CN114601842A - 一种白头翁皂苷精提物在治疗仔猪腹泻的药物中的用途 - Google Patents

一种白头翁皂苷精提物在治疗仔猪腹泻的药物中的用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种白头翁皂苷精提物在治疗仔猪腹泻的药物中的用途；所述白头翁皂苷精提物中，白头翁皂苷B4含量不低于60％，白头翁皂苷B5含量不低于10％。本发明特定组成的白头翁皂苷精提物，可改善腹泻仔猪精神状态、降低腹泻仔猪体温、改善腹泻仔猪被毛状态、改善腹泻仔猪脱水、改善腹泻仔猪食欲和肛门洁净度，有效治疗仔猪腹泻，具有很好的应用前景。

Description

一种白头翁皂苷精提物在治疗仔猪腹泻的药物中的用途
技术领域
本发明属于兽医药领域，具体涉及一种白头翁皂苷精提物在治疗仔猪腹泻的药物中的用途。
背景技术
仔猪腹泻是指3月龄内的小猪尤其是刚断奶仔猪以腹泻为主要临床症状的疾病。该病在仔猪中发病率高，死亡率高。据报道，30kg以下的仔猪全年平均发病率可达46.5％，死亡率10.3％，冬季发病率可达69.9％，死亡率可达19.6％。腹泻造成的危害很大，轻度腹泻会导致仔猪营养不良及生长受阻，严重腹泻则导致仔猪脱水，甚至死亡。病愈后也往往生长发育不良，日增重明显下降，甚至形成僵猪。其次由于拉稀会使猪的体质和免疫力下降，导致疫苗免疫的失败以及对疾病的抵抗力减弱。
仔猪腹泻主要原因有以下几个方面：(1)7日龄之前发生腹泻，主要是感染了早发性大肠杆菌引起的黄痢，或母猪在妊娠期吃了发霉的饲料，也会引起仔猪在产后就发生黄色的粪便；(2)7日龄以后的仔猪，主要为感染了迟发性大肠杆菌引起白痢，或母猪因为乳腺炎而引起的仔猪白痢，或小猪感染了球虫病引起的黄痢；(3)小猪感染了伪狂犬病引起的黄白痢；(4)小猪感染了病毒性的胃肠炎，像轮状病毒，流行性胃肠炎，圆环病毒，猪瘟等。
细菌性腹泻包括仔猪黄痢、仔猪白痢主要导致仔猪肠壁变薄、黏膜脱落等病理变化和呕吐和水样腹泻等临床症状，具有流行范围广、分布地区多、发病率及死亡率高等特点。仔猪大肠杆菌病为初生仔猪的一种急发性、高度致死性疾病，以腹泻，排黄色、白色或水样性粪便为主要特征，又称仔猪黄白痢，多发生在仔猪出生后几小时至5日之间，1～3日龄更为多见，多是同窝发生。有些地方的猪场几乎整窝发病，发病率高达100％，病死率高达80～100％，主要发生在出生后28日龄以内的哺乳仔猪或70日龄以内仔猪，给养猪业造成极大的经济损失。
目前对于仔猪腹泻的治疗多采用恩诺沙星、环丙沙星等化药治疗，由于发病快，对仔猪生长发育影响大，中药治疗药物较少。但是长期抗生素治疗不仅会产生耐药性，影响治疗效果，而且抗生素残留严重，在食物链中蓄积最终对人类健康造成影响，因此寻找一种快速起效，安全无残留的药物具有重要的意义。
白头翁是一种传统中药，药用部位是毛茛科植物白头翁的干燥根，其味苦性寒，归胃、大肠经，具有清热解毒、凉血止痢、燥湿杀虫等功效，临床主要用于治疗阿米巴痢疾、急慢性炎症、消化性溃疡等；白头翁皂苷是白头翁中具有生物活性的五环类三萜成分，目前已有诸多白头翁皂苷的生物活性研究，证实了白头翁皂苷B4抗肿瘤、抗炎、镇痛等功效。此外，中国专利CN111110728B还公开了一种含有白头翁皂苷B4和白头翁皂苷B5的白头翁提取物，在奶牛乳房炎的防治中表现出很好的效果。但白头翁皂苷及其提取物对仔猪腹泻的治疗作用尚未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种白头翁皂苷精提物在治疗仔猪腹泻的药物中的用途。
