CN103323582B - 一种白细胞分类溶血剂及其试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种血液细胞分析装置用的溶血剂。该溶血剂可以分解血液中的红细胞和血小板。本发明还公开了一种白细胞分类试剂盒，该白细胞分类试剂盒包括上述溶血剂、稀释液和抑制剂。本发明是适用于南京普朗医用设备有限公司生产的XFA9500全自动五分类血液细胞分析仪配套试剂，试剂中不含染料，对环境无污染，可直接检测淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞，分析方法快速准确。
Description
技术领域
本发明涉及血液细胞分析领域，具体涉及一种白细胞分类溶血剂及其试剂盒。
背景技术
正常的外周血白细胞中一般分为五个亚群，即淋巴细胞（LYM）、单核细胞（MON）、中性粒细胞（NEU）、嗜酸性粒细胞（EOS）和嗜碱性粒细胞（BASO）。在临床分析领域，针对不同的亚群进行准确地计数对于诊断和研究有着非常重要的作用，并且白细胞各个亚群含量的变化在临床被用作诊断和治疗的重要指标。如：病毒感染会造成淋巴细胞增多，而寄生虫感染和过敏性疾病则会引起嗜酸性粒细胞增多。
随着科学技术水平的不断发展和提高，目前医院多采用全自动血细胞分析仪对外周血进行白细胞分析。而阻抗法只能对白细胞进行三分群计数，无法达到五个亚群分别计数的水平。而对于五分类白细胞的识别普遍采用激光流式法，通过测定多角度散射光、荧光染料标记的荧光量或各种组合方法对白细胞进行分类计数。
美国专利5232857公开了一种对血液中白细胞分群进行计数的试剂，先通过一种非离子表面活性剂如皂苷溶解红细胞，然后在通过一种核酸染料如氯唑黑对细胞核进行染色，通过测定荧光强度和数量对白细胞进行分类计数。染料的使用容易造成环境污染。
美国专利4751179公开了一种试剂体系和自动细胞计数装置，其可确定白细胞的四种亚群，即淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞。但该体系需要将样本在60～75℃下加热，由此增加了设备的复杂性和检测成本，并且不能直接分析嗜碱性粒细胞。
发明内容
发明目的：本发明的目的是为了针对现有技术中的问题，提供一种不含染料、无污染、组成成分少、分析方法快速准确的白细胞分类用的溶血剂及其试剂盒。
技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了一种溶血剂，所述溶血剂包括非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、有机酸和防腐剂，所述非离子表面活性剂浓度为6.2～20.2g/L、阴离子表面活性剂浓度为1.2～2.0g/L、有机酸浓度为0.2～1.3ml/L和防腐剂浓度为0.3g/L～1g/L。
所述非离子表面活性剂为皂苷、曲拉通X-100、乙醇胺、椰子油酸、月桂基酚聚氧乙烯醚、十四烷基聚氧乙烯醚、异月桂醇聚醚-3、异月桂醇聚醚-6、月桂醇聚醚-7柠檬酸酯、月桂醇聚醚-21、吐温-20、吐温-60或吐温-80中的一种或几种。
所述阴离子表面活性剂为十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠或十二烷基硫酸钠中的一种或几种。
所述有机酸为甲酸、乙酸或丁二酸中的一种或几种。
所述溶血剂pH为2.0～4.0。
一种白细胞分类试剂盒，所述试剂盒包括：
a、上述的溶血剂；
b、稀释液，组成包括：氯化钠、硫酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和防腐剂，还包括EDTA-Na2或EDTA-K2；
c、抑制剂，组成包括：碱金属盐、含有碳酸根或碳酸氢根离子的盐、防腐剂。
所述氯化钠在稀释液中的浓度为4.0～8.0g/L，所述硫酸钠在稀释液中的浓度为5.0～15.0g/L，磷酸氢二钠在稀释液中的浓度为0.5～4.0g/L、磷酸二氢钠在稀释液中的浓度为0.1～3.0g/L，防腐剂在稀释液中的浓度为0.1～1.0g/L，EDTA-Na2或EDTA-K2在稀释液中的浓度为0.1～1.0g/L。
所述稀释液渗透压为250～350mOsm/kg。
所述碱金属盐在抑制剂中浓度为8.5g/L～11.4g/L，所述含有碳酸根或碳酸氢根离子的盐在抑制剂中浓度为6.4～7.5g/L，所述防腐剂在抑制剂中浓度为0.3g/L～0.5g/L。
