CN114425038A - 一种20(s)-ppd脂质体乳剂复合体口服给药制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种20(S)‑PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂及其制备方法和应用，属于医药技术领域。本发明所述制剂包括水相、药效成分相和油相；所述水相包括水、糖类、表面活性剂和防腐剂；所述药效成分相包括20(S)‑PPD、磷脂和无水乙醇；所述油相包括大豆油和/或中链甘油三酯。本发明所述20(S)‑PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂载药量高，稳定性好，制剂中20(S)‑PPD浓度可以控制在1～20mg/ml(m/v)；利用超速离心法测定其包封率达85％以上，RSD＜2％；口服绝对生物利用度高，可达31％；口服后，可显著缓解维持肾小球滤过屏障完整性的足细胞的损伤，治疗NS等慢性肾病综合征。

Description

一种20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂及其制备方 法和应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂及其制备方法和应用。
背景技术
肾病综合征(NS)是肾内科常见的慢性肾病，肾病综合征(Nephrotic Syndrome，NS)可由多方面病因引发，临床表现为几个方面，不同程度的水肿、低蛋白血症和高蛋白尿等症状。目前，NS正在逐渐成为一种危害人类健康的慢性泌尿系统类疾病，现国内外临床广泛使用糖皮质激素(GC)治疗，或采用糖皮质激素加辅助药物即细胞毒药物和免疫疗法进行治疗，虽然采用糖皮质激素治疗疗效明显，但存在很多严重的副作用，如在治疗早期大量使用此激素能够引发医源性肾上腺功能亢进症等一系列副反应，在治疗后期对激素进行减量还会出现皮质激素撤减综合征等。因此，为了避免使用激素造成的不良后果，寻找对肾病综合征有积极作用的药物，以缓解症状及减轻并发症，具有较高的临床价值。同心血管、肿瘤和糖尿病等治疗药物相比，肾脏疾病的新药研发明显落后，其发展空间和潜力巨大。
糖皮质激素(GC)主要是通过与糖皮质激素受体(GR)结合来发挥作用；GC与GR结合后，激活GR，GR从GCR复合物上解离下来，易位至细胞核，通过反式激活和反式抑制发挥药理作用；因此，要想增强GC的敏感性，提高GC的疗效，主要可以从调控GR的表达水平及生理活动入手；将GR的反式激活与反式抑制分离，促进GR发生反式抑制同时减弱其反式激活作用。凌昌全教授团队对人参皂苷辅助治疗肾病综合征进行了临床研究，发现人参皂苷可以增强GC治疗NS的临床效应，减少GC的临床用量。(方凡夫，夏国胜，尤艳利，顾伟.人参皂苷辅助治疗肾病综合征的随机双盲对照研究[J].现代中西医结合杂志，2014，23(29):3193-3195+3227)Karra AG等的研究表明，20(S)-PPD和PPT在一定程度上均可以诱导GR的核易位，抑制DEX诱导的GR反式激活作用，促进GR的反式抑制作用等生理活动，从而达到对GC“增效减副”的作用(Karra AG，Konstantinou M，Tzortziou M，et al.Potential DissociativeGlucocorticoid Receptor Activity for Protopanaxadiol and Protopanaxatriol.IntJ Mol Sci.2018；20(1))。
姚熙慧等经临床观察证实：应用肾炎康复片(主成分西洋参、人参)配合激素类药物治肾病综合征比单纯使用激素治疗效果显著，不仅总有效率明显提高，而且临床各项观察指标亦有显著改善，同时还发现肾炎康复片不但能增强激素的治疗作用，并可明显降低血脂，改善由于长期大量使用激素而加重的高凝状态，减少了激素的副作用，保护了肾功能，促进疾病的转归(姚熙慧，贺玉珍.肾炎康复片配合激素治疗成人原发性肾病综合征的疗效分析[J].天津中医学院学报，1998(03):13-14)。
长期实验结果表明，人参有显著抗炎作用，人参主要生物活性成分为人参皂苷，是一种四环三萜类化合物，包括原人参二醇型、原人参三醇型和齐墩果酸型几种类型。
研究表明，原人参三醇(20(S)-PPT)具有较强的生物活性，其中在心血管保护方面作用突出，研究还发现20(S)-PPT具有抗肿瘤、抗脂肪合成、抗糖尿病等作用。但对20(S)-PPT的药代动力学以及口服生物利用度进行研究后，结果表明，20(S)-PPT经口服后能迅速吸收到体内，其达峰时间Tmax为0.58h，峰浓度Cmax为0.13μg/mL，绝对生物利用度较低，仅为3.69％，体内性质不稳定(陈小玲，史大臻，司函瑞，等.原人参三醇生物活性及其作用机制研究进展[J].辽宁中医药大学学报，2021，23(2)：209-214)。
原人参二醇型皂苷具有抗炎作用。20(S)-原人参二醇是原人参二醇型皂苷的苷元，也具有较强的抗炎作用。目前，有多个研究表明，糖皮质激素加辅助药物即人参皂苷，在临床上治疗NS有显著的效果，确证了人参皂苷具有增强激素效应的作用(夏国胜.人参皂苷辅助治疗肾病综合征的随机双盲对照研究[D].第二军医大学，2009)(张黎雯，刘光陵.人参皂苷Rg1药理作用与肾病综合征发病机制的联系[J].医学研究生学报，2011，24(9):989-992)。但是，有研究表明，20(S)-PPD的膜渗透性好，在体内性质稳定。但是其口服生物利用度低，需要采用合适的制剂技术提高其口服生物利用度(金鑫，张振海，孙娥，谭晓斌，夏海建，刘其媛，贾晓斌.20(S)-原人参二醇生物药剂学性质的多元化研究[J].药学学报，2013，48(03):411-416)。
20(S)-PPD的分子式为C30H52O3，分子量为460.3，熔点为197.5～198.5℃，比旋光为[α]15 D＝29.34(C＝1.0，CHCl3)，在丙酮中为簇状结晶。37℃时，20(S)-PPD在水中的平衡溶解度为35.24mg/L，几乎不溶于水，其油水分配系数logP为1.66。20(S)-PPD为亲脂性化合物，其溶解性差，难溶于水、膜渗透性好、半衰期短，其剂型开发受到限制，限制了其在临床上的使用，目前，在国内外市场，未有原人参二醇有关的制剂上市。
专利CN 2013100508584(一种20(S)-原人参二醇微球及其制备方法和应用)中的20(S)-原人参二醇微球存在的常见问题是突释大、包封率低，用水化溶剂挥发法制备20(S)-原人参二醇微球，活性成分容易从球内部向外扩散迁移，在球的表面形成很多孔道，大量孔洞会导致突释加剧并且微球本身降解速率加快，水洗法除有机溶剂(乙酸乙酯和二氯甲烷)有残留溶剂的危害。
专利CN 2012101209585(一种20(S)-原人参二醇干混悬剂及其制备方法)中的20(S)-原人参二醇干混悬剂存在粒径不均匀影响吸收利用度和非可生物降解的辅料导致体内肝脏毒性的常见问题。
专利CN 1765365 B(提高苷或苷元类药物在胃内吸收的口服软胶囊)将苷或苷元类药物溶解于乙醇、氢化蓖麻油，制成口服液或软胶囊。受溶解度与载药量影响，该制剂虽有较好生物利用度，但其载药量低，每次需服用较大剂量。并且含有较高量有机溶剂与氢化蓖麻油，使用顺应性较差。其生物利用度参数如下表1所示。
表1 生物利用度参数
Figure BDA0003491664360000031
Figure BDA0003491664360000041
