CN117625758A - Pcr试剂的冻干保护剂及其应用、混合试剂及其冷冻干燥方法和产品 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种PCR试剂的冻干保护剂及其应用、混合试剂及其冷冻干燥方法和产品,涉及生物技术领域。本发明提供的PCR试剂的冻干保护剂包括:使用浓度为62.5~87.5mg/mL的海藻糖、使用浓度为25~37.5mg/mL的PEG8000、使用浓度为15~22.5mg/mL的D‑甘露醇、使用浓度为1~1.5mg/mL的L‑组氨酸和使用浓度为1~1.5mg/mL的羟乙基淀粉;使用浓度为将冻干保护剂与PCR试剂混合后的浓度。该冻干保护剂成分简单,冻干前后性能变化小,试剂稳定性好,对PCR扩增体系无影响,能够在冷冻干燥过程中起到很高的保护作用,可适用于无甘油或低甘油含量的酶反应体系的冻干保护。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域,尤其是涉及一种PCR试剂的冻干保护剂及其应用、混合试剂及其冷冻干燥方法和产品。
背景技术
聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)是由美国Gentus 公司的Mullis于1983年发明,后来PCR技术很快便成为科研和临床诊断的技术手段。但是传统的PCR技术在实际应用当中并不能准确定量,而且经常出现假阳性结果。直到1996年,美国ABI公司发明了一种新型的定量技术,即在PCR扩增的过程中加入一条特异性的由一个荧光基团和报告基团标记的寡核苷酸探针,PCR扩增时,随着Taq酶5’端-3’端外切酶活性对探针的降解,荧光基团和报告基团分离,释放荧光信号。每扩增一条DNA 链,就会检测到一个荧光分子,从而实现了荧光信号的积累与PCR产物形成完全同步。
虽然PCR技术具有广泛的用途,但是由于体外诊断试剂中反应酶类的试剂对温度较为敏感,高温会使酶或蛋白质失去活性,因此要求低温运输及保存,这就增加了试剂运输过程中的成本。为了解决生物类试剂运输及保存条件对试剂性能的影响,需要开发冻干类试剂来提高体外诊断试剂的稳定性。
随着体外诊断试剂对冻干原料的需求增多,各种冻干类的试剂都纷纷上市,市场对冻干类试剂的报道逐渐增多。但是有些冻干保护剂的成分比较多,对PCR扩增体系性能可能存在一定的影响。如CN113025757A公开一种用于2019-nCov多重扩增反应试剂的冻干保护剂及其应用,该专利所述冻干保护剂包括海藻糖、甘露醇、普鲁兰多糖、牛血清白蛋白、表面活性剂、消泡剂、水杨酸、硫酸软骨素、云芝多糖和透明质酸。又如 CN113801926A公开一种分子检测试剂的冻干保护剂及应用,该专利所述冻干保护剂包括:海藻糖、蔗糖、D-甘露醇、右旋糖酐、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚赖氨酸、吐温-80、二硫苏糖醇、维生素。
也有一些冻干试剂开发者的冻干保护剂的成分比较简单,但是其冻干周期较长。如CN111560417A,放入样品后,隔板温度下降到-45~-55℃,冷阱下降到-65~-70℃,保持0.5~1.5h;开启真空,真空度为10~15Pa,保持 1~3h;第一次升华阶段保持真空度为10~15Pa,冷静温度为-65℃~-75℃,同时升温至-10℃~-12℃,保持15~16h;第二次升华阶段继续保持真空度为 10~15Pa,冷阱温度为-65℃~-75℃,同时升温至15℃~20℃,保持7~8h。冻干程序繁琐,而且一次冻干周期结束最短也要24h以上,严重造成能源的浪费。又如CN114317700A,同样是冻干周期达到了26个小时。
针对以上问题,有需要寻找一种冻干效果好,冻干周期短且适用范围广的PCR试剂的保护剂。
有鉴于此,特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种PCR试剂的冻干保护剂,以解决上述问题中的至少一种。
本发明的第二目的在于提供上述冻干保护剂在PCR试剂保存中的应用。
本发明的第三目的在于提供混合试剂。
