CN112481253A - 用于pcr预混液的冻干保护处方 - Google Patents
用于pcr预混液的冻干保护处方 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112481253A CN112481253A CN201910865785.1A CN201910865785A CN112481253A CN 112481253 A CN112481253 A CN 112481253A CN 201910865785 A CN201910865785 A CN 201910865785A CN 112481253 A CN112481253 A CN 112481253A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pcr
- freeze
- glycerol
- drying
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 title abstract description 75
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 237
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 107
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 87
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 79
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 claims description 40
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 26
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 26
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 25
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 25
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 22
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 22
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 22
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 22
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 21
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 21
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 claims description 15
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 claims description 12
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 10
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 10
- UHZZMRAGKVHANO-UHFFFAOYSA-M chlormequat chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCCl UHZZMRAGKVHANO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 claims description 8
- 230000003321 amplification Effects 0.000 abstract description 7
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 abstract description 7
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 abstract description 3
- 238000000465 moulding Methods 0.000 abstract 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 121
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 34
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 33
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 24
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 20
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 18
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 15
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 6
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 6
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 6
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 description 5
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 5
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 5
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 5
- AHCYMLUZIRLXAA-SHYZEUOFSA-N Deoxyuridine 5'-triphosphate Chemical compound O1[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 AHCYMLUZIRLXAA-SHYZEUOFSA-N 0.000 description 4
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 4
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 4
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 4
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 230000009477 glass transition Effects 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 3
- -1 dntps Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 108700024845 Hepatitis B virus P Proteins 0.000 description 2
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methyl-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound OCC(CO)(CO)NCCS(O)(=O)=O JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012807 PCR reagent Substances 0.000 description 1
- 239000007990 PIPES buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007994 TES buffer Substances 0.000 description 1
- 208000034953 Twin anemia-polycythemia sequence Diseases 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N melezitose Chemical compound O([C@@]1(O[C@@H]([C@H]([C@@H]1O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O)CO)CO)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 1
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供了一种用于PCR预混液的冻干保护处方，涉及冻干保护剂技术领域。所述冻干保护处方适用于冻干含甘油的PCR预混液，解决了含甘油试剂不利于冷冻干燥的问题，且获得的含甘油冻干PCR预混液成型良好，稳定性好同时不影响PCR的扩增效率。
Description
技术领域
本发明涉及冻干保护剂技术领域，尤其是涉及一种用于PCR预混液的冻干保护处方。
背景技术
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，简称PCR，是一种分子生物学技术，用于放大特定的基因片段，目前该技术已在全世界范围内广泛应用，因其具有较高的灵敏度，优良特异性，操作简便，快捷等特点，在生物和医学研究中起到了举足轻重的作用。目前市场流通的用于基因检测的PCR试剂大部分为液体试剂，且扩增所需的各个组分分几管进行超低温保存和运输，这就给储存和运输带来很大不便。
目前大部分企业用于PCR扩增的核心原材料生产工艺过程中，为了保证核心原材料(酶、单抗、RNasin等)的生产和储存稳定性，均会添加50％甘油，那么这些核心原材料在后期应用于PCR扩增时仍然含有一定量的甘油，过多的甘油不利于冷冻干燥的成功，因此市面上的产品基本都是无甘油冻干制剂，然而无甘油冻干制剂需要采用无甘油的原料制作，一方面增加成本，另一方面去甘油十分麻烦。
因此一种含有甘油，同时又不影响冷冻干燥的冻干保护处方是目前市场需要的。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种用于PCR预混液的冻干保护处方，解决了含甘油试剂不利于冷冻干燥的问题。
本发明的第二目的在于提供一种PCR预混冻干粉剂。
本发明的第三目的在于提供一种包含上述PCR预混冻干粉剂的试剂或试剂盒。
为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：