上述专利中公开了几种不同剂型的20(S)-PPD制剂，但仍存在诸多问题需进一步改善，其中，生物利用度低的问题仍较难克服。
发明内容
本发明的目的在于提供一种20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂及其制备方法和应用。本发明所述制剂包封率高，组成简单，载药量高，稳定性好，有机溶剂含量少，药效显著，能够有效解决20(S)-PPD的体内口服吸收利用度低的问题。
本发明提供了一种20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂，所述制剂包括水相、药效成分相和油相；所述水相包括水、糖类、表面活性剂和防腐剂；所述药效成分相包括20(S)-PPD、磷脂和无水乙醇；所述油相包括大豆油和/或中链甘油三酯；
所述表面活性剂包括油酸钠、吐温-80和泊洛沙姆188中的一种或两种以上。
优选的是，所述磷脂包括大豆磷脂和/或卵黄磷脂。
优选的是，所述糖类包括三氯蔗糖、葡萄糖、果糖和麦芽糖中的一种或两种以上。
优选的是，所述所述防腐剂包括山梨酸钾和/或苯甲酸钠。
优选的是，所述制剂中，20(S)-PPD的质量浓度为1～20mg/ml。
优选的是，以每100g水的质量为基准，所述制剂包括磷脂3～5g、无水乙醇5～15mL、油相10～15g、表面活性剂0.05～0.2g、糖类0.02～0.03g和防腐剂0.02～0.03g。
本发明还提供了上述技术方案所述制剂的制备方法，包括以下步骤：
1)将表面活性剂、糖类、防腐剂和水混合，得到水相；
2)将20(S)-PPD、磷脂和无水乙醇混合，得到药效成分相，将药效成分相注入步骤1)所述水相中，得到混合液；
3)将油相和步骤2)所述混合液进行混合乳化，过滤，得到20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂。
优选的是，步骤2)中，所述混合的温度为50～80℃。
优选的是，乳化的方式包括高速剪切结合高压均质、搅拌或超声；当所述乳化的方式为高速剪切结合高压均质时，所述高速剪切的剪切转速为5000～20000rpm，所述高速剪切的时间为1～10min，所述高压均质的压力为400～1000bar，所述高压均质的循环次数为2～10次。
本发明还提供了上述技术方案所述的制剂或上述技术方案所述制备方法制备得到的制剂在制备改善足细胞损伤的药物或治疗慢性肾病综合征的药物中的应用。
本发明提供了一种20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂。本发明所述制剂制剂载药量高，稳定性好，制剂中20(S)-PPD浓度可以控制在1～20mg/ml(m/v)。利用超速离心法测定其包封率达85％以上，RSD＜2％。经口服给药后，绝对生物利用度提高到31％。可显著缓解维持肾小球滤过屏障完整性的足细胞的损伤，治疗NS等慢性肾病综合征。具体的，本发明所述制剂具有以下有益效果：
1)制备工艺简便，载药量高，适合大批量生产；
2)本发明所述制剂中20(S)-PPD包埋在脂质体的双层结构中，能提高生物利用度；20(S)-PPD取代了胆固醇，可以保持脂质体的稳定性，使生物膜的相容性提高，避免胆固醇引起的缺点，有利于提高生物利用度；
3)本发明所使用的大豆油及中链甘油三酯为无毒且日常人体可大量使用的甘油三酯类辅料；在本发明所述制剂中给予药物磷脂双分子层一个稳定支撑空间，可以起到稳定磷脂的作用，进而提高制剂的稳定性；
4)本发明所使用的无水乙醇使得体系界面张力降低，体系更加稳定；
5)本发明所制20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂为口服液体制剂，服用方便，且乳化工艺保留了制剂的优质口感；
6)本发明所制20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂载药量高，稳定性好，制剂中20(S)-PPD浓度可以控制在1～20mg/ml(m/v)；利用超速离心法测定其包封率达85％以上，RSD＜2％；口服绝对生物利用度高，可达31％，药效显著。
附图说明
图1为本发明实施例1提供的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂粒径图；
图2为本发明实施例1提供的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂电位图；
图3为本发明实施例1提供的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂透射电镜图；
图4为本发明提供的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂的结构示意图；
图5为本发明提供的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂累积释放曲线；
图6为本发明提供的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂在大鼠体内药时曲线；
图7为本发明提供的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂在比格犬体内药时曲线结果；
图8为本发明提供的MTT实验结果；
图9为本发明提供的胞迁移实验结果；
图10为本发明提供的细胞免疫荧光实验结果；
图11为本发明提供的细胞免疫荧光实验结果；
图12为本发明提供的细胞免疫荧光实验结果；
图13为本发明提供的24h尿蛋白实验结果；
图14为本发明提供的血生化指标结果图；
图15为本发明提供的HE染色后在光镜下观察的各组大鼠肾组织图片；
图16为本发明提供的肾小球的Desmin免疫组化染色结果；
图17为本发明提供的肾组织透射电镜结果图。
具体实施方式
本发明提供了一种20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂，所述制剂包括水相、药效成分相和油相；所述水相包括水、糖类、表面活性剂和防腐剂；所述药效成分相包括20(S)-PPD、磷脂和无水乙醇；所述油相包括大豆油和/或中链甘油三酯；
所述表面活性剂包括油酸钠、吐温-80和泊洛沙姆188中的一种或两种以上。
本发明20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂的结构示意图如图4所示。图4中的A显示，20(S)-PPD与胆固醇结构相似，为胆固醇类似物，与磷脂存在天然亲和力。磷脂是一类含有磷酸的脂类，具有由磷酸相连的取代基团构成的亲水头和由脂肪酸链构成的疏水尾，与体内细胞膜组成相同，生物可降解，是制备乳剂纳米载药体系的最为常用的乳化剂之一，具有良好的生物相容性。本发明中20(S)-PPD代替胆固醇形成20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂。图4中的B显示，磷脂的亲水头位于膜表面，而疏水尾位于膜内侧，极性磷脂在水溶液表面自然形成厚度为一个脂质分子的脂单层。在水系统中，极性脂自然聚在一起形成分子团或极薄的脂双层以分开两个水性部分。本发明发现，20(S)-PPD与磷脂能在有水的条件下自发形成双层膜脂质体，从而使20(S)-PPD载于磷脂/20(S)-PPD形成的双分子膜与乳剂界面膜中，避免了与水相和油相的直接接触，本发明利用双分子膜与细胞膜相似性，使生物膜的相容性提高，提高其跨膜能力，可以提高20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂的化学稳定性，避免胆固醇引起的缺点，有利于提高药物吸收，进而提高生物利用度。
