CN114544926A - 一种血清蛋白稳定剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种血清蛋白稳定剂,包括如下组分:非离子表面活性剂0.5~20g/L、生物缓冲剂1~30g/L、强极性多元醇2~40g/L、稳定剂1~50g/L、生物防腐剂0.01~5g/L。本发明提供了一种可供血清蛋白稀释,提供稳定检测环境,延长血清蛋白保存时间并且不明显影响检测准确度的稳定剂,试剂配制简单、价格相对低廉、绿色环保、无毒性、具有良好稳定性。
Description
技术领域
本发明涉及免疫测定法的检测试剂领域,尤其涉及一种血清蛋白稳定剂。
背景技术
血清蛋白是血浆里最丰富的蛋白质,由白蛋白、α1、α2、β球蛋白、纤维蛋白原和凝血酶原等混合组成,在人体血液中含量达20-40g/L。具有携带脂肪酸分子,各种药物分子以及其他许多不溶于水分子功能。因此血清蛋白的含量与人体健康息息相关,血清蛋白的检测及保存在临床上也具有很大的意义
血清蛋白作为一类生物大分子,其溶液不稳定,根据公开资料,部分蛋白质,尤其是与神经系统相关的蛋白质如β淀粉样蛋白、α-突触核蛋白等,由于其分子内存在高度疏水区域,且易形成β片层结构(β片层结构又称β折叠(β-pleated sheet)。β折叠是蛋白质的一种二级结构,在β折叠中,两条以上氨基酸链(肽链),或同一条肽链之间的不同部分形成平行或反平行排列,会形成β折叠。具体是蛋白质相邻肽链主链的N-H和C=O之间形成有规则的氢键,且氢键与β-折叠的长轴呈垂直关系,所以β折叠靠键间氢键维持稳定,容易发生团聚,形成聚集体,最终影响其稳定性,从而制约了对该类蛋白的研究与应用。另外血清蛋白易受外部的氧化、酸碱pH变化、重金属离子各种影响干扰,所以血清蛋白的保存在临床检测中局限较大。
如今在部分论文及资料中提到或涉及的解决方案有在血清蛋白溶液中加入强极性多元醇或可溶性盐溶液,得到较为稳定的血清蛋白溶液,但在部分仪器或部分检测方法中,依旧具有重复性不好或测定值与实际值有较大的偏差,该局限性导致此方法应用性不广。另有部分方法是加入含抗凝剂抗坏血酸溶液,此方法是利用抗坏血酸分子上的羟基与血清蛋白上的羟基相互键合,削弱水溶液血清蛋白分子内或几个血清蛋白大分子间氢键的作用,提高了血清蛋白水溶液的稳定性,解决了高浓度的血清蛋白水溶液室温存放过程中快速凝胶的问题,但是由于抗坏血酸自身的稳定性较差、易被氧化的特点,所以试剂保质期较短,市场应用推广不开,仅在实验室中临时配制使用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种血清蛋白稳定剂,以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:非离子表面活性剂0.5~20 g/L、生物缓冲剂1~30g/L、强极性多元醇2~40g/L、稳定剂1~50g/L、生物防腐剂0.01~5g/L。
优选的,非离子表面活性剂是分子中含有在水溶液中不离解的醚基为主要亲水基的表面活性剂,具有很高的表面活性,有良好的增溶、洗涤、抗静电、钙皂分散等性能,在水溶液中不电离,并且不受强电解质、强酸、强碱的影响,也不受硬水中钙、镁离子的影响,所以在临床上广泛应用。本发明中非离子表面活性剂选用吐温20或脂肪醇聚氧乙烯醚。
优选的,非离子表面活性剂选用吐温20或月桂醇聚氧乙烯醚,其组分为 2~5g/L。
优选的,生物缓冲剂选用三羟甲基氨基甲烷、3-(环己胺)-1-丙磺酸、3- 吗啉丙磺酸、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸或4-羟乙基哌嗪乙磺酸中的一种。
优选的,生物缓冲剂选用组分为5~20g/L的4-羟乙基哌嗪乙磺酸。
优选的,强极性多元醇选用甘油、木糖醇、一缩二乙二醇或山梨醇中的一种。
优选的,稳定剂选用抗坏血酸、烷基脲、精氨酸、乙酰胺、二甲脲或EDTA 中的一种。
优选的,稳定剂选用烷基脲、乙酰胺或二甲脲中的一种,其组分为2~ 15g/L。
优选的,生物防腐剂选用尼泊金酯类、异噻唑啉酮类或醛类中的一种。
优选的,生物防腐剂选用组分为0.05~0.2g/L的异噻唑啉酮类。
优选的,生物防腐剂选用异噻唑啉酮类,组分为0.05~0.2g/L。
与现有技术相比,本发明提供了一种血清蛋白稳定剂,具备以下有益效果:本发明提出的血清蛋白稳定剂检测环境稳定,能够延长血清蛋白保存时间的同时又不明显影响检测准确度;并且本发明中的稳定剂具有试剂配制简单、价格相对低廉、绿色环保、无毒性、具有良好稳定效果。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。通常在此处描述和示出的本发明实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。因此,以下对提供的本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围,而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明的实施例,本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例一
用pH值为7.0的无菌生理盐水配置含有50μg/ml的血清蛋白溶液。向该溶液中添加吐温20作为添加物,浓度为表1所示的各浓度(0.5~20g/L),在37℃分别保存6小时、24小时、2天、4天、7天后,用迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产的BS-300生化分析仪测定血清蛋白残留量。对测定的各样品进行3次测定,将测定的结果平均值与初始加入量做对比,根据蛋白剩余量计算保留率
表1
如表1所示,与空白对比,含有吐温20的样品血清蛋白保留率明显更高,因此判断吐温20能有效延长血清蛋白的保存时间,并且随着吐温20含量增加,血清蛋白保留率也逐渐增加,血清蛋白的稳定性增加。并根据图表判断,吐温20的含量达到2~5g/L时,血清蛋白的稳定性基本达到最高,再增加吐温20的含量意义不大。
实施例二
用pH值为7.0的无菌生理盐水配置含有50μg/ml的血清蛋白溶液。向该溶液中添加月桂醇聚氧乙烯醚作为添加物,浓度为表2所示的各浓度(0.5~ 20g/L),在37℃分别保存6小时、24小时、2天、4天、7天后,用迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产的BS-300生化分析仪测定血清蛋白残留量。对测定的各样品进行3次测定,将测定的结果平均值与初始加入量做对比,根据蛋白剩余量计算保留率
表2
如表2所示,与空白对比,含有月桂醇聚氧乙烯醚的样品血清蛋白保留率明显更高,因此判断月桂醇聚氧乙烯醚能有效延长血清蛋白的保存时间,并且随着月桂醇聚氧乙烯醚含量增加,血清蛋白保留率也逐渐增加,血清蛋白的稳定性增加。并根据图表判断,月桂醇聚氧乙烯醚的含量达到5g/L时,血清蛋白的稳定性基本达到上限,再增加月桂醇聚氧乙烯醚对血清蛋白的稳定性影响不大。通过实施例1和2可以了解到,非离子表面活性剂可以有效提高血清蛋白稳定性,并且优选含量2~5g/L。
实施例3
稳定剂1含有4-羟乙基哌嗪乙磺酸5~20g/L、二甲脲2~15g/L、一缩二乙二醇2~40g/L、苯并异噻唑啉酮0.02g/L,pH值调至7.2。
稳定剂2含有吐温20 2~5g/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸5~20g/L、二甲脲2~15g/L、一缩二乙二醇2~40g/L、苯并异噻唑啉酮0.02g/L,pH值调至7.2。
用pH值为7.0的无菌生理盐水配置含有50μg/ml的血清蛋白溶液。向该溶液中添加稳定剂1或2作为添加物,浓度5%,在37℃分别保存6小时、 24小时、2天、4天、7天后,用迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产的BS-300 生化分析仪测定血清蛋白残留量。对测定的各样品进行3次测定,将测定的结果平均值与初始加入量做对比,根据蛋白剩余量计算保留率
表3
