CN114509519B - 加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,其包括:样品制备;对天然单体香原料进行LC‑MS全扫描,得到TIC图;根据TIC图确定天然单体香原料的特征母离子;MRM参数优化,确定天然单体香原料的特征母离子的MRM优化参数;建立MRM‑IDA‑EPI条件;自建天然单体香原料EPI谱库;加料香精溯源分析,利用MRM‑IDA‑EPI条件,对加料香精样品进行扫描,根据自建谱库结合MRM优化参数定性分析,以MRM得到的定量子离子的峰面积进行半定量分析。本发明的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,实现天然单体香原料的有效表征,通过比对EPI二级谱图对加料香精中的部分天然组分进行有效溯源。
Description
技术领域
本发明涉及烟用香精香料成分剖析技术领域,尤其涉及一种加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法。
背景技术
卷烟调香技术是构建中式卷烟的核心技术,是形成卷烟产品特色的关键技术。为实现烟用香精香料的自我掌控,卷烟工业企业正大力推进功能性香基模块和单体香原料的应用开发研究等工作。其中,成分剖析技术为烟用香精香料的“成分可知”提供必要的分析手段,也是后续仿配香精的工作前提。GC-MS技术以其可以利用保留指数和标准谱库比对等两种手段对未知物进行定性的优势,在香精香料的成分分析工作中得到了广泛的应用。但也存在无法分析难挥发性化合物,样品基底复杂时信息干扰严重等问题。
烟用香精中的加料香精组成就较为复杂,除溶剂、少量挥发性成分外,还含有大量的糖、酸、色素、蜡质等成分。与加香香精主要赋予卷烟风格、增加香气的作用不同,加料香精主要的作用是提高舒适性、改善吃味品质等。也就是说,加料香精及其常用天然单体香原料中挥发性组分含量均较低,而且在卷烟产品中起作用的也主要是难挥发性化合物。LC及LC-MS技术可用来对复杂体系中的难挥发性化合物进行定量分析,如可以利用LC-MS/MS技术同时测定食用香精中的9种合成着色剂。但LC-MS技术与GC-MS相比,缺少相应的通用型谱库,一般需要购买标准品进行定性分析。
因此,亟需一种加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,以解决上述现有技术中的问题,能够利用基于MRM-IDA-EPI的LC-MS/MS技术实现了天然单体香原料的有效表征,无需购置标准样品,并通过比对EPI二级谱图对加料香精中的部分天然组分进行有效溯源。
本发明提供了一种加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,其中,包括:
样品制备:分别将天然单体香原料样品和待分析加料香精样品放入样品瓶中,经过超声分散、过滤、稀释后,储存备用;
LC-MS全扫描:对制备得到的天然单体香原料样品的样品溶液进行液质联用全扫描检测,得到总离子流色谱图;
根据所述总离子流色谱图确定所述天然单体香原料样品的特征母离子;
MRM参数优化:对制备得到的样品溶液,以针泵进样确定所述天然单体香原料样品的特征母离子的MRM优化参数;
MRM-IDA-EPI条件的建立:基于所述MRM优化参数,建立多反应监测扫描-信息依赖采集-增强子离子扫描的扫描条件;
自建天然单体香原料EPI谱库:利用建立的MRM-IDA-EPI条件,对制备得到的天然单体香原料样品的样品溶液进行扫描,得到特征母离子的EPI二级扫描质谱图,将该质谱图保存在自建谱库中;
加料香精溯源分析:利用建立的MRM-IDA-EPI条件,对制备得到的待分析加料香精样品的样品溶液进行扫描,根据保存在自建谱库中的EPI二级谱图结合MRM优化参数进行定性分析,并以MRM得到的定量子离子的峰面积进行半定量分析。
如上所述的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,其中,优选的是,所述样品制备,具体包括:
称取0.1g天然单体香原料样品和待分析加料香精样品于40mL样品瓶中,加入10mL水后加盖超声30min,静置取上清液,过0.22μm水相滤膜后,用纯水稀释五倍,储存于2mL色谱小瓶中备用。
如上所述的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,其中,优选的是,所述LC-MS全扫描,具体包括:
在LC-MS检测时,采用的色谱条件为:色谱柱:Poroshell 120EC-C18柱,规格为100m×4.6mm,2.7μm;流动相:0.1%甲酸水溶液(A),甲醇(B);流速:0.4mL/min;柱温:30℃;进样量:2μL;梯度洗脱程序:0~8min,95%~80%A;8~12min,80%~70%A;12~15min,70%~50%A;15~20min,50%~5%A;20~25min,5%A;25~35min,5%~95%A;35~40min,95%A;
采用的质谱条件为:离子源:ESI源,负离子模式;喷雾电压:-4500V;离子源温度:400℃;雾化气压力50psi,气帘气压力35psi,辅助加热气压力50psi;去簇电压:-100V;扫描方式:Q1全扫描,扫描范围80-1000Da。
如上所述的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,其中,优选的是,一种天然单体香原料样品所对应的特征母离子的数量为2-3个。
如上所述的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,其中,优选的是,所述根据所述总离子流色谱图确定所述天然单体香原料样品的特征母离子,具体包括:
将对天然单体香原料样品进行全扫描得到的总离子流色谱图,与对空白样品进行全扫描得到的总离子流色谱图进行对比,以选定差异色谱峰;
通过对比差异色谱峰的前后基线与差异色谱峰本身的峰形,在差异色谱峰中选定差异离子为特征母离子。
如上所述的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,其中,优选的是,所述根据所述总离子流色谱图确定所述天然单体香原料样品的特征母离子,具体包括:
通过文献资料库获得天然单体香原料样品中的若干主要特征组分;
将各主要特征组分的[M-H]-峰作为备选离子对所述总离子流色谱图进行提取;
若提取的备选离子对应的色谱的峰形良好且响应较高,则将该备选离子确定为所述天然单体香原料样品的特征母离子。
如上所述的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,其中,优选的是,所述MRM优化参数至少包括保留时间、子离子、碰撞能量和去簇电压。
如上所述的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,其中,优选的是,所述MRM-IDA-EPI条件的建立,具体包括:
采用的色谱条件为:色谱柱:Poroshell 120EC-C18柱,规格为100m×4.6mm,2.7μm;流动相:0.1%甲酸水溶液(A),甲醇(B);流速:0.4mL/min;柱温:30℃;进样量:2μL;梯度洗脱程序:0~8min,95%~80%A;8~12min,80%~70%A;12~15min,70%~50%A;15~20min,50%~5%A;20~25min,5%A;25~35min,5%~95%A;35~40min,95%A;
质谱条件为:扫描方式为MRM-IDA-EPI,其中,在MRM中输入特征母离子及其MRM优化参数,碰撞气流量设置为“High”;在IDA中输入信号响应阈值;在EPI中输入扫描范围。
如上所述的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,其中,优选的是,所述加料香精溯源分析,具体包括:
利用建立的MRM-IDA-EPI条件,对制备得到的待分析加料香精样品的样品溶液进行扫描,得到待分析加料香精样品的EPI二级扫描质谱图;
将待分析加料香精样品的EPI二级扫描质谱图与保存在自建谱库中的天然单体香原料样品的特征母离子的EPI二级扫描质谱图进行比对,结合MRM优化参数中的保留时间和特征母离子进行定性分析;
通过外标法对以MRM得到的定量子离子的峰面积进行半定量分析。
如上所述的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,其中,优选的是,所述待分析加料香精样品包括调香人员经感官评吸法确定其内含有预设天然单体香原料的加料香精样品,或调香人员使用预设天然单体香原料自配得到的加料香精样品。
本发明提供一种加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,利用QTRAP质谱独有的MRM-IDA-EPI技术,结合EPI自建谱库检索匹配确证检出物信息,实现了加料香精中部分天然单体香原料的定性和半定量分析,为香精香料“成分可知”提供了一种有效的溯源分析手段;利用基于MRM-IDA-EPI的LC-MS/MS技术实现了天然单体香原料的有效表征,无需购置标准样品,并通过比对EPI二级谱图对加料香精中的部分天然组分进行有效溯源;给出了特征母离子的选定原则,实际应用效果较好;建立的EPI二级扫描质谱图的谱库,可随着天然单体香原料样品的增加而扩展,真正实现谱库的检索与确认功能;利用EPI二级谱图和MRM定量信息,可同时实现加料香精中部分天然单体香原料的定性分析和半定量分析,为加料香精的成分剖析提供了有力的分析手段;本发明为复杂混合物体系中的天然组分溯源分析工作提供了可借鉴的分析方法,无需对天然组分进行准确定性,即可实现复杂体系的精准解析。