本发明通过改变20(S)-原人参二醇的剂型，将其制成20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂，促进了制剂的吸收能力，其口服生物利用度得到了有效改善。实施例结果表明，本发明所提供的制剂生物利用度在比格犬中提高效果更好。而且，本发明所述制剂稳定性好，质量可控；载药量高，20(S)-PPD载于磷脂/20(S)-PPD形成的双分子膜与乳剂界面膜中；制剂中20(S)-PPD浓度可以控制在1～20mg/ml(m/v)。利用超速离心法测定其包封率达85％以上，RSD＜2％；经口服给药后，绝对生物利用度提高到31％。可显著缓解维持肾小球滤过屏障完整性的足细胞的损伤，治疗NS等慢性肾病综合征。
在本发明中，所述磷脂优选包括大豆磷脂和/或卵黄磷脂。本发明所述磷脂具有良好的乳化作用，具有良好的生物相容性。本发明所述制剂是一种更出色的多功能载体。在本发明中，所述糖类优选包括三氯蔗糖、葡萄糖、果糖和麦芽糖中的一种或两种以上。在本发明中，所述所述防腐剂包括山梨酸钾和/或苯甲酸钠。
在本发明中，所述制剂中，20(S)-PPD的质量浓度优选为1～20mg/ml，更优选为2～10mg/mL。
在本发明中，所述油相的选取能够为本发明药物磷脂双分子层提供一个稳定支撑空间，起到稳定磷脂的作用，进而提高制剂的稳定性。
在本发明中，无水乙醇的使用能够使体系界面张力降低，体系更稳定，起到稳定剂的作用。
在本发明中，表面活性剂能够吸附在磷脂/20(S)-PPD形成的双分子膜与乳剂界面膜上，增加乳剂粒子表面电荷，使粒子间静电斥力增加，有效阻止粒子之间的相互聚集，增加制剂空间稳定性，起到稳定剂的作用。
在本发明中，以每100g水的质量为基准，所述制剂包括磷脂3～5g、无水乙醇5～15mL、油相10～15g、表面活性剂0.05～0.2g、糖类0.02～0.03g和防腐剂0.02～0.03g。
本发明还提供了上述技术方案所述制剂的制备方法，包括以下步骤：
1)将表面活性剂、糖类、防腐剂和水混合，得到水相；
2)将20(S)-PPD、磷脂和无水乙醇混合，得到药效成分相，将药效成分相注入步骤1)所述水相中，得到混合液；
3)将油相和步骤2)所述混合液进行混合乳化，过滤，得到20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂。
本发明所述制剂采用乙醇注入法制备而成。
本发明将表面活性剂、糖类、防腐剂和水混合，得到水相。本发明优选将表面活性剂、糖类和防腐剂与部分水混合，充分搅拌溶解后，再加入剩余水至全量，得到水相。
得到水相后，本发明将20(S)-PPD、磷脂和无水乙醇混合，得到药效成分相，将药效成分相注入水相中，得到混合液。本发明优选将磷脂与20(S)-PPD加入到无水乙醇中，搅拌使其充分溶解。在本发明中，所述混合的温度优选为50～80℃，更优选为60～80℃。本发明优选使用注射器，将药效成分相缓慢注入水相。将药效成分相注入水相后，本发明优选水化20～40min，更优选水化30min。
得到混合液后，本发明将油相和混合液进行混合乳化，过滤，得到20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂。本发明优选将油相逐滴加入到混合液中。在本发明中，乳化的方式优选包括高速剪切结合高压均质、搅拌或超声。在本发明中，当所述乳化的方式为高速剪切结合高压均质时，所述高速剪切的剪切转速优选为5000～20000rpm，更优选为8000～18000rpm，所述高速剪切的时间优选为1～10min，更优选为2～8min，所述高压均质的压力优选为400～1000bar，更优选为500～800bar，所述高压均质的循环次数优选为2～10次，更优选为4～8次。本发明在高速剪切后得到初乳，得到初乳后，本发明优选先进行静置消泡，冷却至室温，再进行高压均质。本发明优选在循环冷水的条件下进行高压均质。本发明优选用不同粒径的微孔滤膜进行过滤，具体的，所述不同粒径优选包括0.22μm和0.45μm。在本发明中，所述制剂平均粒径优选为100～300nm，粒径参数D90≤0.6μm。
本发明所制备的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂，外观为白色或乳白色均匀乳状液体，裸眼观察表面无油滴。加纯化水稀释后呈淡蓝色乳光，静置无分层，振摇不挂壁。透射电镜照片(图3)显示，在200nm的标尺下，可清晰观察到乳剂表面有明显的磷脂层。说明该制剂存在20(S)-PPD载于界面膜上的脂质双分子层膜。无水乙醇的存在使得体系界面张力降低，体系更加稳定。
本发明还提供了上述技术方案所述的制剂或上述技术方案所述制备方法制备得到的制剂在制备改善足细胞损伤的药物中的应用。
本发明还提供了上述技术方案所述的制剂或上述技术方案所述制备方法制备得到的制剂在制备治疗慢性肾病综合征的药物中的应用。本发明所述制剂口服后，可显著缓解维持肾小球滤过屏障完整性的足细胞的损伤，治疗NS等慢性肾病综合征。
本发明前期进行大量试验，将20(S)-PPD制备成了多种剂型，对多种剂型在大鼠体内进行药物代谢动力学研究，其绝对生物利用度结果如表2。
表2 生物利用度结果
样品 给药方式 绝对生物利用度
油混悬液1 口服 26.39％
油混悬液2 口服 23.76％
油混悬液3 口服 6.98％
油混悬液4 口服 7.33％
油混悬液5 口服 4.87％
水混悬液1 口服 9.42％
水混悬液2 口服 7.52％
水混悬液3 口服 6.23％
纳米囊 口服 8.57％
本发明前期进行大量试验，将20(S)-PPD制备成了多种剂型，对多种剂型在大鼠体内进行药物代谢动力学研究，利用大豆油、生理上更易接受的中链甘油三酯所制备的20(S)-PPD油混悬液、水混悬液、纳米囊等剂型口服绝对生物利用度仍很低且性质不稳定，载药量较低，均未达到预期效果。
下面结合具体实施例对本发明所述的一种20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂及其制备方法和应用做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。
各实施例中制剂采用如下工艺制备，具体工艺参数见各实施例。
S1:称取处方量的表面活性剂(油酸钠、吐温80、泊洛沙姆188中的一种或二种以一定比例混合)、糖类、防腐剂加入部分水中，充分搅拌使其溶解后，加入剩余水至全量，制备水相。
S2:称取处方量的20(S)-PPD及一定量大豆磷脂或蛋黄卵磷脂置于圆底烧瓶中，在温度为60℃条件下，加入适量的反应溶剂无水乙醇，搅拌使其充分溶解，用注射器以一定速度缓慢注入相应的水相，水化30min左右。
S3:在高速剪切条件下，将大豆油、中链甘油三酯中的一种或二种以一定比例混合加入其中，形成初乳。
S4：将得到的初乳静置消泡，冷却至室温，转移至高压均质机，在循环冷水的条件下进行高压均质，灌装，即得。
实施例1
