CN109932505A - 一种检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条及其制备、使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物技术领域，具体公开一种检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条及其制备、使用方法。所述试纸条，包括PVC底板及结合在PVC底板至少一表面中段的硝酸纤维素膜，设置在所述PVC底板至少一表面的一端、且与所述硝酸纤维素膜邻接的吸水滤纸，设置在所述PVC底板至少一表面的另一端、且与所述硝酸纤维素膜邻接的结合垫，以及设置在远离所述硝酸纤维素膜的一端、且与所述结合垫邻接的样品垫；其中，所述硝酸纤维素膜分别在临近结合垫和吸水滤纸处设有检测线和质控线。本发明提供的试纸条能够快速、简便、广谱地检测多个血清群的沙门氏菌，从而能够方便快捷地检测食品中可能污染的沙门氏菌。

Description

一种检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条及其制备、使用 方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条及其制备、使用方法。

背景技术

沙门氏菌是最大群肠道性致病菌,主要寄存在畜禽体内和蛋类中,具有繁殖速度快,生存能力强等特点。沙门氏菌致病物质有菌毛、菌体(O)抗原、内毒素和肠毒素。菌毛和O抗原与其侵袭力有关，内毒素导致肠道局部炎症反应和全身性中毒症状，部分沙门氏菌可产生霍乱样肠毒素，导致严重的腹泻。沙门氏菌具有传染性,容易引起群发性感染,造成严重的后果。有报导表明,人的大多数沙门氏菌感染直接或间接地与动物性食品有关,在世界各国各类细菌性的食物中毒中,沙门氏菌食物中毒位居前列。

根据O抗原可将沙门氏菌分为若干个O群，根据O和H抗原的不同组合，可将沙门氏菌划分为许多血清型，迄今世界上已鉴定出2500多个不同的沙门氏菌血清型。为了有效控制沙门氏菌病的传播,就必须有快速和可靠的方法来检测食物及环境中的沙门氏菌。

传统的食品中检测沙门氏菌的方法主要是用培养法，繁琐、费时，且存在阳性率相对偏低，不能早期诊断的缺陷。目前应用于检测沙门氏菌的方法有化学发光法、免疫分析方法、免疫层析法、免疫比浊法、酶联免疫吸附法以及聚合酶链反应(PCR)技术等，可归纳为以下几类：

化学发光免疫分析方法(CLA)：它是一种测量超微量活性物质(包括药物、毒物、微生物、激素、蛋白质)的技术，是将免疫反应与发光测定结合起来的分析方法，更灵敏，更为准确，但化学发光免疫分析需要专门的设备，测试成本高。

酶联免疫吸附法(ELISA)：它是继免疫萤光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术，敏感性很高，稳定性好，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域，目前主要用直接EIA法与夹心ELISA法对仓品中沙门氏菌的检测，但是elisa检测法时间长，操作复杂。还需配备相应设备，需要实验室里进行操作，不满足快检要求。

免疫比浊法：适用于自动化分析，但要有专门的仪器，且要求反应在10分钟内完成，必须有高活性的抗体和合适的反应体系。此法检测血清用量大且易受到脂血的影响。

聚合酶链反应(PCR)：具有简便、快速、敏感性高和特异性强的优点,已广泛应用于微生物检测、遗传病诊断等诸多领域，但其会引起的实验室环境的污染和使用的染色剂具有致癌性等影响。

发明内容

针对现有的检测沙门氏菌的方法存在的操作复杂，检测费时，对设备要求高等问题，本发明提供一种检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条及其制备方法。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条，包括PVC底板及结合在PVC底板至少一表面中部的硝酸纤维素膜，设置在所述PVC底板至少一表面的一端、且与所述硝酸纤维素膜邻接的吸水滤纸，设置在所述PVC底板至少一表面的另一端、且与所述硝酸纤维素膜邻接的结合垫，以及与所述结合垫邻接、且设置在远离所述硝酸纤维素膜一端的样品垫；其中，所述硝酸纤维素膜分别在临近结合垫和吸水滤纸处设有检测线和质控线；所述检测线包被有沙门氏菌单克隆抗体SP1；所述质控线包被有羊抗兔IgG抗体；所述结合垫包被有胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1。

