CN114621343B - 乙型脑炎病毒抗体2g1及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及抗体技术领域，具体涉及乙型脑炎病毒抗体2G1及其应用。本发明提供一种乙型脑炎病毒抗体，其重链可变区的互补决定区CDR1、CDR2、CDR3分别具有如SEQ ID NO.1‑3所示的氨基酸序列，轻链可变区的互补决定区CDR1、CDR2、CDR3分别具有如SEQ ID NO.4‑6所示的氨基酸序列。该抗体能够与乙型脑炎病毒结合，具有高度特异性和较强的结合能力，可用于乙型脑炎病毒的免疫荧光染色、流式细胞染色和蛋白免疫印迹等检测。同时，该抗体还对乙型脑炎病毒具有一定的中和能力。该抗体为乙型脑炎病毒的检测和诊断提供了有效的工具。

Description

乙型脑炎病毒抗体2G1及其应用
技术领域
本发明涉及抗体技术领域，具体涉及乙型脑炎病毒抗体2G1及其应用。
背景技术
日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）又称乙型脑炎病毒，属于黄病毒科黄病毒属。JEV经库蚊叮咬传播，引起日本脑炎（Japanese encephalitis, JE），即流行性乙型脑炎（简称乙脑）。
目前，JEV是亚洲病毒性脑炎最重要的病原体，乙脑仍然是一个不容忽视的公共卫生问题。尽管目前已经有成熟的疫苗用于预防，但是仍有散发乙脑疫情不断出现，因此，仍需要开发具有高特异性、高结合及中和能力的JEV抗体，以满足乙脑诊断制剂和治疗的需要。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种JEV抗体。本发明的另一目的是提供该抗体的应用及其相关产品。
为实现上述目的，本发明以人乙脑减毒活疫苗为免疫原免疫小鼠，通过杂交瘤技术筛选到一株JEV特异性的杂交瘤（克隆号记为2G1），制备小鼠腹水并纯化抗体，得到能够特异性结合JEV的鼠源性单克隆抗体（mAb）2G1，该抗体对JEV具有较高的亲和力，同时对JEV具有一定的中和能力。
具体地，本发明提供以下技术方案：
本发明提供JEV抗体或其抗原结合片段，其重链可变区的互补决定区CDR1具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，CDR2具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，CDR3具有如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。轻链可变区的互补决定区CDR1具有如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，CDR2具有如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，CDR3具有如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列。
优选地，所述JEV抗体或其抗原结合片段的重链可变区具有如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列。轻链可变区具有如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。
进一步优选地，所述JEV抗体为鼠源单克隆抗体，其重链恒定区具有如SEQ IDNO.11所示的氨基酸序列，其轻链恒定区具有如SEQ ID NO.12所示的氨基酸序列。
本发明中，所述抗原结合片段可选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、单链抗体、人源化抗体、嵌合抗体、双特异抗体或多特异抗体。
本发明提供含有所述JEV抗体或其抗原结合片段的双特异抗体或多特异抗体。
基于上述抗体，本发明提供一种核酸分子，其编码所述JEV抗体或其抗原结合片段。
根据上述提供的JEV抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列，本领域技术人员可以确定编码所述JEV抗体或其抗原结合片段的核酸分子的核苷酸序列，并根据宿主细胞的密码子偏好性选择不同的核酸分子的核苷酸序列。
作为本发明的一种实施方式，编码所述重链可变区的核酸分子具有如SEQ IDNO.9所示的核苷酸序列，编码所述轻链可变区的核酸分子具有如SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列。
编码所述重链恒定区的核酸分子具有如SEQ ID NO.13所示的核苷酸序列，编码所述轻链恒定区的核酸分子具有如SEQ ID NO.14所示的核苷酸序列。
本发明还提供一种生物材料，其含有编码所述JEV抗体或其抗原结合片段的核酸分子。所述生物材料为表达盒、载体或宿主细胞。
以上所述的表达盒是指将所述核酸分子的上游或下游连接用于转录、翻译的调控元件得到的重组核酸分子。
以上所述的载体是指可将核酸分子插入其中的一种核酸运载工具，包括但不限于质粒、人工染色体、噬菌体、动物病毒等，可以为表达载体，也可以为克隆载体或非复制型载体。
以上所述的宿主细胞可以为微生物细胞（如：大肠杆菌、酵母细胞等）或动物细胞（如：昆虫细胞、CHO细胞、BHK细胞，HEK293细胞等用于表达、制备抗体的细胞），其中，动物细胞为不能够繁殖成为动物个体的细胞。
基于上述JEV抗体或其抗原结合片段的功能，本发明提供所述JEV抗体或其抗原结合片段、所述核酸分子或所述生物材料的如下应用：
（1）在制备用于检测JEV的试剂或试剂盒中的应用；
（2）在制备用于预防或治疗JEV感染或JEV感染引起疾病的药物中的应用；
（3）在制备用于中和JEV毒力的产品中的应用。
以上（1）中所述的检测JEV包括检测JEV的存在或其水平。
以上（2）中所述的JEV感染引起疾病包括流行性乙型脑炎及其相关疾病。
基于上述JEV抗体或其抗原结合片段，本发明提供一种抗体偶联物，其为由所述JEV抗体或其抗原结合片段与载体或药物偶联得到，或者由所述JEV抗体或其抗原结合片段与经化学或生物标记得到。
