CN101451931B - 血液稀释液及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于分析血液成分的血液稀释液，所述稀释液包括至少一种嘌呤类化合物或其盐；和/或至少一种碱金属盐和/或至少一种有机缓冲剂和/或无机缓冲剂。本发明的稀释液可以提供合适的电导和渗透压环境，保证在血液细胞分析仪检测时提供稀释及稳定细胞的作用，并且能够在室温条件下使未经处理的新鲜血液样本稳定放置2小时以上，可以通过血液细胞计数仪完成白细胞、红细胞、血小板和血红蛋白等各项血液检测指标的准确测定及白细胞三分群检测，并保证白细胞三分群分类特性不发生改变。

Description

血液稀释液及其使用方法
技术领域
本发明涉及一种血液稀释液及其使用方法，更具体地讲，涉及一种血液细胞分析仪用的血液稀释液及其使用方法。 
背景技术
正常人的血液及造血器官中，各种血细胞的数量有一定的正常范围，不同血细胞及细胞发育的不同阶段有一定形态结构特点。血常规检查项目包括血红蛋白(HGB)、红细胞计数(RBC)、白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)、血细胞比积(HCT)、红细胞平均容量(MCV)、红细胞平均血红蛋白量(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)等参数，用自动化仪器可以大大提高工作效率。 
目前很多仪器在给出细胞数据结果之外，同时提供细胞体积分布图形，这些可以表示出细胞群体分布情况的图形，称为细胞分布直方图。 
以白细胞为例，经过溶血剂处理后的白细胞可以根据其体积分布的直方图(图1)初步确认其相应的细胞群：第一群是小细胞区，主要是淋巴细胞。第二群是单个核细胞区，也被称为中间细胞(MID)，包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞，核象左移或白血病可有各阶段幼稚细胞及白血病细胞。第三群是大细胞区，主要是中性粒细胞(GRAN)。仪器根据各亚群占总体的比例计算出各亚群的百分率，如果与该标本的白细胞总数相乘，即得到各类细胞的绝对值。因此，白细胞直方图的形态对于临床诊断具有很重要的参考意义。稳定、真实的白细胞直方图可以帮助医生获得准确的临床信息。 
由于国外医疗机构血常规检测大多采用静脉抗凝血作为样本，国外血液细胞分析仪及试剂厂商大多关注全血模式下的计数及分类准确性，主要考虑试剂本身渗透压、电导等特性。但是国内有特定的习惯，在门诊等仅做血常规检测时经常采集末梢血作为检测样本，这就对预稀释模式下的检测提出了严格的要求。针对国内各级医疗机构对于末梢血采集后长期放置的情况，不能满足末梢血与稀释液混合后仍能长期稳定血液细胞的要求，尤其是不能满足长期稳定白细胞的要求，不能输出长时间稳定的白细胞直方图，出现分类错误，或者不分类的情况，为临床诊断带来困难，甚至提供错误信息。 
US 5,008,202是美国Sequoia Turner公司关于红细胞分析用稀释液的专利，除使用硫酸钠、氯化钠、EDTA调节电导和渗透压外，还使用了1，3-二甲基脲、1-羟基吡啶-2-硫酮和N-(2-乙酰氨基)-2-亚氨基二乙酸(ADA)稳定红细胞并对白细胞不造成影响； 
US 5,227,304也是美国Sequoia Turner公司的专利，包括等渗稀释液和等渗清洁液，全血稀释液和清洁液的体系，稀释液中主要使用咪唑有机溶液作为细胞稳定剂和维持细胞形态的缓冲剂，此外还包含抗菌剂、无机盐和pH调节剂； 
US5,935,857是美国库尔特公司有关血液稀释液的专利，该技术主要用于分析红细胞、白细胞、血小板和血红蛋白。其中不使用六氢-1，3，5-三(2-羟乙基)-s-三嗪，主要使用5-氯-2-甲基-异噻唑啉-3-酮、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、5-溴-5-硝基-1，3-二氧杂环己烷作为防腐剂，使用氨基苯甲酸酯及其衍生物作为细胞稳定剂； 
CN03116849.3是中国稀释液专利，其中使用盐酸普鲁卡因，并以磷酸取代ADA酸，还加入了表面活性剂起到弥散作用； 
CN200610078646.7是中国血液细胞分析仪用多功能稀释液及制备方法的专利，其中使用非离子表面活性剂，及山梨酸、苯甲酸、酯、盐、吡啶或者吡啶衍生物中的一种物质。 
现有技术中主要集中于提供合适的渗透压和电导环境，不涉及既可以长期保存血液样本，又可以用于血液细胞分析检测的稀释液。 
发明内容
