CN114414723A - 一种心可舒片薄层全药味鉴别方法 - Google Patents

一种心可舒片薄层全药味鉴别方法 Download PDF

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Abstract

本申请属于药味鉴别技术领域，具体公开一种心可舒片薄层全药味鉴别方法，包括使用一块薄层板和两种展开剂鉴别出心可舒片五味药材中的七种指标性成分，所述展开剂包括氯仿‑乙酸乙酯‑甲醇‑水和石油醚‑乙酸乙酯两种展开剂。本申请通过使用一块薄层板和两种展开剂就替代了原来五块薄层板和五种展开剂的鉴别方法，节约大量薄层板、展开剂和显色剂等试剂与耗材，节省企业成本支出；通过简单的薄层色谱法快速鉴别心可舒片的有效成分，避免使用色谱仪器设备带来的高额成本支出；不仅能够帮助判断心可舒片，还能具体分析出心可舒片的七种指标成分是否有缺失；采用的薄层板和展开剂均易获取，成分配比简单有效。

Description

一种心可舒片薄层全药味鉴别方法
技术领域
本申请属于药味鉴别技术领域，具体地说涉及一种心可舒片薄层全药味鉴别方法。
背景技术
《中国药典2020年版》中公开了心可舒片，其处方为丹参、葛根、山楂各294g，三七、木香各19.4g，制法为以上五味，取三七、木香及部分山楂粉碎成细粉，乘余的山、葛根加入60％乙醇温浸30分钟，回流提取二次，合并醇提液，回收乙醇，备用；丹参加水煎煮二次，合并煎液，滤过，滤液与上述备用液合并，混匀，浓缩至适量；加入上述细粉制成颗粒，干燥，压制成1000片(小片)或500片(大片)，包薄膜衣，即得。并公开了该片剂照高效液相色谱法(通则0512)的测定方法，由于高效液相色谱仪器昂贵，并不适用于所有企业进行日常测定。专利CN200810100198.5中公开了一种心可舒片的检验方法，该方法包括以下两种鉴别：山楂的显微鉴别和人参皂苷Rg1三七皂苷R1的薄层鉴别，但该方法没有将心可舒片中全药味进行简单仪器鉴别。
因此，现有技术还有待于进一步发展和改进。
发明内容
针对现有技术的种种不足，为了解决上述问题，现提出一种心可舒片薄层全药味鉴别方法。本申请提供如下技术方案：
一种心可舒片薄层全药味鉴别方法，包括使用一块薄层板和两种展开剂鉴别出心可舒片五味药材中的七种指标性成分，所述展开剂包括氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水和石油醚-乙酸乙酯两种展开剂，其中，五味药材为：丹参、葛根、山楂、三七、木香；七种指标性成分为：丹酚酸B、葛根素、去氢木香内酯、熊果酸、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1；丹参对应的指标成分为丹酚酸B，葛根对应的指标成分为葛根素，山楂对应的指标成分为熊果酸，三七对应的指标成分为人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1，木香对应的指标成分为去氢木香内酯。
进一步的，包括：
分别吸取预先制备的供试品溶液1、供试品溶液2和对照品溶液5L、3L和2L，分别点于同一薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)在10℃下放置的下层溶液每10mL加0.5mL甲酸的混合溶液为展开剂，展开至约6.0cm，取出，晾干，再以石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展至约8.5cm，取出，晾干；置365nm紫外光灯下检视，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰后，分别置254nm紫外灯和365nm紫外灯下检视。
进一步的，供试品溶液1制备方法为：
取《中国药典2020年版》中公开方法制备的心可舒片4片(小片)或2片(大片)研细，加甲醇50mL，40℃超声处理1小时，放冷，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加水20mL使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次30mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30mL，取正丁醇液，回收溶剂至干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液1。
进一步的，供试品溶液2制备方法为：
取《中国药典2020年版》中公开方法制备的心可舒片4片(小片)或2片(大片)研细，加甲醇25mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加水20mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯层，回收溶剂至干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液2。
进一步的，对照品溶液制备方法：分别取丹酚酸B、葛根素、熊果酸、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1和去氢木香内酯对照品加甲醇制成每1mL甲醇含各对照品1mg的混合溶液。
进一步的，所述展开剂为石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(3:1)。
进一步的，置365nm紫外光灯下检视鉴别丹酚酸B。
进一步的，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰后，置254nm紫外灯下检视鉴别葛根素和去氢木香内酯。
进一步的，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰后，置265nm紫外灯下检视鉴别熊果酸、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1。
进一步的，所述薄层板选用高效硅胶GF254薄层板。
有益效果：
1.本申请通过使用一块薄层板和两种展开剂就替代了原来五块薄层板和五种展开剂的鉴别方法，节约大量薄层板、展开剂和显色剂等试剂与耗材，节省企业成本支出；
2.本申请通过简单的薄层色谱法快速鉴别心可舒片的有效成分，避免使用色谱仪器设备带来的高额成本支出；
3.本申请不仅能够帮助判断心可舒片，还能具体分析出心可舒片的七种指标成分是否有缺失；
4.本申请采用的薄层板和展开剂均易获取，成分配比简单有效；
5.本申请只用三种检视手段就能鉴别心可舒片的七种指标成分。
附图说明
图1是本申请具体实施例中心可舒片薄层色谱鉴别结果对照图；
图2是本申请具体实施例中心可舒片丹参专属性考察薄层色谱图；
图3是本申请具体实施例中心可舒片葛根专属性考察薄层色谱图；
图4是本申请具体实施例中心可舒片山楂专属性考察薄层色谱图；
图5是本申请具体实施例中心可舒片三七专属性考察薄层色谱图；
图6是本申请具体实施例中心可舒片木香专属性考察薄层色谱图。
具体实施方式
为了使本领域的人员更好地理解本申请的技术方案，下面结合本申请的附图，对本申请的技术方案进行清楚、完整的描述，基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的其它类同实施例，都应当属于本申请保护的范围。
样品制备
供试品溶液1制备方法为：
取《中国药典2020年版》中公开方法制备的心可舒片4片(小片)或2片(大片)研细，加甲醇50mL，40℃超声处理1小时，放冷，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加水20mL使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次30mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30mL，取正丁醇液，回收溶剂至干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液1。
供试品溶液2制备方法为：
取《中国药典2020年版》中公开方法制备的心可舒片4片(小片)或2片(大片)研细，加甲醇25mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加水20mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯层，回收溶剂至干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液2。
对照品溶液制备方法为：
分别取丹酚酸B、葛根素、熊果酸、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1和去氢木香内酯对照品加甲醇制成每1mL甲醇含各对照品1mg的混合溶液。
鉴别实验：
照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2020年版四部通则0502)试验，吸取供试品溶液1、供试品溶液2和对照品溶液分别5L、3L和2L，分别点于同一高效硅胶GF254薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)在10℃下放置的下层溶液每10mL加0.5mL甲酸的混合溶液为展开剂，展开至约6.0cm，取出，晾干，再以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(3:1)为展开剂，展至约8.5cm，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置紫外灯(254nm)和紫外灯(365nm)下检视。
通过直接在365nm下检视，鉴别丹酚酸B；
通过喷雾10％硫酸乙醇溶液，105℃加热，254nm下检视，鉴别葛根素和去氢木香内酯；365nm下检视，鉴别熊果酸、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。
如图1所示，为心可舒片薄层色谱鉴别结果图。图中(a)365nm直接检视；(b)喷雾10％硫酸乙醇溶液加热后254nm下检视；(c)喷雾10％硫酸乙醇溶液加热后365nm下检视；其中，1.对照品混合溶液，包括丹酚酸B、葛根素、熊果酸、去氢木香内酯、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1；2.心可舒片供试品溶液1；3.心可舒片供试品溶液2。
专属性考察实验：
取心可舒片样品以及分别缺丹参、葛根、山楂、三七、木香的阴性样品，丹参、葛根、山楂、三七和木香药材提取物，丹酚酸B、葛根素、熊果酸、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1和去氢木香内酯对照品，按照上述制备方法制成供试品溶液1和2以及各对照溶液，照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2020年版四部通则0502)试验，吸取对照品溶液2L、对照药材溶液3L、阴性样品溶液3L、供试品溶液3L，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)在10℃下放置的下层溶液每10mL加0.5mL甲酸的混合溶液为展开剂，展开至约6.0cm，取出，晾干，再以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(3:1)为展开剂，展至约8.5cm，取出，晾干。分别置紫外灯(254nm)和置紫外光灯(365nm)下检视，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置紫外灯(254nm)和紫外灯(365nm)下进行检视检测。
如图2所示，为心可舒片丹参专属性考察薄层色谱图。图中(a)254nm直接检视；(b)365nm直接检视；(c)喷雾10％硫酸乙醇溶液加热后254nm下检视；(d)喷雾10％硫酸乙醇溶液加热后365nm下检视；其中，1.丹酚酸B，2.丹参药材，3.丹参阴性样品，4.供试品溶液2，5.心可舒片甲醇提取物。供试品溶液在与丹酚酸B相应的位置上均显相同颜色的荧光斑点，但(a)(c)(d)中在丹酚酸B对应位置，丹参阴性样品均存在干扰，只有(b)的方法可排除丹参阴性样品的干扰，故选择365nm直接检视。
如图3所示，为心可舒片葛根专属性考察薄层色谱图。图中(a)254nm直接检视；(b)365nm直接检视；(c)喷雾10％硫酸乙醇溶液加热后254nm下检视；(d)喷雾10％硫酸乙醇溶液加热后365nm下检视；其中，1.葛根素，2.葛根药材，3.葛根阴性样品，4.供试品溶液1，5.心可舒片甲醇提取物。(b)中葛根素对照品不显色，故排除；(d)中供试品溶液在与葛根素对照品相应的位置上若干斑点间分离度不佳，相互干扰，故排除；(a)(c)中供试品在与葛根素对照品相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，方法均可行，考虑到与木香鉴别统一，减少操作步骤，故选择方法(c)。
如图4所示，为心可舒片山楂专属性考察薄层色谱图。图中(a)喷雾10％硫酸乙醇溶液加热后254nm下检视；(b)喷雾10％硫酸乙醇溶液加热后365nm下检视；其中，1.熊果酸，2.山楂药材，3.山楂阴性样品，4.供试品溶液1，5.心可舒片甲醇提取物。(a)(b)中供试品在与熊果酸对照品相应的位置上均显相同颜色的荧光斑点，方法均可行，考虑到(b)中熊果酸斑点颜色更加明显，易于其他成分进行区分，故选择方法(b)。
如图5所示，为心可舒片三七专属性考察薄层色谱图。图中(a)喷雾10％硫酸乙醇溶液加热后254nm下检视；(b)喷雾10％硫酸乙醇溶液加热后365nm下检视；其中，1.人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1混合溶液，2.三七药材，3.三七阴性样品，4.供试品溶液2，5.心可舒片甲醇提取物。(a)(b)中供试品在与人参皂苷Rg1和三七皂苷R1对照品相应的位置上均显相同颜色的荧光斑点，但(a)中人参皂苷Rb1对照品及供试品相应的位置均未观察到斑点，故选择方法(b)。
如图6所示，为心可舒片木香专属性考察薄层色谱图。图中(a)喷雾10％硫酸乙醇溶液加热后254nm下检视；(b)喷雾10％硫酸乙醇溶液加热后365nm下检视；其中，1.去氢木香内酯，2.木香药材，3.木香阴性样品，4.供试品溶液2，5.心可舒片甲醇提取物。(a)(b)中供试品在与去氢木香内酯对照品相应的位置上均显相同颜色的荧光斑点，但(b)中在去氢木香内酯对应位置，木香阴性样品存在干扰，(a)的方法可排除阴性样品的干扰，故选择方法(a)。
对于本领域技术人员而言，显然本申请不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本申请的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本申请。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本申请的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本申请内。
以上已将本申请做一详细说明，以上所述，仅为本申请之较佳实施例而已，当不能限定本申请实施范围，即凡依本申请范围所作均等变化与修饰，皆应仍属本申请涵盖范围内。