根据本发明的一个方面，本发明提供了一种用于PCR预混液的冻干保护处方，所述冻干保护处方包括如下(a)～(c)任一种组成：
(a)甘油和葡聚糖；
(b)甘油、葡聚糖和蜜里三糖；
(c)甘油、葡聚糖和蜜里三糖；以及，乳糖、蔗糖和山梨糖醇中的至少一种。
优选地，所述甘油的使用浓度为1％～5％；优选为1％～4.5％；更优选为1％～4％。
优选地，所述葡聚糖的使用浓度为2％～8％；优选为3％～7％；更优选为4％～6％。
优选地，所述蜜里三糖的使用浓度为2％～10％；优选为3％～8％；更优选为4％～6％。
优选地，所述乳糖的使用浓度为0.3％～3％；优选为0.5％～2.5％；更优选为1％～2％。
优选地，所述蔗糖的使用浓度为2％～9％；优选为3％～8％；更优选为4％～7％。
优选地，所述山梨糖醇的使用浓度为3％～10％；优选为4％～9％；更优选为5％～7％。
优选地，所述PCR预混液包括PCR扩增预混液或PCR酶预混液。
根据本发明的另一个方面，本发明还提供了一种PCR预混冻干粉剂，该PCR预混冻干粉剂由含有上述冻干保护处方的PCR预混液冻干得到。
根据本发明的另一个方面，本发明还提供了一种试剂或试剂盒，该试剂或试剂盒包含上述PCR预混冻干粉剂。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明提供的PCR预混液的冻干保护处方含甘油和葡聚糖，葡聚糖能够通过提高产品的玻璃化转变温度，克服含甘油试剂的冷冻后干燥稳定的问题。蜜里三糖可以使产品很容易成型，与甘油混合使用以降低产品的吸湿性，提高产品的稳定性。乳糖、蔗糖和山梨糖醇均独立地能够起到稳定剂和低温保护的作用，添加乳糖、蔗糖和山梨糖醇中的至少一种可以进一步提高PCR预混液的稳定性。
本发明提供的用于PCR预混液的冻干保护处方，能够提高PCR预混液的冻干制剂的稳定性，降低PCR预混液中各原料中残留的甘油对冻干制剂的不利影响，同时不影响PCR预混液的扩增效率。冻干含有上述冻干保护处方的PCR预混液得到的PCR预混冻干粉剂，稳定性好，37℃放置至少1个月、25℃放置至少半年、4℃放置至少2年活性保持良好。且PCR预混冻干粉剂可以常温运输，加水复溶后加入待检样品即可上机检测，检测操作简单，降低了空气中的气溶胶对扩增体系的影响。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明提供的PCR预混冻干粉剂；
图2为本发明中对比例1冻干后的试剂。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
根据本发明的一个方面，本发明提供了一种用于PCR预混液的冻干保护处方，所述冻干保护处方包括如下(a)～(c)任一种组成：
(a)甘油和葡聚糖；
(b)甘油、葡聚糖和蜜里三糖；
(c)甘油、葡聚糖和蜜里三糖；以及，乳糖、蔗糖和山梨糖醇中的至少一种。
甘油的玻璃化转变温度很低，会影响含有甘油的冻干产品的稳定性，而葡聚糖的玻璃化转变温度很高，进而提高了产品的玻璃化转变温度，克服含甘油试剂的冷冻后干燥稳定的问题，进而缓解了含有甘油的冻干产品的稳定性问题。
含有甘油的试剂很难冻干成型，蜜里三糖可以使产品很容易成型。蜜里三糖带有五个结晶水，在环境中不吸潮，可以与甘油混合使用以降低产品的吸湿性，提高产品的稳定性。
乳糖、蔗糖和山梨糖醇均独立地能够起到稳定剂和低温保护的作用，添加乳糖、蔗糖和山梨糖醇中的至少一种可以进一步提高PCR预混液的稳定性，并且令人意外地能够提高扩增效率。
本发明提供的用于PCR预混液的冻干保护处方，能够提高PCR预混液的冻干制剂的稳定性，降低PCR预混液中各原料中残留的甘油对冻干制剂的不利影响，同时不影响PCR预混液的扩增效率。
在一些可选的实施方式中，本发明提供的冻干保护处方的实例，包括但不限于：可选地，所述冻干保护处方包括甘油和葡聚糖；可选地，所述冻干保护处方包括甘油、葡聚糖和蜜里三糖；可选地，所述冻干保护处方包括甘油、葡聚糖、蜜里三糖和乳糖；可选地，所述冻干保护处方包括甘油、葡聚糖、蜜里三糖和蔗糖；可选地，所述冻干保护处方包括甘油、葡聚糖、蜜里三糖和山梨糖醇；可选地，所述冻干保护处方包括甘油、葡聚糖、蜜里三糖、乳糖和山梨糖醇；可选地，所述冻干保护处方包括甘油、葡聚糖、蜜里三糖、乳糖、蔗糖和山梨糖醇。
需要说明的是，由于组成PCR预混液中的用于PCR扩增的其他组分中可能残留有甘油，因此本发明提供的冻干保护处方中的甘油可以全部或部分来源于PCR预混液中其他组分中残留的甘油，也可以全部来源于额外向PCR预混液中添加的甘油，本发明对此不作限制。
优化冻干保护处方各组分的用量能够优化冻干保护处方对所述PCR预混液的冻干保护作用，各组分的优选使用浓度如下，本发明所述的使用浓度指的是，冻干保护处方中组分的质量和PCR预混液未冻干状态下的液态试剂的体积百分比。
在一些优选的实施方式中，所述甘油的使用浓度为1％～5％，例如可以为但不限于为1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％或5％；优选为1％～4.5％；更优选为1％～4％。可以理解的是，当冻干所述PCR预混液时，所述PCR预混液中只要含有目标浓度的甘油即可，这些甘油可以全部来源于向所述PCR预混液中额外添加的甘油，也可以全部来源于组成所述PCR预混液的原料中残留的甘油，也可以即含有向所述PCR预混液中额外添加的甘油，同时也含有组成所述PCR预混液的原料中残留的甘油，只要冻干所述PCR预混液时，其中的甘油的浓度符合目标浓度，即属于所述冻干保护处方的甘油的使用浓度。
在一些优选的实施方式中，所述葡聚糖的使用浓度为2％～8％，例如可以为但不限于为2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％或8％；优选为3％～7％；更优选为4％～6％。
