CN107157801A - 含天然丹参多糖复方抑菌型洗手液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含天然丹参多糖复方抑菌型洗手液及其制备方法，属于日化领域，以解决现有洗手液抑菌活性不高的问题。本洗手液由下列重量份的原料组成：十二烷基二甲基甜菜碱0.1％‑8％、脂肪醇聚氧乙醚0.3％‑5％、椰子油脂肪醇二乙醇酰胺1％‑12％、烷基糖苷1％‑10％、丙二醇5％‑10％、维生素E 0.1％‑0.5％、丹参多糖提取物10％‑20％，余量为蒸馏水；用柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液调节溶液的pH在6.0‑7.0之间。本发明以提取物中的黄酮类化合物作为添加成分，以提取的丹参粗多糖作为功能因子，在多次纯化的基础上，将其作为抑菌功能成分，提供一种兼具去污能力强、抑菌、无毒、无刺激等功效的含天然丹参多糖复方抑菌型洗手液。

Description

含天然丹参多糖复方抑菌型洗手液及其制备方法

技术领域

本发明属于日化领域，具体涉及一种复方抑菌型洗手液。

背景技术

洗手液是新兴的一种手部清洁产品，由于使用方便越来越受到广大消费者的厚爱。早期，国内在洗手液的研制与开发方面不太关注护肤功效，洗手液产品大都只注重去污杀菌功效，同时也忽略了洗手液对人体健康的所带来的危害。例如，市场上所售部分洗手液使用氯盐来作为增稠剂，将会直接影响洗手液的滑腻润肤功效及使用者使用时的手感，如长期使用，将会对人体健康会带来一定的隐患。还有部分洗手液使用甲醛作为杀菌防腐剂以达到杀菌、抑菌的效果，虽然达到了清洁去污的目的，但对人体也造成一定的伤害。近年来，一些天然提取物以其温和、无刺激、无毒副作用，具有杀菌、抑菌功效且易降解的特点，深受广大消费者的青睐。同时，由于新兴的绿色洗护产品在市场中备受欢迎，因此，开发一种清洁效果好，同时又对皮肤和环境都友好的洗手液是非常有意义的。

目前市场上比较青睐的大多为添加植物活性成分，天然无刺激的新型绿色洗手液，类似芦荟类洗手液中所含活性酶类物质可分解皮肤表层的死亡细胞，从而去除“污垢”，并对皮肤的新陈代谢具有一定的保护作用。还有些洗手液中含有的过氧化氢酶、SOD等酶类能起到防止细胞老化，去除硬化皮肤(或伤痕)，从而达到保护皮肤的作用。另外制备的金桔洗手液，由于金桔含有类黄酮、萜类化合物、苷类、糖类、维生素等物质，有一定的保湿、消炎、杀菌和抑菌功效，而且容易在环境中被生物降解，不会对环境造成污染，因此制成的抑菌抗炎型洗手液受到广大消费者的厚爱。例如从白蔹、白芷、白茯苓、积雪草、玉竹等植物中提取多糖、多酚、黄酮、植物激酶等物质，作为活性添加成分，提高了洗手液美白洗护性能。由此可见，由中草药提取物所组成的洗手液，能够滋润增白皮肤，减轻色素沉着，改善微循环，促进新陈代谢，延缓皮肤衰老，同时又具有去污，抑菌抗炎等功效，而且对人体健康也不会造成危害。

然而，洗手液的除菌效果是所有功能活性中最重要的一个衡量指标，目前市售的各式洗手液所含的除菌物质不尽相同，除菌效果亦有区别。随着洗手液市场的不断壮大，洗手液产品也在不断推陈出新，例如，新型艾叶洗手液抑菌效果研究，采用水蒸气蒸馏法提取出艾叶挥发油，制作成乳化液，药敏片法测定抑菌效果，并与其它洗手液进行对照。结果表明新型艾叶洗手液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有一定的抑制效果，但是，由于艾叶挥发油提取产率不高，所以成为影响艾叶洗手液产量提高的主要瓶颈；除此之外，用菊花提取物做原料制成的抑菌型洗手液，虽然具有一定的抑菌功效，但是由于菊花的特殊气味限制了洗手液品质的提升；然而用迎春花制备的洗手液具有一定的抑菌杀菌功效，如对大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡糖球菌、伤寒杆菌、肠炎杆菌等都有一定的抑菌活性，但是原料来源大多是以野生为主，所以基体成分含量不稳定，难以保证洗手液的品质及可持续研发。