本发明提供了白头翁皂苷精提物在治疗仔猪腹泻的药物中的用途；所述白头翁皂苷精提物中，白头翁皂苷B4含量不低于60％，白头翁皂苷B5含量不低于10％。
进一步地，上述白头翁皂苷精提物是按照如下步骤制备得到的：
(1)白头翁加乙醇回流提取2～4次，每次2～4小时；
(2)将各次提取的提取液混合浓缩除去乙醇得浓缩液；
(3)浓缩液上样经大孔树脂分离纯化，干燥即得。
更进一步地，步骤(1)所述加乙醇回流为：加8～12倍65～75％浓度的乙醇回流。
更进一步地，步骤(1)所述加乙醇回流为：加10倍70％浓度的乙醇回流。
更进一步地，步骤(1)所述提取为：提取3次，每次3小时。
更进一步地，步骤(3)所述大孔树脂为AB-8大孔树脂。
更进一步地，步骤(3)所述分离纯化的方法是：依次用水洗脱2BV、20％乙醇洗脱3BV、70％乙醇洗脱2BV并收集70％乙醇洗脱液部分，浓缩除去乙醇。
更进一步地，上述浓缩液上样流速为1.5～2.5BV/h，优选为2BV/h。
更进一步地，上述治疗仔猪腹泻的药物是改善腹泻仔猪精神状态、降低腹泻仔猪体温、改善腹泻仔猪被毛状态、改善腹泻仔猪脱水、改善腹泻仔猪食欲和/或改善腹泻仔猪肛门洁净度的药物。
更进一步地，上述治疗仔猪腹泻的药物中，白头翁皂苷精提物的质量分数不低于5％。
本发明的有益效果：本发明特定组成的白头翁皂苷精提物，可改善腹泻仔猪精神状态、降低腹泻仔猪体温、改善腹泻仔猪被毛状态、改善腹泻仔猪脱水、改善腹泻仔猪食欲和肛门洁净度，有效治疗仔猪腹泻，且效果显著优于未经纯化的白头翁皂苷粗提物以及白头翁皂苷B4、白头翁皂苷B5，在仔猪腹泻的治疗中具有很好的应用前景。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为实施例1的白头翁皂苷精提物的HPLC谱图。
图2为对比例1的白头翁皂苷B4的HPLC谱图。
图3为对比例2的白头翁皂苷B5的HPLC谱图。
图4为对比例3的白头翁皂苷粗提物的HPLC谱图。
具体实施方式
本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
实施例1、白头翁皂苷精提物的制备
取白头翁药材加入10倍量70％乙醇回流提取3次，每次3小时，三次提取液混合浓缩至无醇味，浓缩液用AB-8大孔树脂纯化，以2倍柱体积每小时的流速上样，依次用纯化水洗脱2倍柱体积、20％乙醇洗脱3倍柱体积、70％乙醇洗脱2倍柱体积、95％乙醇洗脱2倍柱体积，收集70％乙醇洗脱液部分进行浓缩，浓缩至无醇味，确定有效成分白头翁皂苷B4含量在60％以上，白头翁皂苷B5含量在10％以上，干燥后为白头翁皂苷提取物。
白头翁皂苷精提物标准：
性状：浅黄色粉末；以干燥品计算，白头翁皂苷B4含量不低于60％，白头翁皂苷B5含量不低于10％。其HPLC谱图如图1所示。
实施例2、白头翁皂苷精提物注射液的制备
取实施例1的白头翁皂苷精提物50g，加3％稳定性辅料，配置成1000ml的溶液。调节PH值至中性，灌封，灭菌即得。
白头翁皂苷精提物注射液标准：
性状：浅黄色澄明液体
PH值：6.0-8.0
每1ml含白头翁皂苷B4应大于30mg。
对比例1、白头翁皂苷B4注射液
白头翁皂苷B4制法：
