CN114591914A - 一种重组间充质干细胞、功能增强型外泌体及其制备方法和应用 - Google Patents
一种重组间充质干细胞、功能增强型外泌体及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114591914A CN114591914A CN202210185379.2A CN202210185379A CN114591914A CN 114591914 A CN114591914 A CN 114591914A CN 202210185379 A CN202210185379 A CN 202210185379A CN 114591914 A CN114591914 A CN 114591914A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- exosome
- mesenchymal stem
- function
- enhanced
- recombinant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 title claims abstract description 144
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 71
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims abstract description 28
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 claims abstract description 28
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 36
- 210000005258 dental pulp stem cell Anatomy 0.000 claims description 17
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 6
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 abstract description 13
- 208000014674 injury Diseases 0.000 abstract description 13
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 abstract description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 61
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 102100021977 Ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase family member 2 Human genes 0.000 description 15
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 13
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 12
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 12
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 12
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 11
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 10
- 229920002961 polybutylene succinate Polymers 0.000 description 9
- 239000004631 polybutylene succinate Substances 0.000 description 9
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 9
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 8
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 6
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 5
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 230000005251 gamma ray Effects 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 2
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 210000003074 dental pulp Anatomy 0.000 description 2
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 2
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 2
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 2
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 2
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 208000001395 Acute radiation syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 102000000412 Annexin Human genes 0.000 description 1