本发明的第四目的在于提供一种上述混合试剂的冷冻干燥方法。
本发明的第五目的在于提供一种冷冻干燥产品。
第一方面,本发明提供了一种PCR试剂的冻干保护剂,包括:
使用浓度为62.5~87.5mg/mL的海藻糖、使用浓度为25~37.5mg/mL的 PEG8000、使用浓度为15~22.5mg/mL的D-甘露醇、使用浓度为1~1.5mg/mL 的L-组氨酸和使用浓度为1~1.5mg/mL的羟乙基淀粉;
所述使用浓度为将冻干保护剂与PCR试剂混合后的浓度。
作为进一步技术方案,包括:使用浓度为75mg/mL的海藻糖、使用浓度为31.25mg/mL的PEG8000、使用浓度为22.5mg/mL的D-甘露醇、使用浓度为1.25mg/mL的L-组氨酸和使用浓度为1mg/mL的羟乙基淀粉。
第二方面,本发明提供了上述冻干保护剂在PCR试剂保存中的应用。
第三方面,本发明提供了一种混合试剂,包括上述冻干保护剂和PCR 试剂。
作为进一步技术方案,所述PCR试剂中使用甘油质量占比在0.08%以内的酶。
第四方面,本发明提供了一种混合试剂的冷冻干燥方法,包括如下步骤:
将所述混合试剂置于冷冻干燥机内,然后将冷冻干燥机的板层温度降低至-8~0℃,保持0.5~1.5h,再依次进行预冻、升华干燥和解析干燥,完成对混合试剂的冷冻干燥。
作为进一步技术方案,所述预冻为:将冷冻干燥机的板层温度降低至 -45~-38℃,保持2~3h。
作为进一步技术方案,所述升华干燥为:抽真空至压强小于20pa,同时将冷冻干燥机的板层温度在3~4h内升高至-37~-33℃,保持6~8h;
作为进一步技术方案,所述解析干燥为:抽真空至压强小于5pa,将冷冻干燥机的板层温度在2~3h内升高至28~35℃,保持5~7h。
第五方面,本发明提供了一种冷冻干燥产品,采用上述冷冻干燥方法制备得到。
与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
本发明提供的PCR试剂的冻干保护剂成分简单,冻干前后性能变化小,试剂稳定性好,对PCR扩增体系无影响,能够在冷冻干燥过程中起到很高的保护作用,可适用于无甘油或低甘油含量的酶反应体系的冻干保护。
本发明提供的冷冻干燥方法,通过将混合试剂在板层温度为-8~0℃的条件下保持0.5~1.5h,再依次进行预冻、升华干燥和解析干燥,能够进一步提高冻干产品的均一性,且制备得到的冷冻干燥产品外观完好、无萎缩、无塌陷、性能稳定。
具体实施方式
下面将结合实施方式和实施例对本发明的实施方案进行详细描述,但是本领域技术人员将会理解,下列实施方式和实施例仅用于说明本发明,而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。
第一方面,本发明提供了一种PCR试剂的冻干保护剂,包括:使用浓度为62.5~87.5mg/mL的海藻糖、使用浓度为25~37.5mg/mL的PEG8000、使用浓度为15~22.5mg/mL的D-甘露醇、使用浓度为1~1.5mg/mL的L-组氨酸和使用浓度为1~1.5mg/mL的羟乙基淀粉;所述使用浓度为将冻干保护剂与PCR试剂混合后的浓度,溶剂为水。
海藻糖能够在低温下有效的保护生物活性物质。本发明的冻干保护剂中,海藻糖的使用浓度例如可以为,但不限于62.5mg/mL、65mg/mL、 70mg/mL、75mg/mL、80mg/mL、85mg/mL或87.5mg/mL。
PEG8000作为保护剂在低温环境下优先从蛋白质等活性物质表面析出,使蛋白质溶液黏度升高从而阻止其它小分子结晶(如糖类物质),而且还可以防止冷冻过程中PH的剧烈变化等。本发明的冻干保护剂中, PEG8000的使用浓度例如可以为,但不限于25mg/mL、27mg/mL、30mg/mL、 33mg/mL、35mg/mL或37.5mg/mL。
L-组氨酸不仅可以抑制冷冻过程中溶液PH的变化,还可以充当小分子填充剂,使冻干后产品更加饱满,本发明的冻干保护剂中,L-组氨酸的使用浓度例如可以为,但不限于1mg/mL、1.1mg/mL、1.2mg/mL、1.3mg/mL、 1.4mg/mL或1.5mg/mL。
