CN102028646A

CN102028646A - 百里香香水

Info

Publication number: CN102028646A
Application number: CN 201010556741
Authority: CN
Inventors: 张有林; 张润光; 韩军岐; 钟玉
Original assignee: Shaanxi Normal University
Current assignee: Shaanxi Normal University
Priority date: 2010-11-23
Filing date: 2010-11-23
Publication date: 2011-04-27
Anticipated expiration: 2030-11-23
Also published as: CN102028646B

Abstract

一种百里香香水，包括基础精油1.92份、百里香芳香油0.03～0.10份、精油乳化剂0或2份、无水乙醇或蒸馏水加至100份，其中以蒸馏水作为溶剂配制百里香香水添加2份精油乳化剂，用于将基础精油溶解在蒸馏水中。本发明以从百里香中提取的百里香芳香油为主要成分，所用原料百里香资源廉价易得，主要成分百里香芳香油具有明显的抗氧化性及杀菌性、无毒性，得到的香水整体感觉好，色泽淡雅，香味和谐自然，香味可以维持48小时左右，具有很高的应用价值和广阔的市场前景。

Description

百里香香水

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及以百里香芳香油为主要成分的香水。

背景技术

百里香是唇形科(Labiatae)百里香属(Thymus)植物的统称，是世界著名的芳香植物之一，原产于地中海沿岸及小亚细亚一带。百里香株型奇特、低矮，花型小，花色艳丽，且全株散发芳香气味；喜凉爽气候，喜光，稍耐荫，耐寒，耐旱，忌湿，耐瘠薄。我国的百里香植物种类不是很多，但分布较广，在西北、华北和东北各地均有分布。百里香不但具有较高的食用、药用和化工应用价值，同时还有香化、绿化和环保等作用，因此将是一种具有很大开发潜力的芳香植物。

百里香芳香油含量高、品质优秀，已成为欧美精细化工产业中的重要产品，其贸易已遍及全球。现阶段，百里香属植物的芳香油提取方法主要有蒸馏(SD)和萃取(SDE)。百里香芳香油组分的分析方法有很多种，其中应用最多的是GC-MS分析法。百里香属植物的化学成分主要包括：挥发油和非挥发性物质，目前已报道的百里香芳香油成分达47种之多，其中主要成分是一些醇、酚、烯类物质。而非挥发性物质主要有黄酮类、有机酸和许多营养元素。百里香提取物中富含百里香酚、香荆芥酚、黄酮以及甙类等抗氧化成分，将其添加于食品、饮料、保健品及化妆品中，能够起到防腐蚀、防酸败、抗皮肤衰老和改善肤质、发质等作用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种以百里香芳香油为主要成分，香味和谐自然且维持时间长的百里香香水。

解决上述技术问题所采用的技术方案是它是由下述体积份配比的原料制成：

基础精油 1.92份

百里香芳香油 0.03～0.10份

精油乳化剂 0或2份

无水乙醇或蒸馏水加至100份

上述的基础精油由薄荷油0.1mL、香柠檬油0.1mL、洋甘菊精油0.2mL、葡萄柚精油0.05mL、玫瑰精油0.6mL、茉莉精油0.2mL、橙花精油0.3mL、茶树精油0.1mL、薰衣草精油0.1mL、肉桂精油0.1mL、迷迭香精油0.1mL、檀香精油0.02mL、依兰精油0.05mL混合制成。

本发明的百里香香水由下述体积份配比的原料制成：

基础精油 1.92份

百里香芳香油 0.07份

无水乙醇加至100份

本发明的百里香香水还可由下述体积份配比的原料制成：

基础精油 1.92份

百里香芳香油 0.05份

精油乳化剂 2份

蒸馏水加至100份

上述百里香香水的制备方法如下：

1、采集原料

采集7～8月份百里香植物茎、叶、花，-18～5℃保藏或室内自然阴干。

2、提取百里香芳香油

将百里香植物的茎、叶、花放入蒸馏锅内，加入其质量5倍的蒸馏水，密闭，加热至沸腾60分钟，冷凝回流，分离冷凝回流液上表面漂浮的芳香油，得到百里香芳香油。

3、制备百里香香水

将上述体积份配比的原料混合均匀，装入茶色玻璃瓶内，密封，黑布包裹25℃放置15天，4℃放置60天，过滤，滤液装入密封玻璃瓶中，黑布包裹4℃保藏。

本发明以从百里香中提取的百里香芳香油为主要成分，结合基础精油和无水乙醇或蒸馏水配制成百里香香水，得到的香水整体感觉好，香味和谐自然，香味可以维持48小时左右。

附图说明

图1是实施例1提取的百里香芳香油成分的气-质色谱图。

图2是百里香芳香油对自由基的清除作用曲线图。

图3是百里香芳香油对脂质过氧化的抑制作用曲线图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明进一步详细说明，但本发明不限于这些实施例。

