CN114600915B - 一种中药材防霉储藏方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种中药材防霉储藏方法及应用，以易霉变的薏苡仁为模式药材，采用自然染菌和反式接种黄曲霉菌的方式，在模拟中药材常温库(温度≤30℃，相对湿度35％～75％)的储藏条件下，研究大果木姜子精油的防霉效果和对药材质量的影响，以证实该大果木姜子精油用于中药材防霉的可行性，并为开发高效、绿色的植物源防霉抑菌剂打下基础。

Description

一种中药材防霉储藏方法及应用

技术领域

本发明属于中药材防霉储藏技术领域，具体涉及一种中药材防霉储藏方法及应用。

背景技术

中药材是中医药事业传承和发展的物质基础，是国家的战略性资源。中药材来源广泛，基质成分复杂，储藏不当会引起霉变。霉变会降低药材质量，增加用药风险，还会造成巨大的资源浪费和经济损失。开发高效、安全、绿色的防霉技术是当前中药材产业亟待解决的问题，也是确保药材质量安全的重要手段。微生物侵染是引起药材霉变的主要原因，而以黄曲霉菌尤为严重。黄曲霉菌是可以适应低湿环境的仓储霉菌，具有很强侵染中药材的能力和产生毒素的特性，是中药材仓储过程中重点防控的对象。

中药材存放和储藏过程中的防霉始终是一个必需解决的关键问题。目前中药材的防霉主要以物理和化学法为主，物理防霉虽效果好，但能耗高，投入大，不利于大众消费；化学抑菌剂会对人和动物以及环境造成一定的危害，加之病原菌对化学抑菌剂耐药性不断增强，其防霉效果大打折扣。早期我国在中药材的产地加工、储藏等环节普遍采用硫磺熏蒸的方式。硫磺熏蒸虽在一定程度上解决了中药材霉变的问题，但在实际应用中存在大量使用工业硫磺、易霉变药材反复熏蒸等违规操作，造成药材中硫磺残留严重超标，药材质量下降。因此，寻找和研发安全绿色的防霉新技术替代现有化学防霉剂成为亟待解决的问题。

本发明以易霉变的薏苡仁为模式药材，采用自然染菌和反式接种黄曲霉菌的方式，在模拟中药材常温库(温度≤30℃，相对湿度35％～75％)的储藏条件下，研究大果木姜子精油的防霉效果和对药材质量的影响，以证实该大果木姜子精油用于中药材防霉的可行性，并为开发高效、绿色的植物源防霉抑菌剂打下基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种中药材防霉储藏方法。

本发明的另一目的是提供一种大果木姜子精油在植物防霉抑菌剂中的应用。

本发明的另一目的是提供一种大果木姜子精油在中药材防霉抑菌剂中的应用。

本发明的另一目的是提供一种大果木姜子精油在中国药典要求控制真菌毒素的中药材防霉抑菌剂中的应用。

本发明所述一种中药材防霉储藏方法是基于大果木姜子精油的中药材防霉储藏方法。

本发明所述中药材是指中国药典要求控制真菌毒素的中药材。

本发明所述中药材优选薏苡仁、柏子仁、大枣、水蛭、地龙、肉豆蔻、全蝎、决明子、远志、陈皮、使君子、胖大海、莲子、桃仁、蜈蚣、槟榔、酸枣仁、薏苡仁、僵蚕、麦芽、延胡索、土鳖虫、九香虫、蜂房、马钱子。

本发明所述大果木姜子精油的提取方法为：取大果木姜子药材适量，轻微粉碎，称取上述粉末500g，置于圆底烧瓶中，加入沸石5-10g，加水700mL，连接挥发油测定仪和回流冷凝管，使用电热套180℃加热提取8h后，静置1h，读取挥发油体积，于挥发油测定仪下端缓慢放掉水层，于水油交际处开始收集挥发油并以无水硫酸镁将其除水，置4℃冰箱冷藏备用。

