CN105456132A - 一种植物提取物的组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种植物提取物的组合物及其应用，所述植物提取物的组合物由小叶桉叶提取物、桃树叶提取物、芳枸叶提取物、樟树叶提取物和坤希草叶提取物组成，所述植物提取物的组合物中各提取物的体积份数相同，所述小叶桉叶提取物、桃树叶提取物、樟树叶提取物和坤希草提取物的密度为1.015～1.040g/ml，所述芳枸叶提取物的密度为1.035～1.055g/ml；本发明提供的植物提取物的组合物含有多种植物成分，具有抑菌防腐、保湿及消炎等多重功效，本发明提供的植物提取物的组合物成分来源天然，安全温和，具有较广阔的市场前景。

Description

一种植物提取物的组合物及其应用

技术领域

本发明涉及化妆品领域，具体涉及一种植物提取物的组合物及其应用。

背景技术

化妆品在存储和使用过程中，极易受微生物的污染而导致腐败。由于微生物的作用可引起化妆品变质、腐败，感官上的色泽和气味发生变化，从而失去商品价值；更重要的是致病微生物的污染会导致人体健康的危害。防止化妆品由于微生物污染而产生对人体皮肤的危害及产品的变质、发霉的最有效办法就是添加防腐剂，防腐剂是能够抑制微生物的生长、繁殖的一类化学药剂。

传统化妆品中常用的防腐剂为尼泊金酯等。尼泊金酯亦称对羟基苯甲酸酯，常用的有尼泊金甲酯、乙酯、丙酯三种，其中使用的最多的是甲酯。尼泊金甲酯防腐剂尽管低毒，但使用量过大便会影响人体健康。因此，国家对化妆品防腐剂的添加量有着严格的控制，我国《化妆品卫生标准》中对尼泊金酯最大允许使用浓度规定如下：混合酯10％，单一酯0.4％。

随着科研水平的进步，业界对防腐剂的安全性研究也越来越深入，许多传统被使用的防腐剂，都被证实具有一定的负面作用。所以，安全的“低添加”甚至“无添加”防腐剂的产品概念，深受消费者欢迎。因此，研究一种低毒的天然防腐剂成为亟需解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足 ，提供一种植物提取物的组合物，本发明提供的植物提取物的组合物含有多种植物成分，具有抑菌防腐、保湿及消炎等多重功效，本发明提供的植物提取物的组合物成分来源天然，安全温和，具有较广阔的市场前景。

本发明的另一目的在于提供上述植物提取物的组合物在抑制金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、霉菌或酵母菌中的应用。

本发明的另一目的在于提供一种含有上述植物提取物组合物的个人护理品。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种植物提取物的组合物，所述植物提取物的组合物由小叶桉叶提取物、桃树叶提取物、芳枸叶提取物、樟树叶提取物和坤希草叶提取物组成。

小叶桉(Eucalyptus tereticonis Smith) 是桃金娘科按属植物,原产澳大利亚、福建、广东、广西均有栽培。小叶桉油具有驱虫、杀虫等作用。广泛用于医药、香精和选矿剂。而小叶桉的醇/水提取物，应用在化妆品领域较少，其具有资源天然丰富、工艺简单、性价比高的特点。

桃（学名：Amygdaluspersica L.）：蔷薇科、桃属植物。落叶小乔木；叶为窄椭圆形至披针形，长15厘米，宽4厘米，先端成长而细的尖端，边缘有细齿，暗绿色有光泽，叶基具有蜜腺；树皮暗灰色，随年龄增长出现裂缝；花单生，从淡至深粉红或红色，有时为白色，有短柄，直径4厘米，早春开花；近球形核果，表面有毛茸，肉质可食，为橙黄色泛红色，直径7.5厘米，有带深麻点和沟纹的核，内含白色种子。是一种果实作为水果的落叶小乔木，花可以观赏，果实多汁，可以生食或制桃脯、罐头等，核仁也可以食用。果肉有白色和黄色的，桃有多种品种，一般果皮有毛，“油桃”的果皮光滑；“蟠桃”果实是扁盘状；“碧桃”是观赏花用桃树，有多种形式的花瓣。原产中国，各省区广泛栽培。世界各地均有栽植。而桃树叶的提取物主要的应用在农业领域，本发明主要是研究桃树叶的在化妆品中的应用，其具有取材来源丰富、环保再生的特点。

芳枸叶（学名：Agonisfragrans）是原产澳大利亚西南部的一种灌木，其可长到2.5米左右，它有垂直的花枝，枝上长有坚硬的叶子，小的中间为淡粉色花蕊的五瓣白色花朵。通常称它为“粗糙茶树”。长期以来，该植物用于切花工业，以获得新鲜或干燥花朵。本发明主要是研究芳枸叶的提取物，在化妆品中的应用。

