CN116121339A - 冻干保护剂及其在制备pcr冻干试剂中的应用 - Google Patents

冻干保护剂及其在制备pcr冻干试剂中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116121339A
CN116121339A CN202211639244.5A CN202211639244A CN116121339A CN 116121339 A CN116121339 A CN 116121339A CN 202211639244 A CN202211639244 A CN 202211639244A CN 116121339 A CN116121339 A CN 116121339A
Authority
CN
China
Prior art keywords
freeze
pcr
drying
reagent
dried
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202211639244.5A
Other languages
English (en)
Inventor
张会敏
崔奇新
高利飞
付光宇
郑业焕
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Autobio Diagnostics Co Ltd
Original Assignee
Autobio Diagnostics Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Autobio Diagnostics Co Ltd filed Critical Autobio Diagnostics Co Ltd
Priority to CN202211639244.5A priority Critical patent/CN116121339A/zh
Publication of CN116121339A publication Critical patent/CN116121339A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Manufacturing Of Micro-Capsules (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明涉及分子生物技术领域，尤其涉及冻干保护剂及其在制备PCR冻干试剂中的应用。本发明提供的含有糖类和叔丁醇的冻干保护剂组合，能够使PCR冻干试剂在普通低湿环境中减少含水量，提高耐湿性。利用本发明所述制备方法获得的冻干微球硬度高、不易掉屑，有利于人工和自动化分装。

Description

冻干保护剂及其在制备PCR冻干试剂中的应用
技术领域
本发明涉及分子生物技术领域，尤其涉及冻干保护剂及其在制备PCR冻干试剂中的应用。
背景技术
现在分子诊断试剂大多数为液体试剂，具有灵敏度高、同时检测多靶标等优点，但液体试剂中酶等物质需要在-20℃保存，使用时需反复冻融，影响试剂的稳定性。为保持试剂良好的性能标准及摆脱冷链运输，降低成本，研究人员提出了冷冻干燥技术。现冷冻干燥技术可以使试剂以固态形式在室温下保存，具体是将混合物中已经冻结的固态冰不经融化成液态水的过程而直接升华成气态，最终去除水分并保留其他有效组分的新式高效干燥技术。
冷冻干燥技术在分子诊断试剂应用广泛，有原位冻干试剂，即将添加冻干保护剂的PCR试剂分装于八连排管内，然后放入冻干机进行冻干，具有计量精确、4度运输、便于保存等优点，但因受管材的影响，形状不规则，只能小批量生产，需预冻3-4个小时，冻干工艺时间长，实验操作转移困难。另外一种是非原位冻干试剂即冻干微球，PCR试剂液氮预冻成球，转移至西林瓶后，转移至真空干燥箱半压盖进行冷冻干燥，在冻干完成后，利用冻干机板层的升降来进行压盖，完成初步密封，随后出仓转移到低湿环境内进行二次密封。因冻干产品一般含水量在3％～5％之内，极低的含水量加上冻干制品海绵状的结构特性，使其在出箱过程中特别容易吸潮，吸潮后对产品稳定性和保质期都有非常大的影响。
