CN108318676B - 一种血红蛋白溶血剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种血红蛋白溶血剂及其应用，所述血红蛋白溶血剂包括：a)至少一种足够量的溶解红细胞的非离子表面活性剂，b)至少一种足够量的溶解乳糜颗粒的两性表面活性剂，c)至少一种与血红蛋白结合的阴离子表面活性剂。其中本试剂的pH值在5‑8之间。与血样混合后，可用于血红蛋白含量的测量，其中由于添加了能与乳糜颗粒反应的表面活性剂，消除了样本差异的干扰，保证了血红蛋白测量时的准确性，使临床使用范围更广，防止血红蛋白假性增高现象的出现。

Description

一种血红蛋白溶血剂及其应用
技术领域
本发明涉及血液细胞分析领域，主要涉及一种血红蛋白溶血剂及其应用，所述血红蛋白溶血剂可以对乳糜血中血红蛋白进行准确测定。
背景技术
血红蛋白的测定是血液携氧量的重要指标，乳糜血就是"泛着浮油的血"或称为"脂血"，血浆呈乳白色或混浊状。临床上乳糜血样的比例高达1％以上，由于乳糜血中含有大量乳糜颗粒，增加了血浆的浊度，会引起HGB测量结果出现假性偏高，给临床诊断带来困扰。准确对血液中的血红蛋白进行测量，是相关疾病诊断的重要依据。样本被稀释后加入溶血剂，溶解红细胞及乳糜颗粒，释放血红蛋白，血红蛋白与SDS结合形成衍生物，在特定波长下进行测定，吸光度的变化与血红蛋白含量成正比，最终达到对血红蛋白进行准确测量。
以前，国际血液学标准委员会推荐的对血红蛋白测定的标准方法是氰化血红蛋白法，该方法能够准确测量血红蛋白含量，但是KCN有剧毒，对人体、环境危害大。
后续，人们主要开发无氰溶血剂测定血红蛋白。现有相关技术如下：
现有技术一：中国专利，申请号93120387.2应用十二烷基硫酸钠、聚氧乙烯壬基苯醚及缓冲剂，测定血红蛋白含量，此方法对于大部分样本比较可靠，但是对乳糜血样本的测定结果不是很准确。
现有技术二：中国专利，申请号201210162144.8(烟台卓越生物技术有限责任公司)应用阳离子表面活性剂、酸化剂及配体对血红蛋白进行测定及白细胞进行三分类，此方法对于乳糜血标本的血红蛋白测定结果会偏高。
现有技术三：中国专利，申请号200710125208.6(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)应用阳离子表面活性剂、有机酸对血红蛋白进行测定及白细胞进行分类，此方法同样对于乳糜血标本的血红蛋白测定结果会偏高。
现有技术四：中国专利，应用阳离子表面活性剂、有机酸、螯合剂及血红蛋白稳定剂对血红蛋白进行测定，此方法同样对于乳糜血标本的血红蛋白测定结果会偏高，而且使用温度受限制。
以上现有技术都不能对乳糜血进行准确测量，血红蛋白会出现假性增高，影响临床诊断结果。因此，现有技术还有待于改进和发展。
发明内容
鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种血红蛋白溶血剂及其应用，旨在解决现有乳糜血中血红蛋白的测定结果不准确的问题。
本发明的技术方案如下：
一种血红蛋白溶血剂，其中，包括：
a、至少一种足够量的溶解红细胞的非离子表面活性剂，选自聚氧乙烯型、乙二醇型、吐温系列、曲拉通系列的非离子表面活性剂；
b、至少一种足够量的溶解乳糜颗粒的两性表面活性剂，选自甜菜碱型、咪唑啉型的两性表面活性剂；
c、至少一种与血红蛋白结合的阴离子表面活性剂；
血红蛋白溶血剂的pH值控制在5-8之间。
所述的血红蛋白溶血剂，其中，所述非离子表面活性剂的浓度为1-20g/L，两性表面活性剂的浓度为1-10g/L，阴离子表面活性剂的浓度为0.5-5.0g/L。