在一些优选的实施方式中，所述蜜里三糖的使用浓度为2％～10％，例如可以为但不限于为2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％或10％；优选为3％～8％；更优选为4％～6％。
在一些优选的实施方式中，所述乳糖的使用浓度为0.3％～3％，例如可以为但不限于为0.3％、0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％或3％；优选为0.5％～2.5％；更优选为1％～2％。
在一些优选的实施方式中，所述蔗糖的使用浓度为2％～9％，例如可以为但不限于为2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％或9％；优选为3％～8％；更优选为4％～7％。
在一些优选的实施方式中，山梨糖醇的使用浓度为3％～10％，例如可以为但不限于为3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％或10％；优选为4％～9％；更优选为5％～7％。
可以理解的是，所述PCR预混液可以含有能够独立完成PCR反应的全部组分，也可以含有其中部分组分。在一些可选的实施方式中，能够独立完成PCR反应的全部组分的PCR预混液的实例可选地包括所述冻干保护处方、酶制剂、缓冲物质、引物、盐和dNTP；可选地包括冻干保护处方、酶制剂、缓冲物质、引物、探针、表面活性剂、盐、dNTP和稳定剂。在一些可选地实施方式中，所述PCR预混液可以只包括部分反应试剂，可选地包括酶制剂、dNTP、盐和缓冲物质；可选地包括dNTP、盐、荧光染料、表面活性剂、稳定剂和缓冲物质。所述PCR预混液中的组分可以根据应用场景调整，例如进行常规PCR时，所述PCR预混液中还可以含有凝胶电泳的指示剂；例如进行荧光定量PCR时，其中还可以含有荧光探针或荧光染料；例如以RNA作为起始模板，其中还可以含有RNA酶抑制剂。可以理解的是，这些根据PCR不同应用场景而调整得到的PCR预混液，都属于本发明所述的PCR预混液所包含的范围。
在一些可选的实施方式中，所述PCR预混液包括PCR扩增预混液或PCR酶预混液。
PCR扩增预混液指的是为设计好的针对某一目的基因的PCR扩增预混液，直接加水复溶后，添加待检样本即可检测。PCR扩增预混液操作更简单，使用起来更加方便。
PCR酶预混液指的是，仅含有PCR扩增所需的酶，或含有PCR扩增所需的酶和所需的底物(如dNTPs、dUTP)，可以应用于多个目的基因的检测。PCR扩增预混液含有PCR扩增的所有组分，冻干体积较大，而相比于PCR扩增预混液，PCR酶预混液冻干总体积很小，可以任意添加其他冻干保护剂组分也不会影响到PCR扩增，冻干难易程度较PCR扩增预混液更小。
用于PCR反应试剂的实例如下：酶制剂的实例包括但不限于：DNA聚合酶，或DNA聚合酶和UDG酶的组合；其中DNA酶的优选使用浓度为0.05U/μl-0.1U/μl，UDG酶的优选使用浓度为0.06U/μl-0.1U/μl。
缓冲物质的实例包括但不限于：Tris、Tricine、Bis-Tricine、MOPS、TES、PIPES、TAPS、HEPES和CAPS中的至少一种，所述PCR预混液可以只含有一种缓冲物质，也可以含有多种，例如可选地以Tris和MOPS同时作为缓冲物质，可选地以Bis-Tricine和HEPES同时作为缓冲物质等。缓冲物质优选含有使用浓度为10mM-100mM的Tris-HCl。
盐的实例包括但不限于：氯化钾、醋酸钾、硫酸钾、硫酸铵、氯化铵、醋酸铵、氯化镁、硫酸镁、氯化锰、硫酸锰、氯化钠、醋酸钠和氯化锂中的至少一种，所述PCR预混液可以只含有一种盐，也可以含有几种盐，例如同时含有氯化镁和硫酸铵，可选地含有氯化钠和氯化铵等。优选地，所述PCR反应液中优选含有0.1mM-5mM的Mg2+；优选地，所述PCR反应液中优选含有5mM-20mM(NH4)2SO4。
dNTP实例包括但不限于：dATP、dTTP、dCTP、dGTP和dUTP中的至少一种，例如所述dNTP为dATP、dTTP、dCTP和dGTP，所述dNTP也可以为dATP、dTTP、dCTP、dGTP和dUTP。优选地，所述PCR反应液中优选含有0.1mM-0.5mM的dNTP。
稳定剂的实例包括但不限于BSA和/或明胶，BSA和明胶可以分别单独使用，也可以同时使用BSA和明胶以及其他的稳定剂。所述PCR反应液中优选含有0.01mg-4mg/ml的BSA。
表面活性剂的实例包括但不限于吐温20、TritonX-100和十二烷基硫酸钠中的至少一种，所述PCR预混液中可以只含有一种表面活性剂，例如只含有吐温20、TritonX-100或十二烷基硫酸钠，也可以将几种表面活性剂联用，例如同时使用吐温20和TritonX-100，或同时使用TritonX-100和十二烷基硫酸钠。所述PCR反应液中优选含有0.005％-1％的吐温20。
在一些优选的实施方式中，所述PCR反应液中优选还含有引物：优选地含有上游引物0.05～2μM；优选地含有下游引物0.05～2M。当所述PCR反应液用于荧光检测时，还优选含有探针，探针优选使用浓度为0.05～1μM。
可以理解的是，本申请对PCR预混液中组分的选择以及组合的方式没有限制。
根据本发明的另一个方面，本发明还提供了一种PCR预混冻干粉剂，该PCR预混冻干粉剂由含有上述冻干保护处方的PCR预混液冻干得到。该PCR预混冻干粉剂稳定性好，37℃放置至少1个月、25℃放置至少半年、4℃放置至少2年活性保持良好。制备得到的冻干粉剂如图1所示。
根据本发明的另一个方面，本发明还提供了一种试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包含上述PCR预混冻干粉剂。冻干粉剂可以常温运输，缓解了冷链运输问题；冻干粉剂检测操作简单，加水复溶后加入待检样品即可上机检测，减少一些操作环节，很大程度上降低了空气中的气溶胶对扩增体系的影响。