称量0.05g油酸钠、0.02g三氯蔗糖、0.02g山梨酸钾加入70ml水中，充分搅拌使其溶解后，加入剩余30ml水至全量，制备水相；称量0.2g20(S)-PPD及3.0g大豆磷脂置于圆底烧瓶中，在温度为60℃条件下，加入5.0ml的反应溶剂无水乙醇，搅拌使其充分溶解，并用注射器以一定速度缓慢注入所制备的水相，水化30min左右；加入10g大豆油，在10000rpm的转速下高速剪切3min，形成初乳；将得到的初乳静置消泡，冷却至室温，转移至高压均质机中，在循环冷水的条件下，以800bar压力循环高压均质6次，灌装，即得。
制备得到的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂平均粒径为160.4±20.0nm，Pdi为0.113，Zeta电位为-35.5±6.21。乳剂表面有明显的磷脂层。本发明所述20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂粒径图如图1所示，电位图如图2所示。
实施例2
称量0.05g油酸钠、0.02g三氯蔗糖、0.02g山梨酸钾加入70ml水中，充分搅拌使其溶解后，加入剩余30ml水至全量，制备水相；称量0.2g20(S)-PPD及3.0g大豆磷脂置于圆底烧瓶中，在温度为60℃条件下，加入5.0ml的反应溶剂无水乙醇，搅拌使其充分溶解，并用注射器以一定速度缓慢注入所制备的水相，水化30min左右；加入10g中链甘油三酯，在10000rpm的转速下高速剪切3min，形成初乳；将得到的初乳静置消泡，冷却至室温，转移至高压均质机中，在循环冷水的条件下，以800bar压力循环高压均质6次，灌装，即得。
制备得到的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂平均粒径为164.7±35.1nm，Pdi为0.123，Zeta电位为-33.1±2.41。乳剂表面有明显的磷脂层。
实施例3
称量0.05g吐温80、0.02g三氯蔗糖、0.02g山梨酸钾加入70ml水中，充分搅拌使其溶解后，加入剩余30ml水至全量，制备水相；称量0.2g20(S)-PPD及3.0g大豆磷脂置于圆底烧瓶中，在温度为60℃条件下，加入5.0ml的反应溶剂无水乙醇，搅拌使其充分溶解，并用注射器以一定速度缓慢注入所制备的水相，水化30min左右；加入10g大豆油，在10000rpm的转速下高速剪切3min，形成初乳；将得到的初乳静置消泡，冷却至室温，转移至高压均质机中，在循环冷水的条件下，以800bar压力循环高压均质6次，灌装，即得。
制备得到的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂平均粒径为156.0±31.3nm，Pdi为0.125，Zeta电位为-36.6±5.03。乳剂表面有明显的磷脂层。
实施例4
称量0.05g泊洛沙姆188、0.02g三氯蔗糖、0.02g山梨酸钾加入70ml水中，充分搅拌使其溶解后，加入剩余30ml水至全量，制备水相；称量0.2g20(S)-PPD及3.0g大豆磷脂置于圆底烧瓶中，在温度为60℃条件下，加入5.0ml的反应溶剂无水乙醇，搅拌使其充分溶解，并用注射器以一定速度缓慢注入所制备的水相，水化30min左右；加入10g大豆油，在10000rpm的转速下高速剪切3min，形成初乳；将得到的初乳静置消泡，冷却至室温，转移至高压均质机中，在循环冷水的条件下，以800bar压力循环高压均质6次，灌装，即得。
制备得到的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂平均粒径为166.4±25.8nm，Pdi为0.119，Zeta电位为-37.3±6.70。乳剂表面有明显的磷脂层。
实施例5
称量0.05g油酸钠、0.02g三氯蔗糖、0.02g山梨酸钾加入70ml水中，充分搅拌使其溶解后，加入剩余30ml水至全量，制备水相；称量0.3g20(S)-PPD及4.0g大豆磷脂置于圆底烧瓶中，在温度为60℃条件下，加入5.0ml的反应溶剂无水乙醇，搅拌使其充分溶解，并用注射器以一定速度缓慢注入所制备的水相，水化30min左右；加入10g大豆油，在10000rpm的转速下高速剪切3min，形成初乳；将得到的初乳静置消泡，冷却至室温，转移至高压均质机中，在循环冷水的条件下，以800bar压力循环高压均质6次，灌装，即得。
制备得到的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂平均粒径为139.9±43.7nm，Pdi为0.132，Zeta电位为-35.9±6.14。乳剂表面有明显的磷脂层。
实施例6
称量0.10g油酸钠、0.02g三氯蔗糖、0.02g山梨酸钾加入70ml水中，充分搅拌使其溶解后，加入剩余30ml水至全量，制备水相；称量0.3g20(S)-PPD及4.0g大豆磷脂置于圆底烧瓶中，在温度为60℃条件下，加入5.0ml的反应溶剂无水乙醇，搅拌使其充分溶解，并用注射器以一定速度缓慢注入所制备的水相，水化30min左右；加入10g大豆油，在10000rpm的转速下高速剪切3min，形成初乳；将得到的初乳静置消泡，冷却至室温，转移至高压均质机中，在循环冷水的条件下，以800bar压力循环高压均质6次，灌装，即得。
制备得到的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂平均粒径为147.9±52.1nm，Pdi为0.146，Zeta电位为-34.2±8.27。乳剂表面有明显的磷脂层。
实施例7
称量0.10g油酸钠、0.02g三氯蔗糖、0.02g山梨酸钾加入70ml水中，充分搅拌使其溶解后，加入剩余30ml水至全量，制备水相；称量0.4g20(S)-PPD及5.0g大豆磷脂置于圆底烧瓶中，在温度为60℃条件下，加入8.0ml的反应溶剂无水乙醇，搅拌使其充分溶解，并用注射器以一定速度缓慢注入所制备的水相，水化30min左右；加入10g大豆油，在10000rpm的转速下高速剪切3min，形成初乳；将得到的初乳静置消泡，冷却至室温，转移至高压均质机中，在循环冷水的条件下，以800bar压力循环高压均质6次，灌装，即得。
制备得到的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂平均粒径为146.1±14.3nm，Pdi为0.138，Zeta电位为-37.5±2.57。乳剂表面有明显的磷脂层。
实施例8
称量0.10g油酸钠、0.02g三氯蔗糖、0.02g山梨酸钾加入70ml水中，充分搅拌使其溶解后，加入剩余30ml水至全量，制备水相；称量0.5g20(S)-PPD及5.0g大豆磷脂置于圆底烧瓶中，在温度为60℃条件下，加入10.0ml的反应溶剂无水乙醇，搅拌使其充分溶解，并用注射器以一定速度缓慢注入所制备的水相，水化30min左右；加入10g大豆油，在10000rpm的转速下高速剪切3min，形成初乳；将得到的初乳静置消泡，冷却至室温，转移至高压均质机中，在循环冷水的条件下，以800bar压力循环高压均质6次，灌装，即得。
制备得到的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂平均粒径为164.0±27.5nm，Pdi为0.129，Zeta电位为-36.2±6.31。乳剂表面有明显的磷脂层。
实施例9
称量0.20g油酸钠、0.02g三氯蔗糖、0.02g山梨酸钾加入70ml水中，充分搅拌使其溶解后，加入剩余30ml水至全量，制备水相；称量0.5g20(S)-PPD及5.0g大豆磷脂置于圆底烧瓶中，在温度为60℃条件下，加入10.0ml的反应溶剂无水乙醇，搅拌使其充分溶解，并用注射器以一定速度缓慢注入所制备的水相，水化30min左右；加入10g大豆油，在10000rpm的转速下高速剪切3min，形成初乳；将得到的初乳静置消泡，冷却至室温，转移至高压均质机中，在循环冷水的条件下，以800bar压力循环高压均质6次，灌装，即得。
