CN114381450A - 干燥试剂、试剂盒、干燥试剂的制造方法、分析方法及核酸扩增方法 - Google Patents

干燥试剂、试剂盒、干燥试剂的制造方法、分析方法及核酸扩增方法 Download PDF

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Abstract

本发明的目的在于提供再溶解性高的干燥试剂、试剂盒、干燥试剂的制造方法、分析方法及核酸扩增方法。本发明实施方式的干燥试剂包含不溶性的纤维、和被所述纤维保持且包含生物体物质的被干燥物。

Description

干燥试剂、试剂盒、干燥试剂的制造方法、分析方法及核酸扩 增方法
相关申请的交叉参考
本申请基于2020年10月5日在日本提出的日本专利申请No.2020-168506主张优先权，将其全部内容援引至此。
技术领域
本发明涉及干燥试剂、试剂盒、干燥试剂的制造方法、分析方法及核酸扩增方法。
背景技术
为了以稳定的状态对蛋白质实施冷冻干燥并进行保存，使用着各种碳水化物或聚合物等。其中尤其是高分子的糖有助于干燥后的保存时的蛋白质的稳定性(非专利文献1)。
但是，高分子的糖通过冷冻干燥被浓缩，在保管或使用时会吸收大气中的水分而变成粘性高的状态。因此，在使干燥物再溶解于溶剂来进行使用时，再溶解性会降低。
[非专利文献1]Sun WQ,Davidson P、“EFFECT OF DEXTRAN MOLECULAR WIGHT ONPROTEIN STABILIZATION DURING FREEZE-DRYING AND STORAGE”、CryoLetters 22、2001、285-292
发明内容
本发明的一实施方式涉及一种干燥试剂，其包含：
不溶性的纤维；和
被所述纤维保持且包含生物体物质的被干燥物。
本发明的另一实施方式涉及一种试剂盒，其包含：
上述的干燥试剂；和
用于使所述干燥试剂再溶解的第二溶液。
本发明的又一实施方式涉及一种干燥试剂的制造方法，其包含以下工序：
在包含含有生物体物质的被干燥物的第一溶液中添加不溶性的纤维、获得混合物的添加工序；和
使所述混合物干燥、获得干燥试剂的干燥工序。
本发明的再一实施方式涉及一种分析方法，其包含使干燥试剂溶解在第二溶液中、获得液体试剂的溶解工序，所述干燥试剂包含不溶性的纤维、和被所述纤维保持且包含生物体分子的被干燥物。
本发明的又一实施方式涉及一种核酸扩增方法，其包含以下工序：
使干燥试剂再溶解在第二溶液中、获得液体试剂的溶解工序，所述干燥试剂包含不溶性的纤维、和被所述纤维保持且包含核酸扩增中使用的酶的被干燥物；和
使用所述液体试剂进行核酸扩增的核酸扩增工序。
附图说明
图1为表示实施方式的干燥试剂的图。图1(a)为表示干燥试剂的整体的图、图1(b)为其放大图。
图2为表示实施方式的干燥试剂的图。
图3为表示实施方式的干燥试剂的制造方法的流程图。
图4为表示实施方式的干燥试剂的制造方法的示意图。
图5为表示实施方式的干燥试剂的使用方法的示意图。
图6为将实施方式的干燥试剂进行了保存时的放大图。
图7为表示实施方式的核酸扩增方法的流程图。
具体实施方式
概括而言，根据一实施方式，干燥试剂包含不溶性的纤维和被所述纤维保持且包含生物体物质的被干燥物。
以下，参照附图详细地说明本发明的实施方式。
(第一实施方式)
·干燥试剂
实施方式的干燥试剂1如图1(a)及(b)所示，包含被干燥物2和保持被干燥物2的纤维3。被干燥物2包含生物体物质4。纤维3作为被干燥物2的支架发挥功能。详细地在后叙述，实施方式的干燥试剂1是为了将被干燥物2保存一定期间而制成了干燥形态的试剂，在使用被干燥物2时，例如通过使干燥试剂1与适当的液体(以下也称作“第二溶液”)接触以使被干燥物2再溶解，然后将纤维3除去，从而可以将被干燥物2利用于所希望的用途。
生物体物质4例如优选是蛋白质或肽。或者，生物体物质4还可以是核酸、例如DNA或RNA、细菌、菌类或病毒等。1个干燥试剂1所含的被干燥物2可以包含多个种类的生物体物质4。
被干燥物2还可以包含除了生物体物质4之外的其它成分。例如，被干燥物2虽不受限定，但可以进一步包含盐、增粘剂、防腐剂及/或pH调节用缓冲剂等。
纤维3例如是多根纤维3集合而形成的结构体。例如，纤维3彼此缠绕，在纤维3与纤维3之间存在空隙。纤维3例如是将多个纤维3制成织布状、无纺布状或束状。
被干燥物2所含的成分、例如生物体物质4如图1(b)所示，被保持在纤维3与纤维3之间的空隙或纤维3的表面上。
纤维3为不溶性的纤维3。
另外，纤维3优选具有在再溶解时、在第二溶液中能够维持其自身结构的程度的亲水性。通过具有亲水性，可以提高再溶解性。另外，纤维3优选是适度地与生物体物质4发生相互作用的纤维3。适度的相互作用例如是指通过与纤维3的结合、生物体物质4的活性不会失去且生物体物质4可保持在纤维3之间的程度的相互作用。
