CN102604741A - 乳白香青挥发油的制备方法及其应用 - Google Patents

乳白香青挥发油的制备方法及其应用 Download PDF

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廖志新
刘超
吴玲
逯梦娅
牛宝静
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Abstract

乳白香青挥发油的制备方法及其应用。采用水蒸气蒸馏及CO2超临界萃取法提取乳白香青中的挥发油成分并通过气相色谱/质谱技术首次对其成分进行分析，鉴定了其中的57个成分，占全部精油的94%以上。采用牛津杯法对该挥发油的抑菌杀菌活性进行了研究，发现该挥发油对葡萄球菌属、链球菌属、肠杆菌属、沙门氏属、志贺菌属、假单胞菌属、芽孢杆菌属、大肠埃希菌属等细菌以及念珠菌属、隐球菌属、青霉素、曲霉属、毛霉属、小孢子菌属、毛癣菌属、表皮癣菌属等真菌具有明显的杀灭或抑制功能。DPPH法测定发现该挥发油具有良好的抗氧化活性。鉴于该挥发油的良好的活性，其可以在食品、药品、化妆品、保健品等行业得到广泛的应用。

Description

乳白香青挥发油的制备方法及其应用
技术领域
    本发明涉及了乳白香青挥发油的制备及该挥发油的应用，尤其是该挥发油的抑菌、杀菌以及抗氧化性作用。
背景技术
植物油具有其独特的组成和生物活性，在香料、医药、抗菌、化妆品、添加剂、生态旅游等方面都有广泛的用途。植物精油是植物体内的次生代谢物质，由分子量相对较小的简单化合物组成，具有一定芳香气味，在常温下能挥发的油状液体物质。植物精油所含化学成分比较复杂，按化学结构可分为脂肪族、芳香族和萜类3大类化合物以及它们的含氧衍生物如醇、醛、酮、酸、醚、酯、内酯等，此外还有含氮和含硫的化合物。
目前香料植物精油成分的研究，已普遍使用气质联用仪(GC-MS)分析，加之多种层析技术及波谱仪器使用，香料植物精油成分能快速了解和探知。
植物精油资源是一个富有潜力的生物资源，它可作为重要原料，在香精、香料、医药、保健品、害虫防治、有机合成、饲料和食品等方面广泛应用。尽管对植物精油本身及其应用、开发已做了大量工作，但相关的工作做得仍不够，植物精油的深入认识和开发方仍然有着广泛的空间。
乳白香青，别名大矛香艾、大白矛香，学名Anaphalis lactea Maxim. 植物的形态特征为根状茎粗壮，灌木状，多分枝，直立或斜升，上端被枯叶残片，有顶生的莲座状叶丛或花茎。茎直立，高10～40厘米，稍粗壮，不分枝，草质，被白色或灰白色棉毛，下部有较密的叶。莲座状叶披针状或匙状长圆形，长6～13厘米，宽0.5～2厘米，下部渐狭成具翅而基部鞘状的长柄；茎下部叶较莲座状常稍小，边缘平，顶端尖或急尖，有或无小尖头；中部及上部叶直立或依附于茎上，长椭圆形，线状披针形或线形，长2～10厘米，宽0.8～1.3厘米，基部稍狭，沿茎下延成狭翅，顶端渐尖，有枯焦状长尖头，全部叶被白色或灰白色密棉毛，有离基3出脉或l出脉。头状花序多数，在茎和枝端密集成复伞房状，花序梗长2～4毫米。总苞钟状，长6毫米，稀5或7毫米，径5～7毫米；总硅片4～5层，外层卵圆形，长约3毫米，浅或深褐色，被蛛丝状毛；内层卵状长圆形，长约6毫米，宽2～2.5毫米，乳白色，顶端圆形；最内层狭长圆形，长5毫米，有长约全长三分之二的瓜部。花托有缝状短毛。雌株头状花序有多层雌花，中央有2～3个雄花；雄株头状花序全部有雄花。花冠长3～4毫米。冠毛较花冠稍长；雄花冠毛上部宽扁，有锯齿。瘦果圆柱形，长约1毫米，近无毛。花果期7～9月。
乳白香青主产甘肃南部(夏河、榆中、肃南、天祝)、青海东部(大通、祁连、门源)及四川西北部(松潘)。生于亚高山及低山草地及针叶林下，海拔2000～3400米。全草入药，有清热止咳，散瘀止血的作用。主治感冒头痛；肺热咳嗽；外伤出血等，对于慢性气管炎具有很好的疗效。