所述的血红蛋白溶血剂，其中，非离子表面活性剂的浓度为1-10g/L，两性表面活性剂的浓度为3-5g/L，阴离子表面活性剂的浓度为1-3g/L。
所述的血红蛋白溶血剂，其中，所述非离子表面活性剂的浓度为5g/L，两性表面活性剂的浓度为4g/L，阴离子表面活性剂的浓度为2.5g/L，pH值调节剂的浓度为0.2g/L。
所述的血红蛋白溶血剂，其中，所述聚氧乙烯型的非离子表面活性剂为式1所示的化合物：
R1-R2-(CH2CH2O)n-H 式1
其中，式1中R1是碳原子数8-16的烷基或者烯基；R2是氧原子或者-COO-或者
Figure BDA0001211889350000031
n是8-20的整数；
所述乙二醇型的非离子表面活性剂为式2所示的化合物：
Figure BDA0001211889350000032
其中，式2中n是10～30的整数；
吐温系列的非离子表面活性剂为吐温20、吐温60、吐温80；
曲拉通系列的非离子表面活性剂为曲拉通100、曲拉通405。
所述的血红蛋白溶血剂，其中，阴离子表面活性剂为十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠。
所述的血红蛋白溶血剂，其中，pH值调节使用的酸碱调节剂的浓度0.1-1g/L或者0.1-1mL/L。
所述的血红蛋白溶血剂，其中，酸碱调节剂为盐酸、甲酸、氢氧化钠或氢氧化钾。
一种血红蛋白溶血剂的应用，其中，将所述血红蛋白溶血剂用于制备血红蛋白含量的测定试剂。
所述的血红蛋白溶血剂的应用，其中，将所述血红蛋白溶血剂用于制备乳糜血的血红蛋白含量的测定试剂。
有益效果：本发明的血红蛋白溶血剂与血样混合后，可用于血红蛋白含量的测量，其中由于添加了能与乳糜颗粒反应的表面活性剂，消除了样本差异的干扰，保证了血红蛋白测量时的准确性，使临床使用范围更广，防止血红蛋白假性增高现象的出现。
附图说明
图1为本发明试剂与氰化血红蛋白法对照结果1。
图2为本发明试剂与氰化血红蛋白法对照结果2。
图3为本发明试剂与氰化血红蛋白法对照结果3。
图4为试剂与血液反应后进行扫描的紫外-可见吸收光谱图。
具体实施方式
本发明提供一种血红蛋白溶血剂及其应用，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明中所提供的一种血红蛋白溶血剂，主要包括：
a、至少一种足够量的溶解红细胞的非离子表面活性剂，可以选自聚氧乙烯型、乙二醇型、吐温系列、曲拉通系列的非离子表面活性剂；
b、至少一种足够量的溶解乳糜颗粒的两性表面活性剂，可以选自甜菜碱型、咪唑啉型的两性表面活性剂；
c、至少一种与血红蛋白结合的阴离子表面活性剂；主要可以为十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠；
血红蛋白溶血剂的pH值控制在5-8之间。
其中，所述聚氧乙烯型的非离子表面活性剂可以为式1所示的化合物：
R1-R2-(CH2CH2O)n-H (式1)
其中，式1中R1是碳原子数8-16的烷基或者烯基；R2是氧原子或者-COO-或者
Figure BDA0001211889350000051
n是8-20的整数。
所述乙二醇型的非离子表面活性剂可以为式2所示的化合物：
Figure BDA0001211889350000052
其中，式2中n是10～30的整数。
吐温系列的非离子表面活性剂可以为吐温20、吐温60、吐温80。
曲拉通系列的非离子表面活性剂可以为曲拉通100、曲拉通405。
进一步地，所述非离子表面活性剂的浓度为1-20g/L，两性表面活性剂的浓度为1-10g/L，阴离子表面活性剂的浓度为0.5-5.0g/L。优选地，非离子表面活性剂的浓度为1-10g/L，两性表面活性剂的浓度为3-5g/L，阴离子表面活性剂的浓度为1-3g/L。
pH值调节使用的酸碱调节剂主要包括盐酸、甲酸、氢氧化钠、氢氧化钾。pH值调节使用的酸碱调节剂的浓度0.1-1g/L或者0.1-1mL/L。优选地，酸碱浓度0.1-0.5g/L或者0.1-0.5mL/L。
所述血红蛋白溶血剂中还可以包括防腐剂、抗氧化剂及盐等。
更进一步地，所述非离子表面活性剂的浓度为5g/L，两性表面活性剂的浓度为4g/L，阴离子表面活性剂的浓度为2.5g/L，pH值调节剂的浓度为0.2g/L。
本发明中还提供最为优选的实施例方案，AEO-9的浓度为5g/L，十二烷基二甲基甜菜碱的浓度为4g/L，十二烷基硫酸钠的浓度为2.5g/L，氢氧化钠的浓度为0.2g/L。
将本发明的血红蛋白溶血剂与血样混合后，可用于血红蛋白含量的测量，其中由于添加了能与乳糜颗粒反应的表面活性剂，消除了样本差异的干扰，保证了血红蛋白测量时的准确性，使临床使用范围更广，防止血红蛋白假性增高现象的出现。因此，在本发明中，还提供所述的血红蛋白溶血剂的应用，将所述血红蛋白溶血剂用于血红蛋白含量的测定，用于制备血红蛋白含量的测定试剂；更为优选地，将所述血红蛋白溶血剂用于乳糜血的血红蛋白含量的测定，用于制备乳糜血的血红蛋白含量的测定试剂。
本发明的血红蛋白溶血剂的测量方法、测定结果和常用的氰化物血红蛋白测定方法对比有高度的相关性(见表1，表1为本发明血红蛋白溶血剂跟氰化物血红蛋白测定方法对比相关性)，表明本发明可以用于各种临床样本的血红蛋白含量的测量。其中每次测试样本量在100份以上，且含有乳糜血样本，本发明血红蛋白溶血剂与氰化血红蛋白测定方法对照结果图如图1～图3所示。本发明试剂与氰化血红蛋白法三次测量结果相关性系数都在0.99以上，表现出良好的相关性。。另外用稀释液稀释样本(稀释比例500：1)，按一定比例(加入的比例125:1)加入上述配方的溶血剂，测定紫外-可见吸收光谱图中在539nm处有最大吸收峰，如图4所示。
表1本发明血红蛋白溶血剂跟氰化物血红蛋白测定方法对比相关性
Figure BDA0001211889350000061
以下通过实施案例对本发明作进一步说明。
实施案例1
按照下列方案配制溶液：
Figure BDA0001211889350000062
将十二烷基磺酸钠、吐温20、十二烷基二甲基甜菜碱、氢氧化钠按上述比例混合，加去离子水至1L，室温下搅拌至溶解完全，用0.2μm滤膜进行过滤，在血细胞分析仪上进行测试，空白值满足要求，并测定血红蛋白含量结果见表3。
实施案例2
按照下列方案配制溶液：
Figure BDA0001211889350000071
/>
将十二烷基硫酸钠、曲拉通100、十八烷基二甲基甜菜碱、氢氧化钠按上述比例混合，加去离子水至1L，室温下搅拌至溶解完全，用0.2μm滤膜进行过滤，在血细胞分析仪上进行测试，空白值满足要求，并测定血红蛋白含量测定结果见表2。
实施案例3
按照下列方案配制溶液：
Figure BDA0001211889350000072
将十二烷基硫酸钠、AEO-9、十八烷基二甲基甜菜碱、氢氧化钠按上述比例混合，加去离子水至1L，室温下搅拌至溶解完全，用0.2μm滤膜进行过滤，在血细胞分析仪上进行测试，空白值满足要求，并测定血红蛋白含量结果见表3。
实施案例4
按照下列方案配制溶液：
Figure BDA0001211889350000073
Figure BDA0001211889350000081