本发明正是为了满足临床检测的要求，延长末梢血合理的放置时间，并在全血和预稀释模式下均能提供白细胞、红细胞、血小板和血红蛋白等各项血液检测指标的准确、稳定的计数及测定，并保证白细胞三分群分类特性不发生改变而专门研制的稀释液系统。 
本发明一方面提供了一种用于分析血液成分的血液稀释液，所述稀释液包括至少一种嘌呤类化合物或其盐。所述稀释液任选还包括a)至少一种碱金属盐；和/或b)至少一种有机缓冲剂和/或无机缓冲剂。 
本发明另一方面提供一种分析血液成分的方法，所述方法包括将本发明的血液稀释液、任选的溶血剂与血样混合的步骤。 
本发明经临床验证，可以提供真实准确的各项血常规参数测量结果，同时达到末梢血样采血后放置2小时以上保持白细胞分类稳定，无明显变化。还有，经本发明的血液稀释液稳定的血液样本适用于各种血液细胞分析仪，在各种测试条件下进行血液成分的分析测试。 
附图说明
图1是三分群血液分析仪测得的白细胞分布直方图 
图2-4分别为包含0.05g/L、0.5g/L以及25g/L咖啡因的本发明的稀释液的血样分析图； 
图5-6分别为pH5.0和9.5的包含咖啡因的本发明的稀释液的血样分析图； 
图7为包含氨茶碱的本发明的稀释液的血样分析图(右)，并与不含本发明稀释液的血样分析图(左)作对比； 
图8为包含茶碱的本发明的稀释液的血样分析图(右)，并与不含本发明稀释液的血样分析图(左)作对比； 
图9为包含尿酸的本发明的稀释液的血样分析图(右)，并与不含本发明稀释液的血样分析图(左)作对比； 
图10为包含咖啡因的本发明的稀释液的血样分析图(右)，并与不含本发明稀释液的血样分析图(左)作对比。 
图11为包含次黄嘌呤的本发明的稀释液的血样分析图(右)，并与不含本发明稀释液的血样分析图(左)作对比。 
具体实施方式
本发明的稀释液主要用于对血液样本进行稀释，提供电阻抗法检测适宜的导电环境，及合适的渗透压，同时稳定各类血液细胞，使其保持一定的形态，便于仪器检测获得准确的各参数计数结果；并且对白细胞进行稳定，使得白细胞形态出现较为明显的区分，可以通过阻抗法分为三个类群，从而实现白细胞的三分群计数。 
本发明所定义的“嘌呤类化合物”是指含有以下所示结构的嘧啶并咪唑稠环体系的化合物及其衍生物： 
Figure DEST_PATH_G200710199435320080430D000011
嘌呤的氨基和羟基衍生物广泛分布于动植物中。重要药物如可可碱、咖啡因、茶碱等与核酸的组成成分及代谢产物如黄嘌呤、次黄嘌呤、尿酸的结构相似，均为嘌呤类化合物。 
上述物质分别具有如下结构： 
Figure S2007101994353D00051
在本发明中，对血液成分，如白细胞、红细胞、血小板以及血红蛋白等，尤其是白细胞的稳定作用主要通过嘌呤类化合物实现。 
用于本发明血液稀释液的嘌呤类化合物或其盐，尤其是次黄嘌呤或黄嘌呤类化合物或其盐包括但不限于以下物质，及其衍生物和盐： 
1.咖啡因及其衍生物； 
2.茶碱及其衍生物，例如茶碱、氨茶碱、胆茶碱、二羟丙茶碱、多索茶碱、咖麻黄碱、巴米茶碱、可可碱、己酮可可碱、丙戊茶碱、登布茶碱等； 
3.次黄嘌呤或黄嘌呤及其衍生物，例如次黄嘌呤、黄嘌呤、1-甲基黄嘌呤、3-甲基黄嘌呤、7-甲基黄嘌呤、1，7-二甲基黄嘌呤等； 
4.尿酸及其衍生物，例如尿酸、1-甲基尿酸、1，3-二甲基尿酸、7-甲基尿酸等。 
本领域技术人员应当理解，以上所述化合物的衍生物及其盐包括但不限于该化合物与酸形成的盐、与碱形成的盐、酯、N-氧化物、互变异构体、溶剂合物、配合物、与其它基团以共价或非共价 连接形成的其它物质及其前体或代谢产物，只要其结构中包含以上所列嘌呤类化合物的结构或与所述结构类似。 
所述嘌呤类化合物在本发明稀释液中的含量可为0.05-25g/L的范围。其中优选嘌呤类化合物在本发明稀释液中的含量为0.3-10g/L。适用于本发明，能够为本发明的血液稀释液提供合适的导电性和渗透压的碱金属盐可选自碱金属硫酸盐、碱金属卤化物以及其他碱金属盐。其中优选硫酸钠、氯化钠等作为调节渗透压并提供导电性的成分；在血液细胞测试中，合适的电导率为16-22mS/cm；合适的渗透压为250-350mOsm/Kg。 
本发明的血液稀释液中还含有调整pH值用的缓冲剂。对于缓冲剂没有特定的要求，可以为常用的缓冲体系如甲酸、邻苯二甲酸、乙酸、磷酸、TRIS、硼酸、碳酸等。本发明中pH范围对分类没有明显影响，可以调整到5.0-9.5范围内。 
本发明还提供分析血液成分的方法，所述方法包括将本发明的血液稀释液、任选的溶血剂与血样混合，随后测试血液中各种成分例如白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板的各种参数的步骤。 
如对白细胞进行测试，优选先采用溶血剂溶解并除去其中的红细胞。 
实施例 
以下通过实施例对本发明的血液稀释液作进一步描述，但应理解，本发明并不限于此。 
在以下各制备本发明血液稀释液的实施例中，将各种成分混合即可得到本发明的血液稀释液。 
实施例1： 
稀释液： 
咖啡因                                0.05g 
硫酸钠                                10g 
氯化钠                                        3.5g 
磷酸盐缓冲溶液                                0.05M 
补水到                                        1L 
pH                                            7.0 
实施例2： 
稀释液： 
咖啡因                                        0.5g 
硫酸钠                                        10g 
氯化钠                                        3.5g 
磷酸盐缓冲溶液                                0.05M 
补水到                                        1L 
pH                                            7.0 
实施例3： 
稀释液： 
咖啡因                                        25g 
硫酸钠                                        10g 
氯化钠                                        3.5g 
磷酸盐缓冲溶液                                0.05M 
补水到                                        1L 
pH                                            7.0 
实施例4： 
稀释液： 
咖啡因                                        0.5g 
硫酸钠                                        10g 
氯化钠                                        3.5g 
磷酸盐缓冲溶液                            0.05M 
补水到                                    1L 
pH                                        5.0 
实施例5： 
稀释液： 
咖啡因                                    0.5g 
硫酸钠                                    10g 
氯化钠                                    3.5g 
磷酸盐缓冲溶液                            0.05M 
补水到                                    1L 
pH                                        9.5 
实施例6： 
稀释液： 
氨茶碱                                    0.5g 
硫酸钠                                    10g 
氯化钠                                    3.5g 
磷酸盐缓冲溶液                            0.05M 
补水到                                    1L 
pH                                        7.0 
对比实施例1： 
稀释液： 
N-(2-乙酰氨基)-2-亚氨基二乙酸(ADA)        0.1g 