制备得到的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂平均粒径为170.5±3.90，Pdi为0.114，Zeta电位为-37.2±3.31。乳剂表面有明显的磷脂层。
实施例10
称量0.20g油酸钠、0.02g三氯蔗糖、0.02g山梨酸钾加入70ml水中，充分搅拌使其溶解后，加入剩余30ml水至全量，制备水相；称量0.5g20(S)-PPD及5.0g大豆磷脂置于圆底烧瓶中，在温度为60℃条件下，加入15.0ml的反应溶剂无水乙醇，搅拌使其充分溶解，并用注射器缓慢注入所制备的水相，水化30min左右；加入10g大豆油，在10000rpm的转速下高速剪切3min，形成初乳；将得到的初乳静置消泡，冷却至室温，转移至高压均质机中，在循环冷水的条件下，以800bar压力循环高压均质6次，灌装，即得。
制备得到的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂平均粒径为146.9±25.9nm，Pdi为0.123，Zeta电位为-35.9±4.20。乳剂表面有明显的磷脂层。
实施例1～10各处方所制备的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂物理参数如表3所示。
表3 实施例1～10所述制剂的物理参数
实施例 性状 粒径/nm Pdi 电位
实施例1 外观呈均匀乳白色 160.4±20.0 0.113 -35.5±6.21
实施例2 外观呈均匀乳白色 164.7±35.1 0.123 -33.1±2.41
实施例3 外观呈均匀乳白色 156.0±31.3 0.125 -36.6±5.03
实施例4 外观呈均匀乳白色 166.4±25.8 0.119 -37.3±6.70
实施例5 外观呈均匀乳白色 139.9±43.7 0.132 -35.9±6.14
实施例6 外观呈均匀乳白色 147.9±52.1 0.146 -34.2±8.27
实施例7 外观呈均匀乳白色 146.1±14.3 0.138 -37.5±2.57
实施例8 外观呈均匀乳白色 164.0±27.5 0.129 -36.2±6.31
实施例9 外观呈均匀乳白色 170.5±3.90 0.114 -37.2±3.31
实施例10 外观呈均匀乳白色 146.9±25.9 0.123 -35.9±4.20
根据各处方制备的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂粒径分布均匀，处方工艺重现性良好，物理稳定性良好。
实施例11
实施例1～10各处方的制备方法，除初乳制备中剪切转速为12000rpm，剪切时间为5min，其余相同。
实施例11所制备的各处方20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂，其平均粒径为100～300nm，粒径参数D90≤0.6μm，Zeta电位为-35～-40mV，具体的，平均粒径为162.5±25.2nm，Pdi为0.121，Zeta电位为-34.7±4.2。
实施例12
实施例1～10各处方的制备方法，除初乳制备中剪切转速为15000rpm，剪切时间为5min，其余相同。
实施例12所制备的各处方20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂，其平均粒径为100～300nm，粒径参数D90≤0.6μm，Zeta电位为-35～-40mV，具体的，平均粒径为143nm，Pdi为0.115，Zeta电位为-31.57mV。
实施例13
实施例1～10各处方的制备方法，除初乳制备中剪切转速为18000rpm，剪切时间为5min，其余相同。
实施例13所制备的各处方20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂，其平均粒径为100～300nm，粒径参数D90≤0.6μm，Zeta电位为-35～-40mV，具体的，平均粒径为152nm，Pdi为0.125，Zeta电位为-29.74mV。
实施例14
实施例1～10各处方的制备方法，除初乳制备中剪切转速为12000rpm，剪切时间为5min及终乳制备中循环压力为800bar，循环次数为8次，其余相同。
实施例14所制备的各处方20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂，其平均粒径为100～300nm，粒径参数D90≤0.6μm，Zeta电位为-35～-40mV，具体的，均粒径为161nm，Pdi为0.132，Zeta电位为-30.35mV。
改变制备工艺中剪切转速及高压均质压力及次数后，制备所得20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂粒径分布均匀，物理稳定性较好。
实施例15
本发明20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂的体外释放试验。
试验方法：本试验采用桨法考察制剂的体外释放特性，搅拌桨转速75r·min-1，水浴温度(37±0.5)℃，释放介质为pH 7.4磷酸盐缓冲液(0.3％SDS)900ml，体外释放结果如图5所示。
结果表明，在体外累积释放研究中，20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂在24h内累积释放量为91％。
实施例16
本发明20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂的药动学研究试验。
实施例1所制备制剂在大鼠体内药代动力学评价
采用雄性SD大鼠，180±20g，随机分为8组，每组5只。通过灌胃给药，20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂含量为5.0mg/ml，给药剂量为15mg/kg，给药体积为3ml/kg；通过静脉注射给药，20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂含量为5.0mg/ml，给药剂量为10mg/kg，给药体积为3ml/kg。
图6为20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂在大鼠体内药时曲线结果，结果表明，口服后平均绝对生物利用度F＝30.93％。
实施例1所制备制剂在比格犬体内药代动力学评价
采用雄性比格犬，共6条。通过静脉注射给药，给药体积为8ml/39.2mg20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂；通过口服灌胃给药，给药体积为30ml/147mg 20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂。采用自身对照法，评估20(S)-PPD脂质体复合体混合口服给药制剂在比格犬体内绝对生物利用度。