发明内容

本发明的目的是提供一种含天然丹参多糖的复方抑菌型洗手液，以解决现有洗手液抑菌活性不高的问题。

本发明的另一个目的是提供一种含天然丹参多糖复方抑菌型洗手液的制备方法。

本发明技术方案如下：一种含天然丹参多糖复方抑菌型洗手液，由下列重量份的原料组成：十二烷基二甲基甜菜碱0.1％-8％、脂肪醇聚氧乙醚0.3％-5％、椰子油脂肪醇二乙醇酰胺1％-12％、烷基糖苷1％-10％、丙二醇5％-10％、维生素E 0.1％-0.5％、丹参多糖提取物10％-20％，余量为蒸馏水；用柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液调节溶液的pH在6.0-7.0之间。

作为本发明的进一步改进，所述丹参多糖提取物由以下方法制得：

A、制备乙醇/硫酸铵双水相体系

配置40％-60％的无水乙醇，按照硫酸铵与乙醇溶液1.3—2:5的质量体积比加入无水乙醇，搅拌溶解，待溶液由浑浊变澄清后，自然冷却至室温，溶液分层，上相为乙醇和水，下相为硫酸铵饱和溶液；

B、制备制备丹参粗多糖

丹参粉碎过筛,称取丹参粉末,加入乙醇/硫酸铵双水相溶液，浸泡24h-48h；置于水浴锅中,温度控制在30℃-60℃之间，控制浸提时间为60min-150min，减压抽滤,将溶液真空浓缩，然后在浓缩液中加入乙醇硫酸铵双水相溶液溶解浓缩液，分离的固体和液体，取液体，加入双水相溶液，离心30min,取上清液用乙醇/硫酸铵双水相溶液定容，得到丹参多糖；

C、丹参多糖的纯化

取上述丹参多糖粗提取液100-200ml，加入Sevag试剂，振摇，离心，收集上清液，重复操作，去除蛋白1—3次，得到最终纯化的多糖。

作为本发明的进一步改进，所述步骤B中的分离固体和液体的方式为离心，转速为5000r/min，

作为本发明的进一步改进，所述步骤C中的丹参多糖粗提取液与Sevag试剂的体积比为1:5，振摇5-10min，在8000r/min转速下离心10-15min，收集上清液去除蛋白。

上述含天然丹参多糖复方抑菌型洗手液的制备方法，包括如下步骤：

取蒸馏水加热至70-80℃，在不断搅拌的条件下，逐滴加入十二烷基二甲基甜菜碱使其充分溶解后，降温至30—50℃，加入柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，调节溶液的pH在6.0-7.0之间；加入脂肪醇聚氧乙醚、椰子油脂肪醇二乙醇酰胺、烷基糖苷、丹参多糖提取物、丙二醇,匀速搅拌使其充分溶解后，恒温50-60℃条件下，搅拌,冷却至30—40℃，再次用柠檬酸－柠檬酸钠缓冲溶液调节pH至中性或弱酸性；加入水调节粘度，最后加入维生素E，陈化30-50h后，即得成品。

作为本发明的进一步改进，所述搅拌转速为1000r/min，搅拌时间为30min。

本发明以提取物中的黄酮类化合物作为添加成分，以提取的丹参粗多糖作为功能因子，在多次纯化的基础上，将其作为抑菌功能成分，提供一种兼具去污能力强、抑菌、无毒、无刺激等功效的含天然丹参多糖复方抑菌型洗手液。

本发明产品以植物多糖丹参多糖作为天然绿色的抑菌活性成分，用十二烷基二甲基甜菜碱(BS-12)、脂肪醇聚氧乙醚(AEO)、椰子油脂肪醇二乙醇酰胺(尼诺尔6501)、烷基糖苷作为表面活性剂，丙二醇作为助溶剂，维生素E作为补水抗氧化成分，丹参多糖提取物作为抑菌、补水、美白的活性功能因子，用柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液作为pH调节剂，复方抑菌型洗手液，同时采用滤纸片扩散、微孔板二倍稀释法研究制备的洗手液的抑菌性能进行检测与评估，通过对泡沫高度及抑菌效能进行测试，结果表明丹参多糖复方抑菌型洗手液能够满足家质量标准中理化性能指标指出，洗手液泡沫高度≥100mm的要求，同时抑菌实验表明，该洗手液具有一定的的抑菌特性。本发明产品天然、绿色、无毒无害、无刺激性。

本发明方法以乙醇/硫酸铵双水相作为提取天然产物功能活性成分的保护试剂，提取丹参多糖，能够避免提取溶剂对多糖原始生物活性的影响，减少溶剂残留，防止多糖提取物二次污染等问题，为丹参多糖作为功能活性因子添加至洗手液中产生特定功效提供可靠保证。开发成本低廉、提取效率高，来源稳定可靠。

附图说明

图1是本发明实施例制得的洗手液对金黄色葡萄球菌的抑制作用结果图；

图2是对照组洗手液对对金黄色葡萄球菌的抑制作用结果图；

图3是对照实验结果图。

具体实施方式

下面的实施例可以进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例中原料丹参来源为甘肃陇西地区种植的丹参。Sevag试剂为商购。

实施例1.含天然丹参多糖复方抑菌型洗手液的原料组成：

实施例2.含天然丹参多糖复方抑菌型洗手液的原料组成：

实施例3.含天然丹参多糖复方抑菌型洗手液的原料组成：

上述实施例1-3制备洗手液的方法如下：

取20mL的蒸馏水加热至70℃，在不断搅拌的条件下，逐滴加入十二烷基二甲基甜菜碱(BS-12)使其充分溶解后，降温至50℃，测其溶液的pH，加入已配置好的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH＝5)，调节溶液的pH值至在6.0-7.0之间；加入脂肪醇聚氧乙醚(AEO)，椰子油脂肪醇二乙醇酰胺(尼诺尔6501)，烷基糖苷，加入丹参多糖(1),丙二醇,匀速搅拌使其充分溶解后，恒温50℃条件下，以1000r/min的转速搅拌30min,冷却至40℃，再次用柠檬酸－柠檬酸钠缓冲溶液调节pH至5.0；加入少量的水调节粘度，最后加入维生素E，陈化30h后，即得成品。

实施例4-制备洗手液的方法如下：

配方同实施例1，取20mL的蒸馏水加热至80℃，在不断搅拌的条件下，逐滴加入十二烷基二甲基甜菜碱(BS-12)使其充分溶解后，降温至30℃，测其溶液的pH，加入已配置好的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH＝5)，调节溶液的pH值至在6.0-7.0之间；加入脂肪醇聚氧乙醚(AEO)，椰子油脂肪醇二乙醇酰胺(尼诺尔6501)，烷基糖苷，加入丹参多糖(1),丙二醇,匀速搅拌使其充分溶解后，恒温60℃条件下，以1000r/min的转速搅拌30min,冷却至30℃，再次用柠檬酸－柠檬酸钠缓冲溶液调节pH至5.0；加入少量的水调节粘度，最后加入维生素E，陈化50h后，即得成品。

上述实施例1-4中丹参多糖(1)的制备方法如下：

操作步骤1：制备乙醇/硫酸铵双水相体系

配置40％的无水乙醇1000mL，按照硫酸铵与乙醇溶液的质量体积比2:5加入40％的无水乙醇，在电磁搅拌器搅拌作用下，快速溶解硫酸铵，等溶液由浑浊变澄清后，自然冷却至室温，可观察到明显的分层现象，上相为乙醇和水，下相为硫酸铵饱和溶液。

操作步骤:2：制备丹参粗多糖

丹参粉碎过筛,称取5g丹参粉末，加入不同料液比(1:40g/mL)的乙醇/硫酸铵双水相溶液，浸泡24h；置于水浴锅中,温度控制在45℃，控制浸提时间为90min，减压抽滤，将溶液真空浓缩；然后在浓缩液中加入乙醇硫酸铵双水相溶液溶解浓缩液，离心(5000r/min)，取上清液，加1倍体积的双水相溶液；再以5000r/min离心30min,取上清液用乙醇/硫酸铵双水相溶液定容至一定体积，得到丹参多糖，标记为丹参多糖1号，贮存备用。

操作步骤3：丹参粗多糖的纯化与含量测定

取上述丹参多糖粗提取液100ml，按照体积比1:5加入Sevag试剂，剧烈振摇5min，在8000r/min转速下离心10min，收集上清液，即为Sevag法去除蛋白1次；按照同样方法重复以上操作，得Sevag法去除蛋白2次、3次，得到最终纯化的多糖，采用苯酚硫酸显色法测定其多糖含量为67.8％。

实施例5-制备丹参多糖(按照实施例1的配方)，制备工艺不同。

操作步骤1：制备乙醇/硫酸铵双水相体系

配置60％的无水乙醇1000mL备用，按照硫酸铵与乙醇溶液的质量体积比1.3:5)加入40％的无水乙醇，在电磁搅拌器搅拌作用下，快速溶解硫酸铵，等溶液由浑浊变澄清后，自然冷却至室温，可观察到明显的分层现象，上相为乙醇和水，下相为硫酸铵饱和溶液。

操作步骤:2：制备丹参粗多糖

丹参粉碎过筛,称取10g丹参粉末，加入不同料液比(1:50g/mL)的乙醇/硫酸铵双水相溶液，浸泡48h；置于水浴锅中,温度控制在60℃，控制浸提时间为60min，减压抽滤，将溶液真空浓缩；然后在浓缩液中加入乙醇硫酸铵双水相溶液溶解浓缩液，过滤，取滤液，加1倍体积的双水相溶液；再以5000r/min离心30min,取上清液用乙醇/硫酸铵双水相溶液定容至一定体积，得到丹参多糖，标记为丹参多糖1号，贮存备用。

操作步骤3：丹参粗多糖的纯化与含量测定

取上述丹参多糖粗提取液200ml，按照体积比1:5加入Sevag试剂，剧烈振摇10min，在8000r/min转速下离心15min，收集上清液，去除蛋白1次；按照同样方法重复以上操作，去除蛋白2-3次，得到最终纯化的多糖。

《对比试验》

一、测试制备洗手液的起泡性能：

(1)取配置好的洗手液，用去离子水稀释100倍以后保存备用；

(2)取(1)中稀释好的洗手液加入9支具塞试管中，每3支试管作为一组，分别加入洗手液的体积为50mL、60mL、80mL，塞住试管口上下摇动三次，记下泡沫高度；

(3)重复步骤(2)，测量3次，记录数据每个样平行做三次，以加入的蒸馏水作为试剂空白。实验结果如下表1所示：

表1

国家质量标准中理化性能指标指出，洗手液泡沫高度≥100mm为正常，本发明实施例制备的洗手液泡沫平均高度为644.2mm，符合且优于洗手液理化性能指标。

二、研究洗手液对金黄色葡萄球菌的抑制活性

在无菌操作台上遴选被活化的供试菌2—3环，接入5mL液体培养基中，用100μL的移液枪吹打数次，取10μL均匀涂布于固体培养基平板上，置于无菌超净台放置3—4h，培养箱中培养4h。用平板计数器测量菌悬液的浓度，达到107—108CFU/mL，低温留存备用。经高压灭菌并烘干的滤纸制作成半径为6mm的圆形滤纸片，放在干燥的平皿中，121℃湿热灭菌30min，在平皿温度降到室温之后分别倒入不同配方的丹参多糖洗手液。

如图3所示，一个平皿倒入无菌生理盐水作为阴性对照(不加丹参多糖，洗手液的其余配方同实施例1)，另一个平皿倒入青霉素注射液作为阳性对照(不加丹参多糖，洗手液的其余配方同实施例1)，分别浸泡30min。在无菌操作台上将营养琼脂培养基熔化后倒入平皿中，待培养基凝固之后用无菌移液管量取约0.5m L的菌悬液，用涂布棒在培养基上涂布均匀，用无菌镊子将滤纸片贴在培养基上，每个平皿均匀的分布4个，每个配方做4个平行，然后将平皿置于28℃的温度下进行培养36h，每个处理设3次重复。定期观察菌落形态，并用十字交叉法测量菌落直径，计算抑制生长率。

对照例1、以酸提碱沉法得到的丹参多糖作为功能添加因子；

方法如下：丹参粉碎、过筛，称取5g丹参粉末，加入pH＝5的乙酸溶液浸泡24h，置于60℃的水浴锅中，控制提取时间40min，然后将混合物减压抽滤，弃去沉淀物，上清液真空浓缩，加入0.1mol/L的氢氧化钠溶液静置3h,离心(5000r/min)40min,弃去沉淀，取上清液定容至一定体积，得到丹参多糖，标记为丹参多糖2号，洗手液的其余配方同实施例1，洗手液的制备方法同上。

对照例2、以乙醇-微波辅助法提取的丹参多糖作为功能添加因子；

方法如下：丹参粉碎、过筛，称取5g丹参粉末，加入40％乙醇溶液浸泡24h，在微波功率360-400w条件下,控制微波反应时间5-10min，得粗提取液，减压抽滤，将溶液真空浓缩，加入0.1mol/L乙醇溶液溶解浓缩液，离心(5000r/min)30-50min,弃去沉淀，取上清液加0.1mol/L的无水乙醇溶液定容至一定体积，得到丹参多糖，标记为丹参多糖3号，洗手液的其余配方同实施例1，洗手液的制备方法同上。