- 108050008874 Annexin Proteins 0.000 description 1
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 description 1
- 206010065553 Bone marrow failure Diseases 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 206010019668 Hepatic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 108091007780 MiR-122 Proteins 0.000 description 1
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 description 1
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- -1 Poly Butylene succinate Polymers 0.000 description 1
- 102000016971 Proto-Oncogene Proteins c-kit Human genes 0.000 description 1
- 108010014608 Proto-Oncogene Proteins c-kit Proteins 0.000 description 1
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 description 1
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 description 1
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 208000019155 Radiation injury Diseases 0.000 description 1
- 206010068142 Radiation sickness syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000003012 bilayer membrane Substances 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000001705 ectoderm cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008151 electrolyte solution Substances 0.000 description 1
- 210000004039 endoderm cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 206010025482 malaise Diseases 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 1
- 108091051828 miR-122 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 238000003921 particle size analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- IYDGMDWEHDFVQI-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxotungsten Chemical compound O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.OP(O)(O)=O IYDGMDWEHDFVQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 description 1
- 210000003370 receptor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000008354 sodium chloride injection Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000004357 third molar Anatomy 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0664—Dental pulp stem cells, Dental follicle stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/04—Phosphoric diester hydrolases (3.1.4)
- C12Y301/04039—Alkylglycerophosphoethanolamine phosphodiesterase (3.1.4.39)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
- C12N2509/10—Mechanical dissociation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/10—Plasmid DNA
- C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
- C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及造血损伤技术领域，特别是涉及一种重组间充质干细胞、功能增强型外泌体及其制备方法和应用。所述制备方法，包括以下步骤：将表达自分泌运动因子ATX的重组载体感染受体间充质干细胞，得到重组间充质干细胞。本发明提供的制备方法制备得到的重组间充质干细胞通过感染表达自分泌运动因子ATX的重组载体，对间充质干细胞进行基因修饰，使其高表达ATX，从而使得分泌的外泌体中ATX的产物LPA表达增加，进而增强外泌体的功能，该外泌体可以促进受照(受辐射照射)造血细胞的增殖，抑制受照造血细胞的凋亡，改善受照小鼠的造血微环境，达到治疗造血损伤的效果。
