CN114621129A - 抗肿瘤化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及天然药物领域，涉及抗肿瘤化合物及其制备方法和用途，还包括其药用组合物以及含有该化合物的药桑植物提取物。所述的化合物及其光学异构体或其药学上可接受的盐如式(Ⅰ)或式(Ⅱ)所示，R1～R4如权利要求和说明书所述。本发明所述化合物采用药桑Morus nigra L.的干燥果实为原料，用有机溶剂和/或水进行提取并且进行分离。本发明还提供了所述化合物或其组合物在制备治疗肿瘤疾病的药物中的应用。

Description

抗肿瘤化合物及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，特别涉及抗肿瘤化合物及其制备方法和用途，还包括其药用组合物以及含有该化合物的药桑植物提取物。
背景技术
药桑Morus nigra L.为桑科(Moraceae)桑属(Morus)植物，《神农本草经》记载，桑为传统中药，根皮、枝叶、果实等皆可以入药，具有抗氧化，降糖，降压，抗菌，抗病毒等作用。
药桑的干燥成熟果实，现代药理学研究表明，药桑具有抗氧化、抗菌、抗肿瘤、抗病毒、降压和降糖等作用。化学研究结果表明，药桑中所分离得到的化合物主要以黄酮类为主，其次含有二苯乙烯类、苯骈呋喃类、Diels-Alder型加合物、生物碱类以及其他类等。迄今为止，国内外对药桑的化学成分以及其药理活性的报道甚少，为探索这一具有药用价值的植物是否具有抗肿瘤活性成分，发明人对药桑中具有抗肿瘤的活性成分进行了研究。
发明内容
本发明首要目的在于提供药桑植物中抗肿瘤活性成分。
本发明的第二个目的是提供所述抗肿瘤成分的制备方法。
本发明的第三个目的是提供含有所述抗肿瘤成分的药物组合物
本发明的第四个目的在于提供上述化合物及其组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
本发明的化合物包括式(Ⅰ)或式(Ⅱ)所示化合物及其光学异构体或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0002831259290000011
其中：R1～R4为H、C1-C6烷基。
优选地，R1～R4为H、C1-C4烷基。
本发明更优选如下化合物及其光学异构体或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0002831259290000021
(1)methyl(2R)-5-amino-2-(2-formyl-5-(methoxymethyl)-1H-pyrrol-1-yl)-5-oxopentanoate)
(2)methyl4-(2-(2,4-dihydroxy-6-(6-hydroxybenzofuran-2-yl)-3-(3-methylbut-2-en-1-yl)benzyl)-5-formyl-1H-pyrrol-1-yl)butanoate。
本发明进一步提供了所述化合物的制备方法，包括以下操作步骤：采用药桑Morusnigra L.的干燥果实为原料，用有机溶剂和/或水进行提取并且进行分离。
具体地，本发明所述的制备方法包括如下步骤：
(1)黑桑有机溶剂提取，合并提取液，减压浓缩得浸膏；
(2)将浸膏用水混悬，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层合并后减压浓缩，得到乙酸乙酯层浸膏；
(3)乙酸乙酯层经硅胶柱色谱，氯仿/二氯甲烷:甲醇(100:0-0:100)洗脱，得亚流分E1-E11；
(4)E5流份经凝胶柱色谱，经氯仿/二氯甲烷:甲醇1:1分离后得到E51-E53三个流份；
E6流份经开放硅胶柱色谱，经氯仿/二氯甲烷:甲醇(100:0-1:1)分离后得到E61-E67七个流份；
(5)E52经开放硅胶柱色谱，经氯仿/二氯甲烷:甲醇(100:0-1:1)分离后得到E521-E525五个流份；
E 63经凝胶柱色谱，经氯仿/二氯甲烷:甲醇1:1分离后得到E631-E633三个流份；
(6)E524经开放ODS柱色谱，经氯仿/二氯甲烷:甲醇(1:9-1:0)分离后得到E5241-E5246六个流份；
(7)E643经制备液相分成两部分E6431-E6432；
(8)E6431经制备液相得化合物1；E5243经制备液相得化合物2。
所述步骤(1)中，有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿中的一种或几种，优选为70-95％的乙醇；提取温度为20-100℃，提取时间为1-48小时；
所述步骤(7)中，液相的流动相为：甲醇:水＝6:4-7:3；
所述步骤(8)中，化合物1的流动相为：甲醇:水＝4:6-3:7；化合物2的流动相为：甲醇:水＝甲醇:水＝6:4-7:3。
本发明提供一种药物组合物，由式(Ⅰ)或式(Ⅱ)所示化合物及其光学异构体或其药学上可接受的盐中的两种以上组成。
本发明提供一种药物组合物，包含式(Ⅰ)或式(Ⅱ)所示化合物及其光学异构体或其药学上可接受的盐中的一种或几种和药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明进一步提供一种含有式(Ⅰ)或式(Ⅱ)所示化合物及其光学异构体或其药学上可接受的盐的提取物。
本发明还提供了式(Ⅰ)或式(Ⅱ)所示化合物及其光学异构体或其药学上可接受的盐或其组合物，植物提取物在制备治疗肿瘤疾病的药物中的应用。
所述肿瘤疾病包括但不限于：肺癌、支气管癌、肝癌、卵巢癌、子宫颈癌、膀胱癌、睾丸癌、肾癌、胰腺癌、胃癌、骨癌、食道癌、结肠癌、胆管癌、绒毛膜癌、黑色素瘤、胶质细胞瘤、神经纤维瘤、纤维肉瘤、淋巴管瘤或白血病等。
本发明的化合物可以制备成口服或注射等应用形式的制剂，例如，可为片剂、胶囊剂、粉剂、糖浆剂、针剂等。
本发明相对现有技术具有如下的优点及效果：(1)提供了一系列结构新颖的化合物及其组合物；(2)运用体外活性筛选体系进行活性评价，发现本发明化合物及其组合物能有效地抑制肿瘤细胞细胞的生长，提示本发明化合物及其组合物可作为治疗肿瘤的药物，具有良好的研究开发前景。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步的详细描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1：从药桑果实中提取分离活性化合物
黑桑果实总重量约20kg，用95％乙醇水加热回流提取3次，每次2小时，提取完毕后合并提取液，减压浓缩后得到浸膏7.7kg，将浸膏用水混悬，用乙酸乙酯萃取5次，将各层萃取液合并后减压浓缩，得到乙酸乙酯层浸膏(954g)。乙酸乙酯层经硅胶柱色谱分离(CH2Cl2:CH3OH,100:0、100:1、80:1、60:1、50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、3:1、1:1、0:100)得到11个亚馏分(E1-E11)。
E5(32.0g)流份经凝胶柱色谱(CH2Cl2-CH3OH,1:1)分离后得到E51-E53三个流份，E52经开放硅胶柱色谱(CH2Cl2-CH3OH,100:0、100:1、80:1、50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、1:1)分离后得到E521-E525五个流份。E524经开放ODS柱色谱(CH3OH-H2O,1:9、1:4、3:7、2:3、1:1、3:2、7:3、4:1、9:1、1:0)分离后得到E5241-E5246六个流份，E5243经制备液相(制备条件：70％CH3OH-H2O)得到化合物2(1.2mg,tR＝18.7min)。E6(17.4g)流份经开放硅胶柱色谱(CH2Cl2-CH3OH,100:0、100:1、80:1、50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、1:1)分离后得到E61-E67七个流份，E63经凝胶柱色谱(CH2Cl2-CH3OH,1:1)分离后得到E631-E633三个流份。E643经制备液相(制备条件：70％CH3OH-H2O)分成两部分E6431-E6432。E6431经制备液相(制备条件：40％CH3OH-H2O)得到化合物1(4.4mg,tR＝10.6min)。
通过理化常数和现代波谱学手段(MS、NMR、ECD)，结合文献相关数据，鉴定了它们的结构，化合物1-2均为未见文献报道的新化合物：
Figure BDA0002831259290000041
所得各化合物的物理化学和常数如下：
化合物1白色粉末(甲醇)，
Figure BDA0002831259290000042
-472(c＝0.2,MeOH)，HR-ESI-MS(positive)m/z305.1103[M+H]+(calcd for C30H32NO7 +,305.1107)，分子式为C13H18N2O5，1H-NMR(600MHz,CD3OD)和13C-NMR(150MHz,CD3OD)数据见表1。
化合物2黄色无定形粉末(甲醇)，HR-ESI-MS(positive)m/z 518.2159[M+H]+(calcd for C30H32NO7 +,518.2173)，分子式为C30H31NO7，1H-NMR(600MHz,CD3OD)和13C-NMR(150MHz,CD3OD)数据见表2。
表1化合物1的氢谱和碳谱数据
Figure BDA0002831259290000043
1H-NMR spectrum recorded at 600MHz,13C-NMR spectrum recorded at150MHz,CD3OD.
表2化合物2的氢谱和碳谱数据
Figure BDA0002831259290000044
Figure BDA0002831259290000051
1H-NMR spectrum recorded at 600MHz,13C-NMR spectrum recorded at150MHz,CD3OD.
实施例2：化合物抗肿瘤活性检测
采用MTT方法，对本发明所述化合物进行活性检测，抑制肿瘤细胞的增值，以人宫颈癌细胞系HeLa，人胰腺导管癌(SW1990，Aspc-1，BxPC-3)，人乳腺癌(MCF-7，MDA-MB-468以及MDA-MB-231)，人肝癌细胞(Hep3B)为例。
取处于对数生长期的上述细胞100μL，每孔2×104接种于96孔板中，置CO2培养箱(37℃，5％CO2，饱和湿度)培养。12小时后加药10μL/孔，样品的工作液用培养基稀释至终浓度分别为10，5，2.5，1.25，0.625，0.3125，0.15625μM，加样组及空白组均设3个复孔。继续培养72小时后，加入MTT工作液，20μL/孔，3小时后，弃去培养基，加入DMSO 150μL/孔，平板摇床上500rpm震摇3分钟，用酶标仪测定各孔的OD值，测定波长为490nm，计算细胞增殖抑制率，细胞增殖抑制率＝(空白对照组OD值-给药组OD值)/空白对照组OD值×100％。以上实验均重复三次，活性结果见表3。
表3化合物的抗肿瘤活性结果(IC50，μM)
Figure BDA0002831259290000052

Claims (10)

1.通式(I)或(II)所示的化合物及其光学异构体或其药学上可接受的盐：
Figure RE-FDA0002905685320000011
其中：R1～R4为H或C1-C6烷基。
2.权利要求1的通式(I)或(II)所示的化合物及其光学异构体或其药学上可接受的盐：其中，R1和R2相同。
3.如下的化合物及其光学异构体或其药学上可接受的盐：
Figure RE-FDA0002905685320000012
4.如权利要求3所述的化合物及其光学异构体或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，
(1)黑桑有机溶剂提取，合并提取液，减压浓缩得浸膏；
(2)将浸膏用水混悬，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层合并后减压浓缩，得到乙酸乙酯层浸膏；
(3)乙酸乙酯层经硅胶柱色谱，氯仿/二氯甲烷:甲醇100:0-0:100洗脱，得亚流分E1-E11；
(4)E5流份经凝胶柱色谱，经氯仿/二氯甲烷:甲醇1:1分离后得到E51-E53三个流份；
E6流份经开放硅胶柱色谱，经氯仿/二氯甲烷:甲醇100:0-1:1分离后得到E61-E67七个流份；
(5)E52经开放硅胶柱色谱，经氯仿/二氯甲烷:甲醇100:0-1:1分离后得到E521-E525五个流份；
E63经凝胶柱色谱，经氯仿/二氯甲烷:甲醇1:1分离后得到E631-E633三个流份；
(6)E524经开放ODS柱色谱，经氯仿/二氯甲烷:甲醇1:9-1:0分离后得到E5241-E5246六个流份；
(7)E643经制备液相分成两部分E6431-E6432；
(8)E6431经制备液相得化合物1；E5243经制备液相得化合物2。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿中的一种或几种，优选为70-95％的乙醇；提取温度为20-100℃，提取时间为1-48小时。
6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(7)中，液相的流动相为：甲醇:水＝6:4-7:3；步骤(8)中，化合物1的流动相为：甲醇:水＝4:6-3:7；化合物2的流动相为：甲醇:水＝甲醇:水＝6:4-7:3。
7.一种药物组合物，由权利要求1-3任何一项所述的及其光学异构体或其药学上可接受的盐中的两种或多种组成。
8.一种药物组合物，包含权利要求1-3中任何一项所述的化合物及其光学异构体或其药学上可接受的盐中的一种或几种与药学上可接受载体或赋形剂。
9.权利要求1-3中任何一项所述化合物及其光学异构体或其药学上可接受的盐或权利要求7或8所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤为肺癌、支气管癌、肝癌、卵巢癌、子宫颈癌、膀胱癌、睾丸癌、肾癌、胰腺癌、胃癌、骨癌、食道癌、结肠癌、胆管癌、绒毛膜癌、黑色素瘤、胶质细胞瘤、神经纤维瘤、纤维肉瘤、淋巴管瘤或白血病。
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