羟乙基淀粉和D-甘露醇在冷冻过程中起到保护作用和填充作用。本发明的冻干保护剂中,羟乙基淀粉的使用浓度例如可以为,但不限于1mg/mL、 1.1mg/mL、1.2mg/mL、1.3mg/mL、1.4mg/mL或1.5mg/mL;D-甘露醇的使用浓度例如可以为,但不限于15mg/mL、17mg/mL、20mg/mL或22.5mg/mL。
本发明供的PCR试剂的冻干保护剂成分简单,通过各个组分之间存在协同配合作用,以实现对PCR试剂的冻干保护。
需要说明的是,“使用浓度”是指将冻干保护剂与PCR试剂混合后的终浓度,在该浓度下能够更好的实现对PCR试剂的冻干保护。
在一些优选的实施方式中,PCR试剂的冻干保护剂包括:使用浓度为 75mg/mL的海藻糖、使用浓度为31.25mg/mL的PEG8000、使用浓度为 22.5mg/mL的D-甘露醇、使用浓度为1.25mg/mL的L-组氨酸和使用浓度为 1mg/mL的羟乙基淀粉。
通过对冻干保护剂中各个组分使用浓度的进一步优化和调整,进一步提高对PCR试剂的冻干保护。
第二方面,本发明提供了上述冻干保护剂在PCR试剂保存中的应用。
本发明提供的冻干保护剂成分简单,冻干前后性能变化小,试剂稳定性好,对PCR扩增体系无影响,能够在冷冻干燥过程中起到很高的保护作用,可用于PCR试剂的保存。
第三方面,本发明提供了一种混合试剂,包括上述冻干保护剂和PCR 试剂。
由于冻干保护剂的添加对PCR试剂无影响,因此该混合试剂能够用于 PCR扩增或者冷冻干燥后保存。
在一些优选的实施方式中,所述PCR试剂中使用无甘油或者甘油质量占比在0.08%以内的酶。
第四方面,本发明提供了一种混合试剂的冷冻干燥方法,包括如下步骤:
将所述混合试剂置于冷冻干燥机内,然后将冷冻干燥机的板层温度降低至-8~0℃,保持0.5~1.5h(Sork阶段),再依次进行预冻、升华干燥和解析干燥,完成对混合试剂的冷冻干燥。
本发明提供的冷冻干燥方法,能够进一步提高冻干产品的均一性,且制备得到的冷冻干燥产品外观完好、无萎缩、无塌陷、性能稳定。
在一些优选的实施方式中,所述预冻为:将冷冻干燥机的板层温度降低至-45~-38℃,保持2~3h。
在一些优选的实施方式中,所述升华干燥为:抽真空至压强小于20pa,将冷冻干燥机的板层温度在3~4h内升高至-37~-33℃,保持6~8h;
在一些优选的实施方式中,所述解析干燥为:抽真空至压强小于5pa,将冷冻干燥机的板层温度在2~3h升高至28~35℃,保持5~7h。
本发明提供的冷冻干燥方法,程序简单,冻干周期短,而且所需要的最低冷冻温度为-40℃左右,节省能源消耗。
第五方面,本发明提供了一种冷冻干燥产品,采用上述冷冻干燥方法制备得到。
该采用本发明提供的冷冻干燥方法制备得到的冷冻干燥产品外观完好、无萎缩、无塌陷、性能稳定。
下面通过具体的实施例和对比例进一步说明本发明,但是,应当理解为,这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用,而不应理解为用于以任何形式限制本发明。实施例和对比例中所用引物、探针和质控品均有安徽通用生物合成,序列如下:
ORF1ab-F:GGCTACCCTCTTGAGTGCAT(SEQ ID NO.1);
ORF1ab-R:GAACGTTCCGTGTACCAAGC(SEQ ID NO.2);
ORF1ab-P:5’-FAM-ACTGCTGCCGTGAACATGAGCA-BHQ1-3’(SEQ ID NO.3);
N-F:TTCTACGCAGAAGGGAGCAG(SEQ ID NO.4);
N-R:AGCAAAGCAAGAGCAGCATC(SEQ ID NO.5);
N-P:5’-VIC-TGGCTGGCAATGGCGGTGATGC-BHQ1-3’(SEQ ID NO.6);
IC-F:TTGGCATGGCTTTATTTG(SEQ ID NO.7);
IC-R:CCACATTGTGAACTTTGG(SEQ ID NO.8);
IC-P:5’-ROX-ACTGCTGTCACCTTCACCGT-BHQ1-3’(SEQ ID NO.9)。
质控品序列如下:
ACTCATGCGTGAGCTTAACGGAGGGGCATACACTCGCTATGTCGA TAACAACTTCTGTGGCCCTGATGGCTACCCTCTTGAGTGCATTAAAGA CCTTCTAGCACGTGCTGGTAAAGCTTCATGCACTTTGTCCGAACAACTGGACTTTATTGACACTAAGAGGGGTGTATACTGCTGCCGTGAACATGA GCATGAAATTGCTTGGTACACGGAACGTTCTGAAAAGAGCTATGAATT GCAGACACCTTTTGAAATTAAATTGGCAAAGAAATTTGACACCTTCAA TGGGGAATGTCCAAATTTTGTATTTCGCAACAACTCAGAGTAGAATCA TCATCTAAATTGTGGGCTCAATGTGTCCAGTTACACAATGACATTCTCT TAGCTAAAGATACTACTGAAGCCTTTGAAAAAATGGTTTCACTACTTT CTGTTTTGCTTTCCATGCAGGGTGCTGTAGACATAAACAAGCTTTGTG AAGAAATGCTGGACAACAGGGCAACCTTACAAGCTATAGCCTCAGAG TTTAGTTCCCTTCCATCATATGCAGCTTTTGCTACTGCTCAAGAAGCTT ATGAGCAGGCTGTTGCTAATGGTGATTCTGAAGTTGTTCTTAAAAAGT TGAAGAAGTCTTTGAATGTGGCTAAATCTGAATTTGACCGTGATGCAA AAGGACGAAGATGACAATTTAATTGATTCTTACTTTGTAGTTAAGAGA CACACTTTCTCTAACTACCAACATGAAGAAACAATTTATAATTTACTTA AGGATTGTCCAGCTGTTGCTAAACATGACTTCTTTAAGTTTAGAATAG ACGGTGACATGGTACCACATATATCACGTCAACGTCTTACTAAATACAC AATGGCAGACCTCGTCTATGCTTTAAGGCATTTTGATGAAGGTAATTGT GACACATTAAAAGAAATACTTGTCACATACAATTGTTGTGATGATGATTATTTCAATAAAAAGGACTGGTATGATTTTGTAGAAAACCCAGATATATT ACGCGTATACGCCAACTTAGGTGAACGTGTACGCCAAGCTTTGTTAAA AACAGTACAATTCTGTGATGCCATGCGAAATGCTGGTATTGTTGGTGT ACTGACATTAGATAATAATGGACCCCAAAATCAGCGAAATGCACCCCG CATTACGTTTGGTGGACCCTCAGATTCAACTGGCAGTAACCAGAATGG AGAACGCAGTGGGGCGCGATCAAAACAACGTCGGCCCCAAGGTTTAC CCAATAATACTGCGTCTTGGTTCACCGCTCTCACTCAACATGGCAAGG AAGACCTTAAATTCCCTCGAGGACAAGGCGTTCCAATTAACACCAATA GCAGTCCAGATGACCAAATTGGCTACTACCGAAGAGCTACCAGACGA ATTCGTGGTGGTGACGGTAAAATGAAAGATCTCAGTCCAAGATGGTAT TTCTACTACCTAGGAACTGGGCCAGAAGCTGGACTTCCCTATGGTGCT AACAAAGACGGCATCATATGGGTTGCAACTGAGGGAGCCTTGAATAC ACCAAAAGATCACATTGGCACCCGCAATCCTGCTAACAATGCTGCAAT CGTGCTACAACTTCCTCAAGGAACAACATTGCCAAAAGGCTTCTACG CAGAAGGGAGCAGAGGCGGCAGTCAAGCCTCTTCTCGTTCCTCATCA CGTAGTCGCAACAGTTCAAGAAATTCAACTCCAGGCAGCAGTAGGGG AACTTCTCCTGCTAGAATGGCTGGCAATGGCGGTGATGCTGCTCTTGC TTTGCTGCTGCTTGACAGATTGAACCAGCTTGAGAGCAAAATGTCTGG TAAAGGCCAACAACAACAAGGCCAAACTGTCACTAAGAAATCTGCTG CTGAGGCTTCTAAGAAGCCTCGGCAAAAACGTACTGCCACTAAAGCA TACAATGTAACACAAGCTTTCGGCAGACGTGGTCCAGAACAAACCCA AGGAAATTTTGGGGACCAGGAACTAATCA(SEQ ID NO.10)。