樟树，别名：香樟、樟木、瑶人柴、栳樟、臭樟、乌樟；拉丁文名：Cinnamomumcamphora (L.)Presl.樟目、樟科、樟属常绿大乔木，高可达30米，直径可达3米，树冠广卵形；树冠广展，枝叶茂密，气势雄伟，是优良的绿化树、行道树及庭荫树。产至中国南方及西南各省区。越南、朝鲜、日本也有分布，其他各国常有引种栽培。植物全体均有樟脑香气，可提制樟脑和提取樟油。木材坚硬美观，宜制家具、箱子。香樟树对氯气、二氧化硫、臭氧及氟气等有害气体具有抗性，能驱蚊蝇，能耐短期水淹，是生产樟脑的主要原料。材质上乘，是制造家具的好材料。本发明主要是研究樟树叶的提取物，在化妆品中的应用。

坤希草（学名:Kunzeaambigua），原产澳大利亚，其常被称为“白云”或者“白色坤希草”，是一种高的灌木，高至5米。它开有白色繁花，长有柔软、狭窄、深绿色芳香的叶子，叶子表面有些绒毛。该植物的油性提取物可治疗紧张焦虑，缓解压力，可暂时缓解由淋巴结引起的疼痛，以及肌肉、筋健、关节疼痛，也可以暂时减轻流感症状。本发明主要是研究坤希草的叶子提取物在化妆品中的应用。

本发明将小叶桉叶提取物、桃树叶提取物、芳枸叶提取物、樟树叶提取物、坤希草叶提取物这五种天然提取物复配得到了一种植物提取物的组合物，该植物提取物的组合物含有多种植物成分，这些活性成分之间彼此相互作用，具有保湿、消炎及协同防腐等多重功效；并且本发明提供的植物抑菌组合物蕴含天然植物成分，当将其作为防腐剂添加到个人护理品如护肤品或化妆品中时具有安全温和、毒副作用小，临床疗效好的特点。

优选地，所述植物提取物的组合物中各提取物的体积份数相同，所述小叶桉叶提取物、桃树叶提取物、樟树叶提取物和坤希草提取物的密度为1.015～1.040g/ml，所述芳枸叶提取物的密度为1.035～1.055g/ml。

本发明中的各植物提取物可采用本领域常规的提取方法，优选地，所述小叶桉叶提取物、桃树叶提取物、芳枸叶提取物、樟树叶提取物或坤希草叶提取物采用微波萃取。

微波萃取的机理可从两方面考虑，一方面微波辐射过程是高频电磁波穿透萃取介质，到达物料内部微管束和腺胞系统。由于吸收微波能，细胞内部温度迅速上升，使其细胞内部压力超过细胞壁膨胀承受能力，细胞破裂。细胞内有效成分自由流出，在较低的温度条件下萃取介质捕获并溶解。通过进一步过滤和分离，便获得萃取物料。另一方面，微波所产生的电磁场加速被萃取部分成分向萃取溶剂界面扩散速率，用含水的萃取溶剂时，在微波场下，水分子高速转动称为激发态，这是一种高能量不稳定状态，或者水分子汽化，加强萃取组份的动力；或者水分子本身释放能量回到基态，所释放的能量传递给其他物质分子，加速其热运动，缩短萃取组分的分子由物料内部扩散到萃取溶剂界面的时间，从而使萃取速率提高数倍，同时还降低了萃取温度，最大限度保证萃取的质量。

优选地，所述微波频率为300~300000MHz；进一步优选地，在小叶桉叶提取物微波萃取的过程中，微波频率为400~250000MHz；在桃树叶提取物微波萃取的过程中，微波频率为300~300000MHz；在芳枸叶提取物微波萃取的过程中，微波频率为600~300000MHz；在樟树叶提取物微波萃取的过程中，微波频率为600~300000MHz；在坤希草叶提取物微波萃取的过程中，微波频率为600~300000MHz；更为优选地，所述小叶桉叶提取物、桃树叶提取物、芳枸叶提取物、樟树叶提取物、坤希草叶提取物的微波频率均为2450MHz。

优选地，所述小叶桉叶提取物、桃树叶提取物、芳枸叶提取物、樟树叶提取物或坤希草叶提取物所用的萃取剂为水和/或醇；进一步优选地，所述小叶桉叶提取物、所述桃树叶提取物、所述坤希草叶提取物所用的萃取剂均为丁二醇水溶液，所述芳枸叶提取物和所述樟树叶提取物所用的萃取剂为丙二醇水溶液。