将十二烷基硫酸钠、AEO-9、十二烷基二甲基甜菜碱、氢氧化钠按上述比例混合，加去离子水至1L，室温下搅拌至溶解完全，用0.2μm滤膜进行过滤，在血细胞分析仪上进行测试，空白值满足要求，并测定血红蛋白含量结果见表2。
实施案例5
按照下列方案配制溶液：
Figure BDA0001211889350000082
将十二烷基硫酸钠、AEO-9、十二烷基二甲基甜菜碱、氢氧化钠按上述比例混合，加去离子水至1L，室温下搅拌至溶解完全，用0.2μm滤膜进行过滤，在血细胞分析仪上进行测试，空白值满足要求，并测定血红蛋白含量结果见表3。
实施案例6
按照下列方案配制溶液：
Figure BDA0001211889350000083
将十二烷基硫酸钠、AEO-9、十二烷基二甲基甜菜碱、氢氧化钠按上述比例混合，加去离子水至1L，室温下搅拌至溶解完全，用0.2μm滤膜进行过滤，在血细胞分析仪上进行测试，空白值满足要求，并测定血红蛋白含量结果见表2。
实施案例7
按照下列方案配制溶液：
Figure BDA0001211889350000091
将十二烷基硫酸钠、AEO-9、十二烷基二甲基甜菜碱、氢氧化钠按上述比例混合，加去离子水至1L，室温下搅拌至溶解完全，用0.2μm滤膜进行过滤，在血细胞分析仪上进行测试，空白值满足要求，并测定血红蛋白含量结果见表3。
实施例8
按照下列方案配制溶液：
Figure BDA0001211889350000092
将十二烷基硫酸钠、AEO-9、十二烷基二甲基甜菜碱、氢氧化钠按上述比例混合，加去离子水至1L，室温下搅拌至溶解完全，用0.2μm滤膜进行过滤，在血细胞分析仪上进行测试，空白值满足要求，并测定血红蛋白含量结果见表2。
表2实施例测定结果
Figure BDA0001211889350000101
表3实施例测定结果
Figure BDA0001211889350000111
应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (6)

1.一种血红蛋白溶血剂，其特征在于，包括：
a、至少一种足够量的溶解红细胞的非离子表面活性剂，选自吐温20、曲拉通100、AEO-9；
b、至少一种足够量的溶解乳糜颗粒的两性表面活性剂，选自十二烷基二甲基甜菜碱、十八烷基二甲基甜菜碱；
c、至少一种与血红蛋白结合的阴离子表面活性剂，选自十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠；
血红蛋白溶血剂的pH值控制在5-8之间；
非离子表面活性剂的浓度为1-10g/L，两性表面活性剂的浓度为3-5g/L，阴离子表面活性剂的浓度为1-3g/L。
2.根据权利要求1所述的血红蛋白溶血剂，其特征在于，所述非离子表面活性剂的浓度为5g/L，两性表面活性剂的浓度为4g/L，阴离子表面活性剂的浓度为2.5g/L，pH值调节剂的浓度为0.2g/L。
3.根据权利要求1~2任一所述的血红蛋白溶血剂，其特征在于，pH值调节使用的酸碱调节剂的浓度0.1-1g/L或者0.1-1mL/L。
4.根据权利要求3所述的血红蛋白溶血剂，其特征在于，酸碱调节剂为盐酸、甲酸、氢氧化钠或氢氧化钾。
5.一种如权利要求1~4任一的血红蛋白溶血剂的应用，其特征在于，将所述血红蛋白溶血剂用于制备血红蛋白含量的测定试剂。
6.根据权利要求5所述的血红蛋白溶血剂的应用，其特征在于，将所述血红蛋白溶血剂用于制备乳糜血的血红蛋白含量的测定试剂。
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