所述碱金属盐为氯化钠或硫酸钠，所述含有碳酸根或碳酸氢根离子的盐为碳酸钠或碳酸氢钠，所述防腐剂为叠氮钠或Proclin300。
所述抑制剂pH为8.0～11.0。
在南京普朗医用设备有限公司生产的XFA9500内部，仪器将血样用稀释液稀释成血样：溶液（血样+稀释液）=1:32000的稀释样本A，通过阻抗法进行红细胞（WBC）和血小板（PLT）计数检测。与此同时，用稀释液将血液稀释，然后加入溶血剂，制成血样：溶液（血样+稀释液+溶血剂）=1:250的稀释样本B，将稀释样本B分别进入光电比色通道和激光鞘流通道，进行血红蛋白浓度以及淋巴细胞（LYM）、单核细胞(MON)、中性粒细胞(NEU)和嗜酸性粒细胞（EOS）的计数检测；再向稀释样本B中加入抑制剂形成最终血样：溶液（血样+稀释液+溶血剂+抑制剂）=1:228的稀释样本C，通过阻抗法进行白细胞（WBC）和嗜酸性粒细胞（BASO）计数检测。
有益效果：本发明是适用于南京普朗医用设备有限公司生产的XFA9500全自动五分类血液细胞分析仪配套试剂，试剂中不含染料，对环境无污染，可直接检测淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞(B)，分析方法快速准确。本发明公开的白细胞分类试剂盒包含至少一种非离子表面活性剂，用于快速溶解红细胞和血小板，进行白细胞总数和血红蛋白和嗜碱性粒细胞的分析计数；然后再加入一种抑制剂，抑制分类试剂对于白细胞的持续损伤，保持白细胞的各个亚群的形态，进行白细胞四分群的分析计数，分别是淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，同时也对嗜碱性粒细胞进行分类，最终实现白细胞的五分类计数。
附图说明
图1为本发明实施例1的白细胞分类试剂盒对白细胞进行四类细胞分散的散点图。
图2为本发明实施例2的白细胞分类试剂盒对白细胞进行四类细胞分散的散点图。
图3为本发明的嗜碱性粒细胞散点图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作更进一步的说明。
实施例1
一种溶血剂，其特征在于，所述溶血剂包括非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、有机酸和防腐剂，所述非离子表面活性剂浓度12.1g/L、阴离子表面活性剂浓度为2.0g/L、有机酸浓度为1.0ml/L和防腐剂浓度为0.5g/L。
所述非离子表面活性剂为月桂基酚聚氧乙烯醚，所述阴离子表面活性剂为十二烷基磺酸钠，所述有机酸甲酸和乙酸的混合物。所述防腐剂为叠氮钠。所述溶血剂pH为2.0。一种白细胞分类试剂盒，所述试剂盒包括：
a、上述的溶血剂；
b、稀释液，组成包括：氯化盐、硫酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和防腐剂，还包括EDTA-Na2；
c、抑制剂，组成包括：碱金属盐、含有碳酸根或碳酸氢根离子的盐、防腐剂。
所述防腐剂为叠氮钠。
所述氯化盐为氯化钠，所述氯化钠在稀释液中的浓度为4.2g/L，所述硫酸钠在稀释液中的浓度为10.2g/L，磷酸氢二钠在稀释液中的浓度为3.14g/L、磷酸二氢钠在稀释液中的浓度为0.89g/L，叠氮钠在稀释液中的浓度为0.5/L，EDTA-Na2在稀释液中的浓度为1.0g/L。
所述稀释液渗透压为250mOsm/kg。
所述碱金属盐在抑制剂中浓度为11.4g/L，所述含有碳酸根或碳酸氢根离子的盐在抑制剂中浓度为7.5g/L，所述防腐剂在抑制剂中浓度为0.5g/L。所述抑制剂pH为8.0。
所述碱金属盐为氯化钠，所述含有碳酸根或碳酸氢根离子的盐为碳酸氢钠，所述防腐剂为叠氮钠。
上述试剂盒在南京普朗医用设备有限公司生产的XFA9500上进行白细胞分类与测定，结果如图1和图3所示，图中，L表示淋巴细胞，M表示单核细胞，N表示中性性粒细胞，E表示嗜酸性粒细胞。G表示ghost，一般为红细胞残片。同时图3中可以看出嗜碱性粒细胞（B），因此该仪器在试剂盒的使用下，简单快捷的使得白细胞进行了五分类。
实施例2：
一种溶血剂，所述溶血剂包括非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、有机酸和防腐剂，所述非离子表面活性剂浓度6.2g/L、阴离子表面活性剂浓度为1.2g/L、有机酸浓度为1.3ml/L和防腐剂浓度为0.3g/L。
所述非离子表面活性剂为皂苷，所述阴离子表面活性剂为十二烷基苯磺酸钠，所述有机酸为甲酸。所述防腐剂为Proclin300。所述溶血剂pH为4.0。
一种白细胞分类试剂盒，所述试剂盒包括：
a、上述的溶血剂；
b、稀释液，组成包括：氯化盐、硫酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和防腐剂，还包括EDTA-Na2；
c、抑制剂，组成包括：碱金属盐、含有碳酸根或碳酸氢根离子的盐、防腐剂。
所述防腐剂为叠氮钠。所述氯化盐为氯化钾，所述氯化钾在稀释液中的浓度为5.4g/L，所述硫酸钠在稀释液中的浓度为9.6g/L，磷酸氢二钠在稀释液中的浓度为2.74g/L、磷酸二氢钠在稀释液中的浓度为0.68g/L，叠氮钠在稀释液中的浓度为0.5/L，EDTA-Na2在稀释液中的浓度为1.5g/L。所述稀释液渗透压为350mOsm/kg。所述碱金属盐在抑制剂中浓度为8.5g/L，所述含有碳酸根或碳酸氢根离子的盐在抑制剂中浓度为6.4g/L，所述防腐剂在抑制剂中浓度为0.5g/L。所述抑制剂pH为8.0。所述碱金属盐为硫酸钠，所述含有碳酸根或碳酸氢根离子的盐为碳酸氢钠，所述防腐剂为叠氮钠。上述试剂盒在南京普朗医用设备有限公司生产的XFA9500上进行白细胞分类与测定，结果如图2和图3所示，图中，L表示淋巴细胞，M表示单核细胞，N表示中性，E表示嗜酸性粒细胞。G表示ghost，一般为红细胞残片。同时图3中可以看出嗜碱性粒细胞（B），因此该仪器在试剂盒的使用下，简单快捷的使得白细胞进行了五分类。
实施例3
在南京普朗医用设备有限公司生产的XFA9500全自动五分类血液细胞分析仪上，采用本发明实施例1的试剂盒，同一支血测量20次的检测结果如表1所示：
表1
| 测量次数 | WBC | RBC | HGB | HCT | MCV | PLT | LYM% | MON% | NEU% | EOS% | BSA% |
| 1 | 8.51 | 4.55 | 151 | 47.3 | 95.6 | 156 | 24.5 | 7.8 | 63.3 | 3.0 | 1.4 |
| 2 | 8.60 | 4.51 | 151 | 47.6 | 95.5 | 155 | 24.7 | 7.5 | 63.4 | 3.0 | 1.4 |
| 3 | 8.66 | 4.50 | 152 | 47.5 | 95.7 | 154 | 24.9 | 7.3 | 63.3 | 2.9 | 1.6 |
| 4 | 8.59 | 4.49 | 151 | 47.8 | 95.4 | 154 | 24.2 | 7.4 | 64.5 | 2.4 | 1.5 |
| 5 | 8.4 | 4.46 | 153 | 47.9 | 95.1 | 153 | 23.9 | 7.5 | 65.0 | 2.9 | 0.7 |
| 6 | 8.57 | 4.52 | 150 | 47.5 | 95.6 | 158 | 23.6 | 7.6 | 64.4 | 2.9 | 1.5 |
| 7 | 8.58 | 4.55 | 151 | 47.3 | 95.5 | 150 | 24.0 | 7.8 | 64.1 | 3.6 | 0.5 |
| 8 | 8.64 | 4.44 | 152 | 47.6 | 95.8 | 161 | 24.4 | 7.2 | 64.8 | 2.8 | 0.8 |
| 9 | 8.52 | 4.48 | 150 | 47.2 | 95.5 | 153 | 24.7 | 7.3 | 65.1 | 2.5 | 0.4 |
| 10 | 8.48 | 4.53 | 151 | 47.6 | 95.4 | 158 | 24.1 | 7.0 | 63.6 | 3.8 | 1.5 |
| 11 | 8.55 | 4.53 | 151 | 47.5 | 95.3 | 157 | 24.5 | 7.6 | 64.2 | 2.4 | 1.3 |
| 12 | 8.63 | 4.59 | 151 | 47.9 | 95.6 | 159 | 24.6 | 7.6 | 63.4 | 3.6 | 0.8 |
| 13 | 8.64 | 4.44 | 152 | 47.5 | 95.5 | 160 | 24.1 | 7.8 | 63.3 | 3.5 | 1.3 |
| 14 | 8.59 | 4.48 | 153 | 47.3 | 95.8 | 161 | 25.1 | 7.2 | 63.2 | 3.2 | 1.3 |
| 15 | 8.52 | 4.58 | 150 | 47.3 | 95.5 | 154 | 25.2 | 7.3 | 63.5 | 2.5 | 1.5 |
| 16 | 8.54 | 4.52 | 150 | 47.6 | 95.2 | 153 | 24.9 | 7.2 | 63.3 | 3.3 | 1.3 |
| 17 | 8.59 | 4.56 | 152 | 47.5 | 96.1 | 155 | 24.7 | 6.9 | 63.5 | 3.2 | 1.7 |
| 18 | 8.55 | 4.56 | 151 | 47.6 | 95.4 | 165 | 24.6 | 6.8 | 62.8 | 3.4 | 2.4 |
| 19 | 8.66 | 4.55 | 151 | 47.1 | 95.8 | 158 | 24.7 | 7.4 | 63.4 | 3.4 | 1.1 |
| 20 | 8.67 | 4.51 | 152 | 48.0 | 95.3 | 154 | 24.3 | 7.1 | 63.4 | 3.6 | 1.6 |
| 平均值 | 8.57 | 4.52 | 151.3 | 47.5 | 95.5 | 156.4 | 24.5 | 7.4 | 63.8 | 3.1 | 1.3 |
| SD | 0.07 | 0.04 | 0.91 | 0.24 | 0.23 | 3.60 | 0.41 | 0.29 | 0.67 | 0.43 | 0.46 |
| CV% | 0.8 | 1.0 | 0.6 | 0.5 | 0.2 | 2.3 | 1.7 | 3.9 | 1.0 | 14.0 | 36.2 |
在法国ABX公司生产的PENTRA60全自动五分类血液细胞分析以上，同一支血测量20次的检测结果如表2所示：
表2：
从两台仪器各项数据的重复性上进行对比，本发明的试剂盒使用在各个项目上均优于同类仪器。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种白细胞分类试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
a、溶血剂；所述溶血剂包括非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、有机酸和防腐剂，所述非离子表面活性剂浓度为12.1 g/L、阴离子表面活性剂浓度为1.2 g/L 或2.0 g/L、有机酸浓度为1.0ml/L或1.3 ml/L和防腐剂浓度为0.3g/L或0.5g/L；所述非离子表面活性剂为月桂基酚聚氧乙烯醚；
b、稀释液，组成包括：氯化盐、硫酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和防腐剂，还包括EDTA-Na2或EDTA-K2；
c、抑制剂，组成包括：碱金属盐、含有碳酸根或碳酸氢根离子的盐、防腐剂。
2.根据权利要求1所述的白细胞分类试剂盒，其特征在于，所述氯化盐为氯化钠或氯化钾，所述氯化钠或氯化钾在稀释液中的浓度为4.0～8.0g/L，所述硫酸钠在稀释液中的浓度为5.0～15.0g/L，磷酸氢二钠在稀释液中的浓度为0.5～4.0g/L、磷酸二氢钠在稀释液中的浓度为0.1～3.0g/L，防腐剂在稀释液中的浓度为0.1～1.0g/L，EDTA-Na2或EDTA-K2在稀释液中的浓度为0.1～1.0g/L。
3.根据权利要求1或2所述的白细胞分类试剂盒，其特征在于，所述稀释液渗透压为250～350 mOsm/kg。
4.根据权利要求1所述的白细胞分类试剂盒，其特征在于，所述碱金属盐在抑制剂中浓度为8.5g/L~11.4g/L，所述含有碳酸根或碳酸氢根离子的盐在抑制剂中浓度为6.4~7.5g/L，所述防腐剂在抑制剂中浓度为0.3g/L ~0.5g/L。
5.根据权利要求1或4所述的白细胞分类试剂盒，其特征在于，所述碱金属盐为氯化钠或硫酸钠，所述含有碳酸根或碳酸氢根离子的盐为碳酸钠或碳酸氢钠，所述防腐剂为叠氮钠或Proclin 300。
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