Claims (10)

1.一种心可舒片薄层全药味鉴别方法，其特征在于，包括使用一块薄层板和两种展开剂鉴别出心可舒片五味药材中的七种指标性成分，所述展开剂包括氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水和石油醚-乙酸乙酯两种展开剂。
2.根据权利要求1所述的一种心可舒片薄层全药味鉴别方法，其特征在于，包括：
分别吸取预先制备的供试品溶液1、供试品溶液2和对照品溶液5L、3L和2L，分别点于同一薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)在10℃下放置的下层溶液每10mL加0.5mL甲酸的混合溶液为展开剂，展开至约6.0cm，取出，晾干，再以石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展至约8.5cm，取出，晾干；置365nm紫外光灯下检视，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰后，分别置254nm紫外灯和365nm紫外灯下检视。
3.根据权利要求2所述的一种心可舒片薄层全药味鉴别方法，其特征在于，供试品溶液1制备方法为：
取《中国药典2020年版》中公开方法制备的心可舒片4片(小片)或2片(大片)研细，加甲醇50mL，40℃超声处理1小时，放冷，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加水20mL使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次30mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30mL，取正丁醇液，回收溶剂至干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液1。
4.根据权利要求2所述的一种心可舒片薄层全药味鉴别方法，其特征在于，供试品溶液2制备方法为：
取《中国药典2020年版》中公开方法制备的心可舒片4片(小片)或2片(大片)研细，加甲醇25mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加水20mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯层，回收溶剂至干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液2。
5.根据权利要求2所述的一种心可舒片薄层全药味鉴别方法，其特征在于，对照品溶液制备方法：分别取丹酚酸B、葛根素、熊果酸、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1和去氢木香内酯对照品加甲醇制成每1mL甲醇含各对照品1mg的混合溶液。
6.根据权利要求2所述的一种心可舒片薄层全药味鉴别方法，其特征在于，所述展开剂为石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(3:1)。
7.根据权利要求2所述的一种心可舒片薄层全药味鉴别方法，其特征在于，置365nm紫外光灯下检视鉴别丹酚酸B。
8.根据权利要求2所述的一种心可舒片薄层全药味鉴别方法，其特征在于，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰后，置254nm紫外灯下检视鉴别葛根素和去氢木香内酯。
9.根据权利要求2所述的一种心可舒片薄层全药味鉴别方法，其特征在于，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰后，置265nm紫外灯下检视鉴别熊果酸、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1。
10.根据权利要求2所述的一种心可舒片薄层全药味鉴别方法，其特征在于，所述薄层板选用高效硅胶GF254薄层板。
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