmoc-Trp(5-F)-OH，将步骤S16用Fmoc-Arg(Pbf)-OH替换为Fmoc-Orn(Boc)-OH，制得式I-11所示抗皱环六肽化合物12：Cyclo(Orn-Phe-Trp(5-F)-His-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:12.97(s,1H),10.11(s,1H),8.59(s,1H),8.48(d,1H),8.26(d,1H),8.19(t,3H),8.12(d,1H),7.47(m,2H),7.39(s,1H),7.33(d,1H),7.29(d,2H),7.22(m,1H),7.16(d,1H),6.90(d,1H),6.80(s,1H),5.14(s,2H),4.90(m,3H),4.77(m,1H),4.58(m,2H),3.44-2.65(m,8H),1.76(m,4H),1.66(m,2H),1.52(t,1H),1.41(d,3H),1.07(d,6H).C40H51FN10O6,[M+H]+787.40.
Figure GDA0003796808100000151
实施例13：
一种抗皱环六肽化合物13的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S13用Fmoc-His(Trt)-OH替换为Fmoc-His(1-Me)-OH，制得式I-13所示抗皱环六肽化合物13：Cyclo(Arg-Phe-Trp-His(1-Me)-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:10.19(s,1H),8.76(s,2H),8.60(d,1H),8.35(s,1H),8.29(d,1H),8.23(t,3H),8.09(d,1H),7.77(d,1H),7.64(s,1H),7.49(m,2H),7.42(d,1H),7.33(d,2H),7.27(m,1H),7.20(s,1H),7.15(d,1H),7.06(m,2H),4.95(m,3H),4.78(m,1H),4.60(m,2H),3.79(s,3H),3.44-2.72(m,8H),2.22(s,1H),1.83(m,4H),1.70(m,2H),1.53(t,1H),1.48(d,3H),0.99(d,6H).C42H56N12O6,[M+H]+825.44.
Figure GDA0003796808100000152
实施例14：
一种抗皱环六肽化合物14的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S13用Fmoc-His(Trt)-OH替换为Fmoc-His(1-Me)-OH，将步骤S16用Fmoc-Arg(Pbf)-OH替换为Fmoc-HomoArg(Pbf)-OH，制得式I-14所示抗皱环六肽化合物14：Cyclo(HomoArg-Phe-Trp-His(1-Me)-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:10.24(s,1H),8.73(s,2H),8.59(d,1H),8.33(s,1H),8.27(d,1H),8.20(t,3H),8.05(d,1H),7.70(d,1H),7.60(s,1H),7.43(m,2H),7.35(d,1H),7.30(d,2H),7.24(m,1H),7.19(s,1H),7.14(d,1H),7.02(m,2H),4.92(m,3H),4.71(m,1H),4.53(m,2H),3.72(s,3H),3.50-2.95(m,8H),2.19(s,1H),1.80(m,4H),1.66(m,2H),1.59(t,1H),1.48(d,3H),1.35(m,2H),1.04(d,6H).C43H58N12O6,[M+H]+839.46.
Figure GDA0003796808100000161
实施例15：
一种抗皱环六肽化合物15的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S13用Fmoc-His(Trt)-OH替换为Fmoc-His(1-Me)-OH，将步骤S16用Fmoc-Arg(Pbf)-OH替换为Fmoc-Lys(Boc)-OH，制得式I-15所示抗皱环六肽化合物15：Cyclo(Lys-Phe-Trp-His(1-Me)-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:10.10(s,1H),8.55(d,1H),8.28(d,1H),8.19(t,3H),8.11(d,1H),7.80(d,1H),7.72(s,1H),7.49(m,2H),7.38(d,1H),7.32(d,2H),7.27(m,1H),7.20(s,1H),7.15(d,1H),7.10(m,2H),5.21(s,2H),5.05(m,3H),4.81(m,1H),4.63(m,2H),3.40-2.77(m,8H),1.78(m,4H),1.60(m,2H),1.54(t,1H),1.43(d,3H),1.28(m,4H),0.91(d,6H).C42H56N10O6,[M+H]+797.44.
Figure GDA0003796808100000162
实施例16：
一种抗皱环六肽化合物16的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S13用Fmoc-His(Trt)-OH替换为Fmoc-His(1-Me)-OH，将步骤S16用Fmoc-Arg(Pbf)-OH替换为Fmoc-Orn(Boc)-OH，制得式I-16所示抗皱环六肽化合物16：Cyclo(Orn-Phe-Trp-His(1-Me)-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:10.17(s,1H),8.56(d,1H),8.20(d,1H),8.13(t,3H),7.95(d,1H),7.64(d,1H),7.54(s,1H),7.41(m,2H),7.33(d,1H),7.29(d,2H),7.25(m,1H),7.18(s,1H),7.11(d,1H),7.02(m,2H),5.18(s,2H),4.95(m,3H),4.78(m,1H),4.59(m,2H),3.34-2.68(m,8H),1.76(m,4H),1.62(m,2H),1.54(t,1H),1.38(d,3H),0.90(d,6H).C41H54N10O6,[M+H]+783.42.
Figure GDA0003796808100000171
实施例17：
一种抗皱环六肽化合物17的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S15用Fmoc-Phe-OH替换为Fmoc-Phe(4-Me)-OH，制得式I-17所示抗皱环六肽化合物17：Cyclo(Arg-Phe(4-Me)-Trp-His-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:13.00(s,1H),10.05(s,1H),8.56(s,2H),8.47(s,1H),8.60(d,1H),8.34(d,1H),8.25(s,1H),8.23(t,3H),8.05(d,1H),7.79(d,1H),7.43(s,1H),7.36(d,1H),7.28(d,3H),7.17(m,2H),7.08(d,2H),5.02(m,3H),4.79(m,1H),4.63(m,2H),3.48-2.95(m,8H),2.44(s,3H),2.17(s,1H),1.79-1.74(m,4H),1.65(m,2H),1.55(t,1H),1.43(d,3H),0.95(d,6H).C42H56N12O6,[M+H]+825.44.
Figure GDA0003796808100000172
实施例18：
一种抗皱环六肽化合物18的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S15用Fmoc-Phe-OH替换为Fmoc-Phe(4-Me)-OH，将步骤S16用Fmoc-Arg(Pbf)-OH替换为Fmoc-HomoArg(Pbf)-OH，制得式I-18所示抗皱环六肽化合物18：Cyclo(HomoArg-Phe(4-Me)-Trp-His-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:12.99(s,1H),10.07(s,1H),8.77(s,2H),8.52(s,1H),8.63(d,1H),8.36(d,1H),8.28(s,1H),8.22(t,3H),8.11(d,1H),7.87(d,1H),7.56(s,1H),7.49(d,1H),7.34(d,3H),7.27(m,2H),7.20(d,2H),5.11(m,3H),4.81(m,1H),4.65(m,2H),3.54-2.99(m,8H),2.45(s,3H),2.17(s,1H),1.78-1.74(m,4H),1.64(m,2H),1.53(t,1H),1.45(d,3H),1.31(m,2H),0.97(d,6H).C43H58N12O6,[M+H]+839.46.
Figure GDA0003796808100000181
实施例19：
一种抗皱环六肽化合物19的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S15用Fmoc-Phe-OH替换为Fmoc-Phe(4-Me)-OH，将步骤S16用Fmoc-Arg(Pbf)-OH替换为Fmoc-Lys(Boc)-OH，制得式I-19所示抗皱环六肽化合物19：Cyclo(Lys-Phe(4-Me)-Trp-His-Ala-Leu)。1HNMR(400MHz,DMSO),δppm:13.05(s,1H),10.13(s,1H),8.54(s,1H),8.64(d,1H),8.28(d,1H),8.19(t,3H),7.99(d,1H),7.64(d,1H),7.43(s,1H),7.38(d,1H),7.20(d,3H),7.15(m,2H),7.03(d,2H),5.16(s,2H),4.99(m,3H),4.81(m,1H),4.58(m,2H),3.49-2.67(m,8H),2.42(s,3H),1.79(m,4H),1.64(m,2H),1.52(t,1H),1.47(d,3H),1.32(m,2H),0.98(d,6H).C42H56N10O6,[M+H]+797.44.
Figure GDA0003796808100000182
实施例20：
一种抗皱环六肽化合物20的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S15用Fmoc-Phe-OH替换为Fmoc-Phe(4-Me)-OH，将步骤S16用Fmoc-Arg(Pbf)-OH替换为Fmoc-Orn(Boc)-OH，制得式I-20所示抗皱环六肽化合物20：Cyclo(Orn-Phe(4-Me)-Trp-His-Ala-Leu)。1HNMR(400MHz,DMSO),δppm:13.11(s,1H),10.26(s,1H),8.58(s,1H),8.56(d,1H),8.31(d,1H),8.19(t,3H),8.02(d,1H),7.66(d,1H),7.42(s,1H),7.39(d,1H),7.22(d,3H),7.17(m,2H),7.06(d,2H),5.05(s,2H),4.90(m,3H),4.66(m,1H),4.55(m,2H),3.44-2.65(m,8H),2.39(s,3H),1.85-1.82(m,4H),1.72(m,2H),1.55(t,1H),1.49(d,3H),1.12(d,6H).C41H54N10O6,[M+H]+783.42.
Figure GDA0003796808100000191
实施例21：
一种抗皱环六肽化合物21的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S13用Fmoc-His(Trt)-OH替换为Fmoc-His(1-Me)-OH，将步骤S14用Fmoc-Trp(Boc)-OH替换为Fmoc-Trp(5-F)-OH，将步骤S15用Fmoc-Phe-OH替换为Fmoc-Phe(4-Me)-OH，制得式I-21所示抗皱环六肽化合物21：Cyclo(Arg-Phe(4-Me)-Trp(5-F)-His(1-Me)-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:10.18(s,1H),8.59(s,2H),8.52(d,1H),8.33(s,1H),8.25(d,1H),8.19(t,3H),7.98(d,1H),7.63(s,1H),7.38(d,1H),7.26(s,1H),7.19(d,3H),6.95(d,2H),6.86(d,1H),6.81(s,1H),4.99(m,3H),4.77(m,1H),4.53(m,2H),3.86(s,3H),3.47-2.72(m,8H),2.44(s,3H),2.26(s,1H),1.78-1.74(m,4H),1.63(m,2H),1.49(t,1H),1.44(d,3H),0.95(d,6H).C43H57FN12O6,[M+H]+857.45.
Figure GDA0003796808100000192
实施例22：
一种抗皱环六肽化合物22的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S13用Fmoc-His(Trt)-OH替换为Fmoc-His(1-Me)-OH，将步骤S14用Fmoc-Trp(Boc)-OH替换为Fmoc-Trp(5-F)-OH，将步骤S15用Fmoc-Phe-OH替换为Fmoc-Phe(4-Me)-OH，将步骤S16用Fmoc-Arg(Pbf)-OH替换为Fmoc-HomoArg(Pbf)-OH，制得式I-22所示抗皱环六肽化合物22：Cyclo(HomoArg-Phe(4-Me)-Trp(5-F)-His-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:10.15(s,1H),8.67(s,2H),8.36(s,1H),8.54(d,1H),8.22(d,1H),8.15(t,3H),8.04(d,1H),7.62(s,1H),7.47(d,1H),7.24(s,1H),7.18(d,3H),7.11(d,2H),6.96(d,1H),6.92(s,1H),5.03(m,3H),4.85(m,1H),4.54(m,2H),3.89(s,3H),3.52-2.77(m,8H),2.34(s,3H),2.12(s,1H),1.94-1.90(m,4H),1.63(m,2H),1.52(t,1H),1.46(d,3H),1.23(m,2H),1.01(d,6H).C44H59FN12O6,[M+H]+871.47.
Figure GDA0003796808100000201
实施例23：
一种抗皱环六肽化合物23的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S13用Fmoc-His(Trt)-OH替换为Fmoc-His(1-Me)-OH，将步骤S14用Fmoc-Trp(Boc)-OH替换为Fmoc-Trp(5-F)-OH，将步骤S15用Fmoc-Phe-OH替换为Fmoc-Phe(4-Me)-OH，将步骤S16用Fmoc-Arg(Pbf)-OH替换为Fmoc-Lys(Boc)-OH，制得式I-23所示抗皱环六肽化合物23：Cyclo(Lys-Phe(4-Me)-Trp(5-F)-His(1-Me)-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:10.13(s,1H),8.52(d,1H),8.24(d,1H),8.11(t,3H),7.90(d,1H),7.64(s,1H),7.42(d,1H),7.31(s,1H),7.27(d,3H),7.05(d,2H),6.89(d,1H),6.84(s,1H),5.34(s,2H),4.95(m,3H),4.70(m,1H),4.41(m,2H),3.81(s,3H),3.48-2.76(m,8H),2.45(s,3H),1.82-1.78(m,4H),1.62(m,2H),1.51(t,1H),1.48(d,3H),1.25(m,2H),0.91(d,6H).C43H57FN10O6,[M+H]+829.44.
Figure GDA0003796808100000202
实施例24：
一种抗皱环六肽化合物24的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与实施例1基本相同，区别在于：将步骤S13用Fmoc-His(Trt)-OH替换为Fmoc-His(1-Me)-OH，将步骤S14用Fmoc-Trp(Boc)-OH替换为Fmoc-Trp(5-F)-OH，将步骤S15用Fmoc-Phe-OH替换为Fmoc-Phe(4-Me)-OH，将步骤S16用Fmoc-Arg(Pbf)-OH替换为Fmoc-Orn(Boc)-OH，制得式I-24所示抗皱环六肽化合物24：Cyclo(Orn-Phe(4-Me)-Trp(5-F)-His(1-Me)-Ala-Leu)。1H NMR(400MHz,DMSO),δppm:10.12(s,1H),8.43(d,1H),8.14(d,1H),8.10(t,3H),7.91(d,1H),7.59(s,1H),7.44(d,1H),7.38(s,1H),7.32(d,3H),7.09(d,2H),6.99(d,1H),6.91(s,1H),5.33(s,2H),4.85(m,3H),4.77(m,1H),4.53(m,2H),3.78(s,3H),3.45-2.75(m,8H),2.42(s,3H),1.77(m,4H),1.61(m,2H),1.52(t,1H),1.48(d,3H),0.91(d,6H).C42H55FN10O6,[M+H]+815.43.
Figure GDA0003796808100000211
对比例1：
一种线性六肽化合物1的制备方法
将实施例1中步骤S2得全保护多肽H-Arg(Pbf)-Phe-Trp(Boc)-His(Trt)-Ala-Leu-OH用TFA/TIS/H2O＝90/5/5(70mL)切割2.5小时，将切割液加入到700mL叔丁基甲醚(2-8℃)溶液中，析出白色固体，离心，得到白色固体粗肽，将白色固体粗肽在真空干燥下干燥得到粗肽粉末Arg-Phe-Trp-His-Ala-Leu，然后经过反相C18制备色谱纯化，冻干后得到精品Arg-Phe-Trp-His-Ala-Leu，即线性六肽化合物1。
对比例2：
一种线性六肽化合物2的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例2中步骤S2得全保护多肽。
对比例3：
一种线性六肽化合物3的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例3中步骤S2得全保护多肽。
对比例4：
一种线性六肽化合物4的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例4中步骤S2得全保护多肽。
对比例5：
一种线性六肽化合物5的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例5中步骤S2得全保护多肽。
对比例6：
一种线性六肽化合物6的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例6中步骤S2得全保护多肽。
对比例7：
一种线性六肽化合物7的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例7中步骤S2得全保护多肽。
对比例8：
一种线性六肽化合物8的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例8中步骤S2得全保护多肽。
对比例9：
一种线性六肽化合物9的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例9中步骤S2得全保护多肽。
对比例10：
一种线性六肽化合物10的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例10中步骤S2得全保护多肽。
对比例11：
一种线性六肽化合物11的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例11中步骤S2得全保护多肽。
对比例12：
一种线性六肽化合物12的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例12中步骤S2得全保护多肽。
对比例13：
一种线性六肽化合物13的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例13中步骤S2得全保护多肽。
对比例14：
一种线性六肽化合物14的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例14中步骤S2得全保护多肽。
对比例15：
一种线性六肽化合物15的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例15中步骤S2得全保护多肽。
对比例16：
一种线性六肽化合物16的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例16中步骤S2得全保护多肽。
对比例17：
一种线性六肽化合物17的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例17中步骤S2得全保护多肽。
对比例18：
一种线性六肽化合物18的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例18中步骤S2得全保护多肽。
对比例19：
一种线性六肽化合物19的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例19中步骤S2得全保护多肽。
对比例20：
一种线性六肽化合物20的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例20中步骤S2得全保护多肽。
对比例21：
一种线性六肽化合物21的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例21中步骤S2得全保护多肽。
对比例22：
一种线性六肽化合物22的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例22中步骤S2得全保护多肽。
对比例23：
一种线性六肽化合物23的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例23中步骤S2得全保护多肽。
对比例24：
一种线性六肽化合物24的制备方法
本实施例所用原料、制备方法与对比例1基本相同，区别在于：所用全保护多肽为实施例24中步骤S2得全保护多肽。
实验例1：
抗皱环六肽化合物的细胞毒性
将人角质形成细胞(HaCaT cell)以106/24well的密度分株培养，24h后换成不含FBS的培养基继续进行24h饥饿处理。接着进行生物活性物质处理，分别添加抗皱环六肽化合物1-24样品至终浓度为25mM(实验组1-24)。处理24h后除去培养基，加入5mg/mL MTT试液40μL/well培养4h后除去培养基，并按1mL加入DMSO 500mL振荡12min后，在96孔板中每孔各取200μL，用分光光度计测定540nm处的吸光度，对细胞毒性状况，将不含样品的溶剂作为对照组，按照下列式计算细胞存活率。
细胞存活率％＝(实验组的吸光度/对照组的吸光度)×100％
实验组1-24对人角质形成细胞的作用结果见图1，从图1可以看出，实验组1-24能显著促进人角质形成细胞的生长，增值率大于10％，这说明抗皱环六肽化合物1-24具有较佳的生物相容性。
实验例2：
抗皱环六肽化合物的透皮渗透性
取猪耳朵背部皮肤，去除发毛和脂肪，裁剪3×3cm的皮肤圆片，保存于-20℃冰箱中备用。采用RJY-6B型药物透皮扩散试验仪进行试验，使用时，取出保存的皮肤圆片，自然解冻，并用生理盐水浸泡0.5h，用脱脂棉擦干，固定在垂直透过试验扩散池中。向接受池中加入适量质量浓度为0.9％的氯化钠溶液的生理盐水作为接受液，分别向供给池中加入2g抗皱环六肽化合物1-24样品(实验组1-24)和线性六肽化合物1-24样品(对比组1-24)，加入后用封口膜将供给池封闭，以300r/min速度开启磁力搅拌，并于2h、4h、6h、8h和12h用注射器缓慢抽取出全部接受液，用HPLC测定其中肽化合物的浓度，每次取液之后，再用针管抽取6g保温的生理盐水，补加回接收池，12h后取出接手后不再补充生理盐水。仪器设定温度为32±5℃，然后按照下式计算肽化合物的透皮浓度。
透皮浓度＝(CnVn+∑CkVk)×1000/S
式中：Cn为第n个取样点测得的肽化合物浓度，mg/mL；Ck为第n个取样点前所有取样点相对应测得的肽化合物浓度，mg/mL；Vn为接收液体积，mL；Vk为第n个取样点前所有取样点相对应的取样体积，mL；S为皮肤圆片面积，cm2。
实验组1-24在12h的透皮浓度见图2，对比组1-24在12h的透皮浓度见图3，从图2和图3可以看出，实验组1-24在12h的透皮浓度大于100μg/cm2，实验组1-24在12h的透皮浓度分别大于对比组1-24，这说明抗皱环六肽化合物1-24具有较佳的透皮渗透性，其透皮渗透性优于线性六肽化合物1-24。
实验例3：
抗皱环六肽化合物的抗皱性
检测试剂：iTaqUniversal SYBR Green Supermix(货号1725124，Bio-rad，USA)；FastQuant RTKit(With gDNase)试剂盒(KR106，TIANGEN，China)；RNA-QuickPurificationKit(RNA快速提取试剂盒)(RN001，YiShan Biotech，China)。检测动物：斑马鱼，野生型AB品系，受精后4天(4dpf)。按照标准饲养和繁殖方法，符合国际AAALAC认证(认证编号：001458)的要求。检测方法：随机选取斑马鱼于96孔板中，每孔30尾；以0.003％的浓度将抗皱环六肽化合物1-24样品分别添加到96孔板中(实验组1-24)，每孔定容3mL。同时设置正常对照组和对比组1-24(线性六肽化合物1-24)，共设置三次生物学重复。将各组于28℃条件下避光孵育24h。使用RNA快速提取试剂盒提取各组斑马鱼总RNA，利用紫外-可见光分光光度计对总RNA浓度和纯度进行测定。取2.00ug斑马鱼样品总RNA，按照cDNA第一链合成试剂盒说明操作，合成20.0uL cDNA，用q-PCR检测β-actin和collalb的基因表达。用β-actin作为基因表达的内参，通过如下公式计算collalb基因的RNA相对表达量。
RNA相对表达量＝2^ΔΔC(t)
Figure GDA0003796808100000261
ΔC(t)＝C(t)目的基因-C(t)β-actin
实验组1-24斑马鱼collalb基因的相对表达量见图4，对比组1-24斑马鱼collalb基因的相对表达量见图5，从图4和图5可以看出，实验组1-24斑马鱼collalb基因的相对表达量大于1.30，实验组1-24斑马鱼collalb基因的相对表达量与正常对照组相比均明显增加，这说明抗皱环六肽化合物1-24均具有抗皱功效；实验组1-24斑马鱼collalb基因的相对表达量分别大于对比组1-24，这说明抗皱环六肽化合物1-24的抗皱功效优于线性六肽化合物1-24。
实验例4：
抗皱环六肽化合物的皮肤刺激性测试
受试人群资料及分组：选择皮肤健康、无皮肤病过敏史的女性受试志愿者，35-55岁，随机分组，每组10人。测试方法：选用合格的斑试器，以封闭式斑贴实验方式，将约0.02mL抗皱环六肽化合物样品滴于斑试器内，外用专用胶带贴覆于受试者背部，24h后去除样品，分别于去除后0.5h、6h、12h、24h、48h观察皮肤反应，按照《化妆品卫生规范》中皮肤反应分级标准记录其结果。
从皮肤刺激性测试实验结果可以看出，各组受试者通过上述实验，在0.5h、6h、12h、24h、48h观察受试者皮肤的反应，皮肤均无出现红斑、疱疹、水肿等不良反应，说明本发明抗皱环六肽化合物1-24对皮肤的刺激性小，使用安全。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种抗皱环六肽化合物，其特征在于，所述抗皱环六肽化合物选自以下化合物；
Figure FDA0003796808090000011
Figure FDA0003796808090000021
2.一种权利要求1所述的抗皱环六肽化合物的制备方法，包括，
步骤S1：将CTC树脂和与经Fmoc基团保护的氨基酸类试剂反应，获得H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-CTC-树脂的肽树脂；
步骤S2：将所述肽树脂除去树脂，获得全保护多肽H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-OH；
步骤S3：将所述全保护多肽H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-OH环化，获得Cyclo(AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6)；
步骤S4：将所述Cyclo(AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6)切割，获得粗肽粉末Cyclo(BB1-BB2-BB3-BB4-BB5-BB6)；
步骤S5：将所述粗肽粉末Cyclo(BB1-BB2-BB3-BB4-BB5-BB6)纯化，冻干，获得Cyclo(BB1-BB2-BB3-BB4-BB5-BB6)，即抗皱环六肽化合物；
其中，AA1为Arg(Pbf)、HomoArg(Pbf)、Orn(Boc)或Lys(Boc)；AA2为Phe或Phe(4-Me)；AA3为Trp(Boc)、Trp(1-Me)或Trp(5-F)；AA4为His(Trt)或His(1-Me)；AA5为Ala，AA6为Leu；
BB1为Arg、HomoArg、Orn或Lys；BB2为Phe或Phe(4-Me)；BB3为Trp、Trp(1-Me)或Trp(5-F)；BB4为His或His(1-Me)；BB5为Ala；BB6为Leu。
3.根据权利要求2所述的一种抗皱环六肽化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤S1用Fmoc基团保护的氨基酸类试剂包括Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-HomoArg(Pbf)-OH、Fmoc-Orn(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Phe(4-Me)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Trp(1-Me)-OH、Fmoc-Trp(5-F)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-His(1-Me)-OH、Fmoc-Ala-OH或Fmoc-Leu-OH。
4.根据权利要求2所述的一种抗皱环六肽化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中环化在DIC、HOBt和DIEA存在下进行；所述环化温度为20-40℃，时间为6-24h。
5.根据权利要求2所述的一种抗皱环六肽化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中切割在TFA和TIS存在下进行；所述切割时间为1-5h。
6.权利要求1所述的抗皱环六肽化合物在制备护肤品中的用途。
7.根据权利要求6 所述的用途，其特征在于，所述抗皱环六肽化合物在制备具有抗皱功效的护肤品中的用途。
8.一种护肤品，包括，权利要求1所述的抗皱环六肽化合物。
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