常见的冻干保护剂包括糖类、多聚物、BSA等组合，选择一种不易使冻干制品受潮的冻干保护剂对于后期产品质量稳定非常重要。通常使用可以显著升高制品玻璃化转变温度的保护剂来提高冻干品稳定性，使冻干品不易受潮，但实际应用过程中发现当使用这些冻干剂组合后，在常规RH30％相对湿度环境下，冻干品仍容易受潮不稳定，同时加入量过大时，则会导致冻干品强度变差，在后期分装过程中，容易掉屑，继而导致试剂量减少，性能不稳定，因此现阶段仍需开发出一种不易使冻干产品受潮、不易掉屑且稳定性高的冻干保护剂组合。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种冻干保护剂及其在制备PCR冻干试剂中的应用。本发明提供的含有糖类和叔丁醇的冻干保护剂组合使PCR冻干试剂耐湿性好且稳定，不易掉屑。
本发明提供了一种冻干保护剂组合，包括乳糖、菊糖、甘露醇、PEG20000、PVP、水解明胶、叔丁醇、十二烷基聚乙二醇醚和消泡剂；
其中各组分的质量比为(0.03～0.25)：(0.02～0.07)：(0.01～0.15)：(0.005～0.05)：(0.002～0.05)：(0.001～0.01)：(0.001～0.02)：(0.001～0.01)：(0.001～0.005)。
具体的，在一些实施例中，所述乳糖、菊糖、甘露醇、PEG20000、PVP、水解明胶、叔丁醇、十二烷基聚乙二醇醚和消泡剂的质量比为0.03:0.03:0.02:0.01:0.005:0.005:0.005:0.005:0.002。
在一些具体实施例中，消泡剂为SE-15。
本发明提供的冻干保护剂组合中的叔丁醇能够与水任意混溶，在冷冻时形成的针状结构，升华后会形成疏松骨架结构和管状通道，能够使冻干微球保持良好的外观且不易掉屑，以及含水量减少。在本发明具体的实施例中，添加本发明所述冻干保护剂组合的冻干微球在普通低湿环境下(相对湿度30％)暴露不同时间后均比添加其他保护剂组合的冻干微球含水量少、大小和性能无变化且分装后没有发生掉屑现象。
本发明提供了所述冻干保护剂在制备PCR冻干试剂中的应用。
本发明提供了一种PCR冻干试剂，其包括PCR扩增试剂和本发明所述的冻干保护剂。
进一步的，所述PCR扩增试剂中各组分的浓度为：
20mmol/L～200mmol/L缓冲体系、10mmol/L～100mmol/L阳离子、30μmol/L～400μmol/L脱氧核糖核苷酸、0.5U/μL～10U/μL DNA聚合酶或等温扩增酶、0.5U/μL～5U/μL逆转录酶、0.3μmol/L～1.0μmol/L上下游引物和0.15μmol/L～0.5μmol/L探针；
作为优选，缓冲体系的浓度为：100mmol/L，阳离子的浓度为：50mmol/L，脱氧核糖核苷酸的浓度为：200μmol/L，DNA聚合酶或等温扩增酶的浓度为：1U/μL，逆转录酶的浓度为：1U/μL，上下游引物的浓度为：0.8μmol/L，探针的浓度为：0.4μmol/L。
更进一步的，所述PCR冻干试剂中，所述冻干保护剂的质量分数为10wt％～30wt％；
作为优选，冻干保护剂的质量分数为11.2wt％。
本发明提供的PCR冻干试剂中，所述缓冲体系包括Tris-HCl、HEPES、Tricine中的至少一种；
所述阳离子包括K+、Mg2+、Mn2+中的至少一种；
所述DNA聚合酶或等温扩增酶包括Taq聚合酶、Pfu聚合酶、KOD聚合酶、Bst聚合酶、Phi29聚合酶中的至少一种；
所述逆转录酶包括MMLV逆转录酶、T7逆转录酶中的至少一种。
具体的，在本发明的实施例中，所述PCR冻干试剂中的组分包括：
Tricine 100mmol/L、Mg2+50mmol/L、dNTP 200μmol/L、Taq聚合酶1U/μL、MMLV逆转录酶1U/μL、上游引物0.4μmol/L、下游引物0.4μmol/L、探针0.2μmol/L，以及冻干保护剂11.2wt％。
本发明还提供了所述PCR冻干试剂的制备方法，包括将配制好的PCR试剂经液氮预冻后，进行真空冷冻干燥，获得PCR冻干试剂。
具体的，在本发明的实施例中，液氮预冻的具体步骤为：将配制的PCR试剂灌装入点珠机中，调节分装体积及分装速率后滴入液氮中，将预冻的微球迅速转移到预冻的西林瓶中，半压盖后转移至预冻的真空冷冻干燥机中，转移过程中，保证冻干微球始终在液氮中；液氮预冻主要是防止冻干微球在常温下融化成液体。
冷冻干燥包括升华干燥和解析干燥两个步骤，具体为：
(1)升华干燥：第一阶段设定预冷冻温度为-60±2℃，持续时间120～360min，第二阶段设定为0.5±0.1℃/分钟的升温，升温至-40±2℃，达到温度后自动进入第三阶段；第三阶段设定温度为-40±2℃，持续时间为720～1000min；