下面结合优选实施例进一步说明本发明的技术方案和有益效果：
实施例1
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油3％和葡聚糖5％。
冻干成品：能成型，ct值为29.0，荧光值与液态持平，37℃考核1个月活性下降24％。
实施例2
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油1％和葡聚糖8％。
冻干成品：能成型，ct值为29.2，荧光值与液态持平，37℃考核1个月活性下降27％。
实施例3
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油5％和葡聚糖2％。
冻干成品：能成型，ct值为29.3，荧光值与液态持平，37℃考核1个月活性下降30％。
实施例4
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油3％、葡聚糖5％和蜜里三糖5％。
冻干成品：能成型，ct值为28.8，荧光值与液态持平，37℃考核1个月活性下降2％。
实施例5
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油1％、葡聚糖8％和蜜里三糖2％。
冻干成品：能成型，ct值为29.0，荧光值与液态持平，37℃考核1个月活性不下降。
实施例6
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油5％、葡聚糖2％和蜜里三糖10％。
冻干成品：能成型，ct值为28.9，荧光值与液态持平，37℃考核1个月活性下降3％。
实施例7
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油3％、葡聚糖5％、蜜里三糖5％和乳糖1.5％。
冻干成品：能成型，ct值为28.7，荧光值比液态高2％，37℃考核1个月活性下降2％。
实施例8
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油1％、葡聚糖8％、蜜里三糖2％和乳糖3％。
冻干成品：能成型，ct值为28.6，荧光值比液态高3％，37℃考核1个月活性不下降。
实施例9
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油5％、葡聚糖2％、蜜里三糖10％和乳糖0.3％。
冻干成品：能成型，ct值为28.5，荧光值比液态高2％，37℃考核1个月活性下降1％。
实施例10
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油3％、葡聚糖5％、蜜里三糖5％和蔗糖5.5％。
冻干成品：能成型，ct值为28.4，荧光值比液态高2％，37℃考核1个月活性不下降。
实施例11
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油1％、葡聚糖8％、蜜里三糖2％和蔗糖9％。
冻干成品：能成型，ct值为28.5，荧光值比液态高2％，37℃考核1个月活性不下降。
实施例12
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油5％、葡聚糖2％、蜜里三糖10％和蔗糖2％。
冻干成品：能成型，ct值为28.6，荧光值比液态高2％，37℃考核1个月活性不下降。
实施例13
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油3％、葡聚糖5％、蜜里三糖5％和山梨糖醇6.5％。
冻干成品：能成型，ct值为28.5，荧光值比液态高2％，37℃考核1个月活性不下降。
实施例14
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油1％、葡聚糖8％、蜜里三糖2％和山梨糖醇10％。
冻干成品：能成型，ct值为28.6，荧光值比液态高1％，37℃考核1个月活性不下降。
实施例15
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油5％、葡聚糖2％、蜜里三糖10％和山梨糖醇3％。
冻干成品：能成型，ct值为28.5，荧光值比液态高1％，37℃考核1个月活性下降2％。
实施例16
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油3％、葡聚糖5％、蜜里三糖5％、乳糖1.5％和蔗糖5.5％。
冻干成品：能成型，ct值为28.3，荧光值比液态高5％，37℃考核1个月活性不下降。
实施例17
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油3％、葡聚糖5％、蜜里三糖5％、乳糖1.5％和山梨糖醇6.5％。
冻干成品：能成型，ct值为28.2，荧光值比液态高6％，37℃考核1个月活性不下降。
实施例18
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油3％、葡聚糖5％、蜜里三糖5％、乳糖1.5％和山梨糖醇6.5％。
冻干成品：能成型，ct值为28.4，荧光值比液态高4％，37℃考核1个月活性不下降。
实施例19
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油3％、葡聚糖5％、蜜里三糖5％、乳糖0.5％、蔗糖5.5％和山梨糖醇6.5％。
冻干成品：能成型，ct值为28.0，荧光值比液态高8％，37℃考核1个月活性不下降。
实施例20
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油2％、葡聚糖6％和蜜里三糖3％。
冻干成品：能成型，ct值为29.2，荧光值比液态持平，37℃考核1个月活性下降3％。