上述植物提取物的组合物在抑制金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、霉菌或酵母菌中的应用。

优选地，所述霉菌为黑曲霉；所述酵母菌为白假丝酵母。

一种个人护理品，所述个人护理品中含有质量分数为2～4%的上述植物提取物的组合物。

优选地，所述个人护理品为膏霜、乳液、水剂、凝胶、洗剂或香皂。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明将多种植物活性成分混配，得到一种植物提取物的组合物；本发明提供的植物提取物的组合物具有协同抑菌的功效，当将本发明提供的植物提取物的组合物应用在个人护理品例如化妆品中时具有协同防腐，可以免去使用常规的化学防腐剂或降低化学防腐剂的用量；同时本发明提供的植物提取物的组合物具有保湿与消炎的作用；本发明提供的植物提取物的组合物温和安全，来源天然、资源丰富，具有广阔的应用前景。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的描述。这些实施例仅是对本发明的典型描述，但本发明不限于此。下述实施例中所用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法，所使用的原料，试剂等，如无特殊说明，均为可从常规市场等商业途径得到的原料和试剂。

试验例 1 小叶桉叶提取物、桃树叶提取物、芳枸叶提取物、樟树叶提取物和坤希草叶提取物的提取

（1）小叶桉叶提取物的提取

根据本发明的具体实施方案，本发明中所述小叶桉叶提取物为植物小叶桉树的叶子为原料经丁二醇萃取得到棕黄色提取液；

按照每4克干燥的小叶桉树叶经上述工艺制得的提取液最终调整到10ml 提取液，即折算成小叶桉树叶药材计，每1mL 提取液含0.4 克小叶桉原料，记为0.4g/mL；所述提取液的密度为1.0296g/ml；

按照每3克干燥的小叶桉树叶经上述工艺制得的提取液最终调整到10ml 提取液，即折算成小叶桉树叶药材计，每1mL 提取液含0.3 克小叶桉原料，记为0.3g/mL；所述提取液的密度为1.0234g/ml；

按照每2克干燥的小叶桉树叶经上述工艺制得的提取液最终调整到10ml 提取液，即折算成小叶桉树叶药材计，每1mL 提取液含0.2 克小叶桉原料，记为0.2g/mL；所述提取液的密度为1.0192g/ml；

（2）桃树叶提取物的提取

根据本发明的具体实施方案，本发明中所述桃树叶提取物以植物桃树的叶子为原料经丁二醇萃取得到棕黄色提取液；

按照每3克干燥的桃树叶经上述工艺制得的提取液最终调整到10ml 提取液，即折算成桃树叶药材计，每1mL 提取液含0.3 克桃树原料，记为0.3g/mL；所述提取液的密度为1.0281g/ml；

按照每2克干燥的桃树叶经上述工艺制得的提取液最终调整到10ml 提取液，即折算成桃树叶药材计，每1mL 提取液含0.2 克桃树原料，记为0.2g/mL；所述提取液的密度为1.0182g/ml；

按照每1克干燥的桃树叶经上述工艺制得的提取液最终调整到10ml 提取液，即折算成桃树叶药材计，每1mL 提取液含0.1 克桃树原料，记为0.1g/mL；所述提取液的密度为1.0169g/ml；

（3）芳枸叶提取物的提取

根据本发明的具体实施方案，本发明中所述芳枸提取物以植物芳枸叶的叶子为原料经丙二醇萃取得到棕黄色提取液；

按照每4克干燥的芳枸叶叶子经上述工艺制得的提取液最终调整到10ml 提取液，即折算成干燥芳枸叶药材计，每1mL 提取液含0.4 克芳枸叶原料，记为0.4g/mL；所述提取液的密度为1.0519g/ml；

按照每3克干燥的芳枸叶叶子经上述工艺制得的提取液最终调整到10ml 提取液，即折算成干燥芳枸叶药材计，每1mL 提取液含0.3 克芳枸叶原料，记为0.3g/mL；所述提取液的密度为1.0468g/ml；

按照每2克干燥的芳枸叶叶子经上述工艺制得的提取液最终调整到10ml 提取液，即折算成干燥芳枸叶药材计，每1mL 提取液含0.2 克芳枸叶原料，记为0.2g/mL ；所述提取液的密度为1.0397g/ml

（4）樟树叶提取物的提取

根据本发明的具体实施方案，本发明中所述樟树叶提取物以植物樟树的叶子为原料经丁二醇萃取得到黄色至琥珀色提取液；

按照每3克干燥的樟树叶经上述工艺制得的提取液最终调整到10ml 提取液，即折算成干燥樟树叶药材计，每1mL 提取液含0.3 克樟树原料，记为0.3g/mL；所述提取液的密度为1.0321g/ml；