作为这种纤维3，例如可以使用纤维素纤维或进行了亲水性处理的玻璃纤维。
作为纤维3，可以使用市售的上述任一种的纤维3。作为市售的纤维3，可以使用纤维素纤维垫或玻璃纤维垫等。例如还可以将市售的纤维3加工成所希望的大小进行使用，或者还可以组合使用市售的多个种类的纤维3。
纤维3的整体的形状例如为长方体状、立方体状等，还可以是球状或片状等，并不限于这些。
另外，虽未图示，但干燥试剂1还可以进一步包含低分子的糖及/或表面活性剂。
低分子的糖是不会损害生物体物质4的活性的糖，优选是单糖类或二糖类。低分子的糖例如可以使用葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖或乳糖等。
表面活性剂是不会损害生物体物质4的活性的表面活性剂，例如可以使用非离子性表面活性剂等。
作为进一步的实施方式，如图2所示，干燥试剂1可以以收容于容器5中的状态进行提供。
作为容器5，例如可以使用微管、试管、离心管或者铝制或塑料制的袋等。通过收容在容器5中，在保存干燥试剂1时易于管理，另外，详细情况会在后叙述，在再溶解时可以将溶液(第二溶液)添加在容器5中，例如在需要无菌性的再溶解的情况等时，步骤变得简单。
·制造方法
接着，对制造实施方式的干燥试剂的方法进行说明。该制造方法如图3所示包含以下工序：在包含被干燥物2的溶液7(以下也称作“第一溶液”)中添加纤维3、获得混合物的添加工序(S1)；和使所述混合物干燥、获得干燥试剂的干燥工序(S2)。
以下，使用图4详细地说明该制造方法的一例。
首先，如图4(a)所示准备第一溶液6。第一溶液6例如通过在适当的溶剂中溶解包含所希望的成分的被干燥物2来获得。适当的溶剂是可以忽略对被干燥物2的活性的影响的程度、且可通过干燥而除去的液体。溶剂例如为水、缓冲液、生理盐水等。
所用的第一溶液6的量例如根据一起要使用的生物体物质4的量来选择。例如，在用于制造1个干燥试剂1的第一溶液6中包含1次量的实验所用量的生物体物质4。第一溶液6例如可以收容在上述那样的容器5中进行准备。
另外，如图4(b)所示准备纤维3。所用纤维3的量根据第一溶液6的量来进行选择。
接着，如图4(c)所示，在第一溶液6中添加纤维3，获得混合物7(添加工序(S1))。添加工序(S1)例如通过在第一溶液6中浸渍纤维3来进行。例如可以将纤维3完全地浸渍于第一溶液6中。另外，添加工序(S1)例如还可以通过在纤维3中滴加第一溶液6来进行。
将纤维3浸渍于第一溶液6中后，可以进一步进行搅拌、放置等，以使得第一溶液6被吸收至纤维3的内部。
使用上述低分子的糖及/或表面活性剂时，可以在添加工序(S1)之前将它们添加到第一溶液6中，也可以在添加工序(S1)后添加到混合物7中。
接着，如图4(d)所示，使工序(S1)中获得的上述混合物干燥，获得干燥试剂1(干燥工序(S2))。
干燥工序(S2)例如通过温风干燥或冷冻干燥等来进行。
在使用温风干燥时，例如可以使用干燥机进行。例如，在干燥机的干燥室中配置混合物7，向混合物7输送经干燥的温风，从而将水分从混合物7中除去。此时的条件例如优选是在生物体物质4不会改性的室温附近下进行20小时～180小时。另外，以高温的温风使其干燥时，优选用90～100℃的热风进行5分钟～10分钟。温风干燥还可以以真空状态进行。
在冷冻干燥时，例如利用液氮等使混合物7预先冷冻后，利用冷冻干燥机减压至约10～约20Pa后，在-40～-80℃下进行干燥。冷冻干燥例如可以使用市售的冷冻干燥器来进行。
干燥工序可以对收容于容器5中的状态的混合物7进行，还可以对从容器5中取出的混合物7进行。
通过工序(S2)获得的干燥试剂1可以在制造时所用的容器5内保存，也可以如图4(d)所示从容器5中取出。此时，可以收容在其它的容器中进行保存。
·分析方法
使用图5说明使用实施方式的干燥试剂的分析方法。
首先，如图5(a)所示，将干燥试剂1收容在容器5中。此时，也可以直接原样使用如图2所示那样预先收容在容器5的状态的干燥试剂1。
接着，如图5(b)所示，将第二溶液8添加在容器5中。第二溶液8是用于使干燥试剂1的被干燥物2中所含的各成分、例如生物体物质4再溶解的成分，例如是水、缓冲液、生理盐水等。
之后，为了使被干燥物2从纤维3上剥离而溶解在第二溶液8中，还可以进行搅拌。搅拌可以通过移液管吸取、颠倒混合或涡流等来进行。
通过这样的再溶解，获得在第二溶液8中溶解有被干燥物2的液体试剂9。此时，由于纤维3是不溶性的，因此不会溶解于第二溶液8而作为固体残留。
接着，将纤维3从液体试剂9中除去。例如可以利用微量移液管等对液体试剂9进行分取、收容在其它容器中。或者，还可以如图5(c)及(d)所示那样，使用例如小镊子等将纤维3去除至容器5外，将液体试剂9残留在容器5中。