取白头翁皂苷提取物经中压制备液相纯化，填料为ODSC18色谱柱，流动相以30％乙醇进行洗脱，接收4倍柱体积处的吸收峰，对所得药液进行液相检测，药液干燥后为白头翁皂苷B4干燥品，HPLC谱图如图2所示。
白头翁皂苷B4标准
性状：白色粉末
以干燥品计算，白头翁皂苷B4含量不低于90％。
白头翁皂苷B4注射液制法：
根据处方量取上述合格的白头翁皂苷B4，30g，加入3％稳定性辅料，配置成1000ml的溶液。调节PH值至中性，灌封，灭菌即得。
白头翁皂苷B4注射液标准
性状：浅黄色澄明液体
PH值：6.0-8.0
每1ml含白头翁皂苷B4应大于30mg。
对比例2、白头翁皂苷B5注射液
白头翁皂苷B5制法：
取白头翁皂苷提取物经中压制备液相纯化，填料为ODSC18色谱柱，流动相以30％乙醇进行洗脱，接收6倍柱体积处的吸收峰，对所得药液进行液相检测，药液干燥后为白头翁皂苷B5干燥品，HPLC谱图如图3所示。
白头翁皂苷B5标准：
性状：白色粉末
以干燥品计算，白头翁皂苷B5含量不低于90％。
白头翁皂苷B5注射液制法
根据处方量取上述合格的白头翁皂苷B5，5g，加入3％稳定性辅料，配置成1000ml的溶液。调节PH值至中性，灌封，灭菌即得。
白头翁皂苷B5注射液标准：
性状：浅黄色澄明液体
PH值：6.0-8.0
每1ml含白头翁皂苷B5应大于5mg。
对比例3、白头翁粗提物注射液的制备
取白头翁药材加入10倍量70％乙醇回流提取3次，每次3小时，三次提取液混合浓缩，浓缩液干燥得白头翁粗提物。
性状：黄褐色粉末；以干燥品计算，白头翁皂苷B4含量不低于25％，白头翁皂苷B5含量不低于4％。
取上述白头翁皂苷粗提物50g，加3％稳定性辅料，配置成1000ml的溶液。调节PH值至中性，灌封，灭菌即得。
白头翁皂苷粗提物注射液标准：
性状：黄褐色澄明液体
PH值：6.0-8.0
每1ml含白头翁皂苷B4应大于12.5mg。
以下通过实验例证明本发明的有益效果。
实验例1、白头翁皂苷提取物注射液对仔猪腹泻的治疗
1.1试验场地
四川省宜宾市珙县上罗镇七星村生猪养殖场，占地面积300亩，存栏母猪5000头，后备母猪1600头。年出栏仔猪12万头。
1.2试验材料
1.2.1试验药品及器材
试验药品：实施例2、对比例1～3的注射液。
1.2.2试验器材
注射器、温度计、听诊器、记号笔、电子称等。
1.2.3试验动物
本试验随机选取自然发病腹泻并表现出临床症状的仔猪175头。
1.3试验方法
1.3.1病例选择
试验腹泻仔猪均为自然发病病例，入选均需表现出典型临床体征，具体标准如下：仔猪腹泻症状：排粪次数增加、粪便溏稀、水样、带血或粘液，黄痢或白痢；伴随或不伴随症状：呕吐、食欲减退、精神沉郁、体温升高。只要仔猪出现腹泻症状即可入选本试验。腹泻仔猪临床症状评分标准如表1所示
表1、腹泻仔猪临床症状评分标准
Figure BDA0003625675690000051
Figure BDA0003625675690000061
注：腹泻、食欲、肛门洁净度为主要指标；精神、体温、被毛、脱水状态为次要指标。
1.3.2给药方案
将175头腹泻仔猪分为5组，每组35头，分别给予不同的药物，具体给药情况如表2所示。
表2、腹泻仔猪分组情况
Figure BDA0003625675690000062
Figure BDA0003625675690000071
1.3.3试验周期
所有药物组给药3天，观察至6日。在试验期间，每日同一时间(9:30左右)对腹泻仔猪进行详细临床检查并记录。