实施例1

以制备百里香香水100mL为例，所用原料及其体积配比如下：

基础精油 1.92mL

百里香芳香油 0.07mL

无水乙醇加至100mL

上述百里香香水的制备方法为：

1、采集原料

2、提取百里香芳香油

将百里香植物茎、叶、花放入蒸馏锅内，加入其质量5倍的蒸馏水，密闭，加热至沸腾60分钟，冷凝回流，分离冷凝回流液上表面漂浮的芳香油，得到百里香芳香油。

3、制备百里香香水

将上述体积配比的原料混合均匀，装入茶色玻璃瓶内，密封，黑布包裹25℃放置15天，4℃放置60天，过滤，滤液装入密封玻璃瓶中，黑布包裹4℃保藏。

实施例2

以制备百里香香水100mL为例，所用原料及其体积配比如下：

基础精油 1.92mL

百里香芳香油 0.05mL

无水乙醇加至100mL

其制备方法与实施例1相同。

实施例3

以制备百里香香水100mL为例，所用原料及其体积配比如下：

基础精油 1.92mL

百里香芳香油 0.10mL

无水乙醇加至100mL

其制备方法与实施例1相同。

实施例4

以制备百里香香水100mL为例，所用原料及其体积配比如下：

基础精油 1.92mL

百里香芳香油 0.05mL

精油乳化剂 2mL

蒸馏水加至100mL

其制备方法与实施例1相同。

实施例5

以制备百里香香水100mL为例，所用原料及其体积配比如下：

基础精油 1.92mL

百里香芳香油 0.03mL

精油乳化剂 2mL

蒸馏水加至100mL

其制备方法与实施例1相同。

实施例6

以制备百里香香水100mL为例，所用原料及其体积配比如下：

基础精油 1.92mL

百里香芳香油 0.08mL

精油乳化剂 2mL

蒸馏水加至100mL

其制备方法与实施例1相同。

为了确定本发明的最佳工艺条件和原料配比，发明人进行了大量的实验室研究试验，各种试验情况如下：

试验材料：百里香植物茎、叶、花采于甘肃省镇原县新城乡，分别于5月15日、6月15日、7月15日、8月15日、9月15日、10月15日采集，采用冷冻鲜藏(-18℃)、低温鲜藏(5℃)、室内自然阴干三种方法储存。试验用动物为西安交通大学医学部动物中心培养的昆明种小鼠，出生45天，体重22～26g。

主要试剂：抗坏血酸由天津市天新精细化工开发中心提供；马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基(PDA固体培养基)由北京博奥星生物技术有限责任公司提供；大豆卵磷脂由康普达(威仕)生物科技有限公司提供；硫代巴比妥(TBA)由SCRC国药集团化学试剂有限公司提供；三氯乙酸(TCA)由天津市东丽区天大化学试剂厂提供；维生素E由加拿大营养屋生物医药有限公司提供；二苯代苦味肼基自由基(DPPH)由青海分子生物试剂公司提供；供试菌种麦芽汁啤酒酵母菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉菌由陕西师范大学食品工程与营养科学学院微生物实验室提供。

主要仪器和设备：HP6890GC/5973MSD气-质联用分析仪，由美国惠普公司提供；S.SW-CJ-IF型净化工作台，由上海跃进医疗器械厂提供；LDZX-40BI型立式自动电热压力蒸汽灭菌器，由上海申安医疗器械厂提供；BY-TR型光学显微镜，由重庆奥特光学仪器有限公司提供；DGX-9073B-1型电热鼓风干燥箱，由上海福玛实验设备有限公司提供；WKY型10-50l微量移液器，由上海荣泰生化工程有限公司提供；GSP-9080MBE型隔水式恒温培养箱，由上海博讯实业有限公司提供；MJX-250B-Z型霉菌培养箱，由上海博讯实业有限公司提供；WFJ2000型可见分光光度计，由上海尤尼柯有限公司提供；PL203型电子天平，由上海梅特勒-托利多仪器有限公司提供。