如以上那样，可以获得包含干燥试剂1所含的被干燥物2的液体试剂9。液体试剂9可以用于分析方法的所希望的之后的工序中。之后的工序并无限定，例如包含使用生物体物质4进行的生物学的、生物化学的及/或生理学的分析等。之后的工序并无限定，例如包含第二实施方式所示的核酸扩增、核酸检测、免疫分析、Western Blotting、流式细胞仪及/或显微镜观察等。
以上说明的实施方式的干燥试剂由于将纤维作为被干燥物的支架来使用，因此被干燥物的再溶解性高。例如，在现有的方法中，作为支架是使用高分子的糖，但高分子的糖在保存时易于吸收空气中的水分，在被干燥物的周围形成粘性高的皮膜，从而被干燥物的再溶解性降低。
根据实施方式的干燥试剂，例如在如图6(a)及(b)所示、通过干燥工序(S2)而使附着在生物体物质4和纤维3上的水分子10蒸发后，即便以水分子10存在的状态进行保存，如图6(c)所示，水分子10也基本不会吸收到生物体物质4和纤维3中。结果，如图6(d)所示，即便在保存后，干燥试剂1也不含水分子10，易于溶解在液体中。因此，实施方式的干燥试剂的再溶解性高。由此，可节省利用于之后的工序时的工夫和时间、且易于发挥生物体物质的活性。
另外，通过使用纤维作为被干燥物的支架，生物体物质被配置在纤维与纤维之间，可防止生物体物质之间发生缔合，生物体物质能够以保持其功能的状态稳定地进行干燥及保存。保持功能的状态是指在干燥前后、生物体物质的立体结构不会发生大的变化、维持原本的活性及性质。因此，纤维在干燥时及保存时作为生物体物质的稳定化剂起作用。
进而，在像以往那样对液体状态的被干燥物进行干燥时，为了防止液体因沸腾而飞散，需要使用真空干燥来进行干燥。而由于实施方式的干燥试剂以第一溶液被纤维吸收的状态进行干燥工序，因此可防止第一溶液所含的液体因沸腾而飞散。因而，实施方式的干燥试剂不仅可以通过真空干燥、还可以通过温风干燥来进行制造。因此，不需要昂贵的真空干燥机、可以廉价地进行制造。
进而，通过使用亲水性的纤维、以及包含低分子的糖及/或表面活性剂，可以进一步提高被干燥物2的再溶解性。
·试剂盒
根据进一步的实施方式，提供包含干燥试剂1的试剂盒。试剂盒包含干燥试剂1和第二溶液。
干燥试剂1和第二溶液例如收容在不同的容器中进行提供。
试剂盒例如还可以进一步包含在将干燥试剂1再溶解后进行的工序所需的试剂。
(第二实施方式)
第二实施方式中，干燥试剂包含核酸扩增中使用的酶作为生物体物质。除此之外的构成与第一实施方式相同，可以通过图3所示的方法进行制造。
核酸扩增中使用的酶例如为DNA聚合酶、RNA聚合酶或逆转录酶等。酶的种类根据后述的核酸扩增工序中使用的扩增方法的种类来进行选择。1个干燥试剂中例如包含1次核酸扩增中所用量的酶。
接着，说明使用上述第二实施方式的干燥试剂进行核酸扩增的方法。该方法如图7所示，包含使干燥试剂再溶解在第二溶液中、获得液体试剂的溶解工序(S11)；和使用经再溶解的液体试剂进行核酸扩增的核酸扩增工序(S12)。
溶解工序(S11)可以与第一实施方式的使用方法中说明过的再溶解同样地进行。
在溶解工序(S11)与核酸扩增工序(S12)之间还可以包含从所得的液体试剂9中除去纤维3的工序。例如，可以将纤维3从液体试剂9中去除，也可以将液体试剂9移至其它容器中。
第二溶液8还可以包含核酸扩增中使用的其它试剂。或者，也可以在马上进行核酸扩增工序之前、在液体试剂9中添加核酸扩增中使用的其它试剂。其它试剂例如为引物对、盐、脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、增粘剂、pH调节用缓冲剂、表面活性剂及/或离子等。这些其它的试剂还可以预先包含在干燥试剂中。
接着，进行核酸扩增(核酸扩增工序(S12))。
核酸扩增工序可以利用PCR法等温度发生变化的核酸扩增法来进行，也可以利用LAMP法等等温核酸扩增法来进行，还可以在这些扩增反应之前进行逆转录反应。
根据以上说明的第二实施方式的干燥试剂，在保存中，水分子不会被吸收到生物体物质及纤维中、生物体物质的再溶解性高。因此，可以有效地进行核酸扩增反应。
第二实施方式的干燥试剂也可作为进一步包含第二溶液的试剂盒进行提供。试剂盒例如还可以进一步包含核酸扩增工序所需的上述其它试剂、及/或扩增产物的检测所需的试剂，例如包含用于光学检验的色素的试剂或具有用于电检测的电荷的试剂等。
以上说明了本发明的数个实施方式，但这些实施方式是作为例子示出的，并非是为了限定发明的范围。实际上，这些新的实施方式可以以其它各种方式实施，而且，在不脱离发明主旨的范围内，以上所述的实施方式可以进行各种省略、替换和变更。这些实施方式及其变形包含在发明的范围及主旨内，同时包含在与后附的权利要求书所记载的发明均等的范围内。

Claims (18)

1.一种干燥试剂，其包含：
不溶性的纤维；和
被所述纤维保持且包含生物体物质的被干燥物。
2.根据权利要求1所述的干燥试剂，其中，所述生物体物质为蛋白质或肽。
3.根据权利要求1所述的干燥试剂，其中，所述生物体物质为核酸扩增中使用的酶。
4.根据权利要求1所述的干燥试剂，其中，所述纤维具有亲水性。
5.根据权利要求1所述的干燥试剂，其中，所述纤维为玻璃纤维或纤维素纤维。
6.根据权利要求1所述的干燥试剂，其进一步包含低分子的糖及/或表面活性剂。
7.根据权利要求1所述的干燥试剂，其中，所述干燥试剂是用于通过再溶解于溶液中、并将所述纤维除去而作为液体试剂进行使用的试剂。
8.一种试剂盒，其包含：
权利要求1所述的干燥试剂；和
用于使所述干燥试剂再溶解的第二溶液。
9.一种干燥试剂的制造方法，其包含以下工序：
在包含含有生物体物质的被干燥物的第一溶液中添加不溶性的纤维、获得混合物的添加工序；和
使所述混合物干燥、获得干燥试剂的干燥工序。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述干燥工序通过温风干燥或冷冻干燥来进行。
11.根据权利要求9所述的方法，其中，所述生物体物质为蛋白质或肽。
12.根据权利要求9所述的方法，其中，所述纤维为玻璃纤维或纤维素纤维。
13.根据权利要求9所述的方法，其中，所述添加工序包含在所述第一溶液中进一步添加低分子的糖及/或表面活性剂。
14.根据权利要求9所述的方法，其中，所述干燥试剂是用于通过再溶解于溶液中、并将所述纤维除去而作为液体试剂进行使用的试剂。
15.一种分析方法，其包含使干燥试剂溶解在第二溶液中、获得液体试剂的溶解工序，所述干燥试剂包含不溶性的纤维、和被所述纤维保持且包含生物体分子的被干燥物。
16.根据权利要求15所述的方法，其中，在所述溶解工序之后，包含将所述纤维从所述液体试剂中除去的工序。
17.一种核酸扩增方法，其包含以下工序：
使干燥试剂再溶解在第二溶液中、获得液体试剂的溶解工序，所述干燥试剂包含不溶性的纤维、和被所述纤维保持且包含核酸扩增中使用的酶的被干燥物；和
使用所述液体试剂进行核酸扩增的核酸扩增工序。
18.根据权利要求17所述的核酸扩增方法，其中，在所述溶解工序之后，包含将所述纤维从所述液体试剂中除去的工序。
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Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005114368A (ja) * 2003-10-02 2005-04-28 Arkray Inc 酵素の安定化方法およびそれに用いる検体分析用具
CN102414315A (zh) * 2009-05-19 2012-04-11 森迪奈尔Ch有限责任公司 用于分子生物学应用的包含核酸聚合酶的干燥和稳定的即用组合物
US20120156750A1 (en) * 2009-06-12 2012-06-21 Micronics, Inc. Compositions and methods for dehydrated storage of on-board reagents in microfluidic devices
CN102703433A (zh) * 2012-06-12 2012-10-03 中国水产科学研究院黄海水产研究所 基于多孔材料的核酸等温扩增试剂的保存方法及试剂
CN102803483A (zh) * 2009-06-12 2012-11-28 精密公司 用于微流体装置中taq 聚合酶的干燥储存的可再水合基质
US20150176056A1 (en) * 2013-12-24 2015-06-25 General Electric Comapny Electrospun fibers for protein stabliziation and storage
US20150361511A1 (en) * 2013-01-28 2015-12-17 Fluorogenics Ltd Freeze-dried composition
US20170240881A1 (en) * 2016-02-18 2017-08-24 Ge Healthcare Uk Limited Method and composition for biomolecule stabilization
US20170327911A1 (en) * 2014-10-20 2017-11-16 Envirologix Inc. Compositions and methods for detecting an rna virus
CN107532197A (zh) * 2015-05-08 2018-01-02 株式会社钟化 干燥形态的酶反应试剂及其制备方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5876992A (en) * 1996-07-03 1999-03-02 Molecular Biology Resources, Inc. Method and formulation for stabilization of enzymes
JP6040775B2 (ja) * 2011-12-01 2016-12-07 三菱レイヨン株式会社 核酸増幅用基材及び核酸増幅方法
GB201716963D0 (en) * 2017-10-16 2017-11-29 Biofortuna Ltd Compositions and methods for use in stabilising nucleic acid amplification assays