图7为20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂在比格犬体内药时曲线结果，结果表明，口服后平均绝对生物利用度F＝35.97％。
本发明通过改变20(S)-原人参二醇的剂型，将其制成20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂，促进了制剂的吸收能力，其口服生物利用度得到了有效改善。且本发明所提供的制剂的生物利用度在比格犬中提高效果更好。
实施例17
本发明20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂的药效学研究试验。
足细胞是一种终末期分化的肾上皮细胞，极易受到损伤，是维持肾小球滤过屏障完整性的必要条件，足细胞损伤后运动能力增强，会从肾小球基底膜上脱落，肾小球滤过屏障受损；因此足细胞损伤是形成蛋白尿的核心机制。
目的：探究20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂对改善足细胞损伤的活性。
对实施例1所制备的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂进行药效学研究，其实验结果如图8所示。
图8为MTT实验结果，数据用均值±标准差表示(n＝3)，与空白对照组相比，**P＜0.01；与ADR组相比，#P＜0.05，##P＜0.01；与DEX相比，&P＜0.05。
MTT实验结果表明，20μM时20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂，人参皂苷CK和原人参三醇PPT组的足细胞活力最好(其中20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂的最好)，在40μM时对足细胞可能有一定的毒性作用，80μM时毒性较大，其中CK的毒性作用最强，20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂的毒性作用最小。
MTT实验结果表明，与空白组相比，ADR组足细胞的活力明显下降(P＜0.01)，20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂、CK和PPT对损伤的足细胞具有一定的保护作用，与DEX组(地塞米松组)相当，其中20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂组略优。
图9为细胞迁移实验结果，数据用均值±标准差表示(n＝3)，与空白对照组相比，**P＜0.01；与ADR组相比，##P＜0.01；与DEX相比，&P＜0.05。图9中，Control组为空白组；ADR组即尾静脉注射阿霉素(ADR)；DEX组为地塞米松组，CK组为人参皂苷组；PPT组为原人参三醇组。
细胞迁移实验结果表明，与ADR组相比，20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂、人参皂苷CK、PPT组足细胞的迁移水平明显降低，具有显著统计学差异，与DEX组的效果相当。表明20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂、人参皂苷CK、PPT对足细胞的损伤具有一定的保护作用，降低足细胞运动水平的异常升高，防止其从肾小球基底膜脱落。
图10为细胞免疫荧光实验结果，数据用均值±标准差表示(n＝3)，与空白对照组相比，**P＜0.01；与ADR组相比，##P＜0.01。
细胞免疫荧光实验结果，与空白组相比，ADR组糖皮质激素受体GR的表达量明显下降；与ADR组相比DEX和给人参皂苷给药组(人参皂苷CK、20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂、PPT)GR的表达量明显升高，三种人参皂苷中20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂及PPT组GR的表达量略高于CK组。将同一位置GR与DAPI荧光图Merge后，发现与Control组相比，ADR组GR与DAPI重合的部分明显较少(P＜0.05)；与ADR组相比，各给药组GR与DAPI重合的部分明显较多(P＜0.01)。表明三种人参皂苷均可以促进GR的核易位进程。三种人参皂苷给药组中20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂组重合的部分较多，表明20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂促进足细胞中GR的核易位的作用效果较优于人参皂苷CK和PPT。
图11为细胞免疫荧光实验结果，数据用均值±标准差表示(n＝3)，与空白对照组相比，**P＜0.01；与ADR组相比，#P＜0.05，##P＜0.01；与DEX相比，&P＜0.05，&&P＜0.01。
实验结果表明，与空白组相比，ADR组的Desmin(足细胞损伤标志蛋白)表达水平显著升高(P＜0.01)；与ADR组相比，20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂、CK、PPT组Desmin的表达水平明显下调(P＜0.05)，效果与DEX组相当，表明三种人参皂苷均可以缓解足细胞损伤。
实验结果表明，与空白组相比，ADR组GR的表达水平明显下降(P＜0.01)；与ADR组相比，20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂、CK、PPT组GR的表达水平明显升高，但效果不如DEX组明显，其中20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂的GR表达水平优于CK和PPT组。
图12为细胞免疫荧光实验结果，数据用均值±标准差表示(n＝3)，与空白对照组相比，**P＜0.01；与ADR组相比，#P＜0.05，##P＜0.01；与DEX相比，&P＜0.05，&&P＜0.01。
实验结果表明，与空白组相比，ADR组的炎症因子NF-κB P65及磷酸化的NF-κB P65(p-NF-κB P65)的表达水平明显升高，与ADR组相比，20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂、人参皂苷CK、PPT组NF-κB P65及P-NF-κB P65的表达水平明显下调，其中20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂和PPT下调NF-κB P65表达水平的作用效果优于人参皂苷CK，与DEX相当；20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂下调p-NF-κB P65表达水平的作用效果略优于PPT和人参皂苷CK。
实验结论
20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂、人参皂苷CK和PPT均可以在一定程度上缓解ADR诱导足细胞的损伤、改善损伤足细胞的炎症反应；20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂在缓解ADR诱导足细胞损伤、抑制足细胞迁移、改善GR及炎症相关因子的表达水平方面较优于CK和PPT，并且与GR的结合活性也较高。
