CN114414807A - 一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条及其制备方法，包括以下步骤：S1：配置样品垫处理液，并通过样品垫处理液对玻璃纤维膜进行处理制备获得样品垫；S2：配置金标垫处理液，并通过金标垫处理液对玻璃纤维膜进行处理制备获得金标垫；S3：配置抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体免疫金，使用喷金划膜一体机将制备好的免疫金按3μl/cm喷到处理好的金标垫上。本发明基于免疫侧向流层析技术，检测过程中不需要借助仪器，能够通过肉眼判断血液中是否有乙型肝炎表面抗原；检测结果准确，检测时间短，并且不会对被检者造成身体损伤；因为检测时间短，可在手术前对病人进行急性检测，有利于保护医护人员，有效阻断传染病的传播。
Description
技术领域
本发明涉及乙型肝炎试纸技术领域，尤其涉及一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸及其制备方法。
背景技术
乙型肝炎病毒(HBV)，简称乙肝病毒，是一种易导致人类和猩猩感染乙型病毒性肝炎疾病的DNA病毒，乙肝病毒是一种慢性传染性疾病，是世界上最常见的传染病之一，而我国是乙型肝炎的高发区，乙肝病人累积病人多，危害严重。乙肝病毒传染性比引起艾滋病的HIV病毒强100倍，该病毒的持续性感染可能会导致乙型肝炎、肝硬化和肝细胞癌等疾病，因其具是传染性疾病，乙肝病毒携带者及患者在学习工作和人际交往等社会活动中易遭受到不同程度的歧视，同时因该病毒会严重影响人类健康，目前已经受到人们的广泛重视。
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是感染乙肝病毒感染的指标之一，在临床上可根据检测乙肝表面抗原分析乙型肝炎病毒携带者或乙型肝炎患者的病情状况，同时检测乙型肝炎表面抗原在阻断乙型肝炎病毒在人群中的广泛传播过程中起着极其重要的作用。
如申请号为CN202010598229.5公开了一种乙型肝炎表面抗原检测试剂盒，以及申请号为CN201911422123.3公开了一种乙型肝炎表面抗原检测方法，一种乙型肝炎表面抗原检测试剂盒其具体公开了一种使用磁微粒化学发光法，一种乙型肝炎表面抗原检测方法其具体公开了酶联免疫技术检测乙型肝炎表面抗原的方法，这两种方法均存在等待时间长、检测步骤多、需要借助仪器、检测费用昂贵等缺点，使其不易于在基层医院推广使用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条及其制备方法，适用于急诊或手术前急查乙型肝炎病毒，试纸条检测具有检测时间短、不需要借助仪器、检测费用低和操作简单等优点，适合在基层医院门诊推广使用。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条制备方法，包括以下步骤：
S1：配置样品垫处理液，并通过样品垫处理液对玻璃纤维膜进行处理制备获得样品垫；
S2：配置金标垫处理液，并通过金标垫处理液对玻璃纤维膜进行处理制备获得金标垫；
S3：配置抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体免疫金，使用喷金划膜一体机将制备好的免疫金按3μl/cm喷到处理好的金标垫上，随后将喷有免疫金的金标垫放入烘箱45℃烘2小时；
S4：按照定容后的总体积的比例是：0.61g：0.82g：3.2g：100ml取用NaH2PO4.2H2O：氯化钠：蔗糖进行溶解后调节pH为8-9，制备获得划膜稀释液并装瓶备用；
S5：划膜，使用划膜稀释液将乙型肝炎表面抗原抗体浓度稀释到0.5mg/ml；将羊抗鼠IgG抗体稀释到0.4mg/ml；使用喷金划膜一体机分别将检测线和对照线划到已经粘好的带有背板的硝酸纤维素膜上，随后划好检测线和对照线的背板放入烘箱45℃烘2小时。
作为上述技术方案的进一步描述：
所述步骤S1中配置样品垫处理液具体为按照定容后的总体积的比例是：0.9g：0.85g：0.7g：0.15ml：100ml取用三羟甲基氨基甲烷、聚乙烯吡咯烷酮、牛血清白蛋白和S9溶解混合获得样品垫处理液。
作为上述技术方案的进一步描述：
所述步骤S1中制备获得样品垫具体为：将样品垫处理液调节pH为8-9，再将配好的溶液浸泡玻璃纤维膜；随后放入烘箱45℃烘干2小时制备获得样品垫。
作为上述技术方案的进一步描述：
所述步骤S2中配置金标垫处理液具体为：按照定容后的总体积的比例为0.45g：0.4g：0.09ml：100ml取用三羟甲基氨基甲烷：牛血清白蛋白：S9进行溶解混合调节pH为8-9获得金标处理液。
作为上述技术方案的进一步描述：
所述步骤S2中制备获得金标垫具体为：将配好的金标处理液浸泡玻璃纤维膜；随后放入烘箱45℃烘干2小时制备获得金标垫。
作为上述技术方案的进一步描述：
所述步骤S3中配置抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体免疫金具体为：向搅拌的胶体金溶液中加入碳酸钾调节pH至8-9，然后加入抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体，继续搅拌30min后，加入牛血清白蛋白溶液，搅拌30min后离心，弃掉上清，在沉淀中加入2倍体积金标稀释液，混匀后得到抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体免疫金。