(2)解析干燥：第一阶段设定为0.5±0.1℃/分钟的升温，升温至40±2℃，达到温度后自动进入第二阶段；第二阶段设定温度为40±2℃，持续120～600min。
利用本发明所述制备方法获得的PCR冻干试剂，在使用过程中不需要再次配剂，操作简单，添加样本即可上机检测，可用于多个检测技术平台，兼容性好。
本发明取得的有益效果：
1、在PCR试剂中加入本发明所述冻干保护剂组合制成的冻干微球在环境中吸水量显著降低，耐湿性好，在普通低湿环境中(相对湿度30％)，含水量在1小时内几乎没有变化，性能检测合格；
2、加入本发明所述冻干保护剂组合制成的冻干微球可以在低湿环境下进行出仓、分包装等操作，微球含水量和活性未受影响，因此无需严格控制车间的极低温湿度，极大的降低了能源的消耗；
3、加入本发明所述冻干保护剂组合后，冻干微球硬度高、不易掉屑，更利于人工或自动化分装。
附图说明
图1示冻干微球耐湿性检测图，1为加入两种糖类冻干保护剂组合的冻干微球，2、3、4分别为加入本发明所述冻干保护剂组合冻干微球(叔丁醇0.5％、1％、2％)；
图2示冻干微球性能检验图，左图为加入两种糖类冻干保护剂组合的冻干微球，右图为加入本发明所述冻干保护剂组合冻干微球(叔丁醇0.5％、1％、2％)；
图3示冻干微球掉屑现象验证，1为加入两种糖类冻干保护剂组合的冻干微球，2、3、4分别为加入本发明所述冻干保护剂组合冻干微球(叔丁醇0.5％、1％、2％)；
图4示仅含一种糖类冻干保护剂的冻干微球的性能检测图；
图5示含三种糖类冻干保护剂组合的冻干微球的性能检测图；
图6示含有本发明冻干保护剂组合(叔丁醇为2％)的冻干微球性能检测图；
图7示仅含一种糖类冻干保护剂的冻干微球的加速稳定性检测图；
图8示含三种糖类冻干保护剂组合的冻干微球的加速稳定性检测图；
图9示含有本发明冻干保护剂组合(叔丁醇为2％)的冻干微球的加速稳定性检测图。
具体实施方式
本发明提供了一种冻干保护剂及其在制备PCR冻干试剂中的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
1、配制PCR试剂
荧光定量PCR试剂为罗氏公司KAPA3G HotStart DNA Polymerase(无甘油)，NxtScript 2G RT酶(无甘油)，10×PCR buffer，引物及探针由赛默飞合成。其他所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
表1为含两种糖类冻干保护剂组合的PCR冻干试剂。
表1
表2为含本发明冻干保护剂组合、叔丁醇为0.5％的PCR冻干试剂。
表2
组分 终浓度 20μL体系(μL)
10×PCR buffer 1× 2
合胞病毒上游引物 0.4μM 0.08
合胞病毒下游引物 0.4μM 0.08
合胞病毒探针 0.2μM 0.04
dNTP 200μM 0.2
KAPA3G HotStart DNA Polymerase(无甘油) 1U/μL 0.4
NxtScript 2G RT酶(无甘油) 1U/μL 0.4
乳糖 3％ 1.5
菊糖 3％ 1.5
甘露醇 2％ 1.3
PEG 1％ 0.5
PVP 0.5％ 0.25
水解明胶 0.5％ 0.25
叔丁醇 0.5％ 1
Brij-35 0.5％ 1
SE-15 0.2％ 0.4
ddH2O 9.1
Total 20
表3为含本发明冻干保护剂组合、叔丁醇为1％的PCR冻干试剂。
表3
表4为含本发明冻干保护剂组合、叔丁醇为2％的PCR冻干试剂。
表4
2、制备冻干微球
按上述配方配制PCR反应试剂，灌装到点珠机内，点珠机按照20μL/滴滴入液氮中，将预冻的微球迅速转移到预冻的西林瓶中，半压盖后转移至预冻的真空冷冻干燥机中，按照表5进行真空冷冻干燥。
表5
冻干后，将冻干微球暴露在相对湿度为20％、30％和50％的环境中，测定含水量。
3、实验结果
3.1、含水量测定
(1)、含有两种糖类冻干保护剂组合的冻干微球(表1所示)在普通环境中的吸潮含水量测定，结果如下表6所示：
表6
(2)、加入本发明冻干保护剂组合(叔丁醇0.5％)的冻干微球(表2所示)在普通环境中的吸潮含水量测定，结果如下表7所示：
表7
(3)、加入本发明冻干保护剂组合(叔丁醇1％)的冻干微球(表3所示)在普通环境中的吸潮含水量测定，结果如下表8所示：
表8
(4)、加入本发明冻干保护剂组合(叔丁醇2％)的冻干微球(表4所示)在普通环境中的吸潮含水量测定，结果如下表9所示：
表9