对照例3、不加丹参多糖，洗手液的其余配方同实施例1。

结果：比较不同添加量洗手液的抑菌试验结果，实施例1-3制得的洗手液对金黄色葡萄球菌都一定的抑制作用，三个配方实验组的抑菌直径分别为34.4mm、32.9mm、33.8mm，根据阳性对照组的抑菌直径(48.5mm)和阴性对照组的抑菌直径(12.4mm)，分别计算其抑菌率分别为95.2％，91.1％，93.6％，其抑菌率的计算公式为：抑制率＝R₁/R₀-R*100％(式中：R₁：实验组的抑菌直径，R₀：阳性对照组的抑菌直径；R：阴性对照组的抑菌直径)。

从图1和图2可以看出，采用本发明乙醇硫酸铵双水相提取并纯化后的丹参多糖制备的洗手液对金黄色球菌具有较为明显的抑制作用，能够从图1中看出实施例1-3制备的洗手液能够产生明显的透明圈，说明具有抑菌活性。而对照组采用酸提碱沉法提取的丹参多糖和采用乙醇-超声辅助法提取的丹参多糖对金黄色葡萄球菌没有抑菌作用，从图2中看不到明显的透明圈，因此没有抑菌活性。

Claims (6)

1.一种含天然丹参多糖复方抑菌型洗手液，其特征在于由下列体积含量的原料组成：十二烷基二甲基甜菜碱0.1％-8％、脂肪醇聚氧乙醚0.3％-5％、椰子油脂肪醇二乙醇酰胺1％-12％、烷基糖苷1％-10％、丙二醇5％-10％、维生素E0.1％-0.5％、丹参多糖提取物10％-20％，余量为蒸馏水；用柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液调节溶液的pH在6.0-7.0之间。

2.根据权利要求1所述的含天然丹参多糖复方抑菌型洗手液，其特征在于：所述丹参多糖提取物由以下方法制得：

A、制备乙醇/硫酸铵双水相体系

配置40％-60％的无水乙醇，按照硫酸铵与乙醇溶液1.3—2:5的质量体积比加入无水乙醇，搅拌溶解，待溶液由浑浊变澄清后，自然冷却至室温，溶液分层，上相为乙醇和水，下相为硫酸铵饱和溶液；

B、制备制备丹参粗多糖

丹参粉碎过筛,称取丹参粉末,加入乙醇/硫酸铵双水相溶液，浸泡24h-48h；置于水浴锅中,温度控制在30℃-60℃之间，控制浸提时间为60min-150min，减压抽滤,将溶液真空浓缩，然后在浓缩液中加入乙醇硫酸铵双水相溶液溶解浓缩液，分离的固体和液体，取液体，加入双水相溶液，离心30min,取上清液用乙醇/硫酸铵双水相溶液定容，得到丹参多糖；

C、丹参多糖的纯化

取上述丹参多糖粗提取液100-200ml，加入Sevag试剂，振摇，离心，收集上清液，重复操作，去除蛋白1—3次，得到最终纯化的多糖。

3.根据权利要求2所述的含天然丹参多糖复方抑菌型洗手液，其特征在于：

所述步骤B中的分离固体和液体的方式为离心，转速为5000r/min，

4.根据权利要求2或3所述的含天然丹参多糖复方抑菌型洗手液，其特征在于：所述步骤C中的丹参多糖粗提取液与Sevag试剂的体积比为1:5，振摇5-10min，在8000r/min转速下离心10-15min，收集上清液去除蛋白。

5.权利要求1所述含天然丹参多糖复方抑菌型洗手液的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

取蒸馏水加热至70-80℃，在不断搅拌的条件下，逐滴加入十二烷基二甲基甜菜碱使其充分溶解后，降温至30—50℃，加入柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，调节溶液的pH在6.0-7.0之间；加入脂肪醇聚氧乙醚、椰子油脂肪醇二乙醇酰胺、烷基糖苷、丹参多糖提取物、丙二醇,匀速搅拌使其充分溶解后，恒温50-60℃条件下，搅拌,冷却至30—40℃，再次用柠檬酸－柠檬酸钠缓冲溶液调节pH至中性或弱酸性；加入水调节粘度，最后加入维生素E，陈化30-50h后，即得成品。

6.根据权利要求5所述的含天然丹参多糖复方抑菌型洗手液的制备方法，其特征在于：所述搅拌转速为1000r/min，搅拌时间为30min。