Description
技术领域
本发明涉及造血损伤技术领域，特别是涉及一种重组间充质干细胞、功能增强型外泌体及其制备方法和应用。
背景技术
随着肿瘤发病率的升高，放射治疗的普遍应用，局部放射性骨髓抑制是多种肿瘤放射治疗的重要并发症之一和剂量限制因素之一。骨髓移植全身照射预处理时也会发生放射性造血损伤并发症。急性放射病是核辐射的重要并发症，而放射性造血损伤是其最重要的组织损伤类型。因此，有效预防造血损伤，及早恢复造血系统功能是辐射损伤救治成功的关键。
放射性造血损伤主要表现为造血功能障碍，由此诱发机体感染，出血，免疫功能抑制，死亡等。因此，全身照射后造血系统损伤的轻重和恢复的快慢在很大程度上影响放射病的病情和转归。间充质干细胞(MSC)是目前治疗放射损伤最有应用前景的成体干细胞之一，在体外不同诱导条件下可以分化为中胚层的骨髓基质细胞，甚至可以跨胚层分化为外胚层和内胚层细胞。在生理或病理情况下，可归巢至组织损伤环境下被诱导扩增，参加组织修复或者再生反应。
然而，多项研究表明，MSC移植率极低，移植入体内的MSC仅有一小部分可以在局部存活，因此，不能够仅以此解释MSC所发挥的效应。越来越多的研究发现MSC上清液可促进损伤器官修复，MSC来源的外泌体(MSC-exosomes)对于MSC生理功能的发挥起着重要作用。因此，MSC-exosomes可以替代MSC或者基因修饰MSC重塑骨髓微环境，发挥抗辐射造血损伤作用。
为进一步增强外泌体对受体细胞的作用，提高其靶向性，近年来科学家尝试对外泌体进行多种修饰，如对外泌体的膜进行RGD修饰，从而增强其促进血管生成的作用，miR-122的修饰可以增强脂肪源间充质干细胞来源的外泌体对肝纤维化的治疗效果，通过对外泌体表面进行阳离子化普鲁兰多糖的修饰可以增强其向肝脏的靶向作用等。但未见对间充质干细胞来源的外泌体进行基因修饰，从而可以提高其对辐射造血损伤的修复作用的报道。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种重组间充质干细胞、功能增强型外泌体及其制备方法和应用。本发明提供的制备方法制备得到的重组间充质干细胞可以分泌功能增强型外泌体，从而提高对辐射造血损伤的修复作用。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了一种重组间充质干细胞的制备方法，包括以下步骤：将表达自分泌运动因子ATX的重组载体感染受体间充质干细胞，得到重组间充质干细胞。
优选的，所述重组载体包括重组腺病毒Ad-ATX。
优选的，所述重组载体与受体间充质干细胞的个数比为(100～150):1。
优选的，所述受体间充质干细胞包括牙髓干细胞。
本发明还提供了上述制备方法制备得到的重组间充质干细胞。
本发明还提供了一种功能增强型外泌体，包括上述重组间充质干细胞分泌的外泌体。
本发明还提供了上述功能增强型外泌体的制备方法，包括以下步骤：
将培养重组间充质干细胞的培养基上清液离心，得到沉淀为所述功能增强型外泌体；所述重组间充质干细胞包括上述重组间充质干细胞。
优选的，所述离心的方式包括：
将培养间充质干细胞的培养基上清液在200～400g下离心10min，得到第一上清液；
将第一上清液在1800～2200g下离心20min，得到第二上清液；
将第二上清液在8000～12000g下离心30min，得到第三上清液；
将第三上清液在100000g下离心70min，得到第四上清液；
将第四上清液在100000g下离心70min，得到沉淀为所述功能增强型外泌体。
本发明还提供了上述功能增强型外泌体或利用上述制备方法制备得到的功能增强型外泌体在制备治疗造血损伤的药物中的应用。
本发明还提供了一种治疗造血损伤的药物，所述药物包括上述功能增强型外泌体或利用上述制备方法制备得到的功能增强型外泌体和所述功能增强型外泌体能接受的辅料。
有益效果：
本发明提供了一种重组间充质干细胞的制备方法，包括以下步骤：将表达自分泌运动因子ATX的重组载体感染受体间充质干细胞，得到重组间充质干细胞。本发明提供的制备方法制备得到的重组间充质干细胞通过感染表达自分泌运动因子ATX的重组载体，对间充质干细胞进行基因修饰，使其高表达ATX，从而使得分泌的外泌体中ATX的产物LPA表达增加，进而增强外泌体的功能，该外泌体可以促进受照(受辐射照射)造血细胞的增殖，抑制受照造血细胞的凋亡，改善受照小鼠的造血微环境，达到治疗造血损伤的效果。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为ATX基因修饰牙髓干细胞后ATX表达的检测结果；DPSC.Null为对照，DPSC.ATX为实施例1制备的重组间充质干细胞；****表示p＜0.0001，DPSC.ATX相对于DPSC.Null存在极显著差异；
图2为功能增强型外泌体的电镜检测结果；
图3为功能增强型外泌体的NTA检测结果
图4为功能增强型外泌体的WB检测结果；Cell extract为细胞裂解产物，EVs-ATX为功能增强型外泌体；
图5为功能增强型外泌体中LPA表达的检测结果；EVs-ATX为功能增强型外泌体，EVs-Null为对照外泌体；*表示p＜0.05，EVs-ATX组相对于EVs-Null组有显著差异。
图6为功能增强型外泌体对造血细胞增殖的促进作用；Con为未经处理的FDC-P1细胞；EVs-Null为FDC-P1细胞经对照外泌体处理；EVs-ATX为FDC-P1细胞经功能增强型外泌体处理；EVs-Null相对于Con组无显著差异；*表示p＜0.05，EVs-ATX组相对于Con组有显著差异。
图7为空白对照组FDC-P1细胞经200cGy的60Coγ射线照射后的细胞凋亡情况；
图8为实验组FDC-P1细胞经200cGy的60Coγ射线照射后的细胞凋亡情况；
图9为对照组FDC-P1细胞经200cGy的60Coγ射线照射后的细胞凋亡情况；
图10为空白对照组FDC-P1细胞经600cGy的60Coγ射线照射后的细胞凋亡情况；
图11为实验组FDC-P1细胞经600cGy的60Coγ射线照射后的细胞凋亡情况；
图12为对照组FDC-P1细胞经600cGy的60Coγ射线照射后的细胞凋亡情况；
图13为空白对照组FDC-P1细胞经1000cGy的60Coγ射线照射后的细胞凋亡情况；
图14为实验组FDC-P1细胞经1000cGy的60Coγ射线照射后的细胞凋亡情况；
图15为对照组FDC-P1细胞经1000cGy的60Coγ射线照射后的细胞凋亡情况；