如上所述，比较四种冻干微球暴露在相对湿度为30％的环境中的含水量变化，可以发现，加入本发明所述冻干保护剂组合(叔丁醇0.5％、1％、2％)的冻干微球含水量显著降低，耐湿性好。
3.2、外观检测
将四种冻干微球暴露在相对湿度为30％的环境中暴露3小时，观察其冻干微球的变化，结果如图1所示。
结果显示加入两种糖类冻干保护剂组合的冻干微球变小，而加入本发明所述冻干保护剂组合冻干微球(叔丁醇0.5％、1％、2％)冻干微球外观无变化，说明耐湿性好。
3.3、性能检测
将四种冻干微球暴露在相对湿度为30％的环境中3h与未暴露的冻干微球进行对比检测，结果如图2所示。
结果显示加入两种糖类冻干保护剂组合的冻干微球在相对湿度为30％的环境中分别暴露3小时后，CT值延后，性能下降，加入本发明所述冻干保护剂组合冻干微球(叔丁醇0.5％、1％、2％)在相对湿度为30％环境下暴露3小时的性能与不暴露的冻干微球性能一致，说明耐湿性好，不影响试剂活性。
3.4、掉屑现象验证
加入两种糖类冻干保护剂组合的冻干微球及添加本发明所述冻干保护剂组合(叔丁醇0.5％、1％、2％)的冻干微球在普通低湿环境下分装后的情况如图3所示。
结果显示加入本发明所述冻干保护剂组合冻干微球(叔丁醇0.5％、1％、2％)人工分装时，不会发生掉屑现象，表面光滑无皱缩，性能稳定。
实施例2
1、配制PCR试剂
荧光定量PCR试剂为罗氏公司KAPA3G HotStart DNAPolymerase(无甘油)，NxtScript 2G RT酶(无甘油)，10×PCR buffer，引物及探针由赛默飞合成。其他所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
表10为不含本发明冻干保护剂，仅含一种保护剂(棉子糖)的PCR冻干试剂：
表10
组分 终浓度 20μL体系(μL)
10×PCR buffer 1× 2
合胞病毒上游引物 0.4μM 0.08
合胞病毒下游引物 0.4μM 0.08
合胞病毒探针 0.2μM 0.04
dNTP 200μM 0.2
KAPA3G HotStart DNAPolymerase(无甘油) 1U/μL 0.4
NxtScript 2G RT酶(无甘油) 1U/μL 0.4
棉子糖 3％ 2
ddH2O 14.8
Total 20
表11为不含本发明冻干保护剂，含三种保护剂组合(棉子糖、海藻糖、葡聚糖)的PCR冻干试剂：
表11
组分 终浓度 20μL体系(μL)
10×PCR buffer 1× 2
合胞病毒上游引物 0.4μM 0.08
合胞病毒下游引物 0.4μM 0.08
合胞病毒探针 0.2μM 0.04
dNTP 200μM 0.2
KAPA3G HotStart DNAPolymerase(无甘油) 1U/μL 0.4
NxtScript 2G RT酶(无甘油) 1U/μL 0.4
棉子糖 3％ 2
海藻糖 2％ 2
葡聚糖 3％ 2
ddH2O 10.8
Total 20
表12为含本发明冻干保护剂组合、叔丁醇为2％的PCR冻干试剂：
表12
组分 终浓度 20μL体系(μL)
10×PCR buffer 1× 2
合胞病毒上游引物 0.4μM 0.08
合胞病毒下游引物 0.4μM 0.08
合胞病毒探针 0.2μM 0.04
dNTP 200μM 0.2
KAPA3G HotStart DNAPolymerase(无甘油) 1U/μL 0.4
NxtScript 2G RT酶(无甘油) 1U/μL 0.4
乳糖 3％ 1.5
菊糖 3％ 1.5
甘露醇 2％ 1.3
PEG 1％ 0.5
PVP 0.5％ 0.25
水解明胶 0.5％ 0.25
叔丁醇 2％ 4
Brij-35 0.5％ 1
SE-15 0.2％ 0.4
ddH2O 6.1
Total 20
2、制备冻干微球
按上述配方配制PCR反应试剂，灌装到点珠机内，点珠机按照20μL/滴滴入液氮中，将预冻的微球迅速转移到预冻的西林瓶中，半压盖后转移至预冻的真空冷冻干燥机中，按照表13进行真空冷冻干燥。
表13
3、实验结果
3.1、性能检测
冻干后，将不同组合的冻干微球暴露在相对湿度为30％的环境中分别暴露0小时、3小时、6小时、12小时、24小时后，检测冻干微球的性能，结果如图4～6。
结果显示表10所示的冻干微球在相对湿度为30％的环境中分别暴露3小时后，CT值延后，性能下降，暴露6小时、12小时和24小时后性能趋于0(图4)；表11所示的冻干微球在相对湿度为30％的环境中分别暴露3小时后，CT值延后，性能下降，暴露6小时、12小时和24小时后性能趋于0(图5)；而表12所示的冻干微球在相对湿度为30％环境下暴露24小时的性能与不暴露的冻干微球性能一致(图6)，说明添加本发明冻干保护剂组合的冻干微球耐湿性好，不影响试剂活性。