按照每2克干燥的樟树叶经上述工艺制得的提取液最终调整到10ml 提取液，即折算成干燥樟树叶药材计，每1mL 提取液含0.2 克樟树原料，记为0.2g/mL；所述提取液的密度为1.0252g/ml；

按照每1克干燥的樟树叶经上述工艺制得的提取液最终调整到10ml 提取液，即折算成干燥樟树叶药材计，每1mL 提取液含0.1 克樟树原料，记为0.1g/mL；所述提取液的密度为1.0204g/ml；

（5）坤希草叶提取物的提取

根据本发明的具体实施方案，本发明中所述坤希草叶提取物以植物坤希草的叶子为原料经丙二醇萃取得到棕黄色提取液；

按照每1.5克干燥的坤希草叶经上述工艺制得的提取液最终调整到10ml 提取液，即折算成干燥坤希草叶子药材计，每1mL 提取液含0.15 克坤希草叶原料，记为0.15g/mL；所述提取液的密度为1.0235g/ml；

按照每1克干燥的坤希草叶子经上述工艺制得的提取液最终调整到10ml 提取液，即折算成干燥坤希草叶子药材计，每1mL 提取液含0.1 克坤希草叶子原料，记为0.1g/mL；所述提取液的密度为1.0214g/ml；

按照每0.5克干燥的坤希草叶子经上述工艺制得的提取液最终调整到10ml 提取液，即折算成干燥坤希草叶子药材计，每1mL 提取液含0.05 克坤希草叶子原料，记为0.05g/mL；所述提取液的密度为1.0162g/ml。

试验例 2 植物提取物组合物的抑菌防腐实验

（1）试验材料

实施例1 制备得到的小叶桉叶提取液、桃树叶提取液、芳枸叶提取液、樟树叶提取液和坤希草叶提取液。

（2）受试菌种

细菌：金黄色葡萄球菌:(Staphylococcus aureus)ATCC 6538

大肠埃希氏菌:(Escherichia coli)ATCC 8739

铜绿假单胞菌:(Pseudomonas.aeruginosa)ATCC 9027

霉菌：黑曲霉(Aspergillusniger)ATCC 16404

酵母菌：白假丝酵母(Candida albicans)ATCC 10231

注：上述菌株均由中科院典型培养物保藏委员会微生物菌种库提供。

（3）供试培养基

霉菌培养基：察氏培养基，115℃高压灭菌30min 后制成斜面备用。

细菌培养基：卵磷脂吐温80—营养琼脂培养基，121℃高压灭菌20min 后制成斜面备用。

（4）菌悬液的制备

实验前将各个菌株分别接种到相应的培养基斜面，细菌( 金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌，铜绿假单胞菌) 均于36±1℃恒温培养箱中培养36～48 小时后分别挑取适量菌落于无菌生理盐水中混匀，制成一定浓度的混合细菌悬液。混合细菌悬液总浓度约为1.0×10⁸cfu/ml，置于4℃贮存备用。霉菌于27±1℃恒温培养箱中培养120 小时，酵母菌27±1℃恒温培养箱中培养24 小时，挑取适量霉菌和酵母菌菌落于无菌生理盐水中混合均匀，制成一定浓度的混合菌悬液。混合霉菌和酵母菌孢子悬液总浓度约为1.0×10⁷cfu/ml，置于4℃贮存备用。

（5）复合提取液的制备

确定各提取液的浓度，将实施例1制备得到的提取液按下表1的正交方案分别进行配制即得复合提取液，灭菌，备用。

表1 复合提取液抑菌作用考察因素及水平

。

表1 中的“浓度g/ml”是将提取液折算成原料药材计，即，将实施例1 中每0.4 克药材原料制成1ml 桉树提取液计为0.4g/ml ；将实施例1 中每0.3 克药材原料制成的1ml 提取液计为0.3g/ml，将实施例1 中每0.2 克药材原料制成的1ml 提取液计为0.2g/ml ；可依据类似的方法获得各浓度的其他提取液。复合提取液是将各浓度的小叶桉叶提取液、桃树叶提取液、芳枸提取液、樟树叶提取液、坤希草叶提取液直接按照1:1:1:1:1的体积比混合均匀即可，混合后并未进行浓缩处理；例如，A 小叶桉叶提取液、B 桃花提取液、C 芳枸叶提取液、D樟树叶提取液、E坤希草叶提取液分别按照水平1、2、3的浓度配制的复合提取液，即是将浓度0.4g/ml 的桉树提取液、0.3g/ml 的桃树叶提取液、0.4g/ml的芳枸叶提取液、0.3g/ml的樟树叶提取液、0.15g/ml的坤希草叶提取液按照1:1:1:1:1的体积比直接混合即可，即，混合液中桉树叶、桃树叶、芳枸叶、樟树叶、坤希草叶成分浓度均被稀释为原各自单独提取液浓度的1/5。