本发明所述大果木姜子精油的浓度为0.01～0.20％V。

优选的，本发明所述大果木姜子精油的浓度为0.03～0.15％V。

进一步优选的，本发明所述大果木姜子精油的浓度为0.05～0.10％V。

本发明所述大果木姜子精油在植物防霉抑菌剂中的应用。

优选的，本发明所述大果木姜子精油在中药材防霉抑菌剂中的应用。

进一步优选的，本发明所述大果木姜子精油在中国药典要求控制真菌毒素的中药材防霉抑菌剂中的应用。

有益效果

1、大果木姜子精油作为天然植物提取物，具有较高的安全性，充分利用其易挥发的特性，以熏蒸的方式应用于中药材的防霉，具有操作快速简单、效率高、对中药材品质影响小等优点。当大果木姜子精油浓度大于0.05％V时，对霉菌生长的抑制率即可达到90％以上，对药材霉变的抑制率大于60％，可明显延长药材的保存期，用于中药材储藏过程中的防霉具有很好的开发前景。

2、本发明通过对大果木姜子精油对薏苡仁霉变的防控效果试验证实，当精油浓度为0.05％V(V为储藏环境体积)时，薏苡仁的霉变率为35％，相较于空白组降低了61个百分点是，对薏苡仁药材霉变的抑制率为63.54％；当精油浓度为0.1％V～0.2％V时，薏苡仁的霉变率为28％～10％，霉变抑制率70.83％～89.58％V(表1)。可见，大果木姜子精油对薏苡仁药材的霉变有明显的抑制作用，可用于中药材仓储过程中的防霉。

3、本发明通过对大果木姜子精油对薏苡仁霉菌生长的防控效果试验证实，大果木姜子精油对霉菌的生长具有明显的抑制作用，从抑菌率来看，各处理组相对于空白对照组均具有较好的抑制效果，抑菌率在66.23％～98.49％。在浓度0.01％V～0.05％V(V为仓储环境的体积)时，对霉菌的生长抑制作用呈现明显的剂量依赖性，抑菌率从66.23％增加到90.37％；当精油浓度大于或等于0.05％V时，抑菌率保持在90％以上(表2)。从培养的薏苡仁药材中分离的霉菌在菌落形态和孢子颜色上差别较大(图2)，表明培养的薏苡仁药材同时受多种霉菌的污染，这也说明大果木姜子精油对多种霉菌都有抑制作用。可见，大果木姜子精油抑菌谱广泛，效果明显，可用于中药材储藏过程的防霉。

4、本发明通过不同浓度大果木姜子精油对药材外观性状的影响的试验证实，从外观性状来看，未加精油熏蒸组(0mL)霉变严重，相较于空白组(未经过培养处理组)药材表面可见明显的菌丝分布，体视显微镜下观察，药材腹沟处布满黄色、灰黑色或灰白色的菌丝，背面黑色菌斑明显，药材色泽变深，表面光滑度降低。各添加精油熏蒸组(0.1～2mL)相较于未加精油熏蒸组药材霉变较轻，随着精油浓度的增加，药材受污染的程度逐渐降低。当浓度大于或等于0.05％V时，药材腹沟处未见菌丝生长，背面光滑，乳白色，无菌斑，与空白对照组(CK)外观性状一致(图2、图3)，符合2020年版《中国药典》的规定。可见，霉变会改变药材外观性状，降低药材品相，大果木姜子精油可通过抑制药材上霉菌孢子的萌发和生长来防止药材霉变，对维持储藏过程中药材的质量稳定有积极的作用。

5、本发明通过不同浓度精油对薏苡仁中甘油三油酸酯成分的影响试验证实，从各处理组含量测定结果来看，大果木姜子精油熏蒸对薏苡仁药材中甘油三油酸酯的降低有极显著(P﹤0.01)的抑制作用，且呈现明显的剂量依赖性(图4)。相较于未加精油熏蒸组(0.00％V)，0.01％V、0.03％V、0.05％V、0.1％V、0.15％V、0.20％V浓度组对甘油三油酸酯的减少抑制率分别为36.81％、25.83％、59.04％、99.10％、100％、97.80％。可见大果木姜子精油可通过抑制染菌药材中孢子的萌发和霉菌的生长来减少有效成分的消耗。