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005114368A (ja) * 2003-10-02 2005-04-28 Arkray Inc 酵素の安定化方法およびそれに用いる検体分析用具
CN102414315A (zh) * 2009-05-19 2012-04-11 森迪奈尔Ch有限责任公司 用于分子生物学应用的包含核酸聚合酶的干燥和稳定的即用组合物
US20120156750A1 (en) * 2009-06-12 2012-06-21 Micronics, Inc. Compositions and methods for dehydrated storage of on-board reagents in microfluidic devices
CN102803483A (zh) * 2009-06-12 2012-11-28 精密公司 用于微流体装置中taq 聚合酶的干燥储存的可再水合基质
CN102703433A (zh) * 2012-06-12 2012-10-03 中国水产科学研究院黄海水产研究所 基于多孔材料的核酸等温扩增试剂的保存方法及试剂
US20150361511A1 (en) * 2013-01-28 2015-12-17 Fluorogenics Ltd Freeze-dried composition
US20150176056A1 (en) * 2013-12-24 2015-06-25 General Electric Comapny Electrospun fibers for protein stabliziation and storage
US20170327911A1 (en) * 2014-10-20 2017-11-16 Envirologix Inc. Compositions and methods for detecting an rna virus
CN107532197A (zh) * 2015-05-08 2018-01-02 株式会社钟化 干燥形态的酶反应试剂及其制备方法
US20170240881A1 (en) * 2016-02-18 2017-08-24 Ge Healthcare Uk Limited Method and composition for biomolecule stabilization

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SUJATHA KUMA等: "Long-term dry storage of enzyme-based reagents for isothermal nucleic acid amplification in a porous matrix for use in point-of-care diagnostic devices", ANALYST, vol. 145, pages 6875 - 6886, XP055908453, DOI: 10.1039/D0AN01098G *

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