实施例21
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油4％、葡聚糖4％、蜜里三糖8％、乳糖0.5％、蔗糖3％和山梨糖醇8％。
冻干成品：能成型，ct值为28.1，荧光值比液态高7％，37℃考核1个月活性不下降。
实施例22
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油8％、葡聚糖2％和蜜里三糖15％。
冻干成品：能成型，ct值为30.2，荧光值比液态高8％，37℃考核1个月活性下降3％。
实施例23
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油8％、葡聚糖2％、蜜里三糖12％、乳糖0.5％和山梨糖醇12％。
冻干成品：能成型，ct值为29.5，荧光值比液态高2％，37℃考核1个月活性下降2％。
实施例24
本实施例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油10％、葡聚糖1％、蜜里三糖12％、乳糖0.5％、蔗糖10％和山梨糖醇1.5％。
冻干成品：能成型，ct值为29.9，荧光值比液态高5％，37℃考核1个月活性不下降。
对比例1
本对比例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油3％。
冻干成品：不能成型，冻干后的试剂如图2所示，ct值为34.3，荧光值比液态下降83％。
对比例2
本对比例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油3％和蜜里三糖5％。
冻干成品：不能成型。
对比例3
本对比例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油3％和乳糖1.5％。
冻干成品：不能成型。
对比例4
本对比例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油3％和蔗糖5.5％。
冻干成品：不能成型。
对比例5
本对比例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油3％和山梨糖醇6.5％。
冻干成品：不能成型。
对比例6
本对比例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油3％、蜜里三糖5％、乳糖1.5％、蔗糖5.5％和山梨糖醇6.5％。
冻干成品：不能成型。
对比例7
本对比例提供了一种冻干保护处方，按照冻干保护处方在PCR预混液中的使用浓度计，冻干保护处方组成如下：甘油3％和乳糖1.5％、蔗糖5.5％和山梨糖醇6.5％。
冻干成品：不能成型。
对比例8
对比例8提供了一种PCR预混液，未添加任何稳定处方的预混液，检测其CT值为29.2。
上述实施例中，实施例1～实施例24和对比例1～8中PCR预混液中的PCR反应组分，以各组分的使用浓度计包括：0.08U/μL的DNA聚合酶，0.08U/μL的UDG酶，0.2μM的HBV-F，0.2μM的HBV-R，0.16μM的HBV-P，2mM的Mg2+，0.3mM的dNTP，10mM的(NH4)2SO4，50mM的Tris-HCl、1mg/mL的BSA和0.1％的吐温20。
冻干方法如下：按配方量制成液态试剂，然后将液态试剂分装加入到八连管中，然后将八连管放在96孔金属板上，移入冻干机进行冻干。
实施例25
本实施例提供了一种PCR酶预混液，其中PCR冻干保护处方同实施例1，PCR酶预混液中PCR反应组分如下，以反应时各组分的浓度计：0.1U/μL的DNA聚合酶和0.1U/μL的UDG酶。
冻干成品：能成型，ct值为28.6，荧光值与液态持平，37℃考核1个月活性下降17％。
实施例26
本实施例提供了一种PCR酶预混液，其中PCR冻干保护处方同实施例10，PCR酶预混液中PCR反应组分如下，以反应时各组分的浓度计：0.5U/μL的DNA聚合酶、0.1U/μL的UDG酶和0.5mM的dNTP(等量的dATP、dTTP、dCTP、dGTP和dUTP)。
冻干成品：能成型，ct值为28.2，荧光值比液态高4％，37℃考核1个月活性不下降。
实施例27
本实施例提供了一种PCR酶预混液，其中PCR冻干保护处方同实施例19，PCR酶预混液中PCR反应组分如下，0.1U/μL的DNA聚合酶和0.1U/μL的UDG酶。
冻干成品：能成型，ct值为28.1，荧光值比液态高7％，37℃考核1个月活性不下降。
上述实施例和对比例中使用的引物和探针序列如下：
HBV-F序列为5’GGCTGTAGGCCTAAATTGCTT 3’(SEQ ID NO.1)
HBV-R序列为5’CACAGATTGGAGGCTTTGA 3’(SEQ ID NO.2)
HBV-P探针序列为5’CATGYAACTTTTCACCTTCTGCCTA 3’(SEQ ID NO.3)其中Y表示是C和T兼并碱基。
上述实施例和对比例在PCR时冻干粉剂直接复溶使用，实施例25～实施例27复溶后添加其余组分，使PCR反应组分的配方和终浓度均和实施例1相同。PCR过程如下：
(1)样本处理及核酸提：分别将阴性对照、阳性对照(2500IU/ml带HBV目的片段的质粒)以及定量参考品A1～A4(A1～A4分别为103IU/ml、104IU/ml、105IU/ml、106IU/ml带HBV目的片段的质粒)，按比例(298μl/人份样本+HBV内标2μl/人份)取相应量的阴性对照、阳性对照、定量参考品A1～A4及HBV内标，充分混匀成待提取样本，瞬时离心后备用。
采用“天根生化科技(北京)有限公司的病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒(DP315)”提取样本DNA，提取操作步骤参照提取试剂盒说明书。