附图说明

图1储藏装置

图2自然储藏不同处理组霉菌计数菌落。

图3自然储藏不同处理组药材外观性状。

图4自然储藏不同处理组药材外观显微特征。

图5自然储藏不同浓度精油抑制甘油三油酸酯成分降低的效果(注：*号表示同0mL相比有显著性差异，#表示同CK相比有显著性差异，ns表示无显著性差异)。

图6反式培养不同处理组霉菌计数菌落。

图7反式培养不同浓度精油抑制黄曲霉毒素B1降低的效果。

图8反式培养不同处理组药材外观性状。

图9反式培养不同处理组药材外观显微特征。

图10反式培养不同浓度精油抑制甘油三油酸酯成分降低的效果(注：*号表示同0mL相比有显著性差异，#表示同CK相比有显著性差异，ns表示无显著性差异)。

具体实施方式

实施例1

大果木姜子精油的提取方法为：取大果木姜子药材适量，轻微粉碎，称取上述粉末500g，置于圆底烧瓶中，加入沸石5-10g，加水700mL，连接挥发油测定仪和回流冷凝管，使用电热套180℃加热提取8h后，静置1h，读取挥发油体积，于挥发油测定仪下端缓慢放掉水层，于水油交际处开始收集挥发油并以无水硫酸镁将其除水，置4℃冰箱冷藏备用。

防霉储藏方法：0.01％V或0.03％V或0.05％V或0.10％V或0.15％V或0.20％V大果木姜子精油浓度放置于中药材仓储中。

应用：大果木姜子精油在植物防霉抑菌剂中的应用。

大果木姜子精油优选在中药材防霉抑菌剂中的应用。

大果木姜子精油进一步优选在中国药典要求控制真菌毒素的中药材防霉抑菌剂中的应用。

中药材是指：薏苡仁、柏子仁、大枣、水蛭、地龙、肉豆蔻、全蝎、决明子、远志、陈皮、使君子、胖大海、莲子、桃仁、蜈蚣、槟榔、酸枣仁、薏苡仁、僵蚕、麦芽、延胡索、土鳖虫、九香虫、蜂房、马钱子。

为了进步验证本发明的有效性，本发明进行了一系列的实验，具体如下：

1.仪器和材料

Waters e2695型高效液相色谱仪，配2424蒸发光检测器(美国Waters公司)；安捷伦7890B气相色谱仪(安捷伦科技有限公司)；智能人工气候箱(宁波江南仪器厂)；TOMYKOGYOCO.LTD自动蒸汽灭菌锅(ES-315)。

石油醚(60～90℃)、无水乙醇、正己烷、14％三氟化硼甲醇溶液、甲醇、氯化钠、氢氧化钠均为分析纯；乙腈、二氯甲烷均为色谱纯。

薏苡仁药材购于贵州兴仁，为禾本科薏苡仁的干燥成熟种仁。

2.实验方法

2.1大果木姜子精油的提取

按2020年版《中国药典》(四部)通则2204“挥发油测定法甲法”提取大果木姜子挥发油。取大果木姜子药材适量，轻微粉碎，称取上述粉末500g，置于圆底烧瓶中，加入沸石，加水700mL，连接挥发油测定仪和回流冷凝管，使用电热套加热提取8h后，静置1h，读取挥发油体积，于挥发油测定仪下端缓慢放掉水层，于水油交际处开始收集挥发油并以无水硫酸镁将其除水，置4℃冰箱冷藏备用。

2.2自然染菌储藏试验

取薏苡仁药材2kg，去除霉变药材，置实验室环境下24h小时，让其自然染菌。用蒸馏水调节药材水分含量，控制在15％左右；分别称取60g药材平铺于自制装置的隔板上层，下部放置培养皿，用于盛装熏蒸剂植物精油，装置总体积为1L，如图1所示。培养皿内加入不同体积大果木姜子精油(0、0.1mL、0.3mL、0.5mL、1mL、1.5mL、2mL)，每个梯度设置3个重复，共21组实验。将装置密封，置于恒温恒湿箱中，在温度30℃，湿度75％条件下培养，定时观察霉菌生长情况，空白组有明显霉菌生长后取出，进行菌落计数和药材质量分析。