附图说明
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合附图对本发明作进一步描述,其中:
图1为本发明提供的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法的实施例的流程图;
图2为本发明提供的甘草浸膏样品中主要成分特征母离子的EPI二级扫描质谱图;
图3为本发明提供的酸梅提取物样品中主要成分特征母离子的EPI二级扫描质谱图。
具体实施方式
现在将参照附图来详细描述本公开的各种示例性实施例。对示例性实施例的描述仅仅是说明性的,决不作为对本公开及其应用或使用的任何限制。本公开可以以许多不同的形式实现,不限于这里所述的实施例。提供这些实施例是为了使本公开透彻且完整,并且向本领域技术人员充分表达本公开的范围。应注意到:除非另外具体说明,否则在这些实施例中阐述的部件和步骤的相对布置、材料的组分、数字表达式和数值应被解释为仅仅是示例性的,而不是作为限制。
本公开中使用的“第一”、“第二”:以及类似的词语并不表示任何顺序、数量或者重要性,而只是用来区分不同的部分。“包括”或者“包含”等类似的词语意指在该词前的要素涵盖在该词后列举的要素,并不排除也涵盖其他要素的可能。“上”、“下”等仅用于表示相对位置关系,当被描述对象的绝对位置改变后,则该相对位置关系也可能相应地改变。
在本公开中,当描述到特定部件位于第一部件和第二部件之间时,在该特定部件与第一部件或第二部件之间可以存在居间部件,也可以不存在居间部件。当描述到特定部件连接其它部件时,该特定部件可以与所述其它部件直接连接而不具有居间部件,也可以不与所述其它部件直接连接而具有居间部件。
本公开使用的所有术语(包括技术术语或者科学术语)与本公开所属领域的普通技术人员理解的含义相同,除非另外特别定义。还应当理解,在诸如通用字典中定义的术语应当被解释为具有与它们在相关技术的上下文中的含义相一致的含义,而不应用理想化或极度形式化的意义来解释,除非这里明确地这样定义。
对于相关领域普通技术人员已知的技术、方法和设备可能不作详细讨论,但在适当情况下,技术、方法和设备应当被视为说明书的一部分。
如图1所示,本发明实施例提供了一种加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法在实际执行过程中,具体包括如下步骤:
步骤S1、样品制备:分别将天然单体香原料样品和待分析加料香精样品放入样品瓶中,经过超声分散、过滤、稀释后,储存备用。
具体地,称取0.1g天然单体香原料样品和待分析加料香精样品于40mL样品瓶中,加入10mL水后加盖超声30min,静置取上清液,过0.22μm水相滤膜后,用纯水稀释五倍,储存于2mL色谱小瓶中备用。
在称取样品时,采用型号为GB204的电子天平,来自美国Mettler公司。在超声时,采用苏州昆山公司的超声波发生器;超纯水来自美国Millipore公司的Mill-Q超纯水系统;0.22μm水相滤膜来自中国Dikma公司。
其中,天然单体香原料样品可以为甘草浸膏A、酸梅提取物B,均来自浙江中烟。需要说明的是,本发明对天然单体香原料样品的种类不作具体限定。
所述待分析加料香精样品包括调香人员经感官评吸法确定其内含有预设天然单体香原料的加料香精样品,或调香人员使用预设天然单体香原料自配得到的加料香精样品。
在本发明中,待分析加料香精样品包括加料香精#1和加料香精#2,均来自浙江中烟。其中,加料香精#1为调香人员经感官评吸推测其中含有甘草浸膏的样品,加料香精#2为调香人员使用酸梅提取物B自配得到的样品。
步骤S2、LC-MS(液质联用)全扫描:对制备得到的天然单体香原料样品的样品溶液进行液质联用全扫描检测,得到总离子流色谱图(TIC图)。
具体地,在LC-MS检测时,采用的色谱条件为:色谱柱:Poroshell 120EC-C18柱,规格为100m×4.6mm,2.7μm;流动相:0.1%甲酸水溶液(A),甲醇(B);流速:0.4mL/min;柱温:30℃;进样量:2μL;梯度洗脱程序:0~8min,95%~80%A;8~12min,80%~70%A;12~15min,70%~50%A;15~20min,50%~5%A;20~25min,5%A;25~35min,5%~95%A;35~40min,95%A。