以上所述的载体可为任意可与蛋白质偶联的载体或药物载体。
以上所述的化学标记包括同位素、胶体金、荧光素、生物素标记等。
以上所述的生物标记包括蛋白标记、酶标记等。
本发明提供一种检测试剂，其含有所述JEV抗体或其抗原结合片段或含有所述抗体偶联物。
以上所述的试剂盒还可包含免疫学检测、流式细胞检测等所需的其它试剂。
本发明提供一种药物组合物，其含有所述JEV抗体或其抗原结合片段或含有所述抗体偶联物。
以上所述的药物组合物还可包含药学上可接受的载体或赋形剂。所用载体或赋形剂的类型可根据药物组合物的剂型和给药方式进行选择。所述药物组合物还可包含具有其它功效的抗体或药物活性成分。
本发明的有益效果在于：本发明提供一种针对JEV的单克隆抗体2G1，该抗体能够与JEV特异性结合，具有高度特异性和较强的结合能力，可用于JEV的免疫荧光染色、流式细胞染色和免疫印迹等检测，即使在较高稀释度时，仍然具有较好的检测效果。同时，该抗体对JEV具有一定的中和能力。该抗体为JEV的检测和诊断提供了有效的工具。
附图说明
图1为本发明实施例2中抗体2G1与JEV病毒抗原（包膜E蛋白）的亲和力。
图2为本发明实施例2中抗体2G1用于间接免疫荧光检测，其中， 设灭活病毒感染对照及4G2阳性对照，2G1（1:40000）和2G1（1:80000）分别为抗体2G1经1: 40000和1:80000稀释后染色结果。
图3为本发明实施例2中通过间接免疫荧光检测抗体2G1与其他黄病毒抗原的反应性，其中，4G2为阳性对照。
图4为本发明实施例2中抗体2G1用于流式细胞检测，其中，设灭活病毒感染对照及4G2阳性对照，2G1染色分别为1:20000和1:40000稀释。
图5为本发明实施例2中抗体2G1用于免疫印迹检测，其中，泳道1上样为JEV（Beijing-1株）感染239T 细胞24h的全细胞裂解液，泳道 2~4上样为浓缩JEV颗粒（分别为原液、1:10、1:100稀释）；2G1稀释度为1:5000。
图6为本发明实施例2中抗体2G1的中和曲线。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1 杂交瘤细胞和单克隆抗体的筛选和制备
以人乙脑减毒活疫苗（SA 14-14-2）为免疫原，通过双后肢足垫免疫BALB/c小鼠，剂量为成人剂量的1/10；间隔三周，共计免疫三次。末次免疫1周后，取小鼠脾脏，分离脾细胞与SP2/0细胞进行融合，制备杂交瘤细胞。
克隆化后，经ELISA初筛，筛选到一株对JEV具有高结合能力的单克隆抗体，其杂交瘤克隆号记为2G1，其抗体亚型为IgG2a。
将2G1杂交瘤注射入经降植烷致敏的小鼠腹腔内，约10天后收获小鼠腹水，采用Protein G进行纯化，获得纯化单克隆抗体，浓度为2.1mg/ml。
培养2G1杂交瘤细胞，提取细胞总RNA，RT-PCR扩增抗体重链（1.4kb）及轻链基因（0.7kb），并将正确DNA条带经内切酶消化后与载体pcomb3连接，进而转化x-blue感受态细胞，最后选择阳性克隆进行测序，得到抗体重链及轻链全长序列。
经测序，单克隆抗体2G1的重链可变区的互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1-3所示，轻链可变区的互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4-6所示。重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示。
实施例2 单克隆抗体2G1的性能验证
1、SPR检测抗体2G1与JEV病毒抗原的亲和力
借助表面等离子共振技术（SPR），利用Biacore T200（GE）检测2G1与E蛋白的亲和力。将2G1通过抗体捕获法固定在CM5芯片上，进而将包膜E蛋白进行倍比稀释后（2μM，1μM，500nM，250nM，125nM，62.5nM）作为分析物流过芯片表面。检测结果如图1所示，经软件分析后，结果如下：kd（1/s）为7.062E-5；ka（1/Ms）为4272；KD（M）为1.653E-8。
上述结果说明，2G1与E蛋白具有较强的亲和力。
2、间接免疫荧光技术（indirect immunofluorescent assay, IFA）检测抗体2G1对JEV病毒抗原及其他黄病毒抗原的反应性
2.1利用IFA检测抗体2G1对JEV病毒抗原的反应性，具体方法如下：
采用5% MEM 培养Vero细胞，传代至24孔板；次日细胞融合度约为50%，感染JEVBeijing-1株 （MOI=1）（JEV Beijing-1 已在下述文献中公开：Sheng ZY, et al.Electroporation enhances protective immune response of a DNA vaccine againstJapanese encephalitis in mice and pigs. Vaccine. 2016 Nov 11;34(47):5751-5757.；Chen H, et al. Suppressive Effects on the Immune Response andProtective Immunity to a JEV DNA Vaccine by Coadministration of a GM-CSF-Expressing Plasmid in Mice. PLoS One. 2012;7(4):e34602.），同时设置灭活病毒感染作为阴性对照。感染24h 后，细胞以PBS漂洗2-3遍，加入4%多聚甲醛固定15-20min；PBS漂洗2-3遍；Triton X-100 通透5 min， PBS漂洗2-3遍；1% BSA室温封闭1-2h； 加入不同稀释度的纯化单克隆抗体2G1（原浓度为2.1mg/ml，稀释度为1:5000, 1:10000,1:20000,1:40000,1:80000），4℃孵育过夜，同时设置4G2抗体（广谱黄病毒抗体，其杂交瘤细胞信息参见https://www.atcc.org/products/hb-112）染色作为阳性对照；次日PBS漂洗2-3遍，加入驴抗鼠488二抗，室温孵育30-60min，PBS漂洗2-3遍；加入DAPI染料孵育5-10min染核；PBS 漂洗2-3遍，倒置荧光显微镜下观察。
结果显示，上述各个稀释度的2G1抗体与JEV抗原均有特异性结合反应，但染色荧光强度随抗体稀释度升高而逐渐减弱。其中，1:40000和1:80000稀释度的检测结果如图2所示。以上结果表明，2G1抗体在10-4稀释度，仍可用于JEV的IFA检测。
2.2利用IFA检测抗体2G1对其他黄病毒抗原的反应性
采用5% MEM 培养Vero细胞，传代至24孔板；次日细胞融合度约为50%，感染登革病毒1~4型（DENV 1~4）及寨卡病毒（ZIKV），同时设置灭活病毒感染作为阴性对照。感染后约2d，将细胞按照上述步骤处理后加入2G1（1:5000），4℃过夜，同样依上述步骤进行后续染色，最后置于倒置荧光显微镜下观察。结果如图3所示，2G1仅特异性识别JEV，对DENV1~4和ZIKV均无交叉反应。
3、流式细胞术检测抗体2G1对JEV病毒抗原的反应性
利用流式细胞术检测（单染，间接法）检测抗体2G1对JEV病毒抗原的反应性，具体方法如下：
采用5% MEM 培养Vero细胞，传代至25cm2细胞瓶；次日融合度约为50%，感染JEVBeijing-1 （MOI=1），同时设置灭活病毒感染作为阴性对照。感染24h后，细胞以PBS漂洗1-2遍，加入0.04% EDTA消化细胞，终止消化后，将细胞悬液于1000rpm离心5min，弃上清；2%PFA固定10min，离心弃上清，PBS漂洗2-3遍；加入皂素通透液作用5min，离心弃上清，PBS漂洗2-3遍；加入1% BSA 室温封闭1-2h，离心弃上清；加入不同稀释度的纯化2G1（原浓度为2.1mg/ml，稀释度为1:5000, 1:10000, 1:20000, 1:40000, 1:80000），同时设置4G2抗体（广谱黄病毒抗体）染色作为阳性对照，于4℃处理30min，PBS漂洗2-3遍，离心去上清；加入驴抗鼠488二抗；4℃孵育30min，PBS漂洗2-3遍后，以PBS重悬细胞，上机检测。
结果显示， 2G1抗体与JEV病毒抗原有特异性结合反应，其中，1:20000和1:40000稀释度的检测结果如图4所示。以上结果表明，2G1抗体在10-4稀释度，仍可用于JEV的流式细胞检测。
4、免疫印迹技术（Western Blot）检测抗体2G1对JEV病毒抗原的反应性
病毒抗原为JEV感染的293T细胞及JEV浓缩病毒（均为Beijing-1株）。使用bio-rad电泳系统，12% SDS-PAGE，90V 30min进行浓缩胶电泳，120V 1h进行分离胶电泳； 300mA条件下转膜2h； 10%脱脂牛奶封闭1h后，使用2G1作为一抗（1:5000）4℃孵育过夜，次日使用二抗（926-68071，LI-COR）室温孵育1h，并于Odyssey® CLx成像系统曝光。
结果如图5显示，2G1抗体与JEV病毒抗原具有特异性结合反应，即2G1抗体可用于JEV的免疫印迹检测。
5、中和实验评价抗体2G1的中和能力
将Vero细胞传代24孔板；次日，以2% FBS MEM分别稀释抗体2G1（原始浓度为2.1mg/ml，从1:10开始，5倍比稀释）和JEV病毒原液（Bejing-1）；将稀释好的抗体与病毒混匀（1:1），混合物于37℃孵育1h；以无血清MEM漂洗24孔板1次；将上述混合物加入Vero细胞，37℃继续孵育1h；同时设定不加抗体的病毒对照；洗板后加入1.4%甲基纤维素，于37℃、5%CO2条件下培养，5-6 d后染色，计数噬斑，绘制中和曲线（图6）并计算半数中和浓度。结果显示，抗体2G1的半数中和浓度（Neut50）为0.1486μg/ml，表明该抗体对JEV具有一定的中和活性。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 首都医科大学
<120> 乙型脑炎病毒抗体2G1及其应用
<130> KHP211123127.0YS
<160> 14
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Thr Gly Tyr Ser Ile Ile Ser Gly Tyr
1 5
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Tyr Ile His Tyr Ser Gly Ser
1 5
<210> 3
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Cys Ala Arg Gly Asp Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Gly Met Asp His
1 5 10 15
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Ser Glu Ser Val Glu Tyr Ser Gly Thr Gly
1 5 10
<210> 5
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Tyr Ala Ala
1
<210> 6
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Cys Gln Gln Ser Arg Lys Leu Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 7
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Leu Asp Arg Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Ile Ser Gly
20 25 30
Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Ser Ala Thr Tyr Ser Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Phe Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Gly Met Asp His Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 8
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Ser
20 25 30
Gly Thr Gly Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Val Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Asp Asp Asp Leu Ala Leu Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Lys Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Ser Lys Leu Glu Ile Asn
100 105 110
<210> 9
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
gatgtgcagc ttcaggagtc aggacttgac cgggtgaaac cttctcagtc actttcactc 60
acctgcactg tcactggcta ctccatcatt agtggttata gttggcactg gatccggcaa 120
tttccaggaa agaaactgga atggatgggc tacatacact acagtggtag cgctacctac 180
agcccatctc tcaaaagtcg aatctctatc actcgagaca catccaagaa ccagttcttc 240
ctgcagttga attctgtgac tactgaggac acagccacat tttactgtgc aagaggggac 300
ggtagtagcc cctactatgg tatggaccac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 10
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
gacattgtgc tcacccaatc tccaccttct ttggctgtgt ctctagggca gagagccacc 60
atctcctgca gagccagtga aagtgttgaa tattctggca caggtttaat tcactggtac 120
caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccag cgtggaatct 180
ggggtcccag ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcagcct caacatccat 240
cctgtggagg acgatgatct tgcactgtat ttctgtcagc aaagtaggaa gcttccgtgg 300
acgttcggtg gaggctccaa gttggaaatc aac 333
<210> 11
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
50 55 60
Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
85 90 95
Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp
145 150 155 160
Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg
165 170 175
Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln
180 185 190
His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
195 200 205
Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly
210 215 220
Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met
245 250 255
Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu
260 265 270
Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe
275 280 285
Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn
290 295 300
Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr
305 310 315 320
Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
325 330
<210> 12
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
1 5 10 15
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
35 40 45
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
65 70 75 80
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
85 90 95
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
100 105
<210> 13
<211> 993
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
gccaaaacaa cagccccatc ggtctatcca ctggcccctg tgtgtggaga tacaactggc 60
tcctcggtga ctctaggatg cctggtcaag ggttatttcc ctgagccagt gaccttgacc 120
tggaactctg gatccctgtc cagtggtgtg cacaccttcc cagctgtcct gcagtctgac 180
ctctacaccc tcagcagctc agtgactgta acctcgagca cctggcccag ccagtccatc 240
acctgcaatg tggcccaccc ggcaagcagc accaaggtgg acaagaaaat tgagcccaga 300
gggcccacaa tcaagccctg tcctccatgc aaatgcccag cacctaacct cttgggtgga 360
ccatccgtct tcatcttccc tccaaagatc aaggatgtac tcatgatctc cctgagcccc 420
atagtcacat gtgtggtggt ggatgtgagc gaggatgacc cagatgtcca gatcagctgg 480
tttgtgaaca acgtggaagt acacacagct cagacacaaa cccatagaga ggattacaac 540
agtactctcc gggtggtcag tgccctcccc atccagcacc aggactggat gagtggcaag 600
gagttcaaat gcaaggtcaa caacaaagac ctcccagcgc ccatcgagag aaccatctca 660
aaacccaaag ggtcagtaag agctccacag gtatatgtct tgcctccacc agaagaagag 720
atgactaaga aacaggtcac tctgacctgc atggtcacag acttcatgcc tgaagacatt 780
tacgtggagt ggaccaacaa cgggaaaaca gagctaaact acaagaacac tgaaccagtc 840
ctggactctg atggttctta cttcatgtac agcaagctga gagtggaaaa gaagaactgg 900
gtggaaagaa atagctactc ctgttcagtg gtccacgagg gtctgcacaa tcaccacacg 960
actaagagct tctcccggac tccgggtaaa tga 993
<210> 14
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
cgggctgatg ctgcaccaac tgtatccatc ttcccaccat ccagtgagca gttaacatct 60
ggaggtgcct cagtcgtgtg cttcttgaac aacttctacc ccaaagacat caatgtcaag 120
tggaagattg atggcagtga acgacaaaat ggcgtcctga acagttggac tgatcaggac 180
agcaaagaca gcacctacag catgagcagc accctcacgt tgaccaagga cgagtatgaa 240
cgacataaca gctatacctg tgaggccact cacaagacat caacttcacc cattgtcaag 300
agcttcaaca ggaatgagtg c 321

Claims (9)

1.一种乙型脑炎病毒抗体，其特征在于，其重链可变区的互补决定区CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，CDR3的氨基酸序列如SEQID NO.3所示；轻链可变区的互补决定区CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。
2.根据权利要求1所述的乙型脑炎病毒抗体，其特征在于，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
3.核酸分子，其特征在于，其编码权利要求1或2所述的乙型脑炎病毒抗体。
4.根据权利要求3所述的核酸分子，其特征在于，编码所述重链可变区的核酸分子具有如SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列，编码所述轻链可变区的核酸分子具有如SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列。
5.生物材料，其特征在于，其含有权利要求3或4所述的核酸分子，所述生物材料为表达盒、载体或宿主细胞。
6.权利要求1或2所述的乙型脑炎病毒抗体或权利要求3或4所述的核酸分子或权利要求5所述的生物材料的如下任一种应用：
（1）在制备用于检测乙型脑炎病毒的试剂或试剂盒中的应用；
（2）在制备用于预防或治疗乙型脑炎病毒感染或乙型脑炎病毒感染引起疾病的药物中的应用；
（3）在制备用于中和乙型脑炎病毒毒力的产品中的应用。
7.一种抗体偶联物，其特征在于，其为由权利要求1或2所述的乙型脑炎病毒抗体与载体或药物偶联得到，或者由权利要求1或2所述的乙型脑炎病毒抗体与经化学或生物标记得到。
8.一种检测试剂，其特征在于，其含有权利要求1或2所述的乙型脑炎病毒抗体或权利要求7所述的抗体偶联物。
9.一种药物组合物，其特征在于，其含有权利要求1或2所述的乙型脑炎病毒抗体或权利要求7所述的抗体偶联物。
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