二甲基脲                                  0.5g 
巯基吡啶氧化钠                            0.1g 
硫酸钠                                    10g 
氯化钠                                    3.5g 
磷酸盐缓冲溶液                            0.05M 
补水到                                    1L 
pH                                        7.0 
实施例7： 
稀释液： 
茶碱                                      0.5g 
硫酸钠                                    10g 
氯化钠                                    3.5g 
磷酸盐缓冲溶液                            0.05M 
补水到                                    1L 
pH                                        7.0 
对比实施例2： 
稀释液组成同对比实施例1。 
实施例8： 
稀释液： 
尿酸                                      0.5g 
硫酸钠                                    10g 
氯化钠                                    3.5g 
磷酸盐缓冲溶液                            0.05M 
补水到                                    1L 
pH                                        7.0 
对比实施例3： 
稀释液组成同对比实施例1。 
实施例9： 
稀释液： 
咖啡因                                    0.5g 
硫酸钠                                    10g 
氯化钠                                    3.5g 
磷酸盐缓冲溶液                            0.05M 
补水到                                    1L 
pH                                        7.0 
对比实施例4： 
稀释液组成同对比实施例1。 
实施例10： 
稀释液： 
次黄嘌呤                                  0.5g 
硫酸钠                                    10g 
氯化钠                                    3.5g 
磷酸盐缓冲溶液                            0.05M 
补水到                                    1L 
pH                                        7.0 
对比实施例5： 
稀释液组成同对比实施例1。 
实施例11 
将以上所得稀释液应用于血液分析。采用迈瑞BC-3000Plus(以及BC-1800、BC-2800、BC-2300等三分类血液细胞分析仪)型 血液细胞分析仪。本领域技术人员会理解，其他厂家或型号的血液细胞分析仪也适用于本发明。 
在血液中，各种细胞互相之间重叠以至于无法准确计数和测量体积的大小，所以就需要用稀释液对血样进行稀释，使稀释过的血细胞单个地通过测定孔，同时为计数提供导电环境。完成细胞个数和体积大小的测量。 
在全血模式下，全血和稀释液混合，形成第一浓度的稀释后样品。将第一浓度稀释后样品分成两部分。取一部分的第一浓度稀释后样品和一定量的稀释液混合，形成第二浓度的样品，用于红细胞和血小板的计数测量。剩下的第一浓度稀释后样品和一定量的溶血剂混合，形成第三浓度的样品，用于白细胞的计数测量。 
在预稀释模式下，增加一个机外预稀释的步骤——采末梢血和一定量的稀释液混合(机外稀释)，形成第一浓度的稀释后样品。之后步骤与全血模式一致。 