（6）抑菌试验

①单一提取液的抑菌试验

采用滤纸片扩散法，无菌条件下进行，将滤纸用打孔器打成直径6mm 的圆形滤纸片，置于洁净干净的小烧杯，121℃干热灭菌20min 后，分别放入已灭菌的桉树、桃树、茴香、樟树、苦楝提取液中充分浸泡，每只试管放入8 片备用。将已配制好的固体培养基融化，分别倒入培养皿中，121℃灭菌20min，待冷却凝固后，吸取0.1ml 菌悬液于平板上涂布均匀。用无菌镊子分别夹取已在提取物原液中浸泡过的直径为6mm 圆形滤纸片，贴在含菌平板上，每个平板内等距离贴4 片，以无菌水浸泡的滤纸片作为空白对照，将各培养皿置于37℃恒温培

养箱中平板倒置培养24h，测定抑菌圈直径的大小，设3 个重复，取其平均值。

②复合提取液的抑菌试验

采用滤纸片扩散法，无菌条件下进行，将滤纸用打孔器打成直径6mm 的圆形滤纸片，置于洁净干净的小烧杯，121℃干热灭菌20min 后，分别放入已灭菌的按照正交设计法确定的各组合浓度的复配提取液中充分浸泡，每只试管放入8 片备用。将已配制好的固体培养基融化，分别倒入培养皿中，121℃灭菌20min，待冷却凝固后，吸取0.1ml 菌悬液于平板上涂布均匀。用无菌镊子分别夹取已在复合提取液中浸泡过的直径为6mm 圆形滤纸片，贴在含菌平板上，每个平板内等距离贴4 片，以无菌水浸泡的滤纸片作为空白对照，将各培养皿置于37℃恒温培养箱中平板倒置培养24h，测定抑菌圈直径的大小，设3 个重复，取其

平均值。

③复合提取液最佳浓度的确定

下表2 记录了复合提取液的抑菌效果正交实验结果( 此部分抑菌实验参照卫生部制定的《消毒技术规范》(2002 年版) 中“2.1.8 抗( 抑) 菌试验”进行)。

表2 复合提取液的抑菌效果正交实验结果

通过正交实验的极差R，极差R的大小与因素水平对实验影响成正相关。即极差R最大的那一列，就是因素的水平对实验结果影响最大的因素。例如：A的极差R为360.9，其值在极差值中最大，故A的浓度对该实验的影响程度也最大。由表2 可知，小叶桉叶提取液、坤希草叶提取液浓度对细菌总数的影响最大，其次为桃树叶提取液、芳枸叶提取液、樟树叶提取液。本发明中最终确定的最佳的复合提取液抑菌效果的浓度配比为桉树叶提取液0.4g/ml、桃树叶提取液0.2g/ml、芳枸叶提取液0.3g/ml、樟树叶提取液0.2g/ml、坤希草叶提取液0.15g/ml。

④复合提取液与单一提取液抑菌效果比较( 实验方法参见前述“3 抑菌试验”)

表3 记录了复合提取液和单一提取液对各菌种的抑菌效果，复合提取液与单一提取液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、黑曲霉和白假丝酵母菌的最小抑菌直径见下表3。

表3 复合提取液和单一提取液对各菌种的抑菌效果比较

注：表3 中的复合提取液是由前述折算成原料浓度计小叶桉叶提取液0.4g/ml、桃树叶提取液0.2g/ml、芳枸叶提取液0.3g/ml、樟树叶提取液0.2g/ml、坤希草叶提取液0.15g/ml。按照1:1:1:1:1的体积比混合即得，未进行浓缩处理。

由表3 可知，单一原料和其复合成分均有一定的抑菌效果，但是与五种单一原料的抑菌效果相比，复合提取液对五种菌种的抑菌效果更明显，小叶桉叶提取液、桃树叶提取液、芳枸叶提取液、樟树叶提取液、坤希草叶提取液中的成分协同作用具有较好的抑菌效果。

试验例 3 含有本发明植物提取物组合物的护肤乳霜的制备及其防腐剂抑菌挑战实验

取按照实施例1 的方法提取得到的小叶桉叶提取液原液、桃树叶提取液原液、芳枸叶提取液原液、樟树叶提取液原液以及坤希草叶提取液原液，混合，并浓缩，得到本实施例的植物组合物，其中按原料浓度计桉树提取液0.4g/ml、桃树叶提取液0.2g/ml、芳枸叶提取液0.3g/ml、樟树叶提取液0.2g/ml、坤希草叶提取液0.15g/ml。