1.4观察指标
观察并记录各组腹泻仔猪用药前(第0天)和试验期间每天的临床症状，如精神状态、体温、被毛、脱水状态、食欲、腹泻、肛门洁净度、治愈情况等。
1.5药效评价
在试验期间，需对用药后腹泻仔猪进行药效评价，评价标准见表3。
表3、药效评价标准
Figure BDA0003625675690000072
注：若试验腹泻仔猪在给药0日或给药后1日内出现死亡，应从本试验中淘汰，但不判为治疗无效。
1.6试验结果
试验结果如表4～12所示。
表4、腹泻仔猪体重结果
Figure BDA0003625675690000073
Figure BDA0003625675690000081
注：同行上标有不同小写字母表示组间差异显著(P<0.05)，上标有相同小写字母表示组间差异不显著(P>0.05)。同列下标有不同小写字母表示组内差异显著(P<0.05)，下标有相同小写字母表示组内差异不显著(P>0.05)。下表同。
由表中结果可知，三天给药期间内，所有给药组对仔猪体重都未有明显影响，说明本发明白头翁皂苷精提物对仔猪没有明显毒副作用。
表5、腹泻仔猪精神状态评分结果
Figure BDA0003625675690000082
由表中结果可知，三天给药期间内，白头翁皂苷B4注射液组对仔猪精神状态具有改善作用，白头翁皂苷粗提取物注射液和白头翁皂苷B5注射液组对仔猪精神状态基本无改善作用。本发明白头翁皂苷精提物注射液组相对于其余给药组对仔猪精神状态具有明显的改善作用。
表6、腹泻仔猪体温评分结果
Figure BDA0003625675690000083
由表中结果可知，三天给药期间内，白头翁皂苷B4注射液组、白头翁皂苷B5注射液组、白头翁皂苷粗提物注射液组及恩诺沙星组队都能降低仔猪体温，本发明白头翁皂苷精提物注射液组相对于其余给药组对仔猪具有明显的降低腹泻仔猪体温的作用。
表7、腹泻仔猪被毛状态评分结果
Figure BDA0003625675690000084
Figure BDA0003625675690000091
由表中结果可知，三天给药期间内，白头翁皂苷B4注射液组、白头翁皂苷B5注射液组，及白头翁皂苷粗提物注射液组对腹泻仔猪被毛状态基本无改善作用，相比恩诺沙星组，本发明白头翁皂苷精提物注射液组相对于其余给药组仔猪被毛状态有明显改善作用。
表8、腹泻仔猪脱水评分结果
Figure BDA0003625675690000092
由表中结果可知，三天给药期间内，白头翁皂苷B4组、白头翁皂苷粗提物注射液组和恩诺沙星组对腹泻仔猪脱水情况无改善作用，白头翁皂苷B5组对仔猪脱水状态具有改善作用，本发明白头翁皂苷精提物注射液组相对于其余组仔猪脱水状态有明显改善作用。
表9、腹泻仔猪食欲评分结果
Figure BDA0003625675690000093
由表中结果可知，三天给药期间内，白头翁皂苷粗提物注射液组和白头翁皂苷B4组对腹泻仔猪食欲基本无改善作用，相比白头翁皂苷B5组和恩诺沙星组，本发明白头翁皂苷精提物注射液组对仔猪食欲有明显改善作用。
表10、腹泻仔猪肛门洁净度评分结果
Figure BDA0003625675690000094
Figure BDA0003625675690000101
由表中结果可知，三天给药期间内，白头翁皂苷B5注射液组和白头翁皂苷粗提取物注射液组对仔猪肛门洁净度基本无改善作用，相比白头翁皂苷B4组和恩诺沙星组，本发明白头翁皂苷精提物注射液组最终效果更优。
表11、腹泻仔猪腹泻评分结果
Figure BDA0003625675690000102
由表中结果可知，三天给药期间内，白头翁皂苷B5注射液组和白头翁皂苷粗提取物注射液组对仔猪腹泻基本无改善作用，相比白头翁皂苷B4组和恩诺沙星组，本发明白头翁皂苷精提物注射液组最终效果更优。
表12、各组腹泻仔猪临床疗效判定结果
Figure BDA0003625675690000103
综合以上结果可知，白头翁皂苷粗提物注射液组对仔猪腹泻部分指标具有治疗作用，但是效果并不明显，白头翁皂苷B4、白头翁皂苷B5组和恩诺沙星组对仔猪腹泻大部分指标具有改善作用，但是综合评分结果和疗效判定结果可知，白头翁皂苷提取物注射液相比单一成分的白头翁皂苷B4和白头翁皂苷B5以及恩诺沙星，对腹泻仔猪的治疗效果更佳，起效更快，有效率和治愈率更高，根据临床试验结果可以判断白头翁皂苷B4和白头翁皂苷B5具有协同作用。
综上，本发明提供了一种特定组成的白头翁皂苷精提物，可改善腹泻仔猪精神状态、降低腹泻仔猪体温、改善腹泻仔猪被毛状态、改善腹泻仔猪脱水、改善腹泻仔猪食欲和肛门洁净度，有效治疗仔猪腹泻，且效果显著优于未经纯化的白头翁皂苷粗提物以及白头翁皂苷B4、白头翁皂苷B5，在仔猪腹泻的治疗中具有很好的应用前景。

Claims (10)

1.白头翁皂苷精提物在治疗仔猪腹泻的药物中的用途；所述白头翁皂苷精提物中，白头翁皂苷B4含量不低于60％，白头翁皂苷B5含量不低于10％。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述白头翁皂苷精提物是按照如下步骤制备得到的：
(1)白头翁加乙醇回流提取2～4次，每次2～4小时；
(2)将各次提取的提取液混合浓缩除去乙醇得浓缩液；
(3)浓缩液上样经大孔树脂分离纯化，干燥即得。
3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，步骤(1)所述加乙醇回流为：加8～12倍65～75％浓度的乙醇回流。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，步骤(1)所述加乙醇回流为：加10倍70％浓度的乙醇回流。
5.如权利要求2所述的用途，其特征在于，步骤(1)所述提取为：提取3次，每次3小时。
6.如权利要求2所述的用途，其特征在于，步骤(3)所述大孔树脂为AB-8大孔树脂。
7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，步骤(3)所述分离纯化的方法是：依次用水洗脱2BV、20％乙醇洗脱3BV、70％乙醇洗脱2BV并收集70％乙醇洗脱液部分，浓缩除去乙醇。
8.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述浓缩液上样流速为1.5～2.5BV/h，优选为2BV/h。
9.如权利要求1～8任一项所述的用途，其特征在于，所述治疗仔猪腹泻的药物是改善腹泻仔猪精神状态、降低腹泻仔猪体温、改善腹泻仔猪被毛状态、改善腹泻仔猪脱水、改善腹泻仔猪食欲和/或改善腹泻仔猪肛门洁净度的药物。
10.如权利要求1～8任一项所述的用途，其特征在于，所述治疗仔猪腹泻的药物中，白头翁皂苷精提物的质量分数不低于5％。
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