图16为功能增强型外泌体对受照小鼠外周血白细胞数量的影响；Normal为正常小鼠；Control为受照小鼠腹腔注射PBS对照组；EVs-Null为受照小鼠腹腔注射对照外泌体治疗组；EVs-ATX为受照小鼠腹腔注射功能增强型外泌体治疗组；**表示p＜0.01，Normal组相对于Control组存在显著差异；
图17为功能增强型外泌体对受照小鼠骨髓细胞集落形成能力的影响；Normal为正常小鼠；Control为受照小鼠腹腔注射PBS对照组；EVs-Null为受照小鼠腹腔注射对照外泌体治疗组；EVs-ATX为受照小鼠腹腔注射功能增强型外泌体治疗组；***表示p＜0.001，Normal组相对于Control组存在极显著差异；**表示p＜0.01，EVs-Null组和EVs-ATX组相对于Control组存在显著差异；
图18为功能增强型外泌体对受照小鼠骨髓造血干细胞比例的影响。Normal为正常小鼠；Control为受照小鼠腹腔注射PBS对照组鼠；EVs-Null为受照小鼠腹腔注射对照外泌体治疗组；EVs-ATX为受照小鼠腹腔注射功能增强型外泌体治疗组；***表示p＜0.001，Normal组相对于Control组存在极显著差异；*表示p＜0.05，EVs-ATX组相对于Control组有显著差异。
具体实施方式
本发明提供了一种重组间充质干细胞的制备方法，包括以下步骤：将表达自分泌运动因子ATX的重组载体感染受体间充质干细胞，得到重组间充质干细胞。
在本发明中，所述重组载体优选包括重组腺病毒Ad-ATX。本发明及实施例所述重组腺病毒Ad-ATX优选购自山东维真生物科技有限公司，货号为VH886323。
在本发明中，所述重组载体与受体间充质干细胞的个数比优选为(50～150):1，进一步优选为(100～150):1，更优选为100:1；所述受体间充质干细胞优选包括P3代受体间充质干细胞，更优选包括P3代牙髓干细胞DPSC。本发明所述牙髓干细胞与骨髓来源、脐带来源及脂肪来源间充质干细胞相比，可分泌更多的损伤修复相关生长因子，更适合作为造血损伤修复的外泌体的种子细胞。本发明所述的P3代受体间充质干细胞具有纯度高、表型稳定和干性好的优势。
本发明提供的制备方法制备得到的重组间充质干细胞通过感染表达自分泌运动因子ATX的重组载体，对间充质干细胞进行基因修饰，使其高表达ATX，从而使得分泌的外泌体中ATX的产物LPA表达增加，进而增强外泌体的功能，该外泌体可以促进受照(受辐射照射)造血细胞的增殖，抑制受照造血细胞的凋亡，改善受照小鼠的造血微环境，达到治疗造血损伤的效果。
本发明还提供了一种上述制备方法制备得到的重组间充质干细胞。
本发明还提供了一种功能增强型外泌体，包括上述的重组间充质干细胞分泌的外泌体。本发明提供的功能增强型外泌体具有促进造血细胞增殖，减少造血细胞凋亡，改善小鼠骨髓造血微环境的作用，可以治疗造血损伤。另外，外泌体较细胞更容易生产，保存，且不易发生肺栓塞等不良反应。因此，用功能增强型外泌体对于造血损伤具有更重要的实用价值。
本发明还提供了上述功能增强型外泌体的制备方法，包括以下步骤：
将培养重组间充质干细胞的培养基上清液离心，得到沉淀为所述功能增强型外泌体；所述重组间充质干细胞包括上述的重组间充质干细胞。
在本发明中，所述培养基优选包括无血清培养基。本发明及实施例所述无血清培养基优选购自北京三有利和泽生物科技有限公司，货号为120408。
在本发明中，所述离心的方式优选包括：
将培养间充质干细胞的培养基上清液在200～400g下第一离心10min，得到第一上清液；
将第一上清液在1800～2200g下第二离心20min，得到第二上清液；
将第二上清液在8000～12000g下第三离心30min，得到第三上清液；
将第三上清液在100000g下第四离心70min，得到第四上清液；
将第四上清液在100000g下第五离心70min，得到沉淀为所述功能增强型外泌体。
在本发明中，所述第一离心的参数优选为200～400g，进一步优选为250～350g，更优选为300g。本发明通过适宜的第一离心可以去除上清液中的死细胞及细胞碎片。
在本发明中，所述第二离心的参数优选为1800～2200g，进一步优选为1900～2100g，更优选为2000g；所述第三离心的参数优选为8000～12000g，进一步优选为9000～11000g，更优选为10000g。本发明通过适宜的第二离心和第三离心可以去除外泌体外的其他大分子物质。
本发明通过适宜的第四和第五离心可以进一步去除外泌体外的其他大分子物质，制备得到的功能增强型外泌体的纯度更高。
本发明还提供了上述功能增强型外泌体或利用上述制备方法制备得到的功能增强型外泌体在制备治疗造血损伤的药物中的应用。在本发明中，所述造血损伤优选包括辐射造血损伤。本发明提供的功能增强型外泌体可以治疗造血损伤，具体作用机理同上，在此不在赘述。
本发明还提供了一种治疗造血损伤的药物，所述药物包括上述功能增强型外泌体或利用上述制备方法制备得到的功能增强型外泌体和所述功能增强型外泌体能接受的辅料。在本发明中，所述造血损伤优选包括辐射造血损伤；所述辅料优选包括外泌体保存液或外泌体重悬液。本发明提供的药物可以治疗造血损伤，具体作用机理同上，在此不在赘述。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种重组间充质干细胞、功能增强型外泌体及其制备方法和应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
一种重组间充质干细胞，由以下步骤组成：
复苏P3代牙髓干细胞(DPSC)，采用间充质干细胞无血清培养基(购自北京三有利和泽生物科技有限公司，货号120408)进行扩增，扩增后用重组腺病毒Ad-ATX(购自山东维真生物科技有限公司，货号为VH886323)感染DPSC(Ad-ATX与DPSC的个数比为100：1)，得到重组间充质干细胞；
所述牙髓干细胞(DPSC)取自健康人正常完整的第三磨牙；截牙冠后，从牙根中分离出牙髓组织并在37℃条件下，用胶原酶和中性蛋白酶消化40min；使用氯化钠注射液清洗1次，1500rpm离心5min后去除液体；将上述组织置于75cm2培养瓶，培养至第14天，获得细胞记为P0代DPSC。
对比例1
采用实施例1相似的方法设置对照组，对照组以相同感染复数的腺病毒Ad.Null(未重组ATX基因，购自山东维真生物科技有限公司，货号为VH88001)替换重组腺病毒Ad-ATX感染DPSC。