1、百里香芳香油的提取

将不同时期采集的-18℃、5℃、室内自然阴干三种方法保藏的百里香草和新采集的百里香草(对照)各取1000g，分别加入蒸馏锅内，加入5000g蒸馏水，密闭，加热至沸腾60分钟，冷凝回流，分离冷凝回流液上表面漂浮的芳香油，得到百里香芳香油，按下述公式(1)计算芳香油得率：

实验结果见表1。

表1采集时间和保藏方法对芳香油得率的影响

5月15日

6月15日

7月15日

8月15日

9月15日

10月15日

-18℃

0.11％

0.14％

0.21％

0.19％

0.15％

0.08％

5℃

-

0.10％

-

室内自然阴干

-

0.15％

-

对照

-

0.22％

-

注：对照为当天采集的新鲜百里香草，其他为储藏30天的百里香草。

由表1可见，以7、8月份采集百里香为宜，7月份以前苗木幼嫩，9月份以后苗木老化，芳香油得率均比较低，不宜采集。同时采用不同保藏方法保存的百里香芳香油得率均较高，其中-18℃冷冻保藏保存百里香芳香油的得率最高。本发明选择-18～5℃保藏或室内自然阴干。

2、百里香芳香油成分鉴定

发明人采用气-质联用分析仪对本发明提取的百里香芳香油的成分进行测定。气相色谱条件：选用HP-5MS色谱柱，使用质量分数为5％的苯甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)，进样口温度为200℃，柱室温度为60℃(保持5min)，采用8℃/min升温速率升至150℃(保持10min)，载气为高纯氦气，柱前压为71kPa，流速为1mL/min，分流比为15∶1。质谱条件：接口温度280℃，电离方式EI(电子轰击电离)，电子能量70eV，离子源温度为250℃，四极杆温度130℃，调谐方式为标准调谐，质量扫描方式SCAN，溶剂延迟1.5min，扫描范围是10～550amu，电子倍增器电压为1635V，G1033A，选用D.01.00NlST98标准质谱检索库。测试结果见图1和表2。

表2百里香芳香油主要化学成分及含量

峰号	化合物名称	分子式	质量百分比(％)
				1	2-崖柏烯	C₁₀H₁₆	0.43
2	松萜	C₁₀H₁₆	0.35
				3	莰烯	C₁₀H₁₆	0.47
4	β-水芹烯	C₁₀H₁₆	0.34
				5	β-蒎烯	C₁₀H₁₆	0.71
6	3-甲基1-异丙基-双环[3，1，0]-4-正己烷	C₁₀H₁₆	0.46
				7	4[10]-崖柏烯	C₁₀H₁₆	0.48
8	1-甲基-3-异丙基苯	C₁₀H₁₄	0.36
				9	β-月桂烯	C₁₀H₁₆	0.34
10	桉树脑	C₁₀H₁₈O	0.78
				11	p-聚伞花素	C₁₀H₁₄	0.11
12	顺-1-甲基-4-异丙基-2-环己烯-1-醇	C₁₀H₁₈O	0.57
				13	反-1-甲基-4-异丙基-2-环己烯-1-醇	C₁₀H₁₈O	0.99

14	龙脑	C₁₀H₁₈O	9.04
				15	百里香酚	C₁₂H₂₀O₂	21.60
16	醋酸异冰片酯	C₁₂H₂₀O₂	0.32
				17	1-甲氧基-3-甲基-2-异丙基苯	C₁₀H₁₆O	3.56
18	麝香草酚	C₁₀H₁₄O	5.03
				19	异麝香草酚	C₁₀H₁₄O	4.15
20	醋酸百里酚酯	C₁₂H₁₆O₂	4.37
				21	2-亚甲基-4，8，8-三甲基-4-乙烯基双环[5，2，0]壬烷	C₁₅H₂₄	6.06
22	大根香叶烯-D	C₁₅H₂₄	4.21
				23	邻甲氧基-α，α-二甲基苄基醇	C₁₀H₁₄O₂	0.13
24	2-甲氧基-5-甲基-异丙苯	C₁₁H₁₆O	0.14
				25	2，3，5，6-四甲基-对苯醌	C₁₀H₁₂O₂	0.13
26	2-甲氧基4-甲基-1-[1-甲基乙基]-苯	C₁₁H₁₆O	0.18
				27	柠檬醛	C₁₀H₁₆O	0.17

28	香叶醇	C₁₀H₁₈O	0.15
				29	柠檬醛	C₁₀H₁₆O	0.28
30	正葵醇	C₁₀H₂₂O	0.50
				31	乙酸冰片酯	C₁₂H₂₀O₂	0.51
32	反-石竹烯	C₁₅H₂₄	1.88
				33	石竹烯氧化物	C₁₅H₂₄O	6.89
34	α-石竹烯	C₁₅H₂₄	0.33
				35	1，3-二甲基环戊醇	C₇H₁₄O	0.05
36	樟脑	C₁₀H₁₆O	0.07
				37	α-荜澄茄烯	C₁₅H₂₄	2.06
38	γ-榄香烯	C₁₅H₂₄	1.49
				39	香芹酮	C₁₀H₁₄O	13.67
40	香荆芥酚	C₁₀H₁₄O	24.42
				41	1-己氧基-3-甲基正己烷	C₁₃H₂₈O	0.18

42	4-甲基-3-戊烯醛	C₆H₁₀O	0.18
				43	反-长叶松香芹醇	C₁₅H₂₄O	0.2
44	棕榈酸	C₁₆H₃₂O₂	0.13
				45	葎草烯环氧化物	C₁₅H₂₄O	0.14
46	δ-杜松烯	C₁₅H₂₄O	0.16
				47	待定	C₁₅H₃₄O₂	0.13
48	六氢法呢基丙酮	C₁₈H₃₆O	0.11
				49	香叶基丙酮	C₁₃H₂₂O	3.67
50	别香橙烯	C₁₅H₂₄	0.08
				51	反-长叶松香芹醇	C₁₅H₂₄O	0.08
52	待定	C₁₅H₃₄O₂₀	0.09
				总计			98.51

由图1和表2可见，百里香挥发油中52种成分共占挥发油总量的98.51％，从鉴定结果中可见，其主要成分为香荆芥酚、百里香酚、香芹酮、龙脑、麝香草酚、异麝香草酚、2-亚甲基-4，8，8-三甲基-4-乙烯基双环壬烷、醋酸百里酚酯，可将其添加于化妆品中，抗皮肤衰老和改善肤质。

3、百里香芳香油抑菌性试验

(1)制备酵母菌富集培养基

分别称取葡萄糖50g、尿素1g、(NH₄)₂SO₄·7H₂O 1.0g、孟加拉红0.03g、KH₂PO₄2.5g、FeSO₄·7H₂O 0.1g、MgSO₄·7H₂O 1.0g、酵母膏0.5g，Na₂HPO₄ 0.5g，依次加入蒸馏水中溶解，加蒸馏水至1000mL，再加入琼脂15g，加热融化，补蒸馏水至1000mL；用物质的量浓度为1mol/L的HCl和物质的量浓度为1mol/L的NaOH调节pH值至4.5，过滤，分装入200mL广口瓶中，用塞子塞紧，包扎，置于高压灭菌锅内100Pa灭菌20min，取出，倒入培养皿中，冷却凝固，制备成酵母菌富集培养基，用于培养麦芽汁啤酒酵母菌。

(2)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

称取牛肉膏3.0g、蛋白胨10g、NaCl 5.0g、琼脂18g，置于烧杯中，加入300mL蒸馏水，加热使固体溶解，加蒸馏水至1000mL；用物质的量浓度为1mol/L的HCl和物质的量浓度为1mol/L的NaOH调节pH值至7.2～7.4，过滤，分装入200mL广口瓶中，用塞子塞紧，包扎，置于高压灭菌锅内121℃灭菌15min，冷却至50℃，将试管口端搁置在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总高的一半为宜，冷却凝固，制备成牛肉膏蛋白胨固体培养基用于培养金黄色葡萄球菌。

(3)制备查氏培养基

称取葡萄糖30g、NaNO₃ 2.0g、K₂HPO₄·3H₂O 1.0g、FeSO₄·7H₂O 0.1g、MgSO₄·7H₂O0.5g、KCl 0.5g、琼脂18g，置于烧杯中，加入300mL蒸馏水，加热使固体溶解，加蒸馏水至1000mL；用物质的量浓度为1mol/L的HCl和物质的量浓度为1mol/L的NaOH调节pH值至7.2，过滤，分装入200mL广口瓶中，用塞子塞紧，包扎，置于高压灭菌锅内121℃灭菌15min，冷却至50℃，将试管口端搁置在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总高的一半为宜，冷却凝固，制备成查氏培养基，用于培养黑曲霉菌。

(4)制备无菌生理盐水

将0.85g NaCl和100mL蒸馏水加入三角瓶中，塞上棉塞，塞子外包一层牛皮纸，置于高压灭菌锅内121℃灭菌20min，冷却，待用。

(5)制备PDA固体培养基

称取葡萄糖20g、琼脂20g、去皮捣碎马铃薯200g，置于三角瓶中，加蒸馏水搅拌，用蒸馏水定容至1000mL，用物质的量浓度为1mol/L的HCl和物质的量浓度为1mol/L的NaOH调节pH值至7.6，置于高压灭菌锅内121℃灭菌15min，冷却至50℃，倒入培养皿中，冷却凝固，制备成PDA固体培养基，用于麦芽汁啤酒酵母菌和黑曲霉菌抑菌圈试验。

(6)制备供试菌种菌悬液

取已经活化的金黄色葡萄球菌、黑曲霉菌和麦芽汁啤酒酵母菌三种供试菌种，分别置于装有9mL无菌蒸馏水的试管中，充分混合，制成菌悬液；用无菌吸管取1.0mL菌悬液于装有9.0mL无菌蒸馏水的试管中，依次进行稀释，分别配制成孢子浓度为10⁶～10⁷个/mL的供试菌种菌悬液，其中金黄色葡萄球菌计数采用平板计数法，黑曲霉菌和麦芽汁啤酒酵母菌采用显微镜直接计数法测定。

(7)测定抑菌圈

将直径为9mm的滤纸干热灭菌后放入百里香芳香油中浸泡2h，取各种供试菌种菌悬液各0.15mL均匀涂布于相应的固体培养基上，用无菌镊子将在百里香芳香油中浸泡后的滤纸贴在涂布供试菌种菌悬液的固体培养基上，每个培养皿贴3片，同时取经干热灭菌后的无菌滤纸作为空白对照，将涂布金黄色葡萄球菌菌悬液的牛肉膏蛋白胨固体培养基37℃培养24h，涂布黑曲霉菌菌悬液和麦芽汁啤酒酵母菌菌悬液的PDA固体培养基28℃培养48h。测定滤纸的抑菌圈直径，结果取三次重复试验的平均值，测试结果见表3。按照抑菌圈评价抑菌效果，抗菌素的抑菌圈判断标准为：抑菌圈直径＞15mm时为最敏感型，10～15mm时为中度敏感型，7～9mm时为低度敏感型，无抑菌效果者为不敏感型。

表3百里香芳香油对供试菌种的抑菌作用

供试菌种	抑菌圈直径(mm)
		黑曲霉菌	21.4
金黄色葡萄球菌	14.9
		麦芽汁啤酒酵母菌	18.4
空白对照	9.48

由表3可见，黑曲霉菌、麦芽汁啤酒酵母菌的抑菌圈直径均在15mm以上，属最敏感型，金黄色葡萄球菌属于中度敏感型，说明百里香芳香油对供试的金黄色葡萄球菌、黑曲霉菌和麦芽汁啤酒酵母菌三种菌种都有较强的抑制作用，且对黑曲霉菌的抑制作用最好，其次是麦芽汁啤酒酵母菌和金黄色葡萄球菌。

(8)pH值对百里香芳香油抑菌试验

用物质的量浓度为0.5mol/L的NaOH溶液和物质的量浓度为0.5mol/L的HCl溶液调节牛肉膏蛋白胨固体培养基的pH值为5、6、7、8，供试菌种菌悬液为金黄色葡萄球菌菌悬液，采用上述测定方法测定抑菌圈的大小，比较不同pH值对百里香芳香油抑菌效果的影响，结果见表4。

表4不同pH值对百里香芳香油抑菌作用的影响

pH	5	6	7	8
					抑菌圈直径/mm	18.2	17.4	16.08	15.3

由表4可见，不同pH值对百里香芳香油的抑菌性有较强的影响，而较低pH的抑菌能力更强，pH值为5、6时，菌体已经完全停止生长；pH值为7、8时，随pH值的增大，抑菌圈有减小的趋势。这表明百里香芳香油的抑菌效果在酸性条件下较为强烈，而在中性和碱性条件下随pH值的增大开始有所减弱。由此可知，降低pH可增强百里香芳香油的抑菌作用。

(9)百里香芳香油抑菌热稳定性试验

将百里香芳香油分别在80℃、100℃、121℃下热处理15min，冷至室温，供试菌种菌悬液为pH值为7.0的金黄色葡萄球菌菌种菌悬液，采用上述抑菌圈的测试方法分别测定其抑菌效果，结果见表5。

表5百里香芳香油加热处理抑菌性影响

温度/℃	37℃	80℃	90℃	121℃
					抑菌圈直径/mm	15.9	11.5	11.8	11.3

由表5可见，百里香芳香油经热处理后，对金黄色葡萄球菌的抑菌效果有一定的减弱作用，受热温度达到80℃以上时，抑菌效果变化不明显。

4、百里香芳香油抗氧化性试验

(1)二苯代苦味肼基自由基法(DPPH法)

①配制样品溶液：取10个试管，按照表6的顺序依次加入质量分数为95％的乙醇溶液、物质的量浓度为2×10^-4mol/L的1，1二苯基苦基苯肼水溶液(DPPH水溶液)、不同体积的百里香芳香油溶液(4.0mL百里香芳香油样品用质量分数为95％的乙醇溶液定容至100mL配制而成)。

表6用DPPH法测定百里香芳香油抗氧化性试剂配制表

②配制标样：将1.0mL物质的量浓度为2×10^-4mol/L的DPPH溶液和2.0mL质量分数为95％的乙醇溶液混合。

③配制对照样品：将样品溶液中的百里香芳香油溶液分别用等体积的维生素E溶液(将4.0g维生素E用质量分数为95％的乙醇溶液定容至100mL配制而成)替换，其他原料及其加入量与样品溶液相同。

将样品溶液与相对应的对照样品、标样分别放置30min，置于可见分光光度计中，在517nm处测定吸光度值，按下述公式(2)计算其抑制率(即清除自由基的能力)：

I＝[(A_标准-A_样品)/A_标准]×100％ (2)

式中I表示抑制率，A_标准表示标样吸光度，A_样品表示样品溶液或对照样品的吸光度。实验结果见图2。

由图2可见，百里香芳香油清除自由基的能力在不同的浓度下不同，但整体呈线性关系。作为对照试验的维生素E清除自由基的能力随着浓度的增大而增大，也呈线性关系。百里香芳香油清除自由基的能力比较强，在0.6～0.9之间，特别在添加样品量为0.6mL(试管编号1)时，百里香芳香油清除自由基能力明显强于维生素E。

(2)脂质过氧化法

①配制样品溶液：取7个试管，按照表7顺序依次加入0.8mL大豆卵磷脂缓冲溶液(0.03g大豆卵磷脂溶于100mL pH为7.4物质的量浓度为0.1mol/L的磷酸盐缓冲溶液配制而成)、不同体积的百里香芳香油溶液(4.0mL百里香芳香油用蔗糖脂肪酸脂定容至100mL配制而成)、不同体积的pH为7.4物质的量浓度为0.1mol/L的磷酸盐缓冲溶液(PBS缓冲溶液)和0.2mL FeSO₄-Vc溶液(0.141g FeSO₄和0.152gVc溶于10mL蒸馏水中配制而成)。

表7用脂质过氧化法测定百里香芳香油抗氧化性试剂配制表

②配制标样：将0.8mL的大豆卵磷脂缓冲溶液、0.2mL FeSO₄-Vc溶液，2.0mL PBS缓冲溶液混合。

③配制对照样品溶液：将样品溶液中的百里香芳香油溶液分别用等体积的维生素E溶液(将4.0g维生素E用蔗糖脂肪酸脂定容至100mL配制而成)替换，其他原料及其加入量与样品溶液相同，配制成对照样品溶液。

将样品溶液、对照样品、标样在98℃水浴中加热15min，取出，冷却，离心分离，取上层清液，置于可见分光光度计中，在532nm处测定吸光度值，按照公式(2)计算其抑制率。实验结果见图3。

由图3可见，百里香芳香油具有较强的抗脂质过氧化作用。百里香芳香油溶液的加入量为0.4～1.6mL时，其抗氧化能力变化不大，其脂质过氧化抑制率为0.4％～0.6％。在百里香芳香油溶液添加量为0.4mL(即试管7)时，其抑制率明显高于维生素E，说明较低浓度的百里香芳香油抑制脂质过氧化能力好于维生素E。

5、百里香芳香油急性毒理学试验

(1)小白鼠0％～100％致死用量预试验

将小白鼠致死率0％～100％的剂量范围初定为1,0mL/kg～5.0mL/kg，实验小白鼠按不同剂量分为5组，每组4只(雌雄各半)，一次性灌胃，每组灌胃剂量为：1.00mL/kg、2.00mL/kg、3.00mL/kg、4.00mL/kg、5.00mL/kg。

实验发现小白鼠经5.00mL/kg百里香芳香油灌胃后，出现心跳加快、心率不规则、发出不正常咯咯声、平衡性变差、走路摇摆、步伐不稳、皮肤呈现异常蓝紫色(尾部血管尤为明显)、耳朵充血、眼球充血、四肢抽搐、行动困难、直至呼吸停止的症状。

(2)百里香芳香油对小白鼠急性毒理试验

采用改良寇氏法，根据试验(1)的结果，将小白鼠致死率0％～100％的剂量范围初定为1.50mL/kg～4.00mL/kg，试验小白鼠按不同剂量分为8组，每组10只(雌雄各半)，一次性灌胃。由r＝lg^-1[(lgb-lga)/n-1]，其中r为组距，b为100％致死剂量，a为0％致死剂量，n为组数。经计算r≈1.15。根据r分组，每组灌胃剂量初设为：1.50mL/kg、1.73mL/kg、1.98mL/kg、2.28mL/kg、2.62mL/kg、3.02mL/kg、3.47mL/kg、4.00mL/kg。给小白鼠灌胃后每日观察1次，观察记录在15天中毒表现、死亡数和死亡时间，得出LD(小白鼠致死量)及LD₅₀(小白鼠半致死量)。对于未致死小白鼠，试验结束后，称取体重，处死并解剖观察其心、肝、脾、肺、肾和胃等主要器官的组织变化，记录。结果见表8。

表8小白鼠百里香芳香油灌胃实验结果

实验组	灌胃剂量(mL/kg)	死亡数(只)	死亡率(％)
				1	1.50	0	0
2	1.73	0	0
				3	1.98	2	20
4	2.28	2	20
				5	2.62	3	30
6	3.02	5	50
				7	3.47	8	80
8	4.00	10	100

由表8可见，百里香芳香油的急性毒性致死量(LD)为4.00mL/kg，半致死量(LD₅₀)为3.02mL/kg。

根据美国科学院毒性物质等级划分标准(按物质的半致死剂量LD₅₀值划分)：0级无毒性，LD₅₀＞15.0g/kg；1级实际无毒性，5.0g/kg＜LD₅₀＜15.0g/kg；2级轻度毒性，0.5g/kg＜LD₅₀＜5.0g/kg；3级中度毒性，50.0mg/kg＜LD₅₀＜500.0mg/kg；4级毒性，LD₅₀＜50.0mg/kg。百里香芳香油的毒性程度为2级，是一种具轻度毒性的产品，LD₅₀为3.02mL/kg体重，LD值为4.00mL/kg体重。

(3)百里香芳香油对小白鼠主要脏器的影响

用剂量为1.50mL/kg和1.73mL/kg对小白鼠灌胃后，24h内小白鼠出现轻微中毒症状，24h后症状逐渐消失，至15天，处死所有未致死小白鼠，解剖，观察小白鼠心、肝、脾、肺、肾和胃等脏器，经与未灌百里香芳香油的对照组小白鼠相比，未见有异常改变。

6、百里香香水配制试验

(1)配制基础精油

将薄荷油0.1mL、香柠檬油0.1mL、洋甘菊精油0.2mL、葡萄柚精油0.05mL、玫瑰精油0.6mL、茉莉精油0.2mL、橙花精油0.3mL、茶树精油0.1mL、薰衣草精油0.1mL、肉桂精油0.1mL、迷迭香精油0.1mL、檀香精油0.02mL、依兰精油0.05mL混合均匀，配制成基础精油。

(2)配制酒精基百里香香水

向基础精油中分别添加百里香芳香油0.05mL、0.06mL、0.07mL、0.08mL、0.09mL、0.10mL，用无水乙醇定容至100mL，石蜡封口，于阴凉避光处静置60天，使溶剂、溶质充分混合。

随机安排6名测试者，对不同配方配制的百里香香水，分别从百里香芳香油风味、香味的维持时间、颜色和香水整体感觉几个方面进行评价，总分30分，为香水打分，评分标准见表9。取6名测试者评分的平均值，酒精基百里香香水的感官测评结果见表10。

表9百里香香水感官测评项目及评分标准

表10酒精基百里香香水感官测评结果

百里香芳香油添加量(mL)	香水风味	维持时间	香水颜色	香味整体感觉	总分
						0.05	3	4	6	4	17
0.06	4	8	10	5	27
						0.07	5	9	10	5	29
0.08	4	8	9	4	25
						0.09	4	9	3	3	19
0.10	3	9	2	3	13

由表10可见，在酒精基百里香香水配方中，百里香芳香油的添加量为0.07mL时，香水总得分最高，其整体感觉最好，该配方既可以明显感受到百里香的特殊香味，又不会使其味道过于突出影响香水整体效果，香水味道整体感觉和谐自然，色泽淡雅，且香味可以维持48h左右。随着百里香芳香油添加量的增大，香水色泽逐渐加深，整体风味从淡雅直至强烈刺激。本发明选择酒精基百里香香水中百里香芳香油的添加量最佳为0.07mL/100mL。

(3)配制水基百里香芳香油

向基础精油中分别添加百里香芳香油0.03mL、0.04mL、0.05mL、0.06mL、0.07mL、0.08mL，加入精油乳化剂2.0mL，用蒸馏水定容至100mL，石蜡封口，于阴凉避光处静置60天，使溶剂、溶质充分混合。感官测评水基百里香香水，测评标准与表9相同，测评结果见表11。

表11水基百里香香水感官测评结果

由表11可见，在水基百里香香水配方中，百里香芳香油添加量为0.05mL时，百里香香水的总分最高，其整体感觉最好。由于需要将各种精油溶于水中，水基百里香香水配制过程中添加精油乳化剂2.0mL/100mL，使得水基百里香香水整体色泽呈现不同浓度的乳白色，在视觉的通透性上，比酒精基百里香香水略差。同时，水基百里香香水的溶解度也差于酒精基百里香香水。实验得出，添加等量百里香芳香油，水基百里香香水的气味优于酒精基百里香香水，但香味维持时间略短。

7、后熟陈化

将配制好的酒精基百里香香水装入茶色瓶内，黑暗条件下室温放置，进行后熟陈化试验，结果见表12。

表12酒精基百里香香水后熟陈化感官测评结果

陈化时间(天)	香精风味	维持时间	香水颜色	香味整体感觉	总分
						10	3	5	6	3	17
20	3	6	8	3	20
						40	4	7	9	5	25
60	5	9	10	5	29

80	5	9	10	4	28
						100	5	9	10	5	29

由表12可见，百里香香水后熟陈化60天以上，香精风味、维持时间、香水颜色、整体效果均好。

Claims

1.一种百里香香水，其特征在于它由下述体积份配比的原料制成：

基础精油 1.92份

百里香芳香油 0.03～0.10份

精油乳化剂 0或2份

无水乙醇或蒸馏水加至100份

2.按照权利要求1所述的百里香香水，其特征在于它由下述体积份配比的原料制成：

基础精油 1.92份

百里香芳香油 0.07份

无水乙醇加至100份。

3.按照权利要求1所述的百里香香水，其特征在于它由下述体积份配比的原料制成：

基础精油 1.92份

百里香芳香油 0.05份

精油乳化剂 2份

蒸馏水加至100份。