实施例18
本发明20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂的药效学研究试验。
目的：探究20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂对肾病综合征(NS)大鼠的保护作用。
对实施例1所制备的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂进行药效学研究，其实验结果如表4和图13所示。
表4中，模型组：给大鼠静脉注射注射用盐酸多柔比星；
醋酸泼尼松组(阳性药组)：给大鼠口服醋酸泼尼松片；
20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂(10mg/kg)组：给大鼠口服20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂(10mg/kg)；
20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂(20mg/kg)组：给大鼠口服20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂(20mg/kg)。
表4 24h尿蛋白实验结果
Figure BDA0003491664360000201
结果表明，静脉注射注射用盐酸多柔比星后，大鼠尿蛋白排泄量逐渐增加。1周后，模型组大鼠尿蛋白含量显著高于正常对照组；第14天开始，模型组大鼠尿蛋白含量快速升高。阳性药(醋酸泼尼松片)、20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂显著降低大鼠第2、3和4周尿蛋白含量；其中20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂(20mg)组降低蛋白尿效果最显著，在第3周和第4周时的降低蛋白尿效果优于阳性药(醋酸泼尼松)组。
图14为血生化指标结果图，结果表明，尾静脉注射盐酸多柔比星后大鼠血清白蛋白和总蛋白含量降低，胆固醇、甘油三酯、尿素氮和血肌酐水平升高。阳性药(醋酸泼尼松)组、20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂组，药物都显著提高血清总蛋白和白蛋白水平，并且降低胆固醇、甘油三酯、尿素氮和血肌酐水平，其中20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂(20mg)组治疗效果最好。
图15为HE染色后在光镜下观察的各组大鼠肾组织图片(放大倍数200X)。结果表明，HE染色后在光镜下观察的各组大鼠肾组织结构如图15所示：与正常组相比，模型组大鼠肾小球结构与体积无明显变化，可发现部分肾小球周围肾间质有少量炎性细胞浸润(红色箭头)。与模型组相比，各20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂药物干预组大鼠肾小球结构与体积正常。
图16为肾小球的Desmin免疫组化染色结果(放大倍数400X)。结果表明，Desmin蛋白作为肾损伤的一个标志蛋白，在激素(醋酸泼尼松)、20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂给药后，降低了Desmin的表达，一定程度上改善了肾损伤的程度，20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂组缓解肾损伤效果较好。
图17为肾组织透射电镜结果图。如透射电镜图所示，正常组大鼠肾足细胞突触清晰可见，无肿胀和萎缩，与正常组相比，模型组大鼠肾组织超微结构的病理变化主要表现为足突的广泛融合、裂空间隙消失(红色箭头为典型足突融合区域)，然而原人参二醇药物治疗后，能够有效减少足突融合程度，20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂20mg组效果最好。
实验结论
20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂对阿霉素所致的肾病综合症模型有治疗作用，特别是对尿蛋白的改善效果优于糖皮质激素醋酸泼尼松。
实施例19
对实施例1所制备的20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂进行稳定性试验，其结果如表5和表6所示。
表5 影响因素试验
Figure BDA0003491664360000221
表6 加速试验
Figure BDA0003491664360000222
稳定性试验结果表明，本发明20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂各指标均符合要求，稳定性好，质量可控。
本发明20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂载药量高，20(S)-PPD载于磷脂/20(S)-PPD形成的双分子膜与乳剂界面膜中。
利用超速离心法对实施例1所制备的制剂进行药物相分布测定，W(20(S)-PPDo)/％为油相中20(S)-PPD的质量百分含量，W(20(S)-PPDA)/％为水相中20(S)-PPD的质量百分含量，W(20(S)-PPDI)/％为磷脂/20(S)-PPD形成的双分子膜与乳剂界面膜中20(S)-PPD的质量百分含量。其结果如表7所示：
表7 药物相分布测定
Figure BDA0003491664360000231
20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂中，质量分数为19％的20(S)-PPD存在于水相，质量分数为3.5％的20(S)-PPD存在于油相，由W(20(S)-PPDI)％＝1-W(20(S)-PPDA)/％-W(20(S)-PPDo)/％计算得质量分数为77.5％的20(S)-PPD存在于磷脂/20(S)-PPD形成的双分子膜与乳剂界面膜中。
本发明20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂载药量高，稳定性好，制剂中20(S)-PPD浓度可以控制在1～20mg/ml(m/v)。利用超速离心法测定其包封率达85％以上，RSD＜2％。经口服给药后，绝对生物利用度提高到31％。可显著缓解维持肾小球滤过屏障完整性的足细胞的损伤，治疗NS等慢性肾病综合征。
实施例20
对实施例2～14所制备的制剂也进行了影响因素试验研究、药代动力学研究、药效学研究。其结果均证明本发明20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂载药量高，稳定性好，口服绝对生物利用度高，药效显著。
对比例1
大豆磷脂PC纯度较低，Vtmax值较大，且含少量阴离子成分，如磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油，最终使制备出来的乳剂微粒产生较大的ζ-电位，提高粒子之间的静电斥力，阻碍乳滴之间的聚集和絮凝，从而进一步提高制剂的物理稳定性。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂，其特征在于，所述制剂包括水相、药效成分相和油相；所述水相包括水、糖类、表面活性剂和防腐剂；所述药效成分相包括20(S)-PPD、磷脂和无水乙醇；所述油相包括大豆油和/或中链甘油三酯；