本发明在DPSC细胞感染Ad-ATX后继续培养48小时，通过实时定量PCR法检测实施例1制备的重组间充质干细胞和对照组中ATX的表达变化。结果见表1和图1。
表1不同处理组ATX的表达变化
| 组别 | 实施例1 | 对照 |
| 1 | 3.93217012 | 1.014176663 |
| 2 | 3.703380589 | 0.970556161 |
| 3 | 3.715594329 | 1.014176663 |
注：表1中的1～3为3次重复实验，图1为三次重复实验结果的平均值。
由表1和图1可知，与对照组(感染对照病毒Ad.Null)相比，实验组(实施例1)DPSC-ATX中ATX表达升高。
实施例2
功能增强型外泌体的制备及鉴定
复苏P3代DPSC，采用间充质干细胞无血清培养基进行扩增，扩增后用Ad-ATX感染DPSC(具体方法同实施例1)；
细胞感染1天后，更换无血清培养基，2天后收集培养上清；将培养上清装至50mL离心管，300g，4℃，离心10min；离心后将上清直接倒入新的离心管，2000g，4℃，离心20min；离心后将上清直接倒入新的离心管，10,000g，4℃，离心30min；离心后将上清直接倒入新的离心管，100,000g，4℃超离2次，每次离心70min；离心结束后，弃上清，用200μL冷的PBS反复吹洗冲刷管侧壁靠底部，充分重悬后获得功能增强型外泌体，分装至小EP管中，在-80℃保存，得到功能增强型外泌体。
制备好的外泌体通过电镜、NTA和Western Blot进行鉴定：
电子显微镜观察外泌体：4％多聚甲醛固定稀释外泌体，稀释倍数为50倍；滴20μL稀释液于铜网上，静置10min，待外泌体沉降吸附于铜网；用滤纸吸除多余液体，并滴10μL磷钨酸覆盖铜网，静置1min；用滤纸吸除多余液体；用灯泡烤干多余液体后上机检测，检测结果见图2。由图2可知，外泌体由于膜部分内陷而形成的典型的双层膜结构。
NTA法对外泌体进行粒径分析：取冻存于-80℃的外泌体，室温融化后，置于4℃保存；用PBS 500倍稀释，上机初测颗粒浓度；稀释外泌体，调节颗粒浓度至5～10×107Particles/mL；再次上机，记录测量时温度和溶液pH，根据计算得出外泌体浓度。具体参数如下：
注释：Sample Remarks0:灵敏度:70，快门:70
电解液：PBS
温度：24.40℃
pH值7.4
电导率：15000.00μS/cm
结果如图3所示，外泌体粒径分布直方图为单峰，平均粒径约为156nm。
Western Blot检测外泌体标志蛋白：
利用抗CD9抗体检测外泌体标志蛋白CD9的表达，抗CD73抗体检测外泌体来源细胞的表面标志CD73的表达。结果如图4所示，外泌体表达其特征性的CD9及来源细胞特征性的CD73。
对比例2
功能增强型外泌体中LPA表达的检测
采用实施例2相似的方法制备对照外泌体，唯一区别在于，以等体积的腺病毒Ad.Null(未重组ATX基因，购自山东维真生物科技有限公司，货号为VH88001)替换重组腺病毒Ad-ATX感染DPSC。
利用LPA检测试剂盒(echelon，K-2800S)(根据试剂盒说明书进行检测)，检测功能增强型外泌体中LPA的表达情况，结果如图5和表2所示。
表2功能增强型型外泌体和对照泌体中LPA的表达情况(nmol/L)
| Ad.Null | 205.96 | 196.0429 |
| Ad.ATX | 290.0229 | 337.3843 |
注：Ad.Null为对照外泌体，Ad.ATX为功能增强型外泌体。
由表2和图5可知，功能增强型外泌体与对照外泌体相比，LPA表达量增高。
对比例3
功能增强型外泌体对造血细胞增殖的影响
用1640培养基(含有10％胎牛血清和0.5ng/ml的IL-3)培养FDC-P1细胞(小鼠骨髓细胞)至对数生长期，以1000细胞/孔接种96孔板，设置3个处理组，空白对照组(Con)为不添加外泌体，实验组(EVs-ATX)添加外泌体剂量为5×104颗粒/孔实施例2制备的功能增强型外泌体，对照组(EVs-Null)添加相同颗粒数的对比例2制备的对照外泌体，通过CCK-8法检测细胞增殖情况。检测结果见图6和表3。
表3不同处理组CCK-8法检测细胞增殖结果
注：表3中同一组中同一时间的多组数据为重复实验的结果。
由表3和图6可知，外泌体可以促进FDC-P1骨髓细胞的增殖，功能增强型外泌体效果更好。
对比例4
功能增强型外泌体对造血细胞凋亡的影响
用1640+10％胎牛血清+0.5ng/ml IL-3培养FDC-P1细胞(小鼠骨髓细胞)至对数生长期，将对数生长期FDC-P1细胞经200cGy，600cGy和1000cGy的60Coγ射线照射后，以10000细胞/孔接种至24孔板，加或不加外泌体(分组及处理情况同对比例3)处理3天，通过Annexin V-APC/PI凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况。结果见图7～15。
由图7～15可知，随照射剂量的增加，FDC-P1细胞凋亡比例升高，外泌体可以抑制由于照射引起的细胞凋亡，功能增强型外泌体抑制作用更强。
对比例5
功能增强型外泌体抑制造血损伤
6～8周龄C57BL/6小鼠经60Coγ射线照射，照射后设置不同组别：Control为受照小鼠腹腔注射PBS对照组；EVs-Null为受照小鼠腹腔注射对照外泌体(对比例2制备的对照外泌体)治疗组；EVs-ATX为受照小鼠腹腔注射功能增强型外泌体(实施例2制备的功能增强型外泌体)治疗组，另外，Normal为未照射正常小鼠对照组；以上处理组注射剂量均为2.5×109颗粒/次，外泌体均悬于200μL PBS中。
本发明对四个处理组的小鼠进行了外周血白细胞数量检测、骨髓细胞集落形成能力检测和骨髓造血干细胞比例检测，从而对疗效进行评估。
(1)功能增强型外泌体对受照小鼠外周血白细胞数量的影响
照射后15天，采集小鼠外周血进行白细胞数量分析。结果见表4和图16。
表4不同处理组白细胞数量统计结果(109/L)
| 重复 | Normal | Control | EVs-Null | EVs-ATX |
| 1 | 6 | 4.1 | 4.2 | 4.3 |
| 2 | 7.2 | 3.3 | 4.3 | 3.3 |
| 3 | 8.8 | 2 | 5.9 | 5.4 |
| 4 | 5.3 | 4.4 | 3.6 | 3.7 |
| 5 | - | 3.4 | 4 | 6.9 |
注：1～5为重复实验结果(即同一组别不同老鼠的实验结果)。