相对于现有技术，本发明提供的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条，结构简单，携带方便，试纸条包被有胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1、沙门氏菌单克隆抗体SP1和羊抗兔IgG抗体，能够快速、简便、广谱地检测多个血清群的沙门氏菌，从而能够方便快捷地检测食品中可能污染的沙门氏菌，预防疾病的发生。

进一步地，本发明还提供了所述检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的制备方法。该制备方法，包括以下步骤：

a.利用氯金酸溶液和柠檬酸钠溶液制备胶体金，得到胶体金溶液；

b.在碱性条件下，向所述胶体金溶液中加入沙门氏菌多单克隆抗体DSP1进行标记处理，经封闭处理、离心、重悬，得到胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1；

c.将玻璃纤维素膜置于结合垫处理液中浸泡处理，制备金标垫；用胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1对所述金标垫进行喷金处理后，干燥后得到结合垫；

d.取沙门氏菌单克隆抗体SP1、羊抗兔IgG抗体，采用划膜仪分别划至硝酸纤维素膜的检测线、质控线的位置；

e.将玻璃纤维素膜置于样品垫处理液中浸泡处理，干燥后得到样品垫；

f.将吸水滤纸贴于PVC底板上，且所述吸水滤纸的一端叠合在所述硝酸纤维素膜的一端表面；将结合垫的一端叠合在所述硝酸纤维素膜的另一端表面；将样本垫的一端叠合在所述结合垫的另一端表面，进行切割处理，得到检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条。

相对于现有技术，本发明提供的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的制备方法，工艺简单，操作方便，绿色环保，安全可靠。

相应地，本发明提供了该检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的一种使用方法。该使用方法包括以下步骤：

(1)将样品经缓冲蛋白胨营养液富集培养后，取培养液菌体进行煮沸灭活处理，得到灭火后样本；

(2)取灭活后样本100-200uL加入到放有检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的试纸外壳的检测孔，静置15-30min；

(3)从试纸外壳的观察孔观察试纸条，硝酸纤维素膜上出现检测线、质控线两条线则为阳性，只出现质控线，则为阴性；无质控线，检测条出现品质问题，需更换检测条重新检测。

相对于现有技术，本发明的使用方法，由于检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条结构简单，携带方便，使用时操作简便，用时较少，无需特殊设备，样本在层析动力下，先与结合垫处胶体金标记的沙门氏菌抗体结合，再与检测线处沙门氏菌抗体特异结合，并在检测线位置形成一条紫红色的胶体金条带，完成检测，能够快速高效的对沙门氏菌进行检测，非常适用于食品的现场快速检测。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的结构示意图；

图中，1、PVC底板；2、样品垫；3、结合垫；4、硝酸纤维素膜；5、吸水滤纸；41、检测线；42、质控线。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明实施例提供一种检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条。该检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条，包括PVC底板及结合在PVC底板至少一表面中部的硝酸纤维素膜，设置在所述PVC底板至少一表面的一端、且与所述硝酸纤维素膜邻接的吸水滤纸，设置在所述PVC底板至少一表面的另一端、且与所述硝酸纤维素膜邻接的结合垫，以及与所述结合垫邻接、且设置在远离所述硝酸纤维素膜一端的样品垫；其中，所述硝酸纤维素膜分别在临近结合垫和吸水滤纸处设有检测线和质控线；所述检测线包被有沙门氏菌单克隆抗体SP1；所述质控线包被有羊抗兔IgG抗体；所述结合垫包被有胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1。

具体地，沙门氏菌单克隆抗体SP1，能够识别多达32种不同的沙门氏菌血清型，包括常见的食品污染血清型，有助于试剂条检测食品中的广谱型沙门氏菌。

优选地，所述检测线包被有沙门氏菌多单克隆抗体DSP1；所述质控线包被有羊抗兔IgG抗体；所述结合垫包被有胶体金标记的沙门氏菌单克隆抗体SP1，SP1与DSP1配合使用，可以识别多种不同的沙门氏菌血清型。