乳白香青化学成分的研究已有报道，文献报道主成分为黄酮，甾体，萜类，例如，任召言等从从乳白香青(A.lactea)全草乙醇提取物中分离并鉴定了30个化合物，其中有4个是未见文献报道的新化合物（硕士研究生论文，2009；Planta Medica，2008，74(8)：859-863），Wang Ai-Xia报道了从乳白香青中分离得到的一个新furobenzopyranone类化合物（Die Pharmazie  2004,  59(10),  807-11；Chinese Chemical Letters，2004，15(10),  1185-1186）。其挥发油成分迄今为止未见报道，对该挥发油的抑菌、杀菌以及抗氧化活性也未见报道。鉴于乳白香青挥发油良好的药理活性，本发明对其挥发油成分以及在抑菌、杀菌和抗氧化性方面的活性进行了详细的介绍。
发明内容
    技术问题：本发明的目的是提供一种乳白香青挥发油的制备方法及其应用，
分析乳白香青挥发油的成分，提供乳白香青挥发油在抑菌、杀菌和抗氧化性方面的应用。
技术方案：本发明的乳白香青的挥发油的制备方法如下：
采用水蒸气蒸馏方法，将采集的乳白香青放入提取罐中，置于罐内筛板上，罐底加入足量的水，在提取罐中对乳白香青进行加热100°C－250°C蒸馏(蒸汽或油浴，乳白香青中的挥发性成分随水蒸气蒸馏而带出，待分出的油层不再增加，即不再出油为止时，将油层取出收集，然后用干燥剂干燥，得到淡黄色液体，即乳白香青挥发油。
采用CO2超临界萃取方法，具体为：将采集的新鲜乳白香青冲洗，切碎，装入萃取器中，并通入CO2气体，控制CO2流量，压力11～40MPa，温度308～330K，时间1～4h，收集挥发油。
所述的乳白香青挥发油作为天然的抗菌剂用于食品、药品等行业或作为添加剂用于合成抗菌剂。
所述的所述的乳白香青挥发油作为天然的抗氧化剂用于食品、药品、化妆品、保健品行业。
所述的天然的抗菌剂，其抑菌、杀菌活性是细菌，或是真菌；
所述的细菌为葡萄球菌属、链球菌属、肠杆菌属、沙门氏属、志贺菌属、假单胞菌属、芽孢杆菌属、大肠埃希菌属，尤其是枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、粪肠球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎杆菌、痢疾杆菌、铜绿假单胞杆菌或乳酸链球菌。
所述的真菌为念珠菌属、隐球菌属、青霉素、曲霉属、毛霉属、小孢子菌属、毛癣菌属、表皮癣菌属，尤其是尖孢镰刀菌、黑曲霉、黄色镰刀菌、啤酒酵母菌、烟草赤星病菌、白色念球菌、大小孢子菌、红色毛癣菌或枯青霉。
乳白香青的挥发油味香，具有清甜而带着花香，香气浓烈而持久。
有益效果：乳白香青挥发油的抑菌、杀菌活性：
经试验证明，乳白香青挥发油，具有广谱杀菌和抑菌作用，乳白香青挥发油对葡萄球菌属、链球菌属、肠杆菌属、沙门氏属、志贺菌属、假单胞菌属、芽孢杆菌属、大肠埃希菌属；念珠菌属、隐球菌属、青霉素、曲霉属、毛霉属、小孢子菌属、毛癣菌属、表皮癣菌属等真菌具有一定的杀灭、抑制生长的作用。尤其对常见菌枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、粪肠球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎杆菌、痢疾杆菌、铜绿假单胞杆菌、乳酸链球菌、尖孢镰刀菌、黑曲霉、黄色镰刀菌、啤酒酵母菌、烟草赤星病菌、新生隐球菌、白色念球菌、絮状表皮癣菌、大小孢子菌、红色毛癣菌、枯青霉具有很强的杀灭和抑制生长的作用。因此，乳白香青挥发油可应用于食品、药品、保健品、化妆品等行业，代替有毒副作用的合成抗菌剂。
具体实施方式
本工艺是以水蒸气蒸馏及CO2超临界萃取获得，也可采用其他制备挥发油的方法如溶剂提取等制备。
采用水蒸气蒸馏方法，将采集的乳白香青放入提取罐中，置于罐内筛板上，罐底加入足量的水，在提取罐中对乳白香青进行加热100°C－250°C蒸馏(蒸汽或油浴，乳白香青中的挥发性成分随水蒸气蒸馏而带出，待分出的油层不再增加，即不再出油为止时（3～5h），将油层取出收集，然后用干燥剂干燥，得到淡黄色液体，即乳白香青挥发油。
采用CO2超临界萃取方
法，具体为：将采集的新鲜乳白香青冲洗，切碎，装入萃取器中，并通入CO2气体，控制CO2流量，压力11～40MPa，温度308～330K，时间1～4h，收集挥发油。
本发明乳白香青的挥发油成分分析。
  气相色谱一质谱联用技术所得质谱图经计算机质谱数据库检索确定了乳白香青挥发油中部分化学成分。气相相色谱条件：
(1) 气相色谱条件