所述表面活性剂包括油酸钠、吐温-80和泊洛沙姆188中的一种或两种以上。
2.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述磷脂包括大豆磷脂和/或卵黄磷脂。
3.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述糖类包括三氯蔗糖、葡萄糖、果糖和麦芽糖中的一种或两种以上。
4.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述所述防腐剂包括山梨酸钾和/或苯甲酸钠。
5.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述制剂中，20(S)-PPD的质量浓度为1～20mg/ml。
6.根据权利要求5所述的制剂，其特征在于，以每100g水的质量为基准，所述制剂包括磷脂3～5g、无水乙醇5～15mL、油相10～15g、表面活性剂0.05～0.2g、糖类0.02～0.03g和防腐剂0.02～0.03g。
7.权利要求1～6任一项所述制剂的制备方法，包括以下步骤：
1)将表面活性剂、糖类、防腐剂和水混合，得到水相；
2)将20(S)-PPD、磷脂和无水乙醇混合，得到药效成分相，将药效成分相注入步骤1)所述水相中，得到混合液；
3)将油相和步骤2)所述混合液进行混合乳化，过滤，得到20(S)-PPD脂质体乳剂复合体口服给药制剂。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤2)所述混合的温度为50～80℃。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，乳化的方式包括高速剪切结合高压均质、搅拌或超声；当所述乳化的方式为高速剪切结合高压均质时，所述高速剪切的剪切转速为5000～20000rpm，所述高速剪切的时间为1～10min，所述高压均质的压力为400～1000bar，所述高压均质的循环次数为2～10次。
10.权利要求1～7任一项所述的制剂或权利要求8～9任一项所述制备方法制备得到的制剂在制备改善足细胞损伤的药物或治疗慢性肾病综合征的药物中的应用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114831935A (zh) * 2022-05-18 2022-08-02 沈阳信康药物研究有限公司 一种可鼻饲给药的无菌20(s)-ppd口服液体制剂及其制备方法和应用

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1223112A (zh) * 1998-01-16 1999-07-21 华东师范大学 神经酰胺脂质体乳剂的制备方法
US20030175315A1 (en) * 2002-01-05 2003-09-18 Yoo Byung Hee Nanoemulsion comprising metabolites of ginseng saponin as an active component and a method for preparing the same, and a skin-care composition for anti-aging containing the same
CN1626101A (zh) * 2003-08-25 2005-06-15 山东绿叶天然药物研究开发有限公司 含有人参皂苷的纳米乳剂及其制备方法和用途
CN1850098A (zh) * 2006-02-27 2006-10-25 杭州创新中药标准化研究所有限公司 原人参二醇脂质体及其制备方法
CN101816632A (zh) * 2010-04-23 2010-09-01 广东药学院 一种复合功能脂质体及其制备方法和应用
CN103800286A (zh) * 2012-11-07 2014-05-21 上海中药创新研究中心 一种20(s)-原人参二醇自微乳组合物及其制备方法和应用
CN105748409A (zh) * 2016-03-01 2016-07-13 赵树民 原人参二醇亚微乳制剂及其制备方法和用途
TW201642834A (zh) * 2015-06-04 2016-12-16 shui-sheng Wang 原人參二醇注射用乳劑及其製備方法
CN113637045A (zh) * 2020-05-11 2021-11-12 山东铂源生物医药有限公司 原人参二醇衍生物及其制备方法和应用

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1223112A (zh) * 1998-01-16 1999-07-21 华东师范大学 神经酰胺脂质体乳剂的制备方法
US20030175315A1 (en) * 2002-01-05 2003-09-18 Yoo Byung Hee Nanoemulsion comprising metabolites of ginseng saponin as an active component and a method for preparing the same, and a skin-care composition for anti-aging containing the same
CN1626101A (zh) * 2003-08-25 2005-06-15 山东绿叶天然药物研究开发有限公司 含有人参皂苷的纳米乳剂及其制备方法和用途
CN1850098A (zh) * 2006-02-27 2006-10-25 杭州创新中药标准化研究所有限公司 原人参二醇脂质体及其制备方法
CN101816632A (zh) * 2010-04-23 2010-09-01 广东药学院 一种复合功能脂质体及其制备方法和应用
CN103800286A (zh) * 2012-11-07 2014-05-21 上海中药创新研究中心 一种20(s)-原人参二醇自微乳组合物及其制备方法和应用
TW201642834A (zh) * 2015-06-04 2016-12-16 shui-sheng Wang 原人參二醇注射用乳劑及其製備方法
CN105748409A (zh) * 2016-03-01 2016-07-13 赵树民 原人参二醇亚微乳制剂及其制备方法和用途
CN113637045A (zh) * 2020-05-11 2021-11-12 山东铂源生物医药有限公司 原人参二醇衍生物及其制备方法和应用

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114831935A (zh) * 2022-05-18 2022-08-02 沈阳信康药物研究有限公司 一种可鼻饲给药的无菌20(s)-ppd口服液体制剂及其制备方法和应用
CN114831935B (zh) * 2022-05-18 2023-04-07 沈阳信康药物研究有限公司 一种可鼻饲给药的无菌20(s)-ppd口服液体制剂及其制备方法和应用

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