优选地，所述样品垫邻近所述结合垫的一端叠合设置在所述结合垫表面，方便样本溶液顺利的层析到结合垫与胶体金标记的沙门氏菌抗体结合。

优选地，所述结合垫邻近所述硝酸纤维素膜的一端叠合设置在所述硝酸纤维素膜表面，方便样本溶液顺利的层析到硝酸纤维素膜与检测线和质控线接触。

优选地，所述吸水滤纸邻近所述硝酸纤维素膜的一端叠合设置在所述硝酸纤维素膜表面，方便样本溶液顺利的层析到吸水滤纸，完成检测过程。

本发明实施例提供的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条，结构简单，携带方便，试纸条包被有胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1、沙门氏菌单克隆抗体SP1和羊抗兔IgG抗体，能够快速、简便、广谱地检测多个血清群的沙门氏菌，从而能够方便快捷地检测食品中可能污染的沙门氏菌，预防疾病的发生。

本发明在提供该检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的前提下，还进一步提供了该检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的制备方法。

在一实施例中，该制备方法包括以下步骤：

a.利用氯金酸溶液和柠檬酸钠溶液制备胶体金，得到胶体金溶液；

b.在碱性条件下，向所述胶体金溶液中加入沙门氏菌多单克隆抗体DSP1进行标记处理，经封闭处理、离心、重悬，得到胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1；

c.将玻璃纤维素膜置于结合垫处理液中浸泡处理，制备金标垫；用胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1对所述金标垫进行喷金处理后，干燥后得到结合垫；

d.取沙门氏菌单克隆抗体SP1、羊抗兔IgG抗体，采用划膜仪分别划至硝酸纤维素膜的检测线、质控线的位置；

e.将玻璃纤维素膜置于样品垫处理液中浸泡处理，干燥后得到样品垫；

f.将吸水滤纸贴于PVC底板上，且所述吸水滤纸的一端叠合在所述硝酸纤维素膜的一端表面；将结合垫的一端叠合在所述硝酸纤维素膜的另一端表面；将样本垫的一端叠合在所述结合垫的另一端表面，进行切割处理，得到检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条。

下面对上述制备方法做进一步的解释说明：

优选地，所述结合垫处理液为用D-海藻糖、BSA、Tween-20和硼酸缓冲液(pH9.0)配制成的溶液，对玻璃纤维素膜进行预处理，为了给胶体金标记的沙门氏菌抗体提供一个稳定的保存环境以及一个恒定的反应体系。

优选地，所述样品垫处理液为由Tris、BSA、酪蛋白、蔗糖、K30(PVP)和S9配制成的溶液，对玻璃纤维素膜进行预处理，为样品反应时提供一个恒定的反应体系、减少不同基质的干扰。

优选地，步骤c、e中，所述浸泡处理的时间为10-60s，使玻璃纤维素膜与处理液充分接触，达到预处理的效果，改善其亲水性。

优选地，步骤c、e中，所述干燥的的时间为12-18h，使充分干燥。

优选地，步骤c中，干燥的条件为温度36-38℃，湿度10％-30％，得到包被有胶体金标记的沙门氏菌抗体的结合垫。

优选地，步骤e中，干燥的条件为温度36-38℃，干燥得到样品垫。

优选地，所述胶体金溶液的制备方法为：量取纯化水装入锥形瓶中，加热至340℃，搅拌至沸腾，加入浓度为1％的氯金酸，加热并快速加入等体积的浓度为2％的柠檬酸钠，继续加热，液体颜色稳定为酒红色，室温冷却，得到粒径为35-45nm的胶体金溶液。

优选地，所述胶体金标记的沙门氏菌抗体的标记方法为：量取10mL胶体金溶液，加入0.2M的K₂CO₃溶液，至pH为8.2±0.05，放置在速度为70-90rpm的摇床上3-5min，加入150μg沙门氏菌多单克隆抗体DSP1，进行标记处理25-35min，加入100Μ的10％的BSA溶液，进行封闭处理25-35min，15000rpm、4℃离心10-15min，弃上清液，沉淀用600μL金标重悬液重悬，得到胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1，2-8℃备用。

优选地，步骤c中，所述喷金处理采用三维平面划膜仪实现，得到包被有胶体金标记的沙门氏菌抗体的结合垫。

优选地，步骤d中，所述划膜仪的划膜量为1μL/cm，平台移动速度为50mm/s，得到包被有沙门氏菌单克隆抗体SP1的检测线和包被有羊抗兔IgG抗体的质控线。

本方法制备工艺简单，操作方便，绿色环保，安全可靠。

具体地，本发明还提供了检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的使用方法。

该使用方法，包括以下步骤：

(1)将样品经缓冲蛋白胨营养液富集培养后，取培养液菌体进行煮沸灭活处理，得到灭火后样本；

(2)取灭活后样本100-200uL加入到放有检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的试纸外壳的检测孔，静置15-30min；

(3)从试纸外壳的观察孔观察试纸条，硝酸纤维素膜上出现检测线、质控线两条线则为阳性，只出现质控线，则为阴性；无质控线，检测条出现品质问题，需更换检测条重新检测。

检测时，当含有沙门氏菌的样本加入检测孔后，在层析作用下，样本向吸水滤纸端移动，先经过结合垫，与其中的胶体金标记的沙门氏菌抗体结合，并继续向吸水滤纸端移动，当样本移动到检测线时，样本中的沙门氏菌(已结合了胶体金标记的沙门氏菌抗体)以双夹心的方式与检测线中包被的沙门氏菌抗体特异结合，从而留在检测线位置，形成一条紫红色的胶体金条带；未与沙门氏菌结合的胶体金标记的沙门氏菌抗体继续向上层析，移动到质控线时，与质控线中的羊抗兔IgG抗体特异结合，形成一条紫红色的胶体金条带，质控线是用来判定样本是否足够，层析过程是否正常，试剂是否变质的内控标准，如质控线不出现，该检测应判定为无效。

由于本发明提供的使用方法，由于检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条结构简单，携带方便，使用时操作简便，用时较少，无需特殊设备，样本在层析动力下，先与结合垫处胶体金标记的沙门氏菌抗体结合，再与检测线处沙门氏菌抗体特异结合，并在检测线位置形成一条紫红色的胶体金条带，完成检测，能够快速高效的对沙门氏菌进行检测。

为了更好的说明本发明实施例提供的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条及其制备、使用方法，下面通过实施例做进一步的举例说明。

实施例1

一种检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条

如图1所示，检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条，

包括PVC底板及结合在PVC底板1至少一表面中部的硝酸纤维素膜4，设置在所述PVC底板1至少一表面的一端、且与所述硝酸纤维素膜4邻接的吸水滤纸5，设置在所述PVC底板1至少一表面的另一端、且与所述硝酸纤维素膜4邻接的结合垫3，以及与所述结合垫3邻接、且设置在远离所述硝酸纤维素膜4一端的样品垫2；其中，所述硝酸纤维素膜4分别在临近结合垫3和吸水滤纸5处设有检测线41和质控线42；所述检测线41包被有沙门氏菌单克隆抗体SP1；所述质控线42包被有羊抗兔IgG抗体；所述结合垫3包被有胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1。

实施例2

检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的制备方法，包括如下步骤：

a.量取120mL纯化水装入锥形瓶中，加热至340℃，以300rpm搅拌至沸腾，加入2mL浓度为1％的氯金酸溶液，加热2min，并快速加入2mL浓度为2％的柠檬酸钠溶液，继续加热5min，液体颜色稳定为酒红色，室温冷却，得到粒径为35-45nm的胶体金溶液；

b.向量取10mL胶体金溶液，加入0.2M的K₂CO₃溶液，调节pH至8.2±0.05，放置在速度为80rpm的摇床上5min后，加入150μg沙门氏菌抗体，进行标记处理30min，加入100Μ的10％的BSA溶液，进行封闭处理30min，以15000rpm，4℃条件下离心15min，弃上清液，沉淀用600μL金标重悬液重悬，得到胶体金标记的沙门氏菌抗体，2-8℃备用；

c.取50g的D-海藻糖、5g的BSA、5mL的Tween-20和995mL的硼酸缓冲液(pH9.0)配制成结合垫处理液，将玻璃纤维素膜放入结合垫处理液中，浸泡10-60s后取出于37℃的干燥间干燥12-18h，得到金标垫；按照《三维平面划膜仪标准操作规程》的要求清洗仪器，将仪器调节至“喷金”模式，将制备好的胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1加入2号泵中，设置喷量2μL/cm，进行喷金操作，对金标垫进行喷金处理后，干燥处理12-18h，得到结合垫；

d.取沙门氏菌单克隆抗体SP1、羊抗兔IgG抗体，采用划膜仪以划膜量均为1uL/cm，平台移动速度为50mm/s，分别划至硝酸纤维素膜的检测线、质控线的位置；

e.取12.1g的Tris、5g的BSA、5g的酪蛋白、50g的蔗糖、0.5g的K30(PVP)和1g的S9溶于1000mL的去离子水中配制成样品垫处理液，将玻璃纤维素膜放入样品垫处理液中，浸泡10-60s后取出于37℃干燥12-18h，得到样品垫；

f.将吸水滤纸贴于PVC底板上，吸水滤纸压住硝酸纤维素膜上端上表面(2mm)；将结合垫上端搭载在硝酸纤维素膜下端上表面；将裁切好的样本垫下端对齐PVC底板的下端，样本垫的上端搭载在结合垫的下端上表面；将组装好的层析大板进行切割处理，得到4mm宽的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条。

将所得到的置于带有检测孔和观察孔的试纸外壳中，便于检测使用。

实施例3

检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的使用方法，包括如下步骤：

(1)将样品经缓冲蛋白胨营养液富集培养后，取培养液菌体进行煮沸灭活处理，得到灭火后样本；

(2)取灭活后样本100-200uL加入到放有检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的试纸外壳的检测孔，静置15-30min；

(3)从试纸外壳的观察孔观察试纸条，硝酸纤维素膜上出现检测线、质控线两条线则为阳性，只出现质控线，则为阴性；无质控线，检测条出现品质问题，需更换检测条重新检测。

本发明实施例中提供的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条对沙门氏菌的最低检测量1.0×10⁶cfu/mL，检测时间为10-15min，如表1所示；经过7h前增菌后，可检出样品中1.0×10²cfu/mL的沙门氏菌污染量，如表2所示。

表1

浓度

10<sup>1</sup>

10<sup>2</sup>

10<sup>3</sup>

10<sup>4</sup>

10<sup>5</sup>

10<sup>6</sup>

10<sup>7</sup>

空白

结果

/

/

阴性

阴性

阴性

阳性

阳性

表2

为了更好的说明本发明实施例提供的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的特性，将实施例2制备的试纸条经过64株不同细菌的检测验证，表明该试纸条能快速检测出除A群外的，其它血清型的的沙门氏菌，并与绝大多数的非沙门氏菌不产生假阳性结果，结果如表3所示。

表3

由以上数据可知，本发明所提供的试剂条使用时操作简便，用时较少，无需特殊设备，能够快速高效的对沙门氏菌进行检测，非常适用于食品的现场快速检测。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条，其特征在于：包括PVC底板及结合在PVC底板至少一表面中段的硝酸纤维素膜，设置在所述PVC底板至少一表面的一端、且与所述硝酸纤维素膜邻接的吸水滤纸，设置在所述PVC底板至少一表面的另一端、且与所述硝酸纤维素膜邻接的结合垫，以及设置在远离所述硝酸纤维素膜的一端、且与所述结合垫邻接的样品垫；其中，所述硝酸纤维素膜分别在临近结合垫和吸水滤纸处设有检测线和质控线；所述检测线包被有沙门氏菌单克隆抗体SP1；所述质控线包被有羊抗兔IgG抗体；所述结合垫包被有胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1。