本实施例的护肤乳霜的原料组成包括油脂、乳化剂、保湿剂、增稠剂、去离子水、防腐剂和本实施例的植物提取物的组合物，除防腐体系外，其余组分为护肤乳霜常规组分。具体地，该护肤乳霜配方为见表。

表4 基础护肤乳霜配方及防腐体系比较4( 各百分比数据为占护肤乳霜总重量的百分比)

注：上表4中样品的防腐体系：

样品1#、2#、3#分别包含2.0％、3.0%、4.0％的植物提取物组合物和0.1％的苯氧乙醇；并且1#、2#、3#中的苯氧乙醇为其常规添加量的五分之一；

样品4#的防腐体系为0.5%的苯氧乙醇和0.03%甲基异噻唑啉酮：；

样品5#的防腐体系为0.5%的苯氧乙醇；

样品6#的防腐体系为2%的植物组合物；

“---”在表4中代表该物质在配方中未添加。

本实施例中，按照防腐体系中添加的本实施例的植物组合物分别占护肤乳霜总重量2.0％、3.0％、4.0％的用量及常规防腐剂复配制备了六种规格的护肤乳霜样品。

制备护肤乳霜的方法可按照乳霜的常规操作进行，具体可以按以下方法制备：先使护肤乳霜的A相、B相分别加热至80℃左右完全溶解后，两相混合均质分散均匀；待体系降至50℃后加入C相均质搅拌均匀后，待体系温度降至40-45℃加入D相拌 ( 如配方中有其他添加相，在此步骤中加入其他添加相)，体系经搅拌均匀后，根据配方要求完成操作。

①护肤乳霜常规稳定性实验

将六种规格的样品各取100mL 试样两份，分别置于250mL 具塞广口玻璃瓶中，一份于40±2℃保温箱中放置24h，另一份于-5±2℃冰箱中放置24h。取出各样品恢复至室温后观察，各样品均未出现浑浊、沉淀或分层现象。其中保温放置的样品继续于40±2℃保温箱中放置72h 后取出观察，仍为澄清溶液，未出现浑浊、沉淀或分层现象，未发现有霉菌生长现象。

②护肤乳霜的防腐抑菌挑战实验

样品材料与培养基

霉菌培养基：察氏培养基，115℃高压灭菌30min 后制成斜面备用。

细菌培养基：卵磷脂吐温80- 营养琼脂培养基，121℃高压灭菌20min 后制成斜面备用。

试验菌种：

细菌：金黄色葡萄球菌:(Staphylococcus aureus)ATCC 6538

大肠埃希氏菌:(Escherichia coli)ATCC 8739

铜绿假单胞菌:(Pseudomonas.aeruginosa)ATCC 9027

霉菌：黑曲霉:(Aspergillusniger)ATCC 16404

酵母菌：白假丝酵母(Candida albicans)ATCC 10231

注：上述菌株均由中科院典型培养物保藏委员会微生物菌种库提供。

实验用菌液的配制：

实验前将各个菌株分别接种到相应的培养基斜面，细菌( 金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌，铜绿假单胞菌) 均于36±1℃恒温培养箱中培养36 ～ 48 小时后，分别挑取适量菌落于无菌生理盐水中混匀，制成一定浓度的混合菌悬液。混合细菌悬液总浓度约为1.0×10⁸cfu/ml。置于4℃贮存备用。霉菌于27±1℃恒温培养箱中培养120 小时。酵母菌27±1℃恒温培养箱中培养24 小时，挑取适量霉菌和酵母菌菌落于无菌生理盐水中混合均匀，制成一定浓度的混合菌悬液。混合霉菌和酵母菌孢子悬液总浓度约为1.0×10⁷cfu/ml。置于4℃贮存备用。

取上述细菌混合菌悬液或霉菌和酵母菌的混合菌悬液的菌量1.0×10⁵～ 5.0×10⁵CFU/g 充分混匀，分别置于36±1℃恒温培养箱中培养。在接种第0 天、第3 天、第7 天、第14 天、第21 天和第28 天取样进行菌量分析。

评价标准：

初始接种量细菌10⁶cfu/g～10⁷cfu/g(mL)，霉菌10⁵cfu/g～10⁶cfu/g(mL)：①第28 天时，样品中含细菌或霉菌>10³cfu/g(mL)，该样品不能通过微生物攻击的挑战试验，表明样品的防腐体系不能有效地起到抑制微生物的作用，产品在生产、贮藏和使用中很容易受到微生物的污染。②第28天时，样品中含细菌或霉菌在10²cfu/g～10³cfu/g(mL)，该样品有条件地通过挑战试验，即当产品中蛋白质或其他动植物材料成分不是特别高，同时生产的卫生环境符合要求，包装物不易发生二次污染时，该防霉体系可以使用，否则不能。③第28 天时，样品中含细菌或霉菌在10cfu/g～10²cfu/g(mL)，表明该样品的防腐体系对微生物有较强的抑杀效果，通过挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时不容易受到微生物污染。④从第7天起，样品中的细菌或霉菌<10cfu/g(mL)，说明该样品的防腐体系对微生物有特强的抑杀作用，通过挑战试验, 产品在生产、贮藏和使用时很不容易被微生物污染。