3.2、稳定性检测
冻干后，将不同组合的冻干微球在湿度为30％下分装至八连排管内，并进行密封保存，放置于55℃烘箱中进行加速0天、3天、5天、7天、10天检测冻干微球的性能，结果如图7～9。
结果显示，表10所示的冻干微球的高中低值样本CT值随时间增长而延后，性能逐渐下降(图7)，表11所示的冻干微球的高中低值样本CT值随时间增长而延后，性能逐渐下降(图8)，而表12所示的冻干微球在相对湿度为30％环境下分装后进行55℃加速稳定性检测，55℃加速10天后高中低值样本与0天冻干微球性能一致(图9)，说明添加本发明冻干保护剂组合的冻干微球性能较好。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.冻干保护剂，其特征在于，其包括乳糖、菊糖、甘露醇、PEG20000、PVP、水解明胶、叔丁醇、十二烷基聚乙二醇醚和消泡剂；
其中各组分的质量比为(0.03～0.25)：(0.02～0.07)：(0.01～0.15)：(0.005～0.05)：(0.002～0.05)：(0.001～0.01)：(0.001～0.02)：(0.001～0.01)：(0.001～0.005)。
2.根据权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，所述乳糖、菊糖、甘露醇、PEG20000、PVP、水解明胶、叔丁醇、十二烷基聚乙二醇醚和消泡剂的质量比为0.03:0.03:0.02:0.01:0.005:0.005:0.005:0.005:0.002。
3.权利要求1或2所述的冻干保护剂在制备PCR冻干试剂中的应用。
4.PCR冻干试剂，其特征在于，其包括PCR扩增试剂和权利要求1或2所述的冻干保护剂；所述PCR扩增试剂中各组分的浓度为：
20mmol/L～200mmol/L缓冲体系、10mmol/L～100mmol/L阳离子、30μmol/L～400μmol/L脱氧核糖核苷酸、0.5U/μL～10U/μL DNA聚合酶或等温扩增酶、0.5U/μL～5U/μL逆转录酶、0.3μmol/L～1.0μmol/L上下游引物和0.15μmol/L～0.5μmol/L探针。
5.根据权利要求4所述的PCR冻干试剂，其特征在于，所述PCR冻干试剂中，所述冻干保护剂的质量分数为10wt％～30wt％。
6.根据权利要求4所述的PCR冻干试剂，其特征在于，所述缓冲体系包括Tris-HCl、HEPES、Tricine中的至少一种。
7.根据权利要求4所述的PCR冻干试剂，其特征在于，所述阳离子包括K+、Mg2+、Mn2+中的至少一种。
8.根据权利要求4所述的PCR冻干试剂，其特征在于，所述DNA聚合酶或等温扩增酶包括Taq聚合酶、Pfu聚合酶、KOD聚合酶、Bst聚合酶、Phi29聚合酶中的至少一种；所述逆转录酶包括MMLV逆转录酶、T7逆转录酶中的至少一种。
9.权利要求4～8任一项所述PCR冻干试剂的制备方法，其特征在于，包括将配制好的PCR试剂经液氮预冻后，进行真空冷冻干燥，获得PCR冻干试剂。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述真空冷冻干燥包括如下步骤：
-60℃±2℃，预冻120～360min；
以0.5℃±0.1℃/分钟的速度，升温至-40℃±2℃；
-40℃±2℃，冷冻720～1000min；
以0.5℃±0.1℃/分钟的速度，升温至40℃±2℃；
40℃±2℃，干燥120～600min。
CN202211639244.5A 2022-12-20 2022-12-20 冻干保护剂及其在制备pcr冻干试剂中的应用 Pending CN116121339A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211639244.5A CN116121339A (zh) 2022-12-20 2022-12-20 冻干保护剂及其在制备pcr冻干试剂中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211639244.5A CN116121339A (zh) 2022-12-20 2022-12-20 冻干保护剂及其在制备pcr冻干试剂中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116121339A true CN116121339A (zh) 2023-05-16