2.2.1大果木姜子精油防霉效果的评价

2.2.1.1大果木姜子精油对薏苡仁霉变的防控效果

经观察发现，霉菌的生长首先从薏苡仁腹面的纵沟侵染，腹面纵沟长菌与否，可以作为判断薏苡仁霉变的一个外观性状指标。本研究通过简单随机取样的方式，从培养的薏苡仁药材中，按四周、中间5点法取样，混合成一份10g的样本，在体视显微镜下观察薏苡仁腹面纵沟长菌情况，有霉菌生长判断为霉变，统计10g样本中霉变薏苡仁的质量，重复5次，计算霉变率(Y)。霉变抑制率按下式计算：

Y(％)＝W₁/W₂×100

W₁：样品中霉变药材的质量(g)

W₂：取样药材的质量(g)

2.2.1.2大果木姜子精油对薏苡仁霉菌生长的防控效果

参照GB4789.15-2016方法，对培养后的药材进行霉菌菌落总数计数，并按下式计算不同体积精油的抑菌率，用于评价大果木姜子精油抑制霉菌生长的效果。

抑菌率＝(阳性对照组活菌浓度-实验组活菌浓度)/阳性对照组活菌浓度*100％

活菌浓度单位：CFU/g

2.2.1.3大果木姜子精油对储藏薏苡仁品质影响的研究

2.2.1.3.1不同浓度精油对药材外观性状的影响

按2020年版《中国药典》一部薏苡仁规定项下的性状要求，对不同处理组的样品进行性状观察、描述，并拍照记录。

2.2.1.3.2不同浓度精油对薏苡仁甘油三酯成分的影响

按2020年版《中国药典》一部薏苡仁含量测定项下方法检测。

2.3“反式培养”接种黄曲霉菌的储藏试验

2.3.1黄曲霉菌的复苏培养

取黄曲霉菌冻干粉一支，在超净台中打开，吸取0.5mL无菌水打入冻干管，充分溶解菌粉后，吸取200μL加入PDA平板(马铃薯煮液1.0L，葡萄糖20.0g、KH2PO43.0g、MgSO47H2O1.5g、维生素B1微量、琼脂20.0g、PH6.0、121℃，20min灭菌)中，涂布均匀后置于28℃人工智能培养箱中培养7d。

2.3.2黄曲霉菌孢子悬浮液的制备

取已经培养好的A.flavus菌株，加入适量无菌水，用无菌接种环将培养基上孢子轻轻刮下，然后用灭菌脱脂棉过滤，并用无菌水冲洗滤渣2～3次，得孢子悬浮液。用无菌水稀释悬浮液，血球计数板(25×16)计数，浓度调制1.65*106CFU(colony forming unit)/mL，得孢子悬浮液。

2.3.3药材霉菌与培养

将薏苡仁药材置于微波中灭菌，灭菌条件为中火90s。之后的操作均在无菌条件下进行。灭菌后的药材，用灭菌水调节水分含量，最终药材水分含量为12.18％；称取薏苡仁药材60g，加入黄曲霉菌孢子悬浮液200μL，充分混匀后，平铺于自制装置的隔板上(图1)，在隔板下方的培养皿分别加入不同体积的大果木姜子精油(0mL、0.1mL、0.3mL、0.5mL、1mL、1.5mL)，每个梯度设置3个重复，共18组实验。将装置密封，置于恒温恒湿箱中，在温度30℃，湿度75％条件下培养，定时观察霉菌生长情况，空白组有明显霉菌生长后取出，进行菌落计数和药材质量分析。

2.3.4大果木姜子精油抑制黄曲霉菌效果的评价

2.3.4.1大果木姜子精油对黄曲霉菌侵染薏苡仁的防控效果

经观察发现，黄曲霉菌的生长首先从薏苡仁腹面的纵沟侵染，腹面纵沟长菌与否，可以作为判断薏苡仁霉变的一个外观性状指标。本研究通过简单随机取样的方式，从培养的薏苡仁药材中，按四周、中间5点法取样，混合成一份10g的样本，在体视显微镜下观察薏苡仁腹面纵沟长菌情况，有黄曲霉菌生长判断为霉变，统计10g样本中霉变薏苡仁的质量，重复5次，计算霉变率(Y)。霉变抑制率按下式计算：