采用的质谱条件为:离子源:ESI源,负离子模式;喷雾电压:-4500V;离子源温度:400℃;雾化气压力50psi,气帘气压力35psi,辅助加热气压力50psi;去簇电压:-100V;扫描方式:Q1全扫描,扫描范围80-1000Da。
色谱仪的型号为1260液相色谱,来自美国Agilent公司,质谱仪的型号为Qtrap5500串接四极杆/线性离子阱质谱仪,来自美国AB公司;
步骤S3、根据所述总离子流色谱图确定所述天然单体香原料样品的特征母离子。
其中,示例性地,一种天然单体香原料样品所对应的特征母离子的数量为2-3个。需要说明的是,本发明对特征母离子的数量不作具体限定。
在本发明的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法的一种实施方式中,所述步骤S3具体可以包括:
步骤S31、将对天然单体香原料样品进行全扫描得到的总离子流色谱图,与对空白样品进行全扫描得到的总离子流色谱图进行对比,以选定差异色谱峰。
步骤S32、通过对比差异色谱峰的前后基线与差异色谱峰本身的峰形,在差异色谱峰中选定差异离子为特征母离子。
通过文献检索没有查到酸梅提取物样品中的主要组分信息,特征母离子选定过程如下:对全扫描得到的TIC图,与空白样品进行对比,以选定差异峰;对差异色谱峰,通过对比峰前后基线与峰本身的质谱图,选定差异离子为特征母离子。选择499、461这两个离子作为酸梅提取物的特征母离子。
在本发明的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法的另一种实施方式中,所述步骤S3具体可以包括:
步骤S31'、通过文献资料库获得天然单体香原料样品中的若干主要特征组分;
步骤S32'、将各主要特征组分的[M-H]-峰作为备选离子对所述总离子流色谱图进行提取;
步骤S33'、若提取的备选离子对应的色谱的峰形良好且响应较高,则将该备选离子确定为所述天然单体香原料样品的特征母离子。
通过文献调研,可知甘草浸膏中含有的主要特征组分包括甘草苷(M=418)、甘草酸(M=822)、甘草次酸(M=470)等,以这三个组分的[M-H]-峰作为备选离子对TIC谱图进行提取,发现峰形良好且响应较高,因此将417、821、469等三个离子选定为甘草浸膏的特征母离子。
通过以上分析可知,在本发明中,特征母离子的选取原则有两个。其一,如果可以通过查阅文献资料获得该天然单体香原料中的主要特征组分,即可用该组分的[M-H]-峰作为备选离子对TIC谱图进行提取,若峰形良好且响应较高,即选定该离子。其二,如果对某种天然单体香原料,通过文献无法查找到该样品中的主要组分信息,就按以上全扫描步骤来选取特征母离子,其选取原则为:特异性好、差异峰保留较好、母离子m/z大、响应高。其中,不建议选出峰时间较早的差异峰,主要是因为在这个区间范围内物质峰重叠的概率较高,在峰不纯粹的前提下选择特征母离子的难度较大。特异性好包含两个层面的意义,其一是该母离子在提取离子图上的色谱峰明显,物质内部特异性好;其二是该母离子仅在某一种天然单体香原料中出明显色谱峰,这样有利于后期多种天然组分的溯源分析。
步骤S4、MRM(多反应监测扫描)参数优化:对制备得到的样品溶液,以针泵进样确定所述天然单体香原料样品的特征母离子的MRM优化参数。
所述MRM优化参数至少包括保留时间、子离子、碰撞能量和去簇电压。对制备得到的甘草浸膏样品溶液和酸梅提取物样品溶液,取0.5mL以针泵进样摸索其特征母离子的子离子、碰撞能量、去簇电压等参数。甘草浸膏样品溶液优化后的具体参数见表1,酸梅提取物样品溶液优化后的具体参数见表2。
表1甘草浸膏中主要组分的MRM参数信息
表2酸梅提取物中主要组分的MRM参数信息
步骤S5、MRM-IDA-EPI条件的建立:基于所述MRM优化参数,建立多反应监测扫描-信息依赖采集-增强子离子扫描的扫描条件。
串接四极杆/线性离子阱质谱(QTRAP)的第三根四极杆同时可以作为离子阱使用,因此大大增强了扫描灵敏度,如EPI(增强子离子扫描)模式下其灵敏度比普通的三重四极杆高500倍以上,这就为LC-MS/MS技术中获取目标样品的二级扫描质谱图提供了必要工具。MRM(多反应监测扫描)-IDA(信息依赖采集)-EPI(增强子离子扫描)模式可实现同时定性定量分析。