色谱柱：CP-8(30米×0.25毫米×0.25微米)质谱柱，仪器型号VARIAN CP-3800，1079进样口。  分流进样，进样口温度：250度，电子流量控制。程序升温：柱起始温度40度，保持1分钟，以升温速率3.5度/分钟，升温到200度，保持1分钟。载气：氦气， 流速：1毫升/分钟 。进样量：1μL。分流比1：10 。
(2) 质谱条件
质谱型号：VARIAN Saturn 2200。电离方式：EI 。电子能量为70eV 。离子源温度：200度。接口温度：280度。质量扫描范围：50-550，单位质量分辨率。   
分析鉴定结果表明，乳白香青挥发油主要化学成分为脂肪族、芳香族和萜类3大类化合物以及它们的含氧衍生物如醇、醛、酮、酸、醚、酯、内酯等，鉴定了其中的57个成分，占全部精油的94%以上。其中主要化合物为α-松萜(7.26％), β-松萜(3.2278％), D-柠檬烯(3.0229％), 蓝桉醇(17.1654％), α-雪松烯 (5.5296％)， 邻苯二甲酸二乙酯(3.5281％)等。
乳白香青的挥发油成分见表1。
表1  乳白香青精油化学成分
峰号 保留时间 化合物名称 分子式 相对含量
1 8.859 1R-.alpha.-Pinene C10H16 7.2600
2 9.450 camphene C10H16 0.2415
3 10.673 beta.-Pinene C10H16 3.2278
4 13.098 1,3,8-p-Menthatriene C10H14 0.7713
5 13.178 D-Limonene C10H16 3.0229
6 13.919 Santolina triene C10H16 0.2134
7 14.238 Z,Z,Z-4,6,9-Nonadecatriene C19H34 0.0321
8 14.431 3-Carene C10H16 0.3355
9 15.519 Cyclohexene,1-methyl-4-(1-methylethenylidene) C10H16 2.9679
10 26.087 Caryophyllene-(l1) C15H24 0.1418
11 26.907 Naphthalene,1,2,3,4,4a,5,6,8a-octahydro-7-methyl-4-methylene-1-(1-methylethyl)-,(1.alpha.,4a.alpha.,8a.alpha.)- C15H24 0.1898
12        27.110 Tricyclo[5.4.0.0(2,8)]undec-9-ene,2,6,6,9-tetramethyl C15H24 1.0758
13 27.208 Copaene C15H24 0.3108
14 27.382 1H-Cyclopropa[a]naphthalene,1a,2,3,3a,4,5,6,7b-octahydro-1,1,3a,7-tetramethyl-,[1aR-(1a.alpha.,3a.alpha.,7b.alpha.)]- C15H24 0.2085
15 27.572 1H-Cyclopropa[a]naphthalene,1a,2,3,5,6,7,7a,7b-octahydro-1,1,7,7a-tetramethyl-,[1aR-(1a.alpha.,7.alpha.,7a.alpha.,7b.alpha.)]- C15H24 0.8347
16 27.924 Cyclohexane,1-ethenyl-1-methyl-,2,4-bis(1-methylethenyl)-,[1S-(1.alpha.,2.beta.,4.beta.)]- C15H24 0.1584
17 28.310 (-)-Isoledene C15H24 2.7874
18 28.390 1H-Benzocycloheptene,2,4a,5,6,7,8-hexahydro-3,5,5,9-tetramethyl C15H24 5.0207
19 28.501 1H-3a,7-Methanoazulene,2,3,4,7,8,8a-hexahydro-3,6,8,8-tetramethyl-,[3R-(3.alpha.,3a.beta.,7.beta.,8a.alpha.)]- C15H24 0.1723
20 28.865 Caryophyllene C15H24 1.2046
21 29.105 Humulen-(v1) C15H24 0.8120
22 29.356 Azulene,1,2,3,4,5,6,7,8-octahydro-1,4-dimethyl-7-(1-methylethenyl)-,[1S-(1.alpha.,4.alpha.,7.alpha.)]- C15H24 0.7467
23 29.910 Bicyclo[7.2.0]undec-4-ene,4,11,11-trimethyl-8-methylene- C15H24 3.6298
24 30.294 .alpha.-Caryophyllene C15H24 2.6279
25 30.403 1H-Benzocycloheptene,2,4a,5,6,7,8,9,9a-octahydro-3,5,5-trimethyl-9-methylene-,(4aS-cis)- C15H24 0.0141
26 30.659 Spiro[4.5]dec-7-ene,1,8-dimethyl-4-(1-methylethenyl)-,[1S-(1.alpha.,4.beta.,5.alpha.)]- C15H24 0.6854
27 30.833 1H-Cycloprop[e]azulene,decahydro-1,1,7-trimethyl-4-methylene-,[1aR-(1a.alpha.,4a.beta.,7.alpha.,7a.beta.,7b.alpha.)]- C15H24 2.1419
28 30.945 Di-epi-.alpha.-cedrene C15H24 5.5296
29 31.104 Naphthalene,1,2,4a,5,6,8a-hexahydro-4,7-dimethyl-1-(1-methylethyl)- C15H24 1.0850
30 31.214 Benzene,1-(1,5-dimethyl-4-hexenyl)-4-methyl- C15H22 7.7685
31 31.709 Azulene,1,2,3,4,5,6,7,8-octahydro-1,4-dimethyl-7-(1-methylethenyl)-,[1S-(1.alpha.,4.alpha.,7.alpha.)]- C15H24 1.1972
32 31.755 Naphthalene,1,2,3,5,6,7,8,8a-octahydro-1,8a-dimethyl-7-(1-methylethenyl)-,[1S-(1.alpha.,7.alpha.,8a.alpha.)]- C15H24 0.8276
33 32.011 Spiro[5.5]undec-2-ene,3,7,7-trimethyl-11-methylene-,(-)- C15H24 1.5694
34 32.108 Patchoulene C15H24 2.4227
35 32.582 Naphthalene,1,2,3,5,6,8a-hexahydro-4,7-dimethyl-1-(1-methylethyl)-,(1S-cis)- C15H24 1.8485
36 32.662 Naphthalene,1,2,3,4,4a,5,6,8a-octahydro-4a,8-dimethyl-2-(1-methylethylidene)-,(4aR-trans)- C15H24 0.8440
37 32.742 .gamma.-Himachalene C15H24 0.2032
38 33.026 7-Tetracyclo[6.2.1.0(3.8)0(3.9)]undecanol,4,4,11,11-tetramethyl- C15H24O 0.1168
39 33.218 4,7,10,13,16,19-Docosahexaenoic acid,methyl ester,(all-Z)- C23H34O2 0.1674
40 33.488 Tricyclo[5.2.2.0(1,6)]undecan-3-ol,2-methylene-6,8,8-trimethyl C15H24 0.2742
41 34.045 1,6,10-Dodecatrien-3-ol,3,7,11-trimethyl-,(E)- C15H26O 2.2463
42 35.039 Globulol C15H26O 17.1654
43 35.307 Isoaromadendrene epoxide C15H24O 0.0462
44 35.511 Androstan-17-one,3-3thyl-3-hydroxy-（5.alpha.)-c C21H34O2 0.0597
45 35.84 Diethyl Phthalate C12H14O4 3.5281
46 36.339 2,4,7,14-Tetr-4-vinyl-tricyamthyl C20H34O 0.6255
47 36.882 .beta.-Guaiene C15H24 0.1233
48 38.029 Humulane-1,6-dien-3-ol C15H26O 1.3946
49 38.628 .alpha.-Bisabolol C15H26O 1.9459
50 43.024 1-Heptatriacotanol C37H76O 0.2769
51 43.633 Rhodopin C40H58O 0.0958
52 43.822 1,3,6,10-Cyclotetradecatetraen,3,7,11-trimethyl-14-(1-methylethyl)- C20H32 0.4836
53 44.015 1,2-Benzenedicarboxylic acid,butyl octyl ester C20H30O4 0.3208
54 44.345 5aH-3a,12-Methano-1H-cyclopropa C23H32O5 0.0787
55 44.645 Androstan-17-one,3-ethyl-3-hydroxy C21H34O2 0.4192
56 44.803 6-(p-Tolyl)-2-methyl-2-heptenol C15H22O 0.8035
57 45.908 2-[4-methyl-6-(2,6,6-trimethylcyclohex-1-eny)hexa-1,3,5-trienyl]cyclohex-1-en C23H32O 0.1313
实验方式一：乳白香青的挥发油抑制细菌作用
（1）菌种和培养基：菌种由江苏省无锡市江南大学食品学院提供（表2）。
表2 实验用菌种
属 种名
葡萄球菌属 金黄色葡萄球菌
链球菌属 肺炎链球菌，乳酸链球菌
肠杆菌属 产气肠杆菌
沙门氏属 沙门氏菌
志贺菌属 痢疾杆菌
假单胞菌属 铜绿假单胞杆菌
芽孢杆菌属 枯草芽孢杆菌，蜡样芽孢杆菌
大肠埃希菌属 大肠杆菌，粪肠球菌
牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5 g，蛋白胨10 g，氯化钠5 g，水1000mL，琼脂18g，pH7．2～7．4，121℃灭菌30min。
（2）实验过程
2.1 制备菌悬液
用接种环挑起一定的菌体于装有无菌水的试管中，制成浓度约为105～10 6cfu／mL的菌悬液。
2.2 挥发油抑菌作用的测定．
牛津杯法：各种受试菌悬液分别取1．0mL于已灭菌的培养皿中，倒入融化后冷却至60℃左右的培养基约15mL，摇匀，置水平位置凝固后，在每个培养皿中等距离放置无菌牛津杯6个，用移液枪分别吸取用无水甲醇配成的浓度为0.1ug/uL的待检测物质200uL注入牛津杯中，以无水甲醇作空白对照，用氨苄青霉素做阳性对照。于37℃培养24h，观察菌体生长情况，测定抑菌圈直径，以抑菌圈直径的大小表示抑菌效果。用抑菌圈直径D表示抑菌活性。抑菌效果判断标准为：D≤8 mm为不敏感，8 mm<D≤13 mm为低度敏感，13 mm<D≤19mm为中度敏感，D>19mm为高度敏感。
2.3最小抑菌浓度MIC和最小杀菌浓度MBC的测定采用微量稀释板法