(2)加样：按每管HBV-PCR反应液30μl分装至PCR八联管中，再加提取的核酸样本20μl，震荡混匀并瞬时离心后上机；每管HBV-PCR冻干试剂加30μl超纯水，再加提取的核酸样本20μl，震荡混匀并瞬时离心后上机。
(3)上机：在荧光定量实时PCR仪上设置反应程序如下：
实施例中37℃考核1个月的活性预估与4℃考核2年一致。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 广东菲鹏生物有限公司
<120> 用于PCR预混液的冻干保护处方
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
ggctgtaggc ctaaattgct t 21
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
cacagattgg aggctttga 19
<210> 3
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
catgyaactt ttcaccttct gccta 25
Claims (10)
1.一种用于PCR预混液的冻干保护处方，其特征在于，所述冻干保护处方包括如下(a)～(c)任一种组成：
(a)甘油和葡聚糖；
(b)甘油、葡聚糖和蜜里三糖；
(c)甘油、葡聚糖和蜜里三糖；以及，乳糖、蔗糖和山梨糖醇中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的冻干保护处方，其特征在于，所述甘油的使用浓度为1％～5％；优选为1％～4.5％；更优选为1％～4％。
3.根据权利要求1所述的冻干保护处方，其特征在于，所述葡聚糖的使用浓度为2％～8％；优选为3％～7％；更优选为4％～6％。
4.根据权利要求1所述的冻干保护处方，其特征在于，所述蜜里三糖的使用浓度为2％～10％；优选为3％～8％；更优选为4％～6％。
5.根据权利要求1所述的冻干保护处方，其特征在于，所述乳糖的使用浓度为0.3％～3％；优选为0.5％～2.5％；更优选为1％～2％。
6.根据权利要求1所述的冻干保护处方，其特征在于，所述蔗糖的使用浓度为2％～9％；优选为3％～8％；更优选为4％～7％。
7.根据权利要求1所述的冻干保护处方，其特征在于，所述山梨糖醇的使用浓度为3％～10％；优选为4％～9％；更优选为5％～7％。
8.根据权利要求1-7任一项所述的冻干保护处方，其特征在于，所述PCR预混液包括PCR扩增预混液或PCR酶预混液。
9.一种PCR预混冻干粉剂，其特征在于，由含有权利要求1-8任一项所述的冻干保护处方的PCR预混液冻干得到。
10.试剂或试剂盒，其特征在于，包含权利要求9所述的PCR预混冻干粉剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910865785.1A CN112481253A (zh) | 2019-09-12 | 2019-09-12 | 用于pcr预混液的冻干保护处方 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910865785.1A CN112481253A (zh) | 2019-09-12 | 2019-09-12 | 用于pcr预混液的冻干保护处方 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112481253A true CN112481253A (zh) | 2021-03-12 |
Family
ID=74920806
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910865785.1A Pending CN112481253A (zh) | 2019-09-12 | 2019-09-12 | 用于pcr预混液的冻干保护处方 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112481253A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114480591A (zh) * | 2022-03-09 | 2022-05-13 | 武汉爱博泰克生物科技有限公司 | 一种用于一步法qpcr试剂的冻干保护剂及其应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005103277A1 (en) * | 2004-04-27 | 2005-11-03 | Obschestvo S Ogranichennoy Otvetstvennostju 'kompania 'biokom' | Dry amplification reagent mixture for polymerase chain reaction and the technique of pcr analysis |
| CN105463125A (zh) * | 2016-02-02 | 2016-04-06 | 江苏正大天创生物工程有限公司 | 核酸扩增体系及其冻干保护剂 |
| CN106967706A (zh) * | 2017-05-25 | 2017-07-21 | 北京理工大学 | 一种Taq聚合酶冻干保护剂 |
| CN110093403A (zh) * | 2019-03-19 | 2019-08-06 | 融智生物科技（青岛）有限公司 | 荧光pcr试剂的冻干保护剂以及冻干芯片的制备方法 |
-
2019