具体地,采用的色谱条件为:色谱柱:Poroshell 120EC-C18柱,规格为100m×4.6mm,2.7μm;流动相:0.1%甲酸水溶液(A),甲醇(B);流速:0.4mL/min;柱温:30℃;进样量:2μL;梯度洗脱程序:0~8min,95%~80%A;8~12min,80%~70%A;12~15min,70%~50%A;15~20min,50%~5%A;20~25min,5%A;25~35min,5%~95%A;35~40min,95%A;
质谱条件为:扫描方式为MRM-IDA-EPI,其中,在MRM中输入特征母离子及其MRM优化参数,碰撞气流量设置为“High”;在IDA中输入信号响应阈值;在EPI中输入扫描范围。
示例性地,可在MRM中输入特征母离子及其子离子、碰撞能量、去簇电压等信息。IDA中输入的信号响应阈值可以理解为响应超过阈值时触发EPI,此处选择阈值为20000cps。EPI中输入的扫描范围一般从50Da开始,到只需包括MRM表中最大母离子即可。在本发明中,EPI中输入的扫描范围为50-850Da。
步骤S6、自建天然单体香原料EPI谱库:利用建立的MRM-IDA-EPI条件,对制备得到的天然单体香原料样品的样品溶液进行扫描,得到特征母离子的EPI二级扫描质谱图,将该质谱图保存在自建谱库中。
利用步骤S5中建立的MRM-IDA-EPI条件,分别对甘草浸膏样品和酸梅提取物样品进行扫描,得到特征母离子的EPI二级扫描质谱图(分别见图2和图3),将该质谱图保存在自建谱库中。
步骤S7、加料香精溯源分析:利用建立的MRM-IDA-EPI条件,对制备得到的待分析加料香精样品的样品溶液进行扫描,根据保存在自建谱库中的EPI二级谱图结合MRM优化参数进行定性分析,并以MRM得到的定量子离子的峰面积进行半定量分析。
在本发明的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法的一种实施方式中,所述步骤S7具体可以包括:
步骤S71、利用建立的MRM-IDA-EPI条件,对制备得到的待分析加料香精样品的样品溶液进行扫描,得到待分析加料香精样品的EPI二级扫描质谱图。
步骤S72、将待分析加料香精样品的EPI二级扫描质谱图与保存在自建谱库中的天然单体香原料样品的特征母离子的EPI二级扫描质谱图进行比对,结合MRM优化参数中的保留时间和特征母离子进行定性分析。
步骤S73、通过外标法对以MRM得到的定量子离子的峰面积进行半定量分析。
对制备得到的加料香精#1样品的样品溶液用步骤S5的MRM-IDA-EPI条件进行仪器分析,以EPI二级谱图结合保留时间、特征母离子等进行定性,发现甘草苷、甘草酸、甘草次酸等组分均有检出,由此判定加料香精#1中含有甘草浸膏。以MRM得到的定量子离子(821.4/351)的峰面积进行外标法定量,得到其中甘草浸膏的添加量为11.5%。至此完成了加料香精#1中甘草浸膏的溯源分析。
对制备得到的加料香精#2样品的样品溶液用步骤S5的MRM-IDA-EPI方法进行仪器分析,以EPI二级谱图结合保留时间、特征母离子等进行定性,发现酸梅主成分1-2等组分均有检出,由此判定加料香精#2中含有酸梅提取物。以MRM得到的定量子离子(461/111)的峰面积进行外标法定量,得到其中酸梅提取物的添加量为10%。至此完成了加料香精#2中酸梅提取物的溯源分析。
在本发明中,首先对天然单体香原料处理后,用LC-MS的全扫描模式寻找其差异峰上的特征母离子;然后利用针泵进样模式对该特征母离子进行质谱参数摸索,得到其MRM参数;编辑MRM-IDA-EPI方法后,对天然单体香原料进行扫描,得到相应特征峰上该母离子的EPI二级扫描质谱图,将该质谱图加入自建谱库;对加料香精样品进行分析,得到的EPI二级质谱图与天然单体香原料的谱图进行比对,就可以判定加料香精样品中是否含有该天然单体香原料,如果确定有的话,还可以利用MRM定量子离子的峰面积来推测香精样品中该天然香原料的大致含量。
本发明实施例提供的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,利用QTRAP质谱独有的MRM-IDA-EPI技术,结合EPI自建谱库检索匹配确证检出物信息,实现了加料香精中部分天然单体香原料的定性和半定量分析,为香精香料“成分可知”提供了一种有效的溯源分析手段;利用基于MRM-IDA-EPI的LC-MS/MS技术实现了天然单体香原料的有效表征,无需购置标准样品,并通过比对EPI二级谱图对加料香精中的部分天然组分进行有效溯源;给出了特征母离子的选定原则,实际应用效果较好;建立的EPI二级扫描质谱图的谱库,可随着天然单体香原料样品的增加而扩展,真正实现谱库的检索与确认功能;利用EPI二级谱图和MRM定量信息,可同时实现加料香精中部分天然单体香原料的定性分析和半定量分析,为加料香精的成分剖析提供了有力的分析手段;本发明为复杂混合物体系中的天然组分溯源分析工作提供了可借鉴的分析方法,无需对天然组分进行准确定性,即可实现复杂体系的精准解析。
至此,已经详细描述了本公开的各实施例。为了避免遮蔽本公开的构思,没有描述本领域所公知的一些细节。本领域技术人员根据上面的描述,完全可以明白如何实施这里公开的技术方案。
虽然已经通过示例对本公开的一些特定实施例进行了详细说明,但是本领域的技术人员应该理解,以上示例仅是为了进行说明,而不是为了限制本公开的范围。本领域的技术人员应该理解,可在不脱离本公开的范围和精神的情况下,对以上实施例进行修改或者对部分技术特征进行等同替换。本公开的范围由所附权利要求来限定。
Claims (7)
1.一种加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,其特征在于,包括:
样品制备:分别将天然单体香原料样品和待分析加料香精样品放入样品瓶中,经过超声分散、过滤、稀释后,储存备用;
LC-MS全扫描:对制备得到的天然单体香原料样品的样品溶液进行液质联用全扫描检测,得到总离子流色谱图;
根据所述总离子流色谱图确定所述天然单体香原料样品的特征母离子;
MRM参数优化:对制备得到的样品溶液,以针泵进样确定所述天然单体香原料样品的特征母离子的MRM优化参数;
MRM-IDA-EPI条件的建立:基于所述MRM优化参数,建立多反应监测扫描-信息依赖采集-增强子离子扫描的扫描条件;
自建天然单体香原料EPI谱库:利用建立的MRM-IDA-EPI条件,对制备得到的天然单体香原料样品的样品溶液进行扫描,得到特征母离子的EPI二级扫描质谱图,将该质谱图保存在自建谱库中;
加料香精溯源分析:利用建立的MRM-IDA-EPI条件,对制备得到的待分析加料香精样品的样品溶液进行扫描,根据保存在自建谱库中的EPI二级谱图结合MRM优化参数进行定性分析,并以MRM得到的定量子离子的峰面积进行半定量分析;
所述样品制备,具体包括:
称取0.1g天然单体香原料样品和待分析加料香精样品于40mL样品瓶中,加入10mL水后加盖超声30min,静置取上清液,过0.22μm水相滤膜后,用纯水稀释五倍,储存于2mL色谱小瓶中备用;
所述LC-MS全扫描,具体包括:
在LC-MS检测时,采用的色谱条件为:色谱柱:Poroshell 120EC-C18柱,规格为100m×4.6mm,2.7μm;流动相:0.1%甲酸水溶液A,甲醇B;流速:0.4mL/min;柱温:30℃;进样量:2μL;梯度洗脱程序:0~8min,95%~80%A;8~12min,80%~70%A;12~15min,70%~50%A;15~20min,50%~5%A;20~25min,5%A;25~35min,5%~95%A;35~40min,95%A;
采用的质谱条件为:离子源:ESI源,负离子模式;喷雾电压:-4500V;离子源温度:400℃;雾化气压力50psi,气帘气压力35psi,辅助加热气压力50psi;去簇电压:-100V;扫描方式:Q1全扫描,扫描范围80-1000Da;
所述MRM-IDA-EPI条件的建立,具体包括:
采用的色谱条件为:色谱柱:Poroshell 120EC-C18柱,规格为100m×4.6mm,2.7μm;流动相:0.1%甲酸水溶液A,甲醇B;流速:0.4mL/min;柱温:30℃;进样量:2μL;梯度洗脱程序:0~8min,95%~80%A;8~12min,80%~70%A;12~15min,70%~50%A;15~20min,50%~5%A;20~25min,5%A;25~35min,5%~95%A;35~40min,95%A;
质谱条件为:扫描方式为MRM-IDA-EPI,其中,在MRM中输入特征母离子及其MRM优化参数,碰撞气流量设置为“High”;在IDA中输入信号响应阈值;在EPI中输入扫描范围。
2.根据权利要求1所述的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,其特征在于,一种天然单体香原料样品所对应的特征母离子的数量为2-3个。
3.根据权利要求2所述的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,其特征在于,所述根据所述总离子流色谱图确定所述天然单体香原料样品的特征母离子,具体包括:
将对天然单体香原料样品进行全扫描得到的总离子流色谱图,与对空白样品进行全扫描得到的总离子流色谱图进行对比,以选定差异色谱峰;
通过对比差异色谱峰的前后基线与差异色谱峰本身的峰形,在差异色谱峰中选定差异离子为特征母离子。