实施例1
一种SARS-nCoV扩增试剂5×冻干保护剂配制,组成成分如表1所示。
表1
注:表1-表18中,“终浓度”是指冻干保护剂与核酸扩增反应体系和质控品混合后的浓度;“使用浓度”是指冻干保护剂与核酸扩增反应体系混合后的浓度。
实施例2
一种SARS-nCoV扩增试剂5×冻干保护剂配制,组成成分如表2所示。
表2
实施例3
一种SARS-nCoV扩增试剂5×冻干保护剂配制,组成成分如表3所示。
表3
实施例4
一种SARS-nCoV扩增试剂5×冻干保护剂配制,组成成分如表4所示。
表4
实施例5
一种SARS-nCoV扩增试剂5×冻干保护剂配制,组成成分如表5所示。
表5
实施例6
一种SARS-nCoV扩增试剂5×冻干保护剂配制,组成成分如表6所示。
表6
实施例7
一种SARS-nCoV扩增试剂5×冻干保护剂配制,组成成分如表7所示。
表7
实施例8
一种SARS-nCoV扩增试剂5×冻干保护剂配制,组成成分如表8所示。
表8
实施例9
一种SARS-nCoV扩增试剂5×冻干保护剂配制,组成成分如表9所示。
表9
实施例10
一种SARS-nCoV扩增试剂5×冻干保护剂配制,组成成分如表10所示。
表10
对比例1
一种SARS-nCoV扩增试剂5×冻干保护剂配制,组成成分如表11所示。
表11
对比例2
一种SARS-nCoV扩增试剂5×冻干保护剂配制,组成成分如表12所示。
表12
对比例3
一种SARS-nCoV扩增试剂5×冻干保护剂配制,组成成分如表13所示。
表13
对比例4
一种SARS-nCoV扩增试剂5×冻干保护剂配制,组成成分如表14所示。
表14
对比例5
一种SARS-nCoV扩增试剂5×冻干保护剂配制,组成成分如表15所示。
表15
对比例6
一种SARS-nCoV扩增试剂5×冻干保护剂配制,组成成分如表16所示。
表16
对比例7
一种SARS-nCoV扩增试剂5×冻干保护剂配制,组成成分如表17所示。
表17
对比例8
一种SARS-nCoV扩增试剂5×冻干保护剂配制,组成成分如表18所示。
表18
试验例1
将配制好的SARS-nCoV扩增反应试剂5×冻干保护剂(实施例1-10和对比例1-8)加入到反应体系中,按20μL/T分装到PCR八联管中,将PCR 八联管放到模具上并转移到冻干机中进行冷冻干燥即得到冻干成品。
PCR反应体系配制如表19所示:
表19
冷冻干燥机的冻干程序如表20所示:
表20
阶段 | 温度(℃) | 升/降温时间(min) | 维持时间(min) | 真空度(Pa) |
Sork | -5 | / | 60 | / |
预冻 | -40 | / | 180 | / |
升华干燥 | -35 | 240 | 420 | ≤20pa |
解析干燥 | 30 | 120 | 300 | ≤5pa |
实施例1-10和对比例1-8冻干后的效果如表21:
表21
将冻干后的实施例1-10瞬时离心,分别用20μL ddH2O进行复溶,添加不同浓度质控品各5μL,振荡混匀后,离心,使用杭州博日QuantGene 9600 (FQD-96C)进行PCR扩增反应。
PCR扩增反应程序如表22:
表22
PCR Ct值结果如表23:
表23
根据表21冻干效果和表23PCR扩增Ct值结果来看,后续实施例均使用实施例7的配方进行性能验证。
试验例2
根据实施例7的冻干反应体系,将配制好的荧光PCR冻干反应体系按20μL/T分装到PCR八联管中,将PCR八联管放到模具上并转移到冻干机中进行冷冻干燥即得到冻干成品。
冷冻干燥机的冻干程序如表24:
表24
阶段 | 温度(℃) | 升/降温时间(min) | 维持时间(min) | 真空度(Pa) |
Sork | -5 | / | 60 | / |
预冻 | -40 | / | 180 | / |
升华干燥 | -35 | 240 | 420 | ≤20pa |
解析干燥 | 30 | 120 | 300 | ≤5pa |
试验例3
根据实施例7的冻干反应体系,将配制好的荧光PCR冻干反应体系按 20μL/T分装到PCR八联管中,将PCR八联管放到模具上并转移到冻干机中进行冷冻干燥即得到冻干成品。
冷冻干燥机的冻干程序如表25:
表25
阶段 | 温度(℃) | 升/降温时间(min) | 维持时间(min) | 真空度(Pa) |
预冻 | -40 | / | 180 | / |
升华干燥 | -35 | 240 | 420 | 极限真空 |
解析干燥 | 30 | 120 | 300 | 极限真空 |
试验例2和试验3冻干后的效果如表26:
表26
按照试验例1中的扩增方法,将试验例2和试验例3的冻干产品与质控品混合进行扩增,试验例2和试验例3PCR Ct值结果如表27:
表27
根据表26冻干效果和表27PCR扩增Ct值结果来看,Sork阶段可以提高冻干产品的均一性,但试剂的性能无明显的差异。后续对试验例2进行冻干试剂加速稳定性(37℃加速3d、5d、7d、15d、30d和35d)进行验证, PCR扩增Ct值结果如表28。
表28
注:表中,液体对照:试剂不做冻干直接进行扩增;冻干试剂:试剂冻干后复溶进行扩增;37℃加速3d:试剂冻干后37℃保存3d,复溶后进行扩增,37℃加速5d、37℃加速7d、37℃加速15d、37℃加速30d、37℃加速35d同理。
从以上实验结果可以得出:本发明提供的PCR试剂的冻干保护剂不仅能够在冻干过程中起到一定的保护作用,而且冻干保护剂成分简单,冻干周期短,冻干后产品的外观及稳定性性能均满足试剂开发的要求。
最后应说明的是:以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (10)
1.一种PCR试剂的冻干保护剂,其特征在于,包括:使用浓度为62.5~87.5mg/mL的海藻糖、使用浓度为25~37.5mg/mL的PEG8000、使用浓度为15~22.5mg/mL的D-甘露醇、使用浓度为1~1.5mg/mL的L-组氨酸和使用浓度为1~1.5mg/mL的羟乙基淀粉;
所述使用浓度为将冻干保护剂与PCR试剂混合后的浓度。
2.根据权利要求1所述的冻干保护剂,其特征在于,包括:使用浓度为75mg/mL的海藻糖、使用浓度为31.25mg/mL的PEG8000、使用浓度为22.5mg/mL的D-甘露醇、使用浓度为1.25mg/mL的L-组氨酸和使用浓度为1mg/mL的羟乙基淀粉。
3.权利要求1或2所述的冻干保护剂在PCR试剂保存中的应用。
4.一种混合试剂,其特征在于,包括权利要求1或2所述的冻干保护剂和PCR试剂。
5.根据权利要求4所述的混合试剂,其特征在于,所述PCR试剂中使用甘油质量占比在0.08%以内的酶。
6.权利要求4或5所述混合试剂的冷冻干燥方法,其特征在于,包括如下步骤:
将所述混合试剂置于冷冻干燥机内,然后将冷冻干燥机的板层温度降低至-8~0℃,保持0.5~1.5h,再依次进行预冻、升华干燥和解析干燥,完成对混合试剂的冷冻干燥。
7.根据权利要求6所述的冷冻干燥方法,其特征在于,所述预冻为:将冷冻干燥机的板层温度降低至-45~-38℃,保持2-3h。
8.根据权利要求6所述的冷冻干燥方法,其特征在于,所述升华干燥为:抽真空至压强小于20pa,将冷冻干燥机的板层温度在3~4h内升高至-37~-33℃,保持6-8h。
9.根据权利要求6所述的冷冻干燥方法,其特征在于,所述解析干燥为:抽真空至压强小于5pa,将冷冻干燥机的板层温度在2~3h内升高至28~35℃,保持5-7h。
10.一种冷冻干燥产品,其特征在于,采用权利要求6-9任一项所述冷冻干燥方法制备得到。
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