如表3所示,与空白对比,含有稳定剂1和2的测试组中血清蛋白保留率均明显更高,稳定剂1中成分能有效的增强血清蛋白的稳定性,延长血清蛋白保留时间。对比测试组2和组3,在稳定剂1中加入吐温20后,吐温20 能协同稳定剂1的成分提高血清蛋白稳定性,进一步延长血清蛋白的保存时间,保护效果更好。
实施例4
配制含有吐温20 2~5g/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸5~20g/L、二甲脲2~ 15g/L、一缩二乙二醇2~40g/L、苯并异噻唑啉酮0.02g/L的稳定剂,pH值调至7.2
用pH值为7.0的无菌生理盐水配置含有50μg/ml的血清蛋白溶液。向该溶液中添加稳定剂作为添加物,浓度5%,分别在0℃、20℃和37℃保存7 天、15天、30天、60天后,用迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产的BS-300 生化分析仪测定血清蛋白残留量。对测定的各样品进行3次测定,将测定的结果平均值与初始加入量做对比,根据蛋白剩余量计算保留率
表4
如表4所示,在低温情况下,含有稳定剂的血清蛋白溶液能保存60天而基本不降解,在37℃下也能稳定7天,所以完全能满足临床检测的需求,为血清蛋白的保存提供条件。
实施例5
配制含有吐温20 2~5g/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸5~20g/L、二甲脲2~ 15g/L、一缩二乙二醇2~40g/L、苯并异噻唑啉酮0.02g/L的稳定剂,pH值调至7.2。
在室温分别存放1个月、2个月、3个月、6个月、9个月和12个月,然后测定pH值、溶液中微粒数来验证缓冲液的稳定性
表5
如表5所示,保存12个月,稳定剂的pH值稳定基本未发生变化。然后微粒数未增加,溶液中无微生物滋生,证明稳定剂的防腐性能未失效。以上参数表明本发明的稳定剂稳定性较好,可长期存放。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例,本领域的普通技术人员可以理解:在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由权利要求及其等同物限定。
Claims (10)
1.一种血清蛋白稳定剂,其特征在于,包括如下组分:非离子表面活性剂0.5~20g/L、生物缓冲剂1~30g/L、强极性多元醇2~40g/L、稳定剂1~50g/L、生物防腐剂0.01~5g/L。
2.根据权利要求1所述的一种血清蛋白稳定剂,其特征在于,非离子表面活性剂选用吐温20或脂肪醇聚氧乙烯醚。
3.根据权利要求2所述的一种血清蛋白稳定剂,其特征在于,非离子表面活性剂选用吐温20或月桂醇聚氧乙烯醚,其组分为2~5g/L。
4.根据权利要求1所述的一种血清蛋白稳定剂,其特征在于,生物缓冲剂选用三羟甲基氨基甲烷、3-(环己胺)-1-丙磺酸、3-吗啉丙磺酸、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸或4-羟乙基哌嗪乙磺酸中的一种。
5.根据权利要求4所述的一种血清蛋白稳定剂,其特征在于,生物缓冲剂选用组分为5~20g/L的4-羟乙基哌嗪乙磺酸。
6.根据权利要求1所述的一种血清蛋白稳定剂,其特征在于,强极性多元醇选用甘油、木糖醇、一缩二乙二醇或山梨醇中的一种。
7.根据权利要求1所述的一种血清蛋白稳定剂,其特征在于,稳定剂选用抗坏血酸、烷基脲、精氨酸、乙酰胺、二甲脲或EDTA中的一种。
8.根据权利要求7所述的一种血清蛋白稳定剂,其特征在于,稳定剂选用烷基脲、乙酰胺或二甲脲中的一种,其组分为2~15g/L。
9.根据权利要求1所述的一种血清蛋白稳定剂,其特征在于,生物防腐剂选用尼泊金酯类、异噻唑啉酮类或醛类中的一种。
10.根据权利要求1所述的一种血清蛋白稳定剂,其特征在于,生物防腐剂选用异噻唑啉酮类,组分为0.05~0.2g/L。
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