本发明血液稀释液适用于以上所有稀释步骤，尤其适用于预稀释模式下的稀释步骤，其中溶血剂可采用例如如下配方： 
溶血剂： 
三唑                                  10g 
十二烷基三甲基氯化铵(50％溶液)        35ml 
十四烷基三甲基溴化铵                  3.5g 
补水到                                1L 
pH                                    6.19 
得到各种末梢血样与本发明血液稀释液混合物后所测得的白细胞、红细胞以及血小板的直方图。参见说明书附图2-11。附图中测试样本均取自新鲜的医院临床末梢血样；附图2-6中对比均为同一支血液样本在新鲜取样(一般为取样5分钟左右)和取样后放置2小时(或以上)后的测试结果；附图7-11中对比结果分别为同一支血液样本在新鲜取样(一般为取样5分钟左右，不超过10分钟)和取样后 放置2小时(或以上)后的测试结果；同时左右两组分别为不同稀释液结果对比(见图表标题说明)。 
图2-4分别对应于实施例1-3，以咖啡因作为嘌呤类化合物有效成分，浓度分别为0.05g/L、0.5g/L以及25g/L。由图2-4可见，在将加入本发明稀释液的血样放置2小时后，得到的血液分析曲线与放置5分钟时的基本一致。 
图5、6分别对应于实施例4和5，以咖啡因作为嘌呤类化合物有效成分，采用的稀释液pH值分别为5.0和9.5。由图5、6可见，在pH为5.0-9.5下，本发明稀释液同样可有效稳定血样2小时以上。 
图7-11分别对应于实施例6-10，以氨茶碱、茶碱、尿酸、咖啡因以及次黄嘌呤作为嘌呤类化合物有效成分，同时采用N-(2-乙酰氨基)-2-亚氨基二乙酸(ADA)、二甲基脲及巯基吡啶氧化钠作为对比，即对比实施例(1-5)，进行稳定性测试。由图可见，本发明实施例6-9的血液稀释液在一段时间内(图7为2小时33分、图8为2小时3分、图9为3小时、图10为3小时30分、图11为2小时5分)能够有效地稳定血样各种成分，而对比实施例1-4的白细胞分析图在相应的时间已经发生改变。 
由以上具体实施例可见，本发明的血液稀释液能够有效稳定血样中红细胞、白细胞至少2小时以上，并在血液细胞分析仪上获得较好的结果。 
现已通过具体实施方式和实施例说明了本发明的技术方案，但是不应将其理解为对本发明范围的限制。本领域技术人员应当能够领会，所有对本发明技术方案的明显变形和等同方案都落入本发明的精神和范围内。 

Claims (11)

1.一种用于分析血液成分的血液稀释液，所述稀释液包括：
至少一种次黄嘌呤或黄嘌呤类化合物或其盐，
其中所述次黄嘌呤或黄嘌呤类化合物或其盐的浓度为0.05-25g/L。
2.一种用于分析血液成分的血液稀释液，所述稀释液包括：
a)至少一种次黄嘌呤或黄嘌呤类化合物或其盐；
b)至少一种碱金属盐；和/或
c)至少一种有机缓冲剂和/或无机缓冲剂，
其中所述次黄嘌呤或黄嘌呤类化合物或其盐的浓度为0.05-25g/L。
3.按照权利要求1或2中所述的稀释液，其中所述次黄嘌呤或黄嘌呤类化合物或其盐包括选自以下的物质：咖啡因、茶碱、氨茶碱、胆茶碱、二羟丙茶碱、多索茶碱、咖麻黄碱、巴米茶碱、可可碱、己酮可可碱、丙戊茶碱、登布茶碱、次黄嘌呤、黄嘌呤、1-甲基黄嘌呤、3-甲基黄嘌呤、7-甲基黄嘌呤、1，7-二甲基黄嘌呤、尿酸、1-甲基尿酸、1，3-二甲基尿酸、7-甲基尿酸，以及其衍生物和盐。
4.按照权利要求1或2所述的稀释液，其中所述次黄嘌呤或黄嘌呤类化合物或其盐的浓度为0.3-10g/L。
5.按照权利要求4所述的稀释液，其中所述次黄嘌呤或黄嘌呤类化合物或其盐的浓度为0.5g/L。
6.按照权利要求2所述的稀释液，其中所述碱金属盐选自：碱金属硫酸盐和碱金属卤化物。
7.按照权利要求2或6所述的稀释液，所述稀释液的电导率为16-22mS/cm，渗透压为250-350mOsm/Kg。
8.按照权利要求2或6所述的稀释液，其中所述有机缓冲剂和/或无机缓冲剂选自甲酸、邻苯二甲酸、乙酸、磷酸、TRIS、硼酸、碳酸及其盐。
9.按照权利要求2或6所述的稀释液，所述稀释液的pH值为5.0-9.5。
10.按照权利要求1、2、6中任一项所述的稀释液，其中所述血液成分选自白细胞、红细胞、血小板和血红蛋白。
11.一种分析血液成分的方法，所述方法包括将权利要求1或2所述的血液稀释液、任选的溶血剂与血样混合的步骤。
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