4.根据权利要求2所述的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,其特征在于,所述根据所述总离子流色谱图确定所述天然单体香原料样品的特征母离子,具体包括:
通过文献资料库获得天然单体香原料样品中的若干主要特征组分;
将各主要特征组分的[M-H]-峰作为备选离子对所述总离子流色谱图进行提取;
若提取的备选离子对应的色谱的峰形良好且响应较高,则将该备选离子确定为所述天然单体香原料样品的特征母离子。
5.根据权利要求1所述的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,其特征在于,所述MRM优化参数至少包括保留时间、子离子、碰撞能量和去簇电压。
6.根据权利要求1所述的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,其特征在于,所述加料香精溯源分析,具体包括:
利用建立的MRM-IDA-EPI条件,对制备得到的待分析加料香精样品的样品溶液进行扫描,得到待分析加料香精样品的EPI二级扫描质谱图;
将待分析加料香精样品的EPI二级扫描质谱图与保存在自建谱库中的天然单体香原料样品的特征母离子的EPI二级扫描质谱图进行比对,结合MRM优化参数中的保留时间和特征母离子进行定性分析;
通过外标法对以MRM得到的定量子离子的峰面积进行半定量分析。
7.根据权利要求1所述的加料香精中天然单体香原料的溯源分析方法,其特征在于,所述待分析加料香精样品包括调香人员经感官评吸法确定其内含有预设天然单体香原料的加料香精样品,或调香人员使用预设天然单体香原料自配得到的加料香精样品。
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Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107037138A (zh) * | 2016-08-17 | 2017-08-11 | 广西中烟工业有限责任公司 | 香原料特征成分质谱数据库的建立方法、装置及香料成分确定方法、系统 |
CN110133155A (zh) * | 2019-06-24 | 2019-08-16 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种烟用香精香料的气相色谱-串联质谱分析方法 |
CN112505229A (zh) * | 2020-12-10 | 2021-03-16 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种基于hplc-qtof ms技术检测烟用香精香料的非靶向分析方法 |
CN113125588A (zh) * | 2021-03-17 | 2021-07-16 | 广东省农业科学院农业质量标准与监测技术研究所 | 一种代谢组学分析技术判别鸭屎香单丛茶时空分类的应用 |
-
2022
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107037138A (zh) * | 2016-08-17 | 2017-08-11 | 广西中烟工业有限责任公司 | 香原料特征成分质谱数据库的建立方法、装置及香料成分确定方法、系统 |
CN110133155A (zh) * | 2019-06-24 | 2019-08-16 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种烟用香精香料的气相色谱-串联质谱分析方法 |
CN112505229A (zh) * | 2020-12-10 | 2021-03-16 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种基于hplc-qtof ms技术检测烟用香精香料的非靶向分析方法 |
CN113125588A (zh) * | 2021-03-17 | 2021-07-16 | 广东省农业科学院农业质量标准与监测技术研究所 | 一种代谢组学分析技术判别鸭屎香单丛茶时空分类的应用 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
果品产地溯源技术研究进展及其在南果梨产地溯源的应用展望;王世成;李国琛;王颜红;李波;孙辞;崔杰华;;食品安全质量检测学报;20170925(第09期);全文 * |
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