③护肤乳霜的斑贴实验

斑贴试验方法是，按受试者入选标准选择30例受试人员，选用合格斑贴材料，将样品放入斑试器内（样品用量为0.020～0.025g），同时其中一个斑试器为空白不置任何物质即为空白对照。将有样品的和空白对照用的斑贴器均贴于受试者的前臂曲侧，用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上，持续24h。去除斑贴器后间隔30min,待压痕消失后观察皮肤反应。

斑贴试验的判定标准为，根据《化妆品接触性皮炎诊断标准及处理原则》分类判定：受试部位无反应为（0），皮肤出现淡红斑为（1），皮肤出现红斑、浸润或丘疹为（2），皮肤出现水肿性红斑、丘疹为（3），皮肤出现显著红肿、伴丘疹或大疱为（4）；

④护肤乳霜的保湿性测试

保湿性测试方法：选用30 名志愿受试者，年龄25～40 岁，女性，于湿度相对稳定的封闭空间，以前臂屈内侧适当面积作为测试区；采用德国CK 公司的皮肤水分测试仪，型号Corneometer CM825，测试短期保湿效果

取乳霜0.1 克涂于受试者前臂屈内侧皮肤( 大于1 平方厘米) ，测定保湿化妆品涂敷后即时、30 分钟、60 分钟、120 分钟、180 分钟后的皮肤水分含量；各测试区的皮肤水分含量取5 次测定值的平均值；然后将所有志愿者测定值取平均值。

⑤护肤乳霜的消炎效果试验

具有血管系统的活体组织对损伤因子所发生的防御反应为炎症。任何能够引起组织损伤的因素都可成为炎症的原因，即致炎因子。致炎因子分为：生物性因子（细菌、病毒、立克次体、支原体、真菌、螺旋体和寄生虫等为炎症最常见的原因）、物理性因子（高温、低温、放射性物质及紫外线等和机械损伤）、化学性因子、异物、坏死组织、变态反应等因子。本发明的植物组合物主要是对生物因子导致的炎症进行抵抗的研究，由于细胞内己糖胺酶与组胺的释放同时进行，因此可以利用糖胺酶释放作为组胺释放的指标来评价对组胺释放的抑制作用。组胺存在于肥大细胞中，当肥大细胞受到刺激时，其会通过脱粒反应释放出去，并且会充当诱发炎症及过敏的物质。因此通过抑制己糖胺酶的释放，即抑制组胺的释放，是达到预防及消除炎症的途径之一。

已糖胺酶释放抑制作用试验方法：

（1）向25毫升细胞培养瓶中放入培养基（15%FBS添加S-MEN培养基；以下相同），培养大白鼠嗜碱性白血病细胞（RBL-2H3），通过胰岛蛋白酶处理，回收细胞。将回收的细胞用含有S-MEN培养基4.0×105cells/ml的细胞密度后，添加小白鼠IgE类抗OA和抗DNP抗体至终浓度为0.5μg/ml后接种至96孔板上每孔各接种100μL并培养过夜，除去S-MEN培养基，用500μL的Siraganian缓冲液冲洗2次；

（2）取30μL的Siraganian缓冲液制备好的10μL各样品，在37℃下静置10分钟后，加入100ng/ml的二硝基苯基牛清蛋白（DNP-BSA）溶液10μL，在37℃下静置15分钟以释放已糖胺酶；

（3）将96孔板静置于冰上终止已糖胺酶释放。取一新的96孔板，向各孔中加入细胞上清液110μL以及1mmol/L的硝基苯N-乙酰-ß-D氨基葡萄糖苷（p-NAG）溶液10μL，在37℃下使其反应1个小时。反应完成后，在各个孔中加入0.1mol/LNa2CO3/NaHCO3的溶液250μL，测定在415nm波长处的吸光度；

（4）作为空白试验，测定细胞上清液10μL与250μL的0.1mol/LNa2CO3/NaHCO3的混合液在415nm波长处的吸光度，测定的数值用于校正。根据以下算式来计算对己糖胺酶释放的抑制率