Family

ID=86305565

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211639244.5A Pending CN116121339A (zh) 2022-12-20 2022-12-20 冻干保护剂及其在制备pcr冻干试剂中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116121339A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN118207307A (zh) * 2024-05-21 2024-06-18 成都百思赛弗生物科技有限公司 一种新型pcr冻干微球扩增试剂及其制备方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN118207307A (zh) * 2024-05-21 2024-06-18 成都百思赛弗生物科技有限公司 一种新型pcr冻干微球扩增试剂及其制备方法
CN118207307B (zh) * 2024-05-21 2024-08-02 成都百思赛弗生物科技有限公司 一种pcr冻干微球扩增试剂及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110452956B (zh) 一种pcr反应试剂的冻干微球及其制备方法
CN111560417B (zh) 一种rna扩增反应试剂的冻干保护剂及冻干方法
JP3068836B2 (ja) 物質の貯蔵
EP2063866B2 (en) Preparation of glassified biological reagents
CN112048545B (zh) 一种冻干保护剂、pcr扩增试剂及其冻干方法和应用
CN116121339A (zh) 冻干保护剂及其在制备pcr冻干试剂中的应用
CN105274192A (zh) 一种核酸扩增反应混合物颗粒及其应用
KR20180103945A (ko) 건조된 증폭 조성물
CA2761059C (en) A dried and stabilized ready-to-use composition containing nucleic acid polymerization enzymes for molecular biology applications
KR102021605B1 (ko) 다중타겟 핵산서열 증폭반응용 조성물의 동결건조 방법
AU2018270296B2 (en) Dried compositions containing flap endonuclease
CN114015758B (zh) 一种冻干保护剂、荧光pcr检测试剂盒及冻干工艺
CN110923303A (zh) 一种多重荧光pcr通用冻干保护剂及其应用
CN114606300A (zh) 一种用于核酸检测的冻干体系
CN113025757A (zh) 一种用于2019-nCov多重扩增反应试剂的冻干保护剂及其应用
CN116479088A (zh) 一种生物试剂冻干保存的试剂组合、试剂盒、方法及应用
CN115029423A (zh) 一种多重荧光pcr检测试剂的冻干微球及其制备方法
WO2023142130A1 (zh) 改进的酶小球在目标核酸检测中的应用
CN118667927A (zh) 荧光定量核酸扩增试剂冻干微球的冻干保护剂及其应用
CN117535389A (zh) 一种pcr检测试剂冻干保护组合物
CN117625758A (zh) Pcr试剂的冻干保护剂及其应用、混合试剂及其冷冻干燥方法和产品
CN117887807A (zh) 可改善rna检测试剂全预混性能的冻干保护剂及应用
CN113801926B (zh) 一种分子检测试剂的冻干保护剂及应用
CN114277104B (zh) 一种冻干保护剂及其应用
CN114317700B (zh) 荧光pcr试剂冻干保护剂、冻干方法及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination