CN117050146A - 透明质酸修饰的美容肽、制备方法及其用途 - Google Patents

透明质酸修饰的美容肽、制备方法及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了透明质酸修饰的美容肽、制备方法及其用途，涉及美容肽领域。该透明质酸修饰的美容肽结构式如式(I)所示：M‑C(I)；其中，M代表透明质酸钠，其结构如式(II)所示：(II)，式中y为≥1的自然数；C代表美容肽，所述美容肽包括具有美容和/或护肤功效的多肽或其衍生物，所述多肽包括二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽或九肽；其中，M端基葡萄糖醛酸开环链接C结构中的氨基。本发明提供的透明质酸修饰的美容肽既能保持透明质酸钠的性质又能含有多肽的功能性，并且制备的新型化合物的稳定性能得到明显的提升，在化妆品/护肤品领域具有广阔的应用前景。

Description

透明质酸修饰的美容肽、制备方法及其用途
技术领域
本发明属于美容肽领域，具体涉及透明质酸修饰的美容肽、制备方法及其用途。
背景技术
透明质酸是1934年美国哥伦比亚大学眼科教授Meyer和Palmer首先从牛眼玻璃体中分离得到的大分子多糖，其水溶液呈透明玻璃状，故又名玻璃酸。透明质酸是眼玻璃体、皮肤、脐带、关节滑液等组织 中广泛存在的天然生物物质。早期使用的透明质酸原料主要从鸡冠分离提取。由于受成本和原料的限制，没有得到进一步推广。现在的化妆品和药用透明质酸主要来自微生物发酵法生产。发酵法不受动物原料的限制，成本较低，易于规模化生产，且产品纯度较高，便于控制相对分子质量。国内于20世纪80年代开始此领域的研究，现在已经取得了显著的成果。我国发酵法生产的透明质酸无论从质量还是数量上都已处于国际先进地位。透明质酸是构成细胞外基质和细胞间质的主要成分之一，是细胞间的填充物，对于皮肤的形态、结构、功能 起着重要的作用。由于透明质酸具有保湿、修护、营养等作用，对皮肤有良好的亲合性且使用安全，其在美容化妆 品中的应用越来越广泛。由于透明质酸具有生物可降解性、生物相容性、化学改性能力及体内靶向性等特性，因而在蛋白质多肽修饰领域中备受关注。本发明采用透明质酸修饰的美容肽，并进一步研究其合成方法和应用。
发明内容
本发明的目的在于提供透明质酸修饰的美容肽、制备方法及其用途，该透明质酸修饰的美容肽既能保持透明质酸钠的性质又能含有多肽的功能性，并且制备的新型化合物的稳定性能得到明显的提升，在化妆品/护肤品领域具有广阔的应用前景。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：
一种透明质酸修饰的美容肽，上述透明质酸修饰的美容肽结构式如式(I)所示：
M-C (I)；
其中，M代表透明质酸钠，其结构如式(II)所示：
(II)，式中y为≥1的自然数；
C代表美容肽，上述美容肽包括具有美容和/或护肤功效的多肽或其衍生物，上述多肽包括二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽或其它多肽；
其中，M端基葡萄糖醛酸链接C结构中的氨基。本发明采用美容多肽修饰透明质酸，采用取代反应，将透明质酸钠和多肽通过共价键结合起来，形成新的化学物质，新的化学物质既能保持透明质酸钠的性质又能含有多肽的功能性；并且该化合物具有多种功效，其稳定性功效都较原来的功效明显增强。如化合物具有更加优异的保湿性能；部分化合物的抗皱紧致性能、美白性能、抗氧化能力和抗糖性能得到明显提升，舒缓能力也得到有效改善。本发明将透明质酸和美容多肽采用共价键偶联的方式生成透明质酸修饰的美容肽，直接通过化学改性修饰，形成新型化学结构，能够从根本上赋予该化合物更为优异的特性，制备方法步骤简单；同时本发明还提供了其在化妆品以及美容产品中的应用，显著增强功能型化妆品的使用效果，如补水、抗老紧致、美白、舒缓、抗氧化以及抗糖化功效，进而能够提高用户的使用满意度。
优选地，y选自1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12；更优选地，y=1或2或3。
具体而言，式(I)所示的化合物包括如下式(III)所示的结构：
(III)；
其中，
上述n为自然数；
上述R为美容肽结构中除去反应活性基团氨基的剩余部分；
上述美容肽包括具有美容和/或护肤功效的多肽或其衍生物，上述多肽包括二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽或其它多肽。
优选地，n=0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23或24。更优选地，n=0或1或2或3。
具体而言，二肽或其衍生物包括二肽-2和肌肽中的一种；优选肌肽。
具体而言，三肽或其衍生物包括类蛇毒肽、三肽-1、三肽-5、三肽-8、三肽-38和棕榈酰三肽-38中的一种；优选三肽-1或三肽-8。
具体而言，四肽或其衍生物包括四肽-5、四肽-7、四肽-9、四肽-11、四肽-30和四肽-15中的一种，或者包括氨基酸序列为H-Asp-Val-Lys-Tyr-OH的四肽；优选四肽-7、四肽-15。
具体而言，五肽或其衍生物包括五肽-4和肉豆蔻五肽-4中的一种；优选五肽-4。
具体而言，六肽或其衍生物包括六肽-1、六肽-8、六肽-9、六肽-11和六肽-38中的一种，或者包括氨基酸序列为H-Arg-Arg-Gln-Met-Glu-Glu-NH2、H-Arg-Arg-Gln-D-Met-Glu-Glu-NH2、H-Trp-Phe-Arg-Leu-Ala-His-NH2和H-Trp-Phe-Arg-D-Leu-Ala-His-NH2的六肽中的一种。
优选地，六肽或其衍生物包括六肽-1、六肽-8、六肽-9、六肽-11；更优选氨基酸序列为H-Arg-Arg-Gln-Met-Glu-Glu-NH2、H-Arg-Arg-Gln-D-Met-Glu-Glu-NH2、H-Trp-Phe-Arg-Leu-Ala-His-NH2和H-Trp-Phe-Arg-D-Leu-Ala-His-NH2的六肽中的一种。
具体而言，七肽或其衍生物包括氨基酸序列为H-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-Ala-OH或H-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-Ala-NH2的七肽。
具体而言，所述八肽或其衍生物包括氨基酸序列为H-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-Ala-Asp-NH2的八肽。
具体而言，九肽或其衍生物包括九肽-1。
具体而言，上述(Ⅰ)所示的化合物包括H-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH-透明质酸(钠)、透明质酸(钠)-NH-Phe-Val-Ala-Pro-Phe-Pro-OH、H-His-D-Phe-Arg-NH-透明质酸(钠)、H-His-Ala-Leu-Arg-Phe-Trp-NH-透明质酸(钠)、H-Trp-Phe-Arg-D-Leu-Ala-His-NH-透明质酸(钠)、H-Trp-Phe-Arg-Leu-Ala-His-NH-透明质酸(钠)、H-Arg-Arg-Gln-D-Met-Glu-Glu-NH-透明质酸(钠)或H-Arg-Arg-Gln-Met-Glu-Glu-NH-透明质酸(钠)中的一种或多种。
进一步的，上述(Ⅰ)所示的化合物还可包括透明质酸(钠)-HN-Gly-Gln-Pro-Arg-OH、透明质酸(钠)-HN-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-OH、H-Lys-Leu-Ala-Lys-Lys-NH-透明质酸(钠)、H-Gly-Pro-Gln-Gly-Pro-Gln-NH-透明质酸(钠)、H-Met-Pro-{D-Phe}-Arg-{D-Trp}-Phe-Lys-Pro-Val-NH-透明质酸(钠)、H-Tyr-Pro-Phe-Phe-NH-透明质酸(钠)、透明质酸(钠)-NH-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-Ala-OH或透明质酸(钠)-NH-Asp-Val-Lys-Tyr-OH中的一种或多种。
需要说明的是，上述表示的透明质酸修饰的美容肽可表示结构中透明质酸(钠)与美容肽之间键合只存在一个反应活性位点的情况，也可表示存在多个反应活性位点的情况。进一步需要说明的是，所述键合部分包括美容多肽结构中的活性氨基与透明质酸(钠)结构中端基环中能够进一步聚合的活性羟基位点发生反应形成的。
更优选地，上述式(Ⅰ)所示的化合物包括下列中的一种或多种：
A2；
A4；
A6；
B2；
B4；
B6；
D2；
D4；
D6；
E2；
E4；
E6；
F2；
F4；
F6；
G2；
G4；
G6。
本发明还公开了一种透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括：采用透明质酸钠与美容肽发生缩合反应，制得透明质酸修饰的美容肽。
进一步的，上述透明质酸修饰的美容肽的合成路线如下所示：
；
其中，n为自然数；
Y为Na或H；
Peptide=R；R为美容肽结构中除去反应活性基团氨基的剩余部分；
X包括H、钠或钾；
上述美容肽包括具有美容和/或护肤功效的多肽或其衍生物，所述多肽包括二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽或其它多肽。
需要说明的是，本发明提供的透明质酸修饰的美容肽最终形态可以是透明质酸修饰的美容肽，也可以是盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、醋酸盐、钠盐、钾盐、三氟乙酸盐、马来酸盐或富马酸盐等。
上述透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括：采用透明质酸钠与美容肽发生开环反应，制得透明质酸修饰的美容肽。
具体地，上述透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
将美容肽加入到有机溶剂中，搅拌溶解，然后加入TFA，搅拌0.5-1h后，加入DIEA，然后再称取透明质酸钠加入；在40-50℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入醋酸，水浴锅控温30-45℃，进行重排反应2-4h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，制得透明质酸修饰的美容肽。
具体而言，上述有机溶剂选自DMF、N,N-二乙基乙酰胺、DMSO、乙腈、氮甲基吡咯烷酮（NMP）、甲醇、乙醇、丙酮、THF、二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六环和水等单一溶剂或混合溶剂；优选DMSO。
具体而言，上述美容肽与DMSO的质量体积比为1g:8-25mL；优选1g:10mL。
具体而言，上述美容肽与TFA的质量体积比为1g:0-1.2mL。
具体而言，上述美容肽与DIEA的质量比为1:0.5-5.5；优选1:0.8-2.5。
具体而言，上述美容肽与透明质酸的摩尔比为1:2-8；优选1:3-5；更优选1:4。
具体而言，上述美容肽与醋酸的质量体积比为1g:4-10mL；优选1g:5-9mL；更优选1g:8mL。
本发明的又一目的在于，公开了上述透明质酸修饰的美容肽在制备化妆品和/或护肤品中的用途。
本发明又公开了上述透明质酸修饰的美容肽在增强化妆品和/或护肤品保湿性能中的用途。
本发明还公开了上述透明质酸修饰的美容肽在增强化妆品和/或护肤品舒缓性能中的用途。
本发明还公开了上述透明质酸修饰的美容肽在增强化妆品和/或护肤品抗皱紧致性能中的用途。
本发明还公开了上述透明质酸修饰的美容肽在增强化妆品和/或护肤品美白性能中的用途。
本发明还公开了上述透明质酸修饰的美容肽在增强化妆品和/或护肤品抗糖化性能中的用途。
本发明还公开了上述透明质酸修饰的美容肽在增强化妆品和/或护肤品抗氧化性能中的用途。
一种化妆品，包含上述透明质酸修饰的美容肽。
一种护肤品，包含上述透明质酸修饰的美容肽。
本发明的有益效果包括：
本发明采用美容多肽修饰透明质酸，通过美拉德反应形成新的化合物，该化合物既能保持透明质酸钠的性质又能含有多肽的功能性；并且其稳定性功效都较原来的功效明显增强。如化合物具有更加优异的保湿性能；部分化合物的抗皱紧致性能、美白性能、抗氧化能力和抗糖性能得到明显提升，舒缓能力也得到有效改善。本发明提供的透明质酸修饰的美容肽，直接通过化学改性修饰，形成新型化学结构，能够从根本上赋予该化合物更为优异的特性，制备方法步骤简单；同时本发明还提供了其在化妆品以及美容产品中的应用，显著增强功能型化妆品的使用效果，如补水、抗老紧致、美白、舒缓、抗氧化以及抗糖化功效，进而能够提高用户的使用满意度。
因此，本发明提供了透明质酸修饰的美容肽、制备方法及其用途，该透明质酸修饰的美容肽既能保持透明质酸钠的性质又能含有多肽的功能性，并且制备的新型化合物的稳定性能得到明显的提升，在化妆品/护肤品领域具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为实施例1制备的H-Gly-Gln-Pro-Arg-OH的质谱图测试结果；
图2为实施例1制备的H-Gly-Gln-Pro-Arg-OH的液相色谱图测试结果；
图3为实施例1制备的透明质酸修饰的美容肽的质谱图测试结果；
图4为实施例1制备的透明质酸修饰的美容肽的液相色谱图测试结果；
图5为实施例2制备的H-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-OH的质谱图测试结果；
图6为实施例2制备的H-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-OH的液相色谱图测试结果；
图7为实施例2制备的透明质酸修饰的美容肽的液相色谱图测试结果；
图8为实施例2制备的透明质酸修饰的美容肽的液相色谱中5.801min处样品的质谱图测试结果；
图9为实施例2制备的透明质酸修饰的美容肽的液相色谱中6.102min处样品的质谱图测试结果；
图10为实施例2制备的透明质酸修饰的美容肽的液相色谱中6.558min处样品的质谱图测试结果；
图11为实施例3制备的H-Lys-Leu-Ala-Lys-Lys-NH2的质谱图测试结果；
图12为实施例3制备的H-Lys-Leu-Ala-Lys-Lys-NH2的LC-MS测试结果；
图13为实施例3制备的透明质酸修饰的美容肽的质谱图测试结果；
图14为实施例3制备的透明质酸修饰的美容肽的液相色谱图测试结果；
图15为实施例4制备的H-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2的质谱图测试结果；
图16为实施例4制备的H-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2的LC-MS测试结果；
图17为实施例4制备的透明质酸修饰的美容肽D2的质谱图测试结果；
图18为实施例4制备的透明质酸修饰的美容肽D2的液相色谱图测试结果；
图19为实施例4制备的透明质酸修饰的美容肽D4的质谱图测试结果；
图20为实施例4制备的透明质酸修饰的美容肽D4的液相色谱图测试结果；
图21为实施例4制备的透明质酸修饰的美容肽D6的质谱图测试结果；
图22为实施例4制备的透明质酸修饰的美容肽D6的液相色谱图测试结果；
图23为实施例5制备的透明质酸修饰的美容肽的质谱图测试结果；
图24为实施例5制备的透明质酸修饰的美容肽的液相色谱图测试结果；
图25为实施例6制备的H-Gly-Pro-Gln-Gly-Pro-Gln-NH2的质谱图测试结果；
图26为实施例6制备的H-Gly-Pro-Gln-Gly-Pro-Gln-NH2的液相色谱图测试结果；
图27为实施例6制备的透明质酸修饰的美容肽的质谱图测试结果；
图28为实施例6制备的透明质酸修饰的美容肽的液相色谱图测试结果；
图29为实施例7制备的H-Met-Pro-{D-Phe}-Arg-{D-Trp}-Phe-Lys-Pro-Val-NH2的质谱图测试结果；
图30为实施例7制备的H-Met-Pro-{D-Phe}-Arg-{D-Trp}-Phe-Lys-Pro-Val-NH2的液相色谱图测试结果；
图31为实施例7制备的透明质酸修饰的美容肽的质谱图测试结果；
图32为实施例7制备的透明质酸修饰的美容肽的液相色谱图测试结果；
图33为实施例8制备的H-Phe-Val-Ala-Pro-Phe-Pro-OH的质谱图测试结果；
图34为实施例8制备的H-Phe-Val-Ala-Pro-Phe-Pro-OH的LC-MS测试结果；
图35为实施例8制备的透明质酸修饰的美容肽H2的质谱图测试结果；
图36为实施例8制备的透明质酸修饰的美容肽H2的液相色谱图测试结果；
图37为实施例8制备的透明质酸修饰的美容肽H4的质谱图测试结果；
图38为实施例8制备的透明质酸修饰的美容肽H4的液相色谱图测试结果；
图39为实施例8制备的透明质酸修饰的美容肽H6的质谱图测试结果；
图40为实施例8制备的透明质酸修饰的美容肽H6的液相色谱图测试结果；
图41为实施例9制备的H-His-D-Phe-Arg-NH2的质谱图测试结果；
图42为实施例9制备的H-His-D-Phe-Arg-NH2的LC-MS测试结果；
图43为实施例9制备的透明质酸修饰的美容肽L2的质谱图测试结果；
图44为实施例9制备的透明质酸修饰的美容肽L2的液相色谱图测试结果；
图45为实施例9制备的透明质酸修饰的美容肽L4的质谱图测试结果；
图46为实施例9制备的透明质酸修饰的美容肽L4的液相色谱图测试结果；
图47为实施例9制备的透明质酸修饰的美容肽L6的质谱图测试结果；
图48为实施例9制备的透明质酸修饰的美容肽L6的液相色谱图测试结果；
图49为实施例10制备的H-Tyr-Pro-Phe-Phe-NH2的质谱图测试结果；
图50为实施例10制备的H-Tyr-Pro-Phe-Phe-NH2的液相色谱图测试结果；
图51为实施例10制备的透明质酸修饰的美容肽的质谱图测试结果；
图52为实施例10制备的透明质酸修饰的美容肽的液相色谱图测试结果；
图53为实施例11制备的透明质酸修饰的美容肽中部分产物（y=1，y=2以及y=3的透明质酸钠与美容肽反应产物）的质谱图测试结果；
图54为实施例11制备的透明质酸修饰的美容肽中部分产物（y=1，y=2以及y=3的透明质酸钠与美容肽反应产物）的高效液相色谱图测试结果；
图55为实施例11制备的透明质酸修饰的美容肽中部分产物（y=2以及y=3的透明质酸钠与美容肽反应产物）的质谱图测试结果；
图56为实施例11制备的透明质酸修饰的美容肽中部分产物（y=2以及y=3的透明质酸钠与美容肽反应产物）的液相色谱图测试结果；
图57为实施例12制备的H-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-Ala-OH的质谱图测试结果；
图58为实施例12制备的H-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-Ala-OH的液相色谱图测试结果；
图59为实施例12制备的透明质酸修饰的美容肽的液相色谱图测试结果；
图60为实施例12制备的透明质酸修饰的美容肽的液相色谱图中11.577min处样品的质谱图测试结果；
图61为实施例12制备的透明质酸修饰的美容肽的液相色谱图中12.223min处样品的质谱图测试结果；
图62为实施例13制备的H-Asp-Val-Lys-Tyr-OH的质谱图测试结果；
图63为实施例13制备的H-Asp-Val-Lys-Tyr-OH的液相色谱图测试结果；
图64为实施例13制备的透明质酸修饰的美容肽的液相色谱图测试结果；
图65为实施例13制备的透明质酸修饰的美容肽的液相色谱图中8.226min处样品的质谱图测试结果；
图66为实施例13制备的透明质酸修饰的美容肽的液相色谱图中12.711min处样品的质谱图测试结果；
图67为实施例14制备的H-His-Ala-Leu-Arg-Phe-Trp-NH2的质谱图测试结果；
图68为实施例14制备的H-His-Ala-Leu-Arg-Phe-Trp-NH2的液相色谱图测试结果；
图69为实施例14制备的透明质酸修饰的美容肽A2的质谱图测试结果；
图70为实施例14制备的透明质酸修饰的美容肽A2的液相色谱图测试结果；
图71为实施例14制备的透明质酸修饰的美容肽A4的质谱图测试结果；
图72为实施例14制备的透明质酸修饰的美容肽A4的液相色谱图测试结果；
图73-1为实施例14制备的透明质酸修饰的美容肽A4的部分核磁氢谱测试结果；
图73-2为实施例14制备的透明质酸修饰的美容肽A4的部分核磁氢谱测试结果；
图73-3为实施例14制备的透明质酸修饰的美容肽A4的部分核磁氢谱测试结果；
图73-4为实施例14制备的透明质酸修饰的美容肽A4的部分核磁氢谱测试结果；
图73-5为实施例14制备的透明质酸修饰的美容肽A4的部分核磁氢谱测试结果；
图74-1为实施例14制备的透明质酸修饰的美容肽A4的部分核磁碳谱测试结果；
图74-2为实施例14制备的透明质酸修饰的美容肽A4的部分核磁碳谱测试结果；
图74-3为实施例14制备的透明质酸修饰的美容肽A4的部分核磁碳谱测试结果；
图74-4为实施例14制备的透明质酸修饰的美容肽A4的部分核磁碳谱测试结果；
图74-5为实施例14制备的透明质酸修饰的美容肽A4的部分核磁碳谱测试结果；
图75为实施例14制备的透明质酸修饰的美容肽A4的二维cosy图谱测试结果；
图76为实施例14制备的透明质酸修饰的美容肽A6的质谱图测试结果；
图77为实施例14制备的透明质酸修饰的美容肽A6的液相色谱图测试结果；
图78为实施例27制备的H-Trp-Phe-Arg-D-Leu-Ala-His-NH2的质谱图测试结果；
图79为实施例27制备的H-Trp-Phe-Arg-D-Leu-Ala-His-NH2的液相色谱图测试结果；
图80为实施例27制备的透明质酸修饰的美容肽E2的液相色谱图测试结果；
图81为实施例27制备的透明质酸修饰的美容肽E2的质谱图测试结果；
图82为实施例27制备的透明质酸修饰的美容肽E4的质谱图测试结果；
图83为实施例27制备的透明质酸修饰的美容肽E4的液相色谱图测试结果；
图84为实施例27制备的透明质酸修饰的美容肽E6的质谱图测试结果；
图85为实施例27制备的透明质酸修饰的美容肽E6的液相色谱图测试结果；
图86为实施例28制备的H-Trp-Phe-Arg-Leu-Ala-His-NH2的质谱图测试结果；
图87为实施例28制备的H-Trp-Phe-Arg-Leu-Ala-His-NH2的液相色谱图测试结果；
图88为实施例28制备的透明质酸修饰的美容肽B2的质谱图测试结果；
图89为实施例28制备的透明质酸修饰的美容肽B2的液相色谱图测试结果；
图90为实施例28制备的透明质酸修饰的美容肽B4的液相色谱图测试结果；
图91为实施例28制备的透明质酸修饰的美容肽B4的液相色谱图测试结果；
图92为实施例28制备的透明质酸修饰的美容肽B6的质谱图测试结果；
图93为实施例28制备的透明质酸修饰的美容肽B6的液相色谱图测试结果；
图94为实施例29制备的H-Arg-Arg-Gln-D-Met-Glu-Glu-NH2的质谱图测试结果；
图95为实施例29制备的H-Arg-Arg-Gln-D-Met-Glu-Glu-NH2的液相色谱图测试结果；
图96为实施例29制备的透明质酸修饰的美容肽G2的液相色谱图测试结果；
图97为实施例29制备的透明质酸修饰的美容肽G2的液相色谱图测试结果；
图98为实施例29制备的透明质酸修饰的美容肽G4的液相色谱图测试结果；
图99为实施例29制备的透明质酸修饰的美容肽G4的质谱图测试结果；
图100为实施例29制备的透明质酸修饰的美容肽G6的质谱图测试结果；
图101为实施例29制备的透明质酸修饰的美容肽G6的液相色谱图测试结果；
图102为实施例30制备的H-Arg-Arg-Gln-Met-Glu-Glu-NH2的质谱图测试结果；
图103为实施例30制备的H-Arg-Arg-Gln-Met-Glu-Glu-NH2的液相色谱图测试结果；
图104为实施例30制备的透明质酸修饰的美容肽F2的液相色谱图测试结果；
图105为实施例30制备的透明质酸修饰的美容肽F2的液相色谱图测试结果；
图106为实施例30制备的透明质酸修饰的美容肽F4的液相色谱图测试结果；
图107为实施例30制备的透明质酸修饰的美容肽F4的质谱图测试结果；
图108为实施例30制备的透明质酸修饰的美容肽F6的质谱图测试结果；
图109为实施例30制备的透明质酸修饰的美容肽F6的液相色谱图测试结果。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明确，以下结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细描述：
需要说明的是，本发明实施例1-实施例30所用透明质酸为水解透明质酸钠，购自山东葆力嘉生物科技有限公司，其为混合物，主要成分包括二糖透明质酸钠、四糖透明质酸钠、六糖透明质酸钠，质量比为1：5：3。
实施例1：
一种H-Gly-Gln-Pro-Arg-OH的合成方法，包括：
将3.13mmol Wang树脂置于125mL的固相合成反应器中，加入7.5mmol氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)-OH，加入二氯甲烷（DCM）15mL，再加入吡啶（2.01mL），DBU（1.78mL），25℃条件下反应3h，抽滤，用DMF溶液洗涤3次，每次15mL，加入15mL封端液（封端液包含Ac2O、DMF、DIEA，Ac2O:DMF:DIEA的质量比为：10:84:6）反应15min；过滤，将树脂用二氯甲烷洗涤2次，每次15mL，甲醇洗涤2次，每次15mL，DMF洗涤2次，每次15mL；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液15mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF洗涤6次，每次15mL，抽干待用。
取5mmol Fmoc-Pro-OH.H2O、5mmol HOBt于50mL烧杯中，降温至5℃，加入5mL DMF，0.8mL DIC静置反应15min，并将50mL烧杯中溶液加入到上述125mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次15mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液15mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次15mL，抽干待用。
取7.5mmol Fmoc-Gln(Trt)-OH、7.5mmol HOBt于50mL烧杯中，降温至5℃，加入5mLDMF，1.2mL DIC静置反应15min，并将50mL烧杯中溶液加入到上述125mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次15mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液15mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液15mL洗涤6次，抽干待用。
取7.5mmol Fmoc-Gly-OH、7.5mmol HOBt于50mL烧杯中，降温至5℃，加入5mL DMF，1.2mL DIC静置反应15min，并将50mL烧杯中溶液加入到上述125mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次15mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液15mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次15mL；甲醇洗涤2次，每次15mL；DCM溶液洗涤2次，每次15mL；甲醇洗涤2次，每次15mL；真空干燥，得到H-AA1-AA2-AA3-AA4-Wang-树脂的肽树脂，其中AA1是Gly；AA2是Gln(Trt)；AA3为Pro；AA4是Arg(Pbf)。将上述肽树脂用TFA/Tis/H2O（TFA、Tis与H2O的体积比为90:5:5）切割，用量30mL，时间2.5h，将切割液加入300mL乙醚（5℃）溶液中，析出白色固体，离心，得到H-Gly-Gln-Pro-Arg-OH，其质谱（图1）以及高效液相色谱（图2）如图1-2所示。
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.46g H-Gly-Gln-Pro-Arg-OH.2TFA，加5mL DMSO搅拌溶解，加入0.785gDIEA，四肽析出，再称取2.1g透明质酸，水浴控温45℃，搅拌15min反应液澄清，继续控45℃反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入4mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=100:0，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：0-10%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图3和图4所示。
实施例2：
一种H-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-OH的合成方法，包括：
将8.75mmol CTC树脂置于250mL的固相合成反应器中，加入17.5mmol氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH，加入二氯甲烷75mL，在加入7.0mL DIEA，25℃条件下反应3h，加入甲醇10mL，反应5min；过滤，将树脂用二氯甲烷洗涤2次，每次75mL；甲醇洗涤2次，每次75mL；DMF洗涤2次，每次75mL；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液75mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次75mL，抽干待用。
取21mmol Fmoc- Lys(Boc)-OH、21mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液50mL，3.2mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次75mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液75mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次65mL，抽干待用。
取21mmol Fmoc-Thr(tBu)-OH、21mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液50mL，3.2mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次75mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20% Pip/DMF（v/v）溶液75mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次65mL，抽干待用。
取21mmol Fmoc-Thr(tBu)-OH、21mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液50mL，3.2mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次75mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液75mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次65mL，抽干待用。
取21mmol Fmoc- Lys(Boc)-OH，21mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至2-8℃，加入DMF溶液50mL，3.2mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次75mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液75mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次65mL，然后用甲醇洗涤2次，每次75mL，DCM溶液洗涤2次，每次75mL，甲醇洗涤2次，每次75mL，真空干燥，得到H-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-CTC-树脂；
取4.14g上述肽树脂，加入40mL切割液TFA/Tis/H2O（TFA、Tis与H2O的体积比为90:5:5），30℃条件下搅拌反应2.5h，过滤，除去树脂，得到滤液；滤液拉干得到H-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-OH，其质谱和高效液相色谱表征结果如图5和图6所示。
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-OH.3TFA，加5mL DMSO搅拌溶解，加入82μLTFA，搅拌0.5h后，加入0.641g DIEA，再称取1.71g透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入4mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=100:0，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：0-10%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽，其高效液相色谱表征如图7所示；其中，分别收集5.801min处、6.102min处、6.558min处的样品进行质谱表征，其结果如图8、图9、图10所示。
实施例3：
一种H-Lys-Leu-Ala-Lys-Lys-NH2的合成方法，包括：
将10mmol AM树脂置于250mL的固相合成反应器中，加入20%Pip/DMF（v/v）溶液70mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次70mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Linker、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液35mL、3.1mL DIC，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次70mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液70mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次70mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Lys(Boc)-OH、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液35mL、3.1mL DIC，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次70mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液70mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次70mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Lys(Boc)-OH、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液35mL、3.1mL DIC，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次70mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液70mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次70mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Ala-OH、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液35mL、3.1mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次70mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液70mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次70mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Leu-OH、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液35mL、3.1mL DIC，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次70mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液70mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Lys(Boc)-OH、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液35mL、3.1mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次70mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液70mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。然后加入甲醇洗涤2次，每次70mL，DCM溶液洗涤2次，每次70mL，甲醇洗涤2次，每次70mL。真空干燥，得到H-Lys(Boc)-Leu-Ala-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Linker-AM树脂的肽树脂，
在上述肽树脂中，加入100mL切割液TFA/Tis/H2O（TFA、Tis与H2O的体积比为90:5:5），切割2.5小时，将切割液加入到1000mL乙醚（5℃）溶液中，析出白色固体，离心，真空干燥，制得H-Lys-Leu-Ala-Lys-Lys-NH2，其质谱以及LC-MS表征结果如图11和图12所示。
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-Lys-Leu-Ala-Lys-Lys-NH2.4TFA，加10mL DMSO搅拌溶解，加入107μLTFA，室温搅拌0.5h后，加入0.557g DIEA，再加入1.49g透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入4mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=100:0，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：0-10%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图13和图14所示。
实施例4：
一种H-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2的合成方法，包括：
将5mmol AM树脂置于100mL的固相合成反应器中，加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用；
取10mmol Fmoc-Linker、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，1.5mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，1.5mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，1.5mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Gln（Trt）-OH、，10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，1.5mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Met-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，1.5mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Glu(otBu)-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，1.5mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。
取15mmo Fmoc-Glu(otBu)-OH、1mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，2.3mL静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次30mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用；然后加入甲醇洗涤2次，每次40mL，DCM溶液洗涤2次，每次40mL，甲醇洗涤2次，每次40mL，真空干燥，得到H-Glu(otBu)-Glu(otBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Linker-AM树脂的肽树脂；
将上述肽树脂用100mL TFA/茴香硫醚/苯酚/H2O/EDT（TFA、茴香硫醚、苯酚、H2O与EDT的质量比为：87.5:5:2.5:2.5:2.5）切割2.5h，将切割液加入到1000mL乙醚（5℃）溶液中，析出白色固体，离心，真空干燥，制得H-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2，其质谱及其高效液相色谱表征结果如图15和图16所示。
一种透明质酸修饰的美容肽的合成路线为：
；
其中，-COOX为-COONa；
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取1g H-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2.3TFA，加10mL DMSO搅拌溶解，加入889mg DIEA，再加入3.67g透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入8mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取1g粗品加200mL H2O稀释；
填料：50DAC，C18；流速：60mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=100:0，平衡10min，流速：60mL/min；
上样：流速：60mL/min；
洗脱：0-20%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，得到三种结构的透明质酸修饰的美容肽，如下所示：
D2，其质谱及其高效液相色谱表征结果如图17和图18所示；
D4，其质谱及其高效液相色谱表征结果如图19和图20所示；/>
D6，其质谱及其高效液相色谱表征结果如图21和图22所示。
实施例5：
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-Gly-His-Lys-OH.2AcOH，加10mL DMSO搅拌5min溶解，加入286μLTFA，搅拌1min后溶液变澄清，再搅拌0.5h后，加入3g透明质酸，搅拌溶解后，加入1.11gDIEA，搅拌1min后，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入4mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=100:0，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：0-20%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽，其质谱及其高效液相色谱测试结果如图23和图24所示。
实施例6：
一种H-Gly-Pro-Gln-Gly-Pro-Gln-OH的合成方法，包括：
将10mmol AM树脂置于100mL的固相合成反应器中，加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Linker，20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，3.1mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Glu-OtBu、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，4.6mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Pro-OH、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，4.6mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取20mmo Fmoc-Gly-OH、20mmo HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，4.6mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Gln(Trt)-OH、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，4.6mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Pro-OH、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，4.6mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Gly-OH、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，4.6mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次30mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。然后加入甲醇洗涤2次，每次40mL，DCM溶液洗涤2次，每次40mL，甲醇洗涤2次，每次40mL。真空干燥，得到H-BB1-BB2-BB3-BB4-BB5-BB6-Linker-AM树脂，其中AA1是Gly；AA2是Pro；AA3为Gln；AA4是Gly；AA5是Pro；且AA6是Gln。
取8.3g上述肽树脂用50mL切割液（TFA、Tis与H2O的体积比为90:5:5）切割2.5h，将切割液加入到500mL乙醚（5℃）溶液中，析出白色固体，离心，真空干燥，制得H-Gly-Pro-Gln-Gly-Pro-Gln-OH，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图25和图26所示。
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-Gly-Pro-Gln-Gly-Pro-Gln-OH. TFA，加5mL DMSO搅拌溶解，加入0.834g DIEA，再加入2.23g透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入4mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=100:0，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：0-20%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图27和图28所示。
实施例7：
一种H-Met-Pro-{D-Phe}-Arg-{D-Trp}-Phe-Lys-Pro-Val-NH2的合成方法，包括：
将5mmol AM树脂置于100mL的固相合成反应器中，加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Linker、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，1.5mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取15mmo Fmoc-Val-OH、15mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，2.3mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取15mmol Fmoc-Pro-OH、15mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，2.3mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取15mmol Fmoc-Lys(Boc)-OH、15mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，2.3mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取15mmol Fmoc-Phe-OH、15mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，2.3mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-D-Trp(Boc)-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，1.5mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。
取15mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH、15mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，2.3mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次30mL。洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-D-Phe-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，1.5mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次30mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。
取15mmol Fmoc-Pro-OH、15mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，2.3mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次30mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。
取15mmol Fmoc-Met-OH、15mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL，2.3mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次30mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。然后加入甲醇洗涤2次，每次40mL，DCM溶液洗涤2次，每次40mL，甲醇洗涤2次，每次40mL；真空干燥，得到H-Met-Pro-{D-Phe}-Arg-{D-Trp}-Phe-Lys-Pro-Val-Linker-AM树脂的肽树脂。
取5.7g上述肽树脂用50mL切割液TFA/茴香硫醚/EDT/苯酚/H2O（TFA:茴香硫醚:EDT:苯酚:H2O的质量比为87.5:5:2.5:2.5:2.5）切割2.5h，将切割液加入到500mL乙醚（5℃）溶液中，析出白色固体，离心，真空干燥，制得H-Met-Pro-{D-Phe}-Arg-{D-Trp}-Phe-Lys-Pro-Val-NH2，其质谱以及高效液相色谱如图29和图30所示。
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-Met-Pro-{D-Phe}-Arg-{D-Trp}-Phe-Lys-Pro-Val-NH2.3TFA，加5mLDMSO搅拌溶解，加入0.375g DIEA，再加入1g透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入4mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=95:5，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：15-35%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图31和图32所示。
实施例8：
一种H-Phe-Val-Ala-Pro-Phe-Pro-OH的合成方法，包括：
将12.5mmol CTC树脂置于125mL的固相合成反应器中，加入25mmol氨基酸Fmoc-Pro-OH，加入二氯甲烷100mL，再加入10.9mL DIEA，25℃条件下反应3h，加入甲醇15mL，反应5min；过滤，将树脂用二氯甲烷洗涤2次，每次100mL，甲醇洗涤2次，每次100mL，DMF洗涤2次，每次100mL；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液100mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次20mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Phe-OH、20mmol HOBt于50mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液30mL、3.1mL DIC，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次100mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液100mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次20mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Pro-OH、20mmol HOBt于50mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液30mL、3.1mL DIC，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次100mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液100mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次20mL，抽干待用。
取20mmo Fmoc-Ala-OH、20mmol HOBt于50mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液8mL、3.1mL DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次100mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液100mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次20mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Val-OH、20mmol HOBt于50mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液8mL、20mmol DIC，静置反应5min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次100mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液100mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次20mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Phe-OH、20mmol HOBt于50mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液30mL、3.1mL DIC，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次100mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液100mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次20mL，然后用甲醇洗涤2次，每次100mL，DCM溶液洗涤2次，每次100mL，甲醇洗涤2次，每次100mL，真空干燥，得到H-Phe-Val-Ala-Pro-Phe-Pro-CTC-树脂；
将2g上述肽树脂用20mL切割液TFA/DCM（TFA与DCM的体积比为2:98），30℃条件下切割1小时，将切割液拉干得到H-Phe-Val-Ala-Pro-Phe-Pro-OH，其质谱以及LC-MS表征结果如图33和图34所示。一种透明质酸修饰的美容肽的合成路线为：
；
其中，-COOX为-COONa；
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.56g H-Phe-Val-Ala-Pro-Phe-Pro-OH.TFA，加6mL DMSO搅拌溶解，加入0.75g DIEA，再加入2.2g透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入4mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=95:5，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：12-32%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，得到三种结构的透明质酸修饰的美容肽，分别为：
透明质酸修饰的美容肽H2，其结构中n=0，即原料透明质酸结构中y=1，与美容肽制备的产物，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图35和图36所示；
透明质酸修饰的美容肽H4，其结构中n=1，即原料透明质酸结构中y=2，与美容肽制备的产物，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图37和图38所示；
透明质酸修饰的美容肽H6，其结构中n=2，即原料透明质酸结构中y=3，与美容肽制备的产物，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图39和图40所示。
实施例9：
一种H-His-D-Phe-Arg-NH2的合成方法，包括：
将10mmol AM树脂置于250mL的固相合成反应器中，加入20%Pip/DMF（v/v）溶液70mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每70mL次，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Linker、20mmolHOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液35mL、3.1mL DIC，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次70mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液70mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每70mL次，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液35mL、3.1mL DIC，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次70mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液70mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每70mL次，抽干待用。
取20mmol Fmoc-D-Phe-OH、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液35mL、3.1mL DIC，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次70mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液70mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每70mL次，抽干待用。
取20mmol Fmoc-His(Trt)-OH、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液35mL、20mmol DIC，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次70mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液70mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每40mL次，抽干待用。然后加入甲醇洗涤2次，每70mL次，DCM溶液洗涤2次，每70mL次，甲醇洗涤2次，每70mL次。真空干燥，得到H-His(Trt)-D-Phe-Arg(Pbf)-Linker-AM树脂的肽树脂；
将上述肽树脂用TFA/Tis/H2O（TFA、Tis与H2O的体积比为90:5:5）切割，用量100mL，时间2.5h，将切割液加入到1000mL乙醚（5℃）溶液中，析出白色固体，离心，真空干燥，制得H-His-D-Phe-Arg-NH2，其质谱以及LC-MS表征结果如图41和图42所示。一种透明质酸修饰的美容肽的合成路线为：
；
其中，n=2，-COOX为-COONa；
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-His-D-Phe-Arg-NH2.3TFA，加5mL DMSO搅拌溶解，加入661mg DIEA，再加入1.94g透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入4mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=100:0，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：0-20%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，得到三种结构的透明质酸修饰的美容肽，分别为：
透明质酸修饰的美容肽L2，其结构中n=0，即原料透明质酸结构中y=1，与美容肽制备的产物，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图43和图44所示；
透明质酸修饰的美容肽L4，其结构中n=1，即原料透明质酸结构中y=2，与美容肽制备的产物，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图45和图46所示；
透明质酸修饰的美容肽L6，其结构中n=2，即原料透明质酸结构中y=3，与美容肽制备的产物，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图47和图48所示。
实施例10：
一种H-Tyr-Pro-Phe-Phe-NH2的合成方法，包括：
将10mmol AM树脂，置于250mL的固相合成反应器中，加入20%Pip/DMF（v/v）溶液70mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次70mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Linker、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液35mL、DIC 3.1mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次70mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液70mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次70mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc -Phe-OH、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液35mL、DIC 3.1mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成；树脂用DMF溶液洗涤3次，每次70mL；洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液70mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液L洗涤6次，每次70mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc -Phe-OH、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液35mL、DIC 3.1mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次70mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液70mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次70mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Pro-OH、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液35mL、DIC 3.1mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次70mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液70mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次70mL，抽干待用。
取20mmol Fmoc-Tyr(tBu)-OH、20mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液35mL、DIC 3.1mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次70mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液70mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。然后加入甲醇洗涤2次，每次70mL，DCM溶液洗涤2次，每次70mL，甲醇洗涤2次，每次70mL。真空干燥，得到H-Tyr(tBu)-Pro- Phe -Phe -Linker-AM树脂的肽树脂；
将上述肽树脂用TFA/Tis/H2O（TFA、Tis与H2O的体积比为90:5:5）切割，用量100mL，时间2.5h，将切割液加入到1000mL乙醚（5℃）溶液中，析出白色固体，离心，真空干燥，制得H-Tyr-Pro- Phe-Phe-NH2，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图49和图50所示。
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-Tyr-Pro-Phe-Phe-NH2.TFA，加5mL DMSO搅拌溶解，加入0.771gDIEA，再加入2.27g透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入4mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.2g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=95:5，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：12-32%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图51和图52所示。
实施例11：
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-β-Ala-His-OH.TFA，加10mL DMSO搅拌溶解，加入0.5g TFA，搅拌10min，再加入2.5g DIEA，再加入6.85g透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入4mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=100:0，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：0-10%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽，其中，美容肽与两个四糖透明质酸钠结合或美容肽与一个六糖透明质酸钠以及一个二糖透明质酸钠结合的产物的质谱以及高效液相色谱表征结果如图53和图54所示，高效液相色谱的出峰位置为6.460min，产物分子量872.3/582.0；美容肽与一个六糖透明质酸钠及一个四糖透明质酸钠的产物的质谱以及高效液相色谱表征结果如图55和图56所示，高效液相色谱中出峰位置为7.202min，产物分子量为708.4/1061.8/1415.8。
实施例12：
一种H-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-Ala-OH的合成方法，包括：
将7.5mmol Wang树脂置于125mL的固相合成反应器中，加入15mmol氨基酸Fmoc-Ala-OH，加入二氯甲烷50mL，再加入4.8mL吡啶、4.2mL DBU，25℃条件下反应3h，抽滤，用DMF溶液洗涤3次，每次50mL，加入封端液Ac2O/DMF/DIEA（Ac2O、DMF与DIEA的体积比为10:84:6）50mL反应15min。过滤，将树脂用二氯甲烷洗涤2次，每次50mL，甲醇洗涤2次，每次50mL，DMF洗涤2次，每次50mL；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液50mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次50mL，抽干待用。
取15mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH、15mmol HOBt于50mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液20mL、DIC 2.32mL，静置反应15min，并将50mL烧杯中溶液加入到上述125mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次15mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液50mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次50mL，抽干待用。
取15mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH、15mmol HOBt于50mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液20mL、DIC 2.32mL，静置反应15min，并将50mL烧杯中溶液加入到上述125mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次15mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液50mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次50mL，抽干待用。
取15mmol Fmoc-Gln(Trt)-OH、15mmol HOBt于50mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液20mL、DIC 2.32mL，静置反应15min，并将50mL烧杯中溶液加入到上述125mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次15mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液50mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次50mL，抽干待用。
取15mmol Fmoc-Met-OH、15mmol HOBt于50mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液20mL、DIC 2.32mL，静置反应15min，并将50mL烧杯中溶液加入到上述125mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次15mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液50mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次50mL，抽干待用。
取15mmol Fmoc-Glu(OtBu)-OH、15mmol HOBt于50mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液20mL、DIC 2.32mL，静置反应15min，并将50mL烧杯中溶液加入到上述125mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次15mL。洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液50mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次50mL，抽干待用。
取15mmol Fmoc-Glu(OtBu)-OH、15mmol HOBt于50mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液20mL、DIC 2.32mL，静置反应15min，并将50mL烧杯中溶液加入到上述125mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次15mL。洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液50mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次50mL，甲醇洗涤2次，每次50mL，DCM溶液洗涤2次，每次50mL，甲醇洗涤2次，每次50mL。真空干燥，得到H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-Wang-树脂，其中AA1是Glu(OtBu)；AA2是Glu(OtBu)；AA3为Met；AA4是Gln(Trt)；AA5是Arg(Pbf)；AA6是Arg(Pbf)；AA7是Ala。
取4.22g上述肽树脂用40mL TFA/茴香硫醚/苯酚/H2O/EDT（TFA、茴香硫醚、苯酚、H2O与EDT的质量比为：87.5:5:2.5:2.5:2.5）切割2.5h，将切割液加入到400mL乙醚（5℃）溶液中，析出白色固体，离心，真空干燥，制得H-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-Ala-OH，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图57和图58所示。
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-Ala-OH.3TFA，加5mLDMSO搅拌溶解，再加入0.46g DIEA，再加入1.24g透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入4mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=100:0，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：0-10%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽，其高效液相色谱测试结果如图59所示。其中，11.577min处的样品为美容肽与一个四糖透明质酸钠结合的产物，其质谱表征结果如图60所示；12.223min处的样品为美容肽与一个六糖透明质酸钠结合的产物，其质谱表征结果如图61所示。
实施例13：
一种H-Asp-Val-Lys-Tyr-OH的合成方法，包括：
将6.25mmol CTC树脂置于250mL的固相合成反应器中，加入12.5mmol氨基酸Fmoc-Tyr(tBu)-OH，加入二氯甲烷120mL，在加入8.7mL DIEA，25℃条件下反应3h，加入甲醇12.5mL，反应5min。过滤，将树脂用二氯甲烷洗涤2次，每次150mL，甲醇洗涤2次，每次150mL，DMF洗涤2次，每次390mL。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液65mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次120mL，抽干待用。
取15mmol Fmoc- Lys(Boc)-OH、15mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液14mL、DIC 1.89mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次120mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液65mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次120mL，抽干待用。
取15mmol Fmoc-Val-OH、15mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液10mL、DIC 2.32mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次120mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液65mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次120mL，抽干待用。
取15mmol Fmoc-Asp(OtBu)-OH、15mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液13mL、DIC 2.32mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述250mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次120mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液65mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次120mL。然后用甲醇洗涤2次，每次125mL，DCM溶液洗涤2次，每次125mL，甲醇洗涤2次，每次125mL，真空干燥，得到H-Asp(OtBu)-Val-Lys(Boc)-Tyr(tBu)-CTC-树脂；
将4.89g上述肽树脂用TFA/Tis/H2O（TFA、Tis与H2O的体积比为90:5:5）切割，用量40mL，30℃条件下搅拌反应2.5h，过滤，除去树脂，得到滤液。滤液拉干得到粗肽H-Asp-Val-Lys-Tyr-OH，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图62和图63所示。
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-Asp-Val-Lys-Tyr-OH.2TFA，加7mL DMSO搅拌溶解，再加入0.773gDIEA，再加入2.1g透明质酸，水浴控温45℃，搅拌15min溶解后，再搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入4mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=100:0，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：0-20%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽，其高效液相色谱测试结果如图64所示。其中，8.226min处的样品为美容肽与两个六糖透明质酸钠结合的产物，其质谱表征结果如图65所示；12.711min处的样品为美容肽与一个六糖透明质酸钠、一个二糖透明质酸钠结合或美容多肽与两个四糖透明质酸钠结合的产物，其质谱表征结果如图66所示。
实施例14：
一种H-His-Ala-Leu-Arg-Phe-Trp-NH2的合成方法，包括：
将30mmol AM树脂置于500mL的固相合成反应器中，加入20%Pip/DMF（v/v）溶液200mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次200mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Linker、60mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液60mL、DIC 9.3mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述500mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次100mL。洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液200mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次200mL，抽干待用。
取60mmol Fmoc-Trp(Boc)-OH、60mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液60mL、DIC 9.3mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述500mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次100mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液200mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次200mL，抽干待用。
取60mmol Fmoc-Phe-OH、60mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液60mL、DIC 9.3mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述500mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次100mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液200mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次200mL，抽干待用。
取60mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH、60mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液60mL、DIC 9.3mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述500mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次100mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液200mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次200mL，抽干待用。
取60mmol Fmoc-Leu-OH、60mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液60mL、DIC 9.3mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述500mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次100mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液200mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次200mL，抽干待用。
取60mmol Fmoc-Ala-OH、60mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液60mL、DIC 9.3mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述500mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次100mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液200mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次200mL，抽干待用。
取90mmol Fmoc-His(Trt)-OH、90mmolHOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液100mL、DIC 13.9mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到500mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次150mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液200mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次200mL，抽干待用。然后加入甲醇洗涤2次，每次200mL，DCM溶液洗涤2次，每次200mL，甲醇洗涤2次，每次200mL。真空干燥，得到H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-Linker-AM树脂的肽树脂，其中AA1是His(Trt)；AA2是Ala；AA3为Leu；AA4是Arg(Pbf)；AA5是Phe；且AA6是Trp。
将上述肽树脂用690mL TFA/茴香硫醚/苯酚/H2O/EDT（TFA、茴香硫醚、苯酚、H2O与EDT的质量比为：87.5:5:2.5:2.5:2.5）切割2.5h，将切割液加入到7000mL乙醚（5℃）溶液中，析出白色固体，离心，真空干燥，制得H-His-Ala-Leu-Arg-Phe-Trp-NH2，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图67和图68所示。
一种透明质酸修饰的美容肽的合成路线为：
；
其中，-COOX为-COONa；
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取1g H-His-Ala-Leu-Arg-Phe-Trp-NH2.TFA，加10mL DMSO搅拌溶解，加入1.28g DIEA，搅拌5min后，再加入3.75g透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入8mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.2g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=95:5，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：12-32%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，得到三种结构的透明质酸修饰的美容肽，如下所示：
A2，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图69和图70所示；
A4，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图71和图72所示，其核磁氢谱如图73-1至图73-5所示，和碳谱如图74-1至74-5所示，其二维cosy图谱如图75所示；
A6，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图76和图77所示。/>
实施例15：
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-β-Ala-Pro-Dab-NH-Bzl.TFA，加5mL DMSO搅拌溶解，加入704.32mgDIEA，搅拌5min后，再加入2064.08mg透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入3mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.2g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=95:5，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：12-32%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽。
实施例16：
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-Dab-Val-Dab-OH.2TFA，加7mL DMSO搅拌溶解，再加入833.2mg DIEA，搅拌5min后，再加入2441.79mg透明质酸，水浴控温45℃，再搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入3mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=100:0，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：0-20%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽。
实施例17：
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-Lys-Val-Lys-OH.2TFA，加7mL DMSO搅拌溶解，再加入708.03mgDIEA，搅拌5min后，再加入2074.97mg透明质酸，水浴控温45℃，再搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入3mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=100:0，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：0-20%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽。
实施例18：
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-Gln-Asp-Val-His-OH.TFA，加5mL DMSO搅拌溶解，加入531.55mgDIEA，搅拌5min后，再加入1557.76mg透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入3mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.2g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=95:5，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：12-32%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽。
实施例19：
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-Pro-Pro-Tyr-Leu-OH.TFA，加5mL DMSO搅拌溶解，加入541.25mgDIEA，搅拌5min后，再加入1586.20mg透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入3mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.2g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=95:5，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：12-32%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽。
实施例20：
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-Pro-Lys-Glu-Lys-OH.2TFA，加7mL DMSO搅拌溶解，再加入528.27mgDIEA，搅拌5min后，再加入1548.14mg透明质酸，水浴控温45℃，再搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入3mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=100:0，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：0-20%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽。
实施例21：
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-Val-Trp-OH.2TFA，加7mL DMSO搅拌溶解，再加入871.74mg DIEA，搅拌5min后，再加入2554.72mg透明质酸，水浴控温45℃，再搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入3mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=100:0，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：0-20%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽。
实施例22：
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-Ser-Val-Val-Val-Arg-Thr-NH2.TFA，加5mL DMSO搅拌溶解，加入404.41mg DIEA，搅拌5min后，再加入1176.38mg透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入3mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.2g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=95:5，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：12-32%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽。
实施例23：
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g Pal-Lys-Met(O)2-Lys-OH.2TFA，加7mL DMSO搅拌溶解，再加入391.22mg DIEA，搅拌5min后，再加入1146.50mg透明质酸，水浴控温45℃，再搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入3mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=100:0，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：0-20%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽。
实施例24：
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-Lys-Met(O)2-Lys-OH.2TFA，加7mL DMSO搅拌溶解，再加入604.37mgDIEA，搅拌5min后，再加入1771.19mg透明质酸，水浴控温45℃，再搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入3mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=100:0，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：0-20%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽。
实施例25：
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-OH.2TFA，加7mL DMSO搅拌溶解，再加入530.41mg DIEA，搅拌5min后，再加入1554.41mg透明质酸，水浴控温45℃，再搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入3mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=100:0，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：0-20%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽。
实施例26：
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.5g H-bataAla-His-Ser-His-OH.2TFA，加7mL DMSO搅拌溶解，再加入587.07mg DIEA，搅拌5min后，再加入1720.46mg透明质酸，水浴控温45℃，再搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入3mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.5g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=100:0，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：0-20%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，制得透明质酸修饰的美容肽。
实施例27：
一种H-Trp-Phe-Arg-D-Leu-Ala-His-NH2的合成方法，包括：
将5mmol AM树脂置于100mL的固相合成反应器中，加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Linker、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-His(Trt)-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Ala-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-D-Leu-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Phe-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用
取15mmol Fmoc-Trp(Boc)-OH、1mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 2.3mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次30mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。然后加入甲醇洗涤2次，每次40mL，DCM溶液洗涤2次，每次40mL，甲醇洗涤2次，每次40mL。真空干燥，得到H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-Linker-AM树脂的肽树脂，其中AA1是Trp(Boc)；AA2是Phe；AA3为Arg；AA4是D-Leu；AA5是Ala；且AA6是His(Trt)。
将上述肽树脂用110mL TFA/茴香硫醚/苯酚/H2O/EDT（TFA、茴香硫醚、苯酚、H2O与EDT的质量比为：87.5:5:2.5:2.5:2.5）切割2.5h，将切割液加入到1000mL乙醚（5℃）溶液中，析出白色固体，离心，真空干燥，制得H-Trp-Phe-Arg-D-Leu-Ala-His-NH2，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图78和图79所示。
一种透明质酸修饰的美容肽的合成路线为：
；
其中，-COOX为-COONa；
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取1g H-Trp-Phe-Arg-D-Leu-Ala-His-NH2.TFA，加10mL DMSO搅拌溶解，加入1.28g DIEA，搅拌5min后，再加入3.75g透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入8mL醋酸，恒温进行重排反应2h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.2g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=95:5，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：12-32%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，得到三种结构的透明质酸修饰的美容肽，如下所示：
E2，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图80和图81所示；
E4，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图82和图83所示；/>
E6，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图84和图85所示。
实施例28：
一种H-Trp-Phe-Arg-Leu-Ala-His-NH2的合成方法，包括：
将5mmol AM树脂置于100mL的固相合成反应器中，加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Linker、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-His(Trt)-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Ala-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc -Leu-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Phe-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用
取15mmol Fmoc-Trp(Boc)-OH、1mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 2.3mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次30mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。然后加入甲醇洗涤2次，每次40mL，DCM溶液洗涤2次，每次40mL，甲醇洗涤2次，每次40mL。真空干燥，得到H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-Linker-AM树脂的肽树脂，其中AA1是Trp(Boc)；AA2是Phe；AA3为Arg；AA4是D-Leu；AA5是Ala；且AA6是His(Trt)。
将上述肽树脂用110mL TFA/茴香硫醚/苯酚/H2O/EDT（TFA、茴香硫醚、苯酚、H2O与EDT的质量比为：87.5:5:2.5:2.5:2.5）切割2.5h，将切割液加入到1000mL乙醚（5℃）溶液中，析出白色固体，离心，真空干燥，制得H-Trp-Phe-Arg-Leu-Ala-His-NH2，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图86和图87所示。
一种透明质酸修饰的美容肽的合成路线为：
；
其中，-COOX为-COONa；
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取1g H-Trp-Phe-Arg-Leu-Ala-His-NH2.TFA，加10mL DMSO搅拌溶解，加入1.28g DIEA，搅拌5min后，再加入3.75g透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入8mL醋酸，恒温进行重排反应2h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.2g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=95:5，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：12-32%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，得到三种结构的透明质酸修饰的美容肽，如下所示：
B2，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图88和图89所示；
B4，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图90和图91所示；/>
B6，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图92和图93所示。
实施例29：
一种H-Arg-Arg-Gln-D-Met-Glu-Glu-NH2的合成方法，包括：
将5mmol AM树脂置于100mL的固相合成反应器中，加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Linker、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Glu(otBu)-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用；
取10mmol Fmoc-Glu(otBu)-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用；
取10mmol Fmoc-D-Met-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Gln（Trt）-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取15mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH、15mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液20mL、DIC 2.3mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。然后加入甲醇洗涤2次，每次40mL，DCM溶液洗涤2次，每次40mL，甲醇洗涤2次，每次40mL。真空干燥，得到H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-Linker-AM树脂的肽树脂，其中AA1是Arg(Pbf)；AA2是Arg(Pbf)；AA3为Gln(Trt)；AA4是D-Met；AA5是Glu(otBu)；且AA6是Glu(otBu)。
将上述肽树脂用110mL TFA/茴香硫醚/苯酚/H2O/EDT（TFA、茴香硫醚、苯酚、H2O与EDT的质量比为：87.5:5:2.5:2.5:2.5）切割2.5h，将切割液加入到1000mL乙醚（5℃）溶液中，析出白色固体，离心，真空干燥，制得H-Arg-Arg-Gln-D-Met-Glu-Glu-NH2，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图94和图95所示。
一种透明质酸修饰的美容肽的合成路线为：
；
其中，-COOX为-COONa；
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取1g H-Arg-Arg-Gln-D-Met-Glu-Glu-NH2.TFA，加10mL DMSO搅拌溶解，加入1.25g DIEA，搅拌5min后，再加入3.67g透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入8mL醋酸，恒温进行重排反应2h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.2g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=95:5，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：12-32%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，得到三种结构的透明质酸修饰的美容肽，如下所示：
G2，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图96和图97所示；/>
G4，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图98和图99所示；
G6，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图100和图101所示。
实施例30：
一种H-Arg-Arg-Gln-Met-Glu-Glu-NH2的合成方法，包括：
将5mmol AM树脂置于100mL的固相合成反应器中，加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Linker、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应；加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Glu(otBu)-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用
取10mmol Fmoc-Glu(otBu)-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用
取10mmol Fmoc-Met-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次40mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Gln（Trt）-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、DIC 1.5mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取10mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH、10mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液15mL、10mmol DIC静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液30mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液洗涤6次，每次30mL，抽干待用。
取15mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH、15mmol HOBt于100mL烧杯中，降温至5℃，加入DMF溶液20mL、DIC 2.3mL，静置反应15min，并将100mL烧杯中溶液加入到上述100mL固相合成反应器中，搅拌反应1.5h，反应完成。树脂用DMF溶液洗涤3次，每次20mL。洗涤完成后，进行下一步反应。加入20%Pip/DMF（v/v）溶液40mL，搅拌反应30min，抽滤，除去脱保护液，然后用DMF溶液40mL洗涤6次，抽干待用。然后加入甲醇40mL洗涤2次，DCM溶液40mL洗涤2次，甲醇40mL洗涤2次。真空干燥，得到H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-Linker-AM树脂的肽树脂，其中AA1是Arg(Pbf)；AA2是Arg(Pbf)；AA3为Gln(Trt)；AA4是Met；AA5是Glu(otBu)；且AA6是Glu(otBu)。
将上述肽树脂用110mL TFA/茴香硫醚/苯酚/H2O/EDT（TFA、茴香硫醚、苯酚、H2O与EDT的质量比为：87.5:5:2.5:2.5:2.5）切割2.5h，将切割液加入到1000mL乙醚（5℃）溶液中，析出白色固体，离心，真空干燥，制得H-Arg-Arg-Gln-Met-Glu-Glu-NH2，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图102和图103所示。
一种透明质酸修饰的美容肽的合成路线为：
；
其中，-COOX为-COONa；
透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取1g H-Arg-Arg-Gln-Met-Glu-Glu-NH2.TFA，加10mL DMSO搅拌溶解，加入1.25g DIEA，搅拌5min后，再加入3.67g透明质酸，水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入8mL醋酸，恒温进行重排反应2h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化，纯化条件：
溶解：取0.2g粗品加100mL H2O稀释；
填料：21.2*250mm，10-120，C18；流速：10mL/min；波长：220nm；
流动相：A：1%HAc；B：ACN；
平衡：A:B=95:5，平衡10min，流速：10mL/min；
上样：流速：10mL/min；
洗脱：12-32%B 60min；
柱清洗：80%ACN清洗至基线平衡；
收集合格产品，得到三种结构的透明质酸修饰的美容肽，如下所示：
F2，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图104和图105所示；
F4，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图106和图107所示；/>
F6，其质谱以及高效液相色谱表征结果如图108和图109所示。
实施例31：
一种透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.56g H-Phe-Val-Ala-Pro-Phe-Pro-OH.TFA（实施例8制备的），加6mL DMSO搅拌溶解，加入0.75g DIEA，再加入2.2g透明质酸（y=1），水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入4mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化得到透明质酸修饰的美容肽。
实施例32：
一种透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.56g H-Phe-Val-Ala-Pro-Phe-Pro-OH.TFA（实施例8制备的），加6mL DMSO搅拌溶解，加入0.75g DIEA，再加入2.2g透明质酸（y=2），水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入4mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化得到透明质酸修饰的美容肽。
实施例33：
一种透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括以下步骤：
称取0.56g H-Phe-Val-Ala-Pro-Phe-Pro-OH.TFA（实施例8制备的），加6mL DMSO搅拌溶解，加入0.75g DIEA，再加入2.2g透明质酸（y=3），水浴控温45℃，搅拌反应过夜，取样检测LC-MS，基本反应完全，加入4mL醋酸，水浴锅控温35℃，进行重排反应3h，取样检测LC-MS，基本反应完全；然后进行反向色谱纯化得到透明质酸修饰的美容肽。
试验例1：
1、保湿性能测试
AQP3含量测试如下：
(1) 细胞接种：接种细胞至24孔板，培养箱（37℃、5% CO2）中孵育过夜；
(2) 配液：按照实验设计（如表1所示）配置受试物工作液；
表1 AQP3实验设计表
(3) 加入受试物：在培养箱(37℃，5% CO2)中培养24 h后，按表加入受试物，继续培养24 h；
(4) 收样：弃去上清，PBS润洗细胞3遍；
(5) 免疫荧光染色：
a.加入甲醇固定细胞，用PBS润洗3遍，每孔再加1 mLBSA封闭1小时；
b.弃掉封闭液，每孔加一抗，放入4℃冰箱过夜。弃去一抗，用PBS润洗3遍；
c.每孔加二抗，作用2小时；弃去二抗，用PBS润洗3遍；
d.每孔加入DAPI进行核染，作用10 min，弃去DAPI，用PBS润洗3遍，然后利用荧光显微镜进行拍照；
(6) 结果分析：利用Image Pro Plus软件对AQP3荧光强度进行定量分析。
HA含量测试如下：
(1) 细胞接种：接种细胞至24孔板，培养箱（37℃、5% CO2）中孵育过夜；
(2) 配液：按照实验设计（表2）配置受试物工作液；
表2 HA实验设计表
(3) 加入受试物：在培养箱(37℃，5% CO2)中培养24h后，按表加入受试物，继续培养24h；
(4) 收样：收集上清，用ELISA试剂盒测定HA含量。
结果分析：
表3-1 AQP3测试结果
从表3-1中的数据分析可知，本发明实施例制备的透明质酸修饰的美容肽具有优异的保湿性能，能够有效提升AQP3含量。具体的，本发明实施例4中制备的透明质酸修饰的美容肽D4和透明质酸修饰的美容肽D6在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的保湿功效，并且在三种结构（D2、D4、D6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，其在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下也具有优异的保湿功效。本发明实施例27中制备的三种结构（E2、E4、E6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的保湿功效；本发明实施例28中制备的三种结构（B2、B4、B6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的保湿功效。本发明实施例29中制备的三种结构（G2、G4、G6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的保湿功效。本发明实施例30中制备的三种结构（F2、F4、F6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的保湿功效。本发明实施例14中制备的透明质酸修饰的美容肽A4和透明质酸修饰的美容肽A6在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的保湿功效，并且在三种结构（A2、A4、A6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，其在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下也具有优异的保湿功效。
表3-2 AQP3测试结果
/>
从表3-2中的数据分析可知，本发明实施例制备的透明质酸修饰的美容肽对AQP3表现出优异的促进效果，对其含量提升作用更佳。具体的，本发明实施例1-2、实施例5-7以及实施例10-13制备的透明质酸修饰的美容肽在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的保湿功效。并且，本发明实施例4中制备的三种结构（D2、D4、D6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的保湿功效；本发明实施例8中制备的三种结构（H2、H4、H6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的保湿功效；本发明实施例9中制备的三种结构（L2、L4、L6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的保湿功效。
表4 HA测试结果
/>
从表4中的数据分析可知，本发明实施例2和实施例8制备的透明质酸修饰的美容肽对HA表现出优异的促进效果，对其含量提升作用更佳。具体的，本发明实施例2制备的透明质酸修饰的美容肽在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的保湿功效。并且，本发明实施例8中制备的三种结构（H2、H4、H6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的保湿功效。
2、抗皱紧致性能测定
Ⅰ型胶原蛋白和MMP-1含量测试如下：
(1) 细胞接种：接种细胞至24孔板，培养箱（37℃、5% CO2）中孵育过夜；
(2) 配液：按照实验设计（表5）配置受试物工作液；
表5 实验设计表
(3) UVA辐射：培养24小时后，阴性对照组、阳性对照组及样品组接受总剂量为9J/cm2的UVA辐射，与此同时，空白对照组放置于相同的环境（UVA辐射剂量为0J/cm2）；
(4) 加入受试物：根据实验设计，辐照后，分组加入受试物，空白对照组、阴性对照组每孔加入1 mL的细胞培养液；阳性对照组每孔加入1 mL含有维生素C和维生素E的细胞培养液；样品组每孔加入1 mL含有相应浓度受试物的培养液；加入受试物完成后将24孔板放置在培养箱（37℃、5% CO2）中培养24h；
(5) 收取上清进行Ⅰ型胶原蛋白和MMP-1含量测定；
(6) 结果分析：各组间比较采用 t-test 统计分析，统计分析均为双尾。
表6 MMP-1测试结果
表7-1 Ⅰ型胶原蛋白测试结果
从表6和表7-1中的数据分析可知，本发明实施例制备的透明质酸修饰的美容肽对MMP-1表现出优异的抑制效果，并且对Collagen I表现出优异的促进作用。具体的，本发明实施例4中制备的透明质酸修饰的美容肽D4和透明质酸修饰的美容肽D6在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的抗皱紧致功效，并且在三种结构（D2、D4、D6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，其在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下也具有优异的抗皱紧致功效。本发明实施例27中制备的三种结构（E2、E4、E6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的抗皱紧致功效；本发明实施例28中制备的三种结构（B2、B4、B6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的抗皱紧致功效。本发明实施例29中制备的三种结构（G2、G4、G6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的抗皱紧致功效。本发明实施例30中制备的三种结构（F2、F4、F6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的抗皱紧致功效。本发明实施例14中制备的透明质酸修饰的美容肽A4和透明质酸修饰的美容肽A6在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的抗皱紧致功效，并且在三种结构（A2、A4、A6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，其在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下也具有优异的抗皱紧致功效。
表7-2 Ⅰ型胶原蛋白测试结果
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从表7-2中的数据分析可知，本发明实施例1-2、实施例5-7以及实施例10-13制备的透明质酸修饰的美容肽在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的抗皱紧致功效。并且，本发明实施例4中制备的三种结构（D2、D4、D6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的抗皱紧致功效；本发明实施例8中制备的三种结构（H2、H4、H6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的抗皱紧致功效；本发明实施例9中制备的三种结构（L2、L4、L6）的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合后，在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的抗皱紧致功效。
3、舒缓性能测试
IL-6含量测试
(1) 细胞接种：接种细胞至24孔板，培养箱 (37℃、5% CO2) 中孵育过夜；
(2) 配液：按照实验设计（如表8所示）配置受试物工作液；
表8 IL-6合成实验设计表
(3) 加入受试物：根据实验分组，待24孔板中细胞铺板率达到40%~60%时，分组加入受试物，每组设3个复孔，将24孔板放置在培养箱（37℃、5% CO2）中孵育24 h；
(4) 检测：培养24小时后，收集上清，用ELISA试剂盒测定IL-6含量。
表9 舒缓性能测试结果
从表9中的数据分析可知，本发明实施例2制备的透明质酸修饰的美容肽在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有舒缓功效；本发明实施例5制备的透明质酸修饰的美容肽在0.063mg/mL浓度下具有舒缓功效；本发明实施例6制备的透明质酸修饰的美容肽在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有舒缓功效；本发明实施例7制备的透明质酸修饰的美容肽在0.125mg/mL浓度下具有舒缓功效；本发明实施例9中制备的三种结构的透明质酸修饰的美容肽，以一定质量比混合，在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有舒缓功效；本发明实施例10制备的透明质酸修饰的美容肽在0.063mg/mL浓度下具有舒缓功效；本发明实施例13制备的透明质酸修饰的美容肽在0.125mg/mL浓度下具有舒缓功效；本发明实施例11制备的透明质酸修饰的美容肽在0.063mg/mL、0.125mg/mL浓度下具有舒缓功效；本发明实施例12制备的透明质酸修饰的美容肽在0.063mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有舒缓功效。
4、美白性能测试
黑色素含量测试如下：
表10 黑素含量实验设计表
收集对数生长期细胞接种至24孔板，在培养箱（37℃，5% CO2）中培养24h后，根据细胞毒性结果，按表加入受试物，以未处理细胞作为空白对照，每组设置3个平行。
加药后在培养箱（37℃，5% CO2）中继续培养24h，弃去上清，加入0.5 mL含10%DMSO的1M NaOH，80℃恒温孵育1h，以含10%DMSO的1M NaOH作为溶剂对照，于酶标仪下读取吸光度值并计算细胞黑素相对抑制率。
表11 美白性能测试结果
从表11中的数据分析可知，本发明实施例7制备的透明质酸修饰的美容肽在0.063mg/mL、0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有优异的美白功效；并且0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下的美白效果均与阳性对照组相当或者要高于阳性对照组的。
5、抗糖化性能测试
使用PBS配制含牛血清白蛋白和葡萄糖的混合溶液，经0.22μm滤膜过滤，作为2×糖化反应液。按照表配制各组反应体系。
表12 AGEs清除测试反应体系表
混合均匀后于55℃下孵化4d。以PBS代替样品作为阴性对照、以氨基胍盐酸盐（100mg/mL）作为阳性对照、以PBS代替糖基化反应液作为对照体系。反应结束后，将孵育的溶液冷却至室温，2000r/min离心5min，取上清液经0.22μm滤膜过滤后，依次取反应液200μL加入96孔板，使用荧光酶标仪在激发波长320nm，发射波长460nm条件下检测并按照下式计算AGEs抑制率。
式中：
A-添加受试物的糖化体系荧光强度；
B-添加受试物的PBS溶液荧光强度；
C-未添加受试物的糖化体系荧光强度；
D-未添加受试物的PBS溶液荧光强度。
表13 抗糖化性能测试结果
从表13中的数据分析可知，本发明实施例11制备的透明质酸修饰的美容肽在0.0625mg/mL和0.25mg/mL浓度下对晚期糖基化终产物具有清除作用。
6、抗氧化性能测试
ROS含量测试如下：
(1) 细胞接种：接种细胞至24孔板，培养箱（37℃、5% CO2）中孵育过夜；
(2) 配液：按照实验设计（表13）配置受试物工作液。
表14 ROS实验设计表
(3) 加入受试物：在培养箱(37℃，5% CO2)中培养24h后，按表加入受试物，继续培养24h；
(4) 造模：PBS清洗2次，以未处理细胞作为空白对照，其余组按表中条件接受UVB刺激，以VC+VE组为阳性对照；
(5) ROS含量检测：DCFH-DA探针母液用无血清培养液稀释。每孔分别加入稀释后的DCFH-DA探针500μL，于37℃细胞培养箱内孵育；30 min后，用无血清DMEM培养液洗涤细胞3次，以充分地去除未进入细胞内的探针；使用荧光显微镜，在激发波长488 nm的条件下观察并拍照。
(6) 结果分析：利用Image Pro Plus软件对ROS荧光强度进行定量分析。
表15 抗氧化性能测试结果
从表15中的数据分析可知，本发明实施例11制备的透明质酸修饰的美容肽在0.125mg/mL和0.25mg/mL浓度下具有更佳的抗氧化能力，且0.25mg/mL浓度下其抗氧化能力水平与阳性对照相当。
上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (16)

1.一种透明质酸修饰的美容肽，所述透明质酸修饰的美容肽结构式如式(I)所示：
M-C (I)；
其中，M代表透明质酸钠，其结构如式(II)所示：
(II)，式中y为≥1的自然数；
C代表美容肽，所述美容肽包括具有美容和/或护肤功效的多肽或其衍生物，所述多肽包括二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽或其它多肽；
其中，M端基葡萄糖醛酸链接X结构中的氨基。
2.根据权利要求1所述的透明质酸修饰的美容肽，其特征在于：所述式(Ⅰ)所示的化合物包括如下式(III)所示的结构：
(III)；
其中，
所述n为自然数；
所述R为美容肽结构中除去反应活性基团氨基的剩余部分；
所述美容肽包括具有美容和/或护肤功效的多肽或其衍生物，所述多肽包括二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽或其它多肽。
3.根据权利要求1或2所述的透明质酸修饰的美容肽，其特征在于：所述二肽或其衍生物包括二肽-2和肌肽中的一种。
4.根据权利要求1或2所述的透明质酸修饰的美容肽，其特征在于：所述三肽或其衍生物包括类蛇毒肽、三肽-1、三肽-5、三肽-8、三肽-38和棕榈酰三肽-38中的一种。
5.根据权利要求1或2所述的透明质酸修饰的美容肽，其特征在于：所述四肽或其衍生物包括四肽-5、四肽-7、四肽-9、四肽-11、四肽-30和四肽-15中的一种，或者包括氨基酸序列为H-Asp-Val-Lys-Tyr-OH的四肽。
6.根据权利要求1或2所述的透明质酸修饰的美容肽，其特征在于：所述五肽或其衍生物包括五肽-4和肉豆蔻五肽-4中的一种。
7.根据权利要求1或2所述的透明质酸修饰的美容肽，其特征在于：所述六肽或其衍生物包括六肽-1、六肽-8、六肽-9、六肽-11和六肽-38中的一种，或者包括氨基酸序列为H-Arg-Arg-Gln-Met-Glu-Glu-NH2、H-Arg-Arg-Gln-D-Met-Glu-Glu-NH2、H-Trp-Phe-Arg-Leu-Ala-His-NH2和H-Trp-Phe-Arg-D-Leu-Ala-His-NH2的六肽中的一种。
8.根据权利要求1或2所述的透明质酸修饰的美容肽，其特征在于：所述七肽或其衍生物包括氨基酸序列为H-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-Ala-OH或H-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-Ala-NH2的七肽。
9.根据权利要求1或2所述的透明质酸修饰的美容肽，其特征在于：所述八肽或其衍生物包括氨基酸序列为H-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-Ala-Asp-NH2的八肽。
10.根据权利要求1或2所述的透明质酸修饰的美容肽，其特征在于：所述九肽或其衍生物包括九肽-1。
11.权利要求1或2所述透明质酸修饰的美容肽的制备方法，包括：采用透明质酸钠与美容肽发生开环反应，制得透明质酸修饰的美容肽。
12.根据权利要求11所述的透明质酸修饰的美容肽的制备方法，其特征在于：所述美容肽与透明质酸钠的摩尔比为1:2-8。
13.权利要求11所述制备方法获得的透明质酸修饰的美容肽在制备化妆品和/或护肤品中的用途。
14.权利要求11所述制备方法获得的透明质酸修饰的美容肽在增强化妆品和/或护肤品保湿性能或紧致抗皱性能或抗衰性能中的用途。
15.权利要求11所述制备方法获得的透明质酸修饰的美容肽在增强化妆品和/或护肤品舒缓性能或抗氧化性能或美白性能中的用途。
16.一种化妆品，包含权利要求1所述的透明质酸修饰的美容肽。
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