由表4和图16可知，小鼠受照射后，外周血白细胞数量降低，外泌体治疗可以减少白细胞数量的降低。结果显示，与对照外泌体相比，功能增强型外泌体有较好疗效。
(2)功能增强型外泌体对受照小鼠骨髓集落形成能力的影响
照射后8天，处死小鼠，采集股骨，分离骨髓细胞，以2000细胞/孔接种24孔板，加入集落培养基(生产厂家：STEMCELL Technologies，货号：03434)培养7天，计数集落数。结果见表5和图17。
表5不同处理组集落数统计结果(CFU)
| 重复 | Normal | Control | EVs-Null | EVs-ATX |
| 1 | 9 | 3 | 5 | 4 |
| 2 | 16 | 0 | 6 | 6 |
| 3 | 8 | 1 | 4 | 5 |
| 4 | 19 | 3 | 3 | 4 |
| 5 | 14 | 1 | 4 | 5 |
注：1～5为重复实验结果(即同一组别不同老鼠的实验结果)。
由表5和图17可知，小鼠受照射后，骨髓细胞集落形成能力降低，外泌体治疗可以促进骨髓细胞集落形成能力的恢复。结果显示，与对照外泌体相比，功能增强型外泌体有较好疗效。
(3)功能增强型外泌体对受照小鼠骨髓造血干细胞比例的影响
照射后30天，处死小鼠，采集股骨，分离骨髓细胞，取2×106细胞，标记Lin-抗体，c-Kit抗体和Sca-1抗体，通过流式细胞术检测造血干细胞比例。结果见表6和图18。
表6不同处理组流式细胞术检测造血干细胞比例结果(％)
| 重复 | Normal | Control | EVs-Null | EVs-ATX |
| 1 | 1.46 | 0.573 | 0.995 | 1.11 |
| 2 | 1.71 | 0.752 | 0.893 | 1 |
| 3 | 1.74 | 0.526 | 0.831 | 0.91 |
注：1～3为重复实验结果(即同一组别不同老鼠的实验结果)。
由表6和图18可知，小鼠受照射后，骨髓造血干细胞比例下降，外泌体治疗可以增加骨髓造血干细胞的比例。结果显示，与对照外泌体相比，功能增强型外泌体有较好疗效。
综上所述，本发明提供的功能增强型外泌体可以促进骨髓细胞增殖，抑制由于照射导致的细胞凋亡；经过功能增强型外泌体治疗后，可缓解受照小鼠外周血白细胞数量的减少，促进骨髓集落形成能力的恢复，增加骨髓造血干细胞的比例。本发明提供的功能增强型外泌体能够有效的促进造血恢复，从而应用于造血损伤的治疗。
虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (10)
1.一种重组间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将表达自分泌运动因子ATX的重组载体感染受体间充质干细胞，得到重组间充质干细胞。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述重组载体包括重组腺病毒Ad-ATX。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述重组载体与受体间充质干细胞的个数比为(100～150):1。
4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述受体间充质干细胞包括牙髓干细胞。
5.权利要求1～4任一项所述制备方法制备得到的重组间充质干细胞。
6.一种功能增强型外泌体，其特征在于，包括权利要求5所述重组间充质干细胞分泌的外泌体。
7.权利要求6所述功能增强型外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将培养重组间充质干细胞的培养基上清液离心，得到沉淀为所述功能增强型外泌体；所述重组间充质干细胞包括权利要求5所述重组间充质干细胞。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述离心的方式包括：
将培养间充质干细胞的培养基上清液在200～400g下离心10min，得到第一上清液；
将第一上清液在1800～2200g下离心20min，得到第二上清液；
将第二上清液在8000～12000g下离心30min，得到第三上清液；
将第三上清液在100000g下离心70min，得到第四上清液；
将第四上清液在100000g下离心70min，得到沉淀为所述功能增强型外泌体。
9.权利要求6所述功能增强型外泌体或利用权利要求7或8所述制备方法制备得到的功能增强型外泌体在制备治疗造血损伤的药物中的应用。
10.一种治疗造血损伤的药物，其特征在于，所述药物包括权利要求6所述功能增强型外泌体或利用权利要求7或8所述制备方法制备得到的功能增强型外泌体和所述功能增强型外泌体能接受的辅料。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210185379.2A CN114591914A (zh) | 2022-02-28 | 2022-02-28 | 一种重组间充质干细胞、功能增强型外泌体及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210185379.2A CN114591914A (zh) | 2022-02-28 | 2022-02-28 | 一种重组间充质干细胞、功能增强型外泌体及其制备方法和应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114591914A true CN114591914A (zh) | 2022-06-07 |
Family
ID=81808363
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210185379.2A Pending CN114591914A (zh) | 2022-02-28 | 2022-02-28 | 一种重组间充质干细胞、功能增强型外泌体及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114591914A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117286094A (zh) * | 2023-09-27 | 2023-12-26 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种人类器官来源外泌体的制备方法及其应用 |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110225661A1 (en) * | 2008-06-26 | 2011-09-15 | Spectrum Health Innovations, LLC | Method for treating and preventing radiation damage using genetically modified mesenchymal stem cells |
| CN103203025A (zh) * | 2012-01-13 | 2013-07-17 | 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 | 一种基因修饰的间充质干细胞在肺纤维化治疗中的应用 |
| CN106754817A (zh) * | 2016-11-03 | 2017-05-31 | 山西省生物研究所 | 一种重组自分泌运动因子的表达方法 |
| US20200113943A1 (en) * | 2017-06-05 | 2020-04-16 | The Regents Of The University Of California | Methods for enhanced production and isolation of cell-derived vesicles and treatment of inflammation and neurological damage |
| CN111281883A (zh) * | 2020-02-11 | 2020-06-16 | 卡替（上海）生物技术股份有限公司 | 牙髓间充质干细胞改善糖尿病的方法 |
| CN112423768A (zh) * | 2018-06-29 | 2021-02-26 | 北卡罗来纳州立大学 | 通过肺球体细胞分泌因子的吸入来进行治疗性肺修复 |
| CN112626031A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-04-09 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种基因修饰的牙髓干细胞及其制备方法和应用 |
| CN112675308A (zh) * | 2020-12-09 | 2021-04-20 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 抑制enpp2基因和/或蛋白表达的物质在制备治疗多发性骨髓瘤的药物中的应用 |
| CN112921003A (zh) * | 2021-02-02 | 2021-06-08 | 苏州大学 | 表达pd-l1分子的间充质干细胞来源外泌体及其制备方法与应用 |
| CN113181215A (zh) * | 2021-04-07 | 2021-07-30 | 因诺伟(北京)生物医疗科技有限公司 | 一种骨髓间充质干细胞外泌体制剂及促进造血损伤恢复的用途 |
-
2022
- 2022-02-28 CN CN202210185379.2A patent/CN114591914A/zh active Pending
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110225661A1 (en) * | 2008-06-26 | 2011-09-15 | Spectrum Health Innovations, LLC | Method for treating and preventing radiation damage using genetically modified mesenchymal stem cells |
| CN103203025A (zh) * | 2012-01-13 | 2013-07-17 | 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 | 一种基因修饰的间充质干细胞在肺纤维化治疗中的应用 |
| CN106754817A (zh) * | 2016-11-03 | 2017-05-31 | 山西省生物研究所 | 一种重组自分泌运动因子的表达方法 |
| US20200113943A1 (en) * | 2017-06-05 | 2020-04-16 | The Regents Of The University Of California | Methods for enhanced production and isolation of cell-derived vesicles and treatment of inflammation and neurological damage |
| CN112423768A (zh) * | 2018-06-29 | 2021-02-26 | 北卡罗来纳州立大学 | 通过肺球体细胞分泌因子的吸入来进行治疗性肺修复 |
| CN111281883A (zh) * | 2020-02-11 | 2020-06-16 | 卡替（上海）生物技术股份有限公司 | 牙髓间充质干细胞改善糖尿病的方法 |
| CN112675308A (zh) * | 2020-12-09 | 2021-04-20 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 抑制enpp2基因和/或蛋白表达的物质在制备治疗多发性骨髓瘤的药物中的应用 |
| CN112626031A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-04-09 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种基因修饰的牙髓干细胞及其制备方法和应用 |
| CN112921003A (zh) * | 2021-02-02 | 2021-06-08 | 苏州大学 | 表达pd-l1分子的间充质干细胞来源外泌体及其制备方法与应用 |
| CN113181215A (zh) * | 2021-04-07 | 2021-07-30 | 因诺伟(北京)生物医疗科技有限公司 | 一种骨髓间充质干细胞外泌体制剂及促进造血损伤恢复的用途 |
Non-Patent Citations (9)
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117286094A (zh) * | 2023-09-27 | 2023-12-26 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种人类器官来源外泌体的制备方法及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lim et al. | Intraglandular transplantation of bone marrow-derived clonal mesenchymal stem cells for amelioration of post-irradiation salivary gland damage | |
| Xu et al. | 3D spheroid culture enhances survival and therapeutic capacities of MSC s injected into ischemic kidney | |
| Jeong et al. | Human neural stem cell transplantation promotes functional recovery in rats with experimental intracerebral hemorrhage | |
| Nicolay et al. | Mesenchymal stem cells–A new hope for radiotherapy-induced tissue damage? | |
| Kerrigan et al. | Mesenchymal stromal cells for the delivery of oncolytic viruses in gliomas | |
| Zhang et al. | Hepatocyte growth factor gene-modified adipose-derived mesenchymal stem cells ameliorate radiation induced liver damage in a rat model | |
| Guo et al. | Menstrual blood-derived stem cells as delivery vehicles for oncolytic adenovirus virotherapy for colorectal cancer | |
| Amano et al. | Use of genetically engineered bone marrow-derived mesenchymal stem cells for glioma gene therapy | |
| Liu et al. | Therapeutic implications of mesenchymal stem cells transfected with hepatocyte growth factor transplanted in rat kidney with unilateral ureteral obstruction | |
| CN107858329B (zh) | 从脂肪中分离脂肪间充质干细胞的方法和使用的试液 | |
| Piryani et al. | Endothelial cell-derived extracellular vesicles mitigate radiation-induced hematopoietic injury | |
| CN114591914A (zh) | 一种重组间充质干细胞、功能增强型外泌体及其制备方法和应用 | |
| CN106566803A (zh) | 一种培养液及其应用和培养脐带间充质干细胞的方法 | |
| Wang et al. | Mesenchymal stem cell carriers enhance antitumor efficacy induced by oncolytic reovirus in acute myeloid leukemia | |
| WO2022068248A1 (zh) | 降低kat7含量或活性的物质在预防衰老和治疗肝纤维化中的应用 | |
| CN107119020B (zh) | 一种基于miR-9的肝损伤靶向间充质干细胞及其制备方法与应用 | |
| CN106606512B (zh) | 一种用于治疗心肌梗死的混合细胞制剂及制备方法与应用 | |
| CN117511886A (zh) | 冷冻休克处理的装载减毒沙门氏菌的单核细胞或巨噬细胞的制备方法及其应用 | |
| Zhang et al. | Treatment of radiation bone injury with transplanted hUCB-MSCs via Wnt/β-Catenin | |
| CN112522193B (zh) | 无血清培养基在分离和传代脂肪间充质干细胞中的用途 | |
| CN112300986B (zh) | 无血清培养基制备脂肪间充质干细胞的方法 | |
| CN115478048A (zh) | 培养脂肪间充质干细胞制备外泌体 | |
| CN112516147B (zh) | Azd3965的药物新用途 | |
| KR102247136B1 (ko) | 클로날 줄기세포를 포함하는 췌장염 치료용 약학적 조성물 | |
| KR102258890B1 (ko) | 클로날 줄기세포를 포함하는 이식편대숙주질환 치료용 약학적 조성물 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Wang Hua Inventor after: Kong Fanxuan Inventor after: Jin Jide Inventor after: Mao Zhuang Inventor after: Wu Zuze Inventor before: Wang Hua Inventor before: Kong Fanxuan Inventor before: Jin Jide Inventor before: Wu Zuze |
|
| CB03 | Change of inventor or designer information |