Y(％)＝W₁/W₂×100

W₁：样品中霉变药材的质量(g)

W₂：取样药材的质量(g)

2.3.4.2大果木姜子精油对薏苡仁黄曲霉菌生长的防控效果

参照GB4789.15-2016方法，对培养后的药材进行黄曲霉菌菌落总数计数，并按下式计算不同体积精油的抑菌率，用于评价大果木姜子精油抑制霉菌生长的效果。

抑菌率＝(阳性对照组活菌浓度-实验组活菌浓度)/阳性对照组活菌浓度*100％活菌浓度单位：CFU/g

2.2.1.3大果木姜子精油对薏苡仁黄曲霉毒素B1产生的防控效果

采用2020版中国药典四部2351项规定真菌毒素测定法测定黄曲霉毒素B1的含量检测、分析不同处理组黄曲霉毒素含量差异，计算产毒抑制率(P)，以评价大果木姜子精油抑制黄曲霉菌产毒的效果。按下式计算产毒抑制率(％)：

P(％)＝(a-b)/b×100

P:产毒抑制率(％)

a：空白组产毒量(ng)

b：处理组产毒量(ng)

2.2.1.4大果木姜子精油对储藏薏苡仁品质影响的研究

2.2.1.4.1不同浓度精油对药材外观性状的影响

按2020年版《中国药典》一部薏苡仁规定项下的性状要求，对不同处理组的样品进行性状观察、描述，并拍照记录。

2.2.1.4.2不同浓度精油对薏苡仁甘油三酯成分的影响

按2020年版《中国药典》一部薏苡仁含量测定项下方法检测。

3.结果与分析

3.1自然染菌储藏试验结果

3.1.1大果木姜子精油对薏苡仁霉变的防控效果

大果木姜子精油对霉菌的生长具有明显的抑制作用，且抑制效果与剂量呈明显的依赖关系。从霉变率来看，未加精油熏蒸的CK组，霉变严重，霉变率为96％；各处理组对薏苡仁霉变都有一定的抑制作用，与空白组相比均具有显著性差异(p<0.05)；当精油浓度为0.05％V(V为储藏环境体积)时，薏苡仁的霉变率为35％，相较于空白组降低了61个百分点是，对薏苡仁药材霉变的抑制率为63.54％；当精油浓度为0.1％V～0.2％V时，薏苡仁的霉变率为28％～10％，霉变抑制率70.83％～89.58％V(表1)。可见，大果木姜子精油对薏苡仁药材的霉变有明显的抑制作用，可用于中药材仓储过程中的防霉。

表1不同浓度大果木姜子精油的防霉效果(n＝2)

注：“V”为仓储环境体积

3.1.2大果木姜子精油对薏苡仁霉菌生长的防控效果

大果木姜子精油对霉菌的生长具有明显的抑制作用，从抑菌率来看，各处理组相对于空白对照组均具有较好的抑制效果，抑菌率在66.23％～98.49％。在浓度0.01V％～0.05V％(V为仓储环境的体积)时，对霉菌的生长抑制作用呈现明显的剂量依赖性，抑菌率从66.23％增加到90.37％；当精油浓度大于或等于0.05V％时，抑菌率保持在90％以上(表2)。从培养的薏苡仁药材中分离的霉菌在菌落形态和孢子颜色上差别较大(图2)，表明培养的薏苡仁药材同时受多种霉菌的污染，这也说明大果木姜子精油对多种霉菌都有抑制作用。可见，大果木姜子精油抑菌谱广泛，效果明显，可用于中药材储藏过程的防霉。

表2不同浓度大果木姜子精油的抑菌效果(n＝2)