已糖胺酶释放抑制率（%）=[1-(B-C)/A]×100

在上列算式中，A表示样品在无添加状态下的在415nm波长处的吸光度。B表示样品在添加状态下的在415nm波长处的吸光度。C表示添加样品且没有添加p-NAG状态下的在415nm波长处的吸光度。使样品浓度阶段性减少并进行上述已糖胺酶释放抑制率的测定，通过内插法求得使已糖胺酶释放抑制率变为50%的样品浓度IC50(μg/ml),该浓度数值越小对抑制已糖胺酶释放的作用越大。

表5 防腐挑战试验、常规稳定性、斑贴、消炎试验结果表

注：“---”表示该样品不具备抑制已糖胺酶的作用；样品浓度IC50(μg/ml)在小于30μg/ml时，抑制效果优；样品浓度IC50(μg/ml)在30～80μg/ml时，抑制效果良；样品浓度IC50(μg/ml)在80～200μg/ml时，抑制效果一般；样品浓度IC50(μg/ml)在大于200μg/ml时，抑制效果较差。

1#、2#、3# 、4#、5#、6#均为护肤乳霜，1#、2#、3#选用植物组合物与为常规添加量五分之一的化学防腐剂搭配的防腐体系，4# 、5#选用常规添加量的化学防腐体系，6#为单独使用植物提取物的组合物的防腐体系。根据试验结果，对6个防腐体系的样品进行的微生物挑战试验结果表明：第28 天时，各个样品中细菌、霉菌和酵母菌的含量均<10cfu/g(mL)，表明这6种防腐体系对微生物均有较强的抑杀效果，通过挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时不容易受到微生物污染。2# 抑菌效果与4# 相当，且从第7 天以后的检测数据证明，其对细菌的抑制效果更好一些，优于只添加化学防腐的样品5#；4# 选用常规添加量的化学防腐剂混配，3#对细菌的抑菌效果明显优于只加化学防腐剂的样品4#与5#；而6#单独使用植物组合物的样品在抑菌效果上略优于样品5#；试验数据证明，该植物组合物可以达到不用或减少防腐剂用量，协同防腐的效果。

表5的常规稳定性考察与斑贴试验显示，该植物组合物初步具有商业化产品的稳定性与安全性效果；另从表5中的数据看出添加植物该组合物的护肤膏霜还具有抑制已糖胺酶的释放，从而达到抗炎、消炎的效果。

表6 保湿率效果表

。

由表6可知，添加该植物组合物的护肤膏霜对提升保湿效果有帮助；

综上所述，本发明的植物组合物可有效的应用于护肤乳霜中，不用或减少产品中原有防腐剂的添加量，并具有保湿、消炎的效果。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，本发明提供的植物组合物添加在化妆品中可以制成膏霜、乳液、水剂、凝胶、洗剂、香皂等各种剂型的日化用品。

其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种植物提取物的组合物，其特征在于，所述植物提取物的组合物由小叶桉叶提取物、桃树叶提取物、芳枸叶提取物、樟树叶提取物和坤希草叶提取物组成。

2.根据权利要求1所述植物提取物的组合物，其特征在于，所述植物提取物的组合物中各提取物的体积份数相同，所述小叶桉叶提取物、桃树叶提取物、樟树叶提取物和坤希草提取物的密度为1.015～1.040g/ml，所述芳枸叶提取物的密度为1.035～1.055g/ml。

3.根据权利要求1所述植物提取物的组合物，其特征在于，所述植物提取物的组合物以干燥小叶桉叶、桃树叶、芳枸叶、樟树叶、坤希草叶为原料，并以4:2:3:2:1.5的质量比分别提取后混合制得。

4.根据权利要求1所述植物提取物的组合物，其特征在于，所述小叶桉叶提取物、桃树叶提取物、芳枸叶提取物、樟树叶提取物或坤希草叶提取物采用微波萃取。

5.根据权利要求1所述植物提取物的组合物，其特征在于，所述微波频率为300~300000MHz。

6.根据权利要求1所述植物提取物的组合物，其特征在于，所述小叶桉叶提取物、桃树叶提取物、芳枸叶提取物、樟树叶提取物或坤希草叶提取物所用的萃取剂为水和/或醇。

7.权利要求1～6所述植物提取物的组合物在抑制金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、霉菌或酵母菌中的应用。

8.根据权利要求7所述植物提取物的组合物的应用，其特征在于，所述霉菌为黑曲霉；所述酵母菌为白假丝酵母。

9.一种个人护理品，其特征在于，所述个人护理品中含有质量分数为2～4%的权利要求1～6所述植物提取物的组合物。

10.根据权利要求9所述个人护理品，其特征在于，所述个人护理品为膏霜、乳液、水剂、凝胶、洗剂或香皂。