作为上述技术方案的进一步描述：
所述乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体加入量为5μg/ml，所述牛血清白蛋白溶液的加入体积为所述胶体金体积的1/10。
作为上述技术方案的进一步描述：
所述金标稀释液制备方法具体为：按照定容后的总体积的比例是0.8g：1.0g：2.5g：100ml取用三羟甲基氨基甲烷：牛血清白蛋白：海藻糖进行溶解后调节pH为8-9，制备获得金标稀释液并装瓶备用。
一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条，其为上述的一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条制备方法制备获得的试纸条，包括底板；所述底板上依次粘贴有吸收纸、硝酸纤维素膜、金标垫以及样品垫；所述硝酸纤维素膜上设置有对照线以及检测线，所述检测线靠近所述样品垫的一侧。
本发明提供了一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条及其制备方法。具备以下有益效果：
该检测乙型肝炎表面抗原的试纸条及其制备方法，基于免疫侧向流层析技术，检测过程中不需要借助仪器，能够通过肉眼判断血液中是否有乙型肝炎表面抗原；检测结果准确，检测时间短，并且不会对被检者造成身体损伤；因为检测时间短，可在手术前对病人进行急性检测，有利于保护医护人员，有效阻断传染病的传播；检测费用低、操作简单等优点，适合在基层医院门诊推广使用。
附图说明
图1为本发明提出的一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条的结构示意图。
图例说明：
1、吸收纸；2、样品垫；3、硝酸纤维素膜；4、金标垫；5、对照线；6、检测线；7、底板。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
参照图1，一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条制备方法，包括以下步骤：
S1：配置样品垫处理液，并通过样品垫处理液对玻璃纤维膜进行处理制备获得样品垫；其中，配置样品垫处理液具体为按照定容后的总体积的比例是：0.9g：0.85g：0.7g：0.15ml：100ml取用三羟甲基氨基甲烷、聚乙烯吡咯烷酮、牛血清白蛋白和S9溶解混合获得样品垫处理液，进一步的，制备获得样品垫具体为：将样品垫处理液调节pH为8-9，再将配好的溶液浸泡玻璃纤维膜；随后放入烘箱45℃烘干2小时制备获得样品垫。
S2：配置金标垫处理液，并通过金标垫处理液对玻璃纤维膜进行处理制备获得金标垫；具体的，配置金标垫处理液具体为：按照定容后的总体积的比例为0.45g：0.4g：0.09ml：100ml取用三羟甲基氨基甲烷：牛血清白蛋白：S9进行溶解混合调节pH为8-9获得金标处理液，制备获得金标垫具体为：将配好的金标处理液浸泡玻璃纤维膜；随后放入烘箱45℃烘干2小时制备获得金标垫。
S3：配置抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体免疫金，使用喷金划膜一体机将制备好的免疫金按3μl/cm喷到处理好的金标垫上，随后将喷有免疫金的金标垫放入烘箱45℃烘2小时；
S4：按照定容后的总体积的比例是：0.61g：0.82g：3.2g：100ml取用NaH2PO4.2H2O：氯化钠：蔗糖进行溶解后调节pH为8-9，制备获得划膜稀释液并装瓶备用；
S5：划膜，使用划膜稀释液将乙型肝炎表面抗原抗体浓度稀释到0.5mg/ml；将羊抗鼠IgG抗体稀释到0.4mg/ml；使用喷金划膜一体机分别将检测线和对照线划到已经粘好的带有背板的硝酸纤维素膜上，随后划好检测线和对照线的背板放入烘箱45℃烘2小时。
步骤S3中配置抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体免疫金具体为：向搅拌的胶体金溶液中加入碳酸钾调节pH至8-9，然后加入抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体，继续搅拌30min后，加入牛血清白蛋白溶液，搅拌30min后离心，其中，搅拌是置于磁力搅拌器上完成的，弃掉上清，在沉淀中加入2倍体积金标稀释液，混匀后得到抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体免疫金。乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体加入量为5μg/ml，牛血清白蛋白溶液的加入体积为胶体金体积的1/10。
金标稀释液制备方法具体为：按照定容后的总体积的比例是0.8g：1.0g：2.5g：100ml取用三羟甲基氨基甲烷：牛血清白蛋白：海藻糖进行溶解后调节pH为8-9，制备获得金标稀释液并装瓶备用。
一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条，其为上述的一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条制备方法制备获得的试纸条，包括底板7；底板7上依次粘贴有吸收纸1、硝酸纤维素膜3、金标垫4以及样品垫2；硝酸纤维素膜3上设置有对照线5以及检测线6，检测线6靠近样品垫2的一侧。具体的，该检测乙型肝炎表面抗原的试纸条的检测方法为，取待检测液进滴在样品垫2上，根据对照线5以及检测线6的显色状态进行判断检测结果。