注：“V”为仓储环境体积

3.1.3不同浓度大果木姜子精油对药材外观性状的影响

从外观性状来看，未加精油熏蒸组(0mL)霉变严重，相较于空白组(未经过培养处理组)药材表面可见明显的菌丝分布，体视显微镜下观察，药材腹沟处布满黄色、灰黑色或灰白色的菌丝，背面黑色菌斑明显，药材色泽变深，表面光滑度降低。各添加精油熏蒸组(0.1～2mL)相较于未加精油熏蒸组药材霉变较轻，随着精油浓度的增加，药材受污染的程度逐渐降低。当浓度大于或等于0.05％V时，药材腹沟处未见菌丝生长，背面光滑，乳白色，无菌斑，与空白对照组(CK)外观性状一致(图3、图4)，符合2020年版《中国药典》的规定。可见，霉变会改变药材外观性状，降低药材品相，大果木姜子精油可通过抑制药材上霉菌孢子的萌发和生长来防止药材霉变，对维持储藏过程中药材的质量稳定有积极的作用。

3.1.4不同浓度精油对薏苡仁中甘油三油酸酯成分的影响

霉菌侵染会降低薏苡仁药材中甘油三油酸酯成分的含量。薏苡仁药材在培养前甘油三油酸酯含量为14.05mg/g，经过10天培养后，0.00％V、0.01％V、0.03％V、0.05％V、0.1％V、0.15％V、0.20％V浓度组含量分别为6.21mg/g、9.19mg/g、8.31mg/g、10.88mg/g、13.98mg/g、14.16mg/g、13.88mg/g(表)，除0.1％V、0.15％V组外，其余处理组与空白对照组均有显著性差异(p﹤0.05)；相较于空白组，各处理组的减少率分别为55.80％、34.80％、40.85％、22.56％、0.50％、0、1.21％，可见霉菌侵染和高温高湿条件下培养会降低薏苡仁药材中甘油三油酸酯成分的含量。

从各处理组含量测定结果来看，大果木姜子精油熏蒸对薏苡仁药材中甘油三油酸酯的降低有极显著(P﹤0.01)的抑制作用，且呈现明显的剂量依赖性(图5)。相较于未加精油熏蒸组(0.00％V)，0.01％V、0.03％V、0.05％V、0.1％V、0.15％V、0.20％V浓度组对甘油三油酸酯的减少抑制率分别为36.81％、25.83％、59.04％、99.10％、100％、97.80％。可见大果木姜子精油可通过抑制染菌药材中孢子的萌发和霉菌的生长来减少有效成分的消耗。

表3不同浓度精油抑制甘油三油酸酯成分降低的效果(n＝2)

3.2“反式培养”接种黄曲霉菌的储藏试验结果

3.2.1对药材霉变的防控效果

大果木姜子精油对黄曲霉菌的生长具有明显的抑制作用，且抑制效果与剂量呈明显的依赖关系。从霉变率来看，未加精油熏蒸的0mL组，霉变严重，霉变率为61％；各处理组对薏苡仁霉变都有一定的抑制作用，与空白组相比均具有显著性差异(p<0.05)；当精油浓度为0.05％V(V为储藏环境体积)时，薏苡仁的霉变率为22.4％，对薏苡仁药材霉变的抑制率为63.3％；当精油浓度为0.1％V～0.15％V时，薏苡仁的霉变率为5.5％～8.6％，霉变抑制率85.9％～91.0V(表1)。可见，大果木姜子精油对薏苡仁药材的霉变有明显的抑制作用，可用于中药材仓储过程中的防霉。

表4不同浓度大果木姜子精油的防霉效果(n＝2)

3.2.2对药材霉菌生长的防控效果

大果木姜子精油对黄曲霉菌的生长具有明显的抑制作用，从抑菌率来看，各处理组相对于0mL均具有较好的抑制效果，抑菌率在64.09％～98.33％。在浓度0.01V％～0.05V％(V为仓储环境的体积)时，对黄曲霉菌的生长抑制作用呈现明显的剂量依赖性，抑菌率从64.09％增加到79.64％；当精油浓度大于或等于0.05V％时，抑菌率保持在90％以上(表5)。

表5不同浓度大果木姜子精油的抑菌效果(n＝2)

3.2.3对黄曲霉毒素B1产生的抑制效果

如表6所示，未经过处理组(CK)仅加水储藏时测定的AFB1的含量为1.4929ug/kg，未超过中国药典的规定，当大果木姜子油的用量为(0-0.1mL)时，AFB1的含量为15.9479-18.3572ug/kg，超过限量标准3到4倍，当大果木姜子油的用量超过0.3mL时，AFB1的含量低于CK，产毒抑制率高达90％以上。综上所述可知，大果木姜子油在储藏过程中，不仅可以抑制黄曲霉菌的生长，同时还可以抑制黄曲霉毒素的产生。