试验菌液浓度为106cfu/ml。吸取稀释好的菌液加于96孔细胞培养板中，每孔100uL，每种药物100uL ，依次对比稀释10孔，使得各孔中药物浓度分别为100 mg/ml、50 mg/ml、25mg/ml、12.5 mg/ml、  6.25 mg/ml、  3.125 mg/ml、  1.56 mg/ml、  0.78 mg/ml、0.39mg/ml、0.195 mg/ml。最后一孔不加药物（仅加培养基和细菌）加入稀释菌液100uL，为细菌生长对照孔。留一列孔不加细菌（仅加培养基和药物）作药物对照孔，阳性对照为氨苄青霉素，按说明做倍比稀释。置于振荡器上振荡1min，使孔内溶液充分混匀后，微孔板加盖并放在铺有湿纱布的方形搪瓷盘中，于37℃温箱中孵育18h，眼观无细菌生长孔所含最低药物浓度即为最小抑菌浓度。
最小杀菌浓度的测定：取≥MIC药物浓度的液体培养物(0. Iml)涂布在相应的琼脂培养基上，37℃温箱中孵育18小时，进行存活菌落的计数，判定MBC值（菌落数小于5个的培养物所对应的最低药物浓度为MBC值）。
2.4  实验结果
表3乳白香青挥发油对各种细菌作用的抑菌圈大小（mm）
细菌 乳白香青挥发油 空白对照 阳性对照
金黄色葡萄球菌 18.29 7.98 27.48
肺炎链球菌 18.36 5.26 26.02
乳酸链球菌 17.28 5.42 24.09
产气肠杆菌 17.40 6.74 26.95
沙门氏菌 19.02 7.69 28.19
痢疾杆菌 15.48 5.95 19.98
铜绿假单胞杆菌 14.27 6.29 20.78
枯草芽孢杆菌 17.89 7.91 28.94
蜡样芽孢杆菌 16.40 6.02 24.58
表4 乳白香青的挥发油最小抑菌浓度（MCI）和最小杀菌浓度(MBC)(单位：mg/mL)
细菌 MCI MBC
金黄色葡萄球菌 0.039 0.313
肺炎链球菌 0.039 0.156
乳酸链球菌 0.156 0.625
产气肠杆菌 0.156 0.625
沙门氏菌 0.039 0.156
痢疾杆菌 0.625 2.50
铜绿假单胞杆菌 0.156 0.625
枯草芽孢杆菌 0.039 0.313
蜡样芽孢杆菌 0.039 0.313
实验方式二：乳白香青的挥发油抑制真菌作用
（1）菌种和培养基：菌种由江苏省无锡市江南大学食品学院提供，列表如下
（表5）：
表5 试验用菌种
属 种名
念珠菌属 白色念球菌
隐球菌属 新生隐球菌
青霉素 枯青霉
曲霉属 黑曲霉
毛霉属 总状毛霉
毛癣菌属 红色毛癣菌
小孢子菌属 大小孢子菌
表皮癣菌属 絮状表皮癣菌
培养基采用完全培养基：酵母膏10g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，琼脂20g，   水1000ml，自然pH。培养基与牛津杯、培养皿全部灭菌。
（2）实验过程
菌悬液、实验过程如实施过程一所述
（3）    实验结果
表6乳白香青挥发油对各种细菌作用的抑菌圈大小（mm）
真菌 乳白香青挥发油 空白对照 阳性对照
白色念球菌 17.65 6.56 20.03
新生隐球菌 17.59 8.67 17.89
枯青霉 16.13 5.24 24.16
黑曲霉 14.69 5.36 16.98
总状毛霉 13.94 5.87 17.77
红色毛癣菌 19.02 7.14 18.88
大小孢子菌 18.96 8.59 20.17
絮状表皮癣菌 16.07 7.68 20.04
表7乳白香青的挥发油最小抑菌浓度（MCI）和最小杀菌浓度(MBC)(单位：mg/mL)
真菌 MCI MBC
金黄色葡萄球菌 0.039 0.313
肺炎链球菌 0.078 0. 625
乳酸链球菌 0.078 0.625
产气肠杆菌 0.625 2.50
沙门氏菌 0.078 0.313
痢疾杆菌 0.625 2.50
铜绿假单胞杆菌 0.156 0.313
枯草芽孢杆菌 0156 0.313
蜡样芽孢杆菌 0.039 0.313
通过以上两个具体实验我们可以发现：乳白香青挥发油对于真菌和细菌具有很好的抑制作用。对葡萄球菌属、链球菌属、肠杆菌属、沙门氏属、志贺菌属、假单胞菌属、芽孢杆菌属、大肠埃希菌属等细菌以及念珠菌属、隐球菌属、青霉素、曲霉属、毛霉属、小孢子菌属、毛癣菌属、表皮癣菌属等真菌具有明显的抑制功能。其抑制作用与氨苄青霉素相比在绝大多数菌属中略显微弱，但在某些真菌属中其抑制作用可以相互替代，例如隐球菌和毛癣菌属。总体而言，乳白香青的挥发油具有重要的应用价值，可以可以作为天然的抗菌剂用于食品、药品等行业，代替有毒副作用的合成抗菌剂。
实验方式三： 乳白香青的挥发油的抗氧化活性
实施法案 DPPH法测定乳白香青挥发油的抗氧化性
4.1.1DPPH原理
DPPH自由基是一种非常稳定，可以长时间保存的自由基，经常被用来作为测试抗氧化性试剂．当它遇到能释放质子的物质或者被还原时，自由基被消除，化合物溶液颜色发生显著变化，溶液从紫色脱至淡黄色．通过测定加入所测样品前后在517 nm处的吸光度变化，可求得样品对DPPH的清除率。
4.1.2 实验过程
  在装有2．0 mL的75umol／L浓度的DPPH无水乙醇溶液的10 mL试管中，加入所定量的精油样品溶液，再加入一定量的无水乙醇，使总体积为3mL，震荡后室温下放置30 min后，测定517 nm波长的吸光度值，由下式计算清除率：
 清除率=[A0-(A-Ab)]/ A0*100％
Ao：517 nm下空白吸光度值为0．303(75 umol／LDPPH溶液吸光度0．590)．
A：517 nm下加入样品的DPPH的吸光度A值；
Ab：517 nm下样品本身的吸光度值(不加DPPH)
   我们分别加入0.2mL 、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL挥发油然后测得各自的清除率见下表：
挥发油量（mL） 清除率（％）
0.2 58.9
0.3 86.6
0.4 90.8
0.5 94.5
0.6 95.0
   由以上数据可以看出当加入的挥发油量较少时，清除率与加入的挥发油量成正比，随着加入的挥发油量达到一定值时，清除率的变化与挥发油量的变化不再呈线性关系，清除率增长比较缓慢。通过测定乳白香青挥发油对DPPH的清除率可以发现乳白香青挥发油具有很好的氧化作用，可以作为天然的抗氧化剂用于食品、药品、化妆品、保健品等行业，代替有毒副作用的合成抗氧化剂。对于乳白香青挥发油抗氧化性的研究可以是用DPPH法，也可以是别的方法，例如超氧阴离子自由基、羟基自由基法等。
    通过以上三种实例可以发现乳白香青挥发油具有很好的抗菌、杀菌活性，同时也具有很好的抗氧化作用。对于乳白香青的开发具有重要的实践意义和应用前景。

Claims (7)

1.一种乳白香青挥发油的制备方法，其特征在于，采用水蒸气蒸馏方法，将采集的乳白香青放入提取罐中，置于罐内筛板上，罐底加入足量的水，在提取罐中对乳白香青进行加热100℃-250℃蒸馏(蒸汽或油浴，乳白香青中的挥发性成分随水蒸气蒸馏而带出，待分出的油层不再增加，即不再出油为止时，将油层取出收集，然后用干燥剂干燥，得到淡黄色液体，即乳白香青挥发油。
2.一种乳白香青挥发油的制备方法，其特征在于，采用CO2超临界萃取方法，具体为：将采集的新鲜乳白香青冲洗，切碎，装入萃取器中，并通入CO2气体，控制CO2流量，压力11～40MPa，温度308～330K，时间1～4h，收集挥发油。
3.一种如权利要求1或2所制备的乳白香青挥发油的应用，其特征在于所述的乳白香青挥发油作为天然的抗菌剂用于食品、药品等行业或作为添加剂用于合成抗菌剂。
4.一种如权利要求1或2所制备的乳白香青挥发油的应用，其特征在于，所述的所述的乳白香青挥发油作为天然的抗氧化剂用于食品、药品、化妆品、保健品行业。
5.根据权利要求3所述的乳白香青挥发油的应用，其特征在于所述的天然的抗菌剂，其抑菌、杀菌活性是细菌，或是真菌。
6.根据权利要求5所述的乳白香青挥发油的应用，其特征在于所述的细菌为葡萄球菌属、链球菌属、肠杆菌属、沙门氏属、志贺菌属、假单胞菌属、芽孢杆菌属、大肠埃希菌属，尤其是枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、粪肠球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎杆菌、痢疾杆菌、铜绿假单胞杆菌或乳酸链球菌。
7.根据权利要求5所述的乳白香青挥发油的应用，其特征在于所述的真菌为念珠菌属、隐球菌属、青霉素、曲霉属、毛霉属、小孢子菌属、毛癣菌属、表皮癣菌属，尤其是尖孢镰刀菌、黑曲霉、黄色镰刀菌、啤酒酵母菌、烟草赤星病菌、白色念球菌、大小孢子菌、红色毛癣菌或枯青霉。 
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