该检测乙型肝炎表面抗原的试纸条及其制备方法，是免疫侧向流层析技术，检测过程中不需要借助仪器，能够通过肉眼判断血液中是否有乙型肝炎表面抗原；检测结果准确，检测时间短，并且不会对被检者造成身体损伤；因为检测时间短，可在手术前对病人进行急性检测，有利于保护医护人员，有效阻断传染病的传播；检测费用低、操作简单等优点，适合在基层医院门诊推广使用。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：配置样品垫处理液，并通过样品垫处理液对玻璃纤维膜进行处理制备获得样品垫；
S2：配置金标垫处理液，并通过金标垫处理液对玻璃纤维膜进行处理制备获得金标垫；
S3：配置抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体免疫金，使用喷金划膜一体机将制备好的免疫金按3μl/cm喷到处理好的金标垫上，随后将喷有免疫金的金标垫放入烘箱45℃烘2小时；
S4：按照定容后的总体积的比例是：0.61g：0.82g：3.2g：100ml取用NaH2PO4.2H2O：氯化钠：蔗糖进行溶解后调节pH为8-9，制备获得划膜稀释液并装瓶备用；
S5：划膜，使用划膜稀释液将乙型肝炎表面抗原抗体浓度稀释到0.5mg/ml；将羊抗鼠IgG抗体稀释到0.4mg/ml；使用喷金划膜一体机分别将检测线和对照线划到已经粘好的带有背板的硝酸纤维素膜上，随后划好检测线和对照线的背板放入烘箱45℃烘2小时。
2.根据权利要求1所述的一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条及其制备方法，其特征在于，所述步骤S1中配置样品垫处理液具体为按照定容后的总体积的比例是：0.9g：0.85g：0.7g：0.15ml：100ml取用三羟甲基氨基甲烷、聚乙烯吡咯烷酮、牛血清白蛋白和S9溶解混合获得样品垫处理液。
3.根据权利要求2所述的一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条及其制备方法，其特征在于，步骤S1中制备获得样品垫具体为：将样品垫处理液调节pH为8-9，再将配好的溶液浸泡玻璃纤维膜；随后放入烘箱45℃烘干2小时制备获得样品垫。
4.根据权利要求1所述的一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条及其制备方法，其特征在于，所述步骤S2中配置金标垫处理液具体为：按照定容后的总体积的比例为0.45g：0.4g：0.09ml：100ml取用三羟甲基氨基甲烷：牛血清白蛋白：S9进行溶解混合调节pH为8-9获得金标处理液。
5.根据权利要求4所述的一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条及其制备方法，其特征在于，所述步骤S2中制备获得金标垫具体为：将配好的金标处理液浸泡玻璃纤维膜；随后放入烘箱45℃烘干2小时制备获得金标垫。
6.根据权利要求1所述的一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条及其制备方法，其特征在于，所述步骤S3中配置抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体免疫金具体为：向搅拌的胶体金溶液中加入碳酸钾调节pH至8-9，然后加入抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体，继续搅拌30min后，加入牛血清白蛋白溶液，搅拌30min后离心，弃掉上清，在沉淀中加入2倍体积金标稀释液，混匀后得到抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体免疫金。
7.根据权利要求6所述的一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条及其制备方法，其特征在于，所述乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体加入量为5μg/ml，所述牛血清白蛋白溶液的加入体积为所述胶体金体积的1/10。
8.根据权利要求6所述的一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条及其制备方法，其特征在于，所述金标稀释液制备方法具体为：按照定容后的总体积的比例是0.8g：1.0g：2.5g：100ml取用三羟甲基氨基甲烷：牛血清白蛋白：海藻糖进行溶解后调节pH为8-9，制备获得金标稀释液并装瓶备用。
9.一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条，其为上述权利要求1-7任一项所述的一种检测乙型肝炎表面抗原的试纸条制备方法制备获得的试纸条，其特征在于：包括底板(7)；
所述底板(7)上依次粘贴有吸收纸(1)、硝酸纤维素膜(3)、金标垫(4)以及样品垫(2)；
所述硝酸纤维素膜(3)上设置有对照线(5)以及检测线(6)，所述检测线(6)靠近所述样品垫(2)的一侧。
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