表6不同浓度大果木姜子精油处理组黄曲霉毒素B1含量

3.2.4不同浓度大果木姜子精油对药材外观性状的影响

从外观性状来看，未加精油熏蒸组(0mL)霉变严重，相较于空白组(未经过培养处理组)药材表面可见明显的菌丝分布，体视显微镜下观察，药材腹沟处布满黄色的菌丝，背面菌斑明显，药材色泽变深，表面光滑度降低。各添加精油熏蒸组(0.1～1.5mL)相较于未加精油熏蒸组药材霉变较轻，随着精油浓度的增加，药材受污染的程度逐渐降低。当浓度大于或等于0.05％V时，药材腹沟处未见菌丝生长，背面光滑，乳白色，无菌斑，与空白对照组(CK)外观性状一致(图8、图9)，符合2020年版《中国药典》的规定。可见，黄曲霉菌侵染会改变药材外观性状，降低药材品相，大果木姜子精油可通过抑制药材上黄曲霉菌孢子的萌发和生长来防止药材霉变，对维持储藏过程中药材的质量稳定有积极的作用。

3.2.5对甘油三油酸酯成分的影响

黄曲霉菌侵染会降低薏苡仁药材中甘油三油酸酯成分的含量。薏苡仁药材在培养前甘油三油酸酯含量为16.59mg/g，经过10天培养后，0.00％V、0.01％V、0.03％V、0.05％V、0.1％V、0.15％V浓度组含量分别为12.56mg/g、13.35mg/g、15.06mg/g、15.27mg/g、15.26mg/g、15.63mg/g(表7)，除0.05％V、0.1％V、0.15％V组外，其余处理组与空白对照组均有显著性差异(p﹤0.05)；相较于空白组，各处理组的减少率分别为24.26％、19.51％、9.23％、7.97％、8.04％、5.79％，可见黄曲霉菌侵染和高温高湿条件下培养会降低薏苡仁药材中甘油三油酸酯成分的含量。

从各处理组含量测定结果来看，大果木姜子精油熏蒸对薏苡仁药材中甘油三油酸酯的降低有极显著(P﹤0.01)的抑制作用，且呈现明显的剂量依赖性(图10)。相较于未加精油熏蒸组(0.00％V)，0.01％V、0.03％V、0.05％V、0.1％V、0.15％V、浓度组对甘油三油酸酯的减少抑制率分别为5.91％、19.85％、17.70％、17.65％、19.61％。可见大果木姜子精油可通过抑制染菌药材中孢子的萌发和霉菌的生长来减少有效成分的消耗。

表7不同浓度精油抑制甘油三油酸酯成分降低的效果(n＝2)

4.结论

大果木姜子精油作为天然植物提取物，具有较高的安全性，充分利用其易挥发的特性，以熏蒸的方式应用于中药材的防霉，具有操作快速简单、效率高、对中药材品质影响小等优点。当精油浓度大于0.05V％时，对霉菌生长的抑制率即可达到90％以上，对药材霉变的抑制率大于60％，可明显延长药材的保存期，用于中药材储藏过程中的防霉具有很好的开发前景。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (2)

1.一种中药材防霉储藏方法，其特征在于，所述方法是基于大果木姜子精油的薏苡仁防霉储藏方法，大果木姜子精油的浓度为0.05～0.10％V，所述V为仓储环境的体积；

大果木姜子精油的提取方法为：取大果木姜子药材适量，轻微粉碎，称取上述粉末500g，置于圆底烧瓶中，加入沸石5-10g，加水700mL，连接挥发油测定仪和回流冷凝管，使用电热套180℃加热提取8h后，静置1h，读取挥发油体积，于挥发油测定仪下端缓慢放掉水层，于水油交际处开始收集挥发油并以无水硫酸镁将其除水，置4℃冰箱冷藏备用。

2.如权利要求1所述的中药材防霉储藏方法的应用，其特征在于，所述大果木姜子精油在薏苡仁防霉抑菌剂中的应用。