2.如权利要求1所述的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条，其特征在于：所述检测线包被有沙门氏菌多单克隆抗体DSP1；所述质控线包被有羊抗兔IgG抗体；所述结合垫包被有胶体金标记的沙门氏菌单克隆抗体SP1。

3.如权利要求1所述的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条，其特征在于：所述吸水滤纸邻近所述硝酸纤维素膜的一端叠合设置在所述硝酸纤维素膜表面；和/或

所述结合垫邻近所述硝酸纤维素膜的一端叠合设置在所述硝酸纤维素膜表面；和/或

所述样品垫邻近所述结合垫的一端叠合设置在所述结合垫表面。

4.如权利要求1-3任一项所述的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

a.利用氯金酸溶液和柠檬酸钠溶液制备胶体金，得到胶体金溶液；

b.在碱性条件下，向所述胶体金溶液中加入沙门氏菌多单克隆抗体DSP1进行标记处理，经封闭处理、离心、重悬，得到胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1；

c.将玻璃纤维素膜置于结合垫处理液中浸泡处理，制备金标垫；用胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1对所述金标垫进行喷金处理后，干燥后得到结合垫；

d.取沙门氏菌单克隆抗体SP1、羊抗兔IgG抗体，采用划膜仪分别划至硝酸纤维素膜的检测线、质控线的位置；

e.将玻璃纤维素膜置于样品垫处理液中浸泡处理，干燥后得到样品垫；

f.将吸水滤纸贴于PVC底板上，且所述吸水滤纸的一端叠合在所述硝酸纤维素膜的一端表面；将结合垫的一端叠合在所述硝酸纤维素膜的另一端表面；将样本垫的一端叠合在所述结合垫的另一端表面，进行切割处理，得到检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条。

5.如权利要求4所述的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的制备方法，其特征在于：步骤c、e中，所述浸泡处理的时间为10-60s；和/或

步骤c、e中，所述干燥的的时间为12-18h；和/或

步骤c中，干燥的条件为温度36-38℃，湿度10％-30％；和/或

步骤e中，干燥的条件为温度36-38℃。

6.如权利要求4所述的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的制备方法，其特征在于：所述胶体金溶液的制备方法为：量取纯化水装入锥形瓶中，加热至340℃，搅拌至沸腾，加入浓度为1％的氯金酸，加热并快速加入等体积的浓度为2％的柠檬酸钠，继续加热，液体颜色稳定为酒红色，室温冷却，得到粒径为35-45nm的胶体金溶液。

7.如权利要求4所述的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的制备方法，其特征在于：所述胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1的标记方法为：量取10mL胶体金溶液，加入0.2M的K₂CO₃溶液，至pH为8.2±0.05，放置在速度为70-90rpm的摇床上3-5min，加入150μg沙门氏菌多单克隆抗体DSP1，进行标记处理25-35min，加入100Μ的10％的BSA溶液，进行封闭处理25-35min，15000rpm、4℃离心10-15min，弃上清液，沉淀用600μL金标重悬液重悬，得到胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1，2-8℃备用。

8.如权利要求4所述的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的制备方法，其特征在于：步骤c中，所述喷金处理采用三维平面划膜仪实现；和/或

步骤d中，所述划膜仪的划膜量为1μL/cm，平台移动速度为50mm/s。

9.如权利要求1-3任一项所述的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的使用方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)将样品经缓冲蛋白胨营养液富集培养后，取培养液菌体进行煮沸灭活处理，得到灭火后样本；

(2)取灭活后样本100-200uL加入到放有检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的试纸外壳的检测孔，静置15-30min；

(3)从试纸外壳的观察孔观察试纸条，硝酸纤维素膜上出现检测线、质控线两条线则为阳性，只出现质控线，则为阴性；无质控线，检测条出现品质问题，需更换检测条重新检测。

10.如权利要求9所述的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的使用方法，其特征在于：所述检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的样品垫在试纸外壳的检测处；试纸条的硝酸纤维素膜在试纸外壳的观察孔处。