- 2019-09-12 CN CN201910865785.1A patent/CN112481253A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005103277A1 (en) * | 2004-04-27 | 2005-11-03 | Obschestvo S Ogranichennoy Otvetstvennostju 'kompania 'biokom' | Dry amplification reagent mixture for polymerase chain reaction and the technique of pcr analysis |
| CN105463125A (zh) * | 2016-02-02 | 2016-04-06 | 江苏正大天创生物工程有限公司 | 核酸扩增体系及其冻干保护剂 |
| CN106967706A (zh) * | 2017-05-25 | 2017-07-21 | 北京理工大学 | 一种Taq聚合酶冻干保护剂 |
| CN110093403A (zh) * | 2019-03-19 | 2019-08-06 | 融智生物科技（青岛）有限公司 | 荧光pcr试剂的冻干保护剂以及冻干芯片的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 王世宇: "《药用辅料学》", 30 April 2019, 中国中医药出版社 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114480591A (zh) * | 2022-03-09 | 2022-05-13 | 武汉爱博泰克生物科技有限公司 | 一种用于一步法qpcr试剂的冻干保护剂及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Deininger et al. | Base sequence studies of 300 nucleotide renatured repeated human DNA clones | |
| US8741560B2 (en) | Stable compositions for nucleic acid amplification and sequencing | |
| CN111139313B (zh) | 一种高效快速检测及定量血清或血浆核酸的试剂盒及方法 | |
| CN108368539A (zh) | 环境或生物样本中的核酸纯化 | |
| CN103074334B (zh) | 检测cho细胞dna的方法 | |
| ES2717538T3 (es) | Mezclas de reacción estables | |
| JP2014507950A (ja) | 混合個体群における標的ｄｎａを配列決定するためのキットおよび方法 | |
| Azevedo et al. | Colony PCR | |
| CN109457039A (zh) | 一种检测虾苗肝肠胞虫的冻干pcr试剂 | |
| US9273303B2 (en) | Dried and stabilized ready-to-use composition containing nucleic acid polymerization enzymes for molecular biology applications | |
| WO2022127846A1 (zh) | 一种用于核酸扩增的预装pcr反应试剂及其制备方法 | |
| EP2678445B1 (en) | Method for quantifying human dna | |
| CN111118222B (zh) | Hbv检测试剂盒及其使用方法和应用 | |
| KR102055447B1 (ko) | 중합효소연쇄반응 및 실시간중합효소연쇄반응을 이용한 세포치료제 또는 생물학적 의약품에 오염되는 진균을 검출하는 방법 및 이 방법에 사용하기 위한 키트 | |
| CN112481253A (zh) | 用于pcr预混液的冻干保护处方 | |
| CN114410844A (zh) | 多重qPCR检测GALV和ALB拷贝数判定CAR-T细胞产品中RCR阴阳性的方法 | |
| CN110804652B (zh) | 一种快速检测dna的实时定量pcr的添加剂、试剂盒及反应方法 | |
| WO2014137093A1 (ko) | 교차오염 억제용 ｕｄｇ를 함유한 중합효소연쇄반응액의 동결건조물 | |
| CN106978512A (zh) | 用于检测新型竹鼠源阿卡斑病毒的rt‑pcr引物及其试剂盒 | |
| CN111996272A (zh) | 耐药基因mcr-8的RPA检测引物组、试剂盒和方法 | |
| Dunn et al. | Sequencing protocols for detection of HLA class I polymorphism | |
| Rist et al. | Development of an in vitro bacteriophage N4 DNA replication system. | |
| CN117417980A (zh) | 高通量测序文库构建用反应试剂、文库构建方法 | |
| SEVİM NALKIRAN et al. | Comparison of DNA isolation methods from mammalian sperm cells and development of a new protocol | |
| KR100978215B1 (ko) | 건조형태의 ｐｃｒ 반응용 조성물에 기반한 ｐｃｒ의 최적증폭 조건 탐색 및 설정에 활